FROTIS PERIFERICO DE LA SANGRE, TINCIONES WRIGHT Y

GIEMSA
Dayana Suarez trujillo¹, Johan Nicolas Quintero2, Estudiantes segundo semestre de
biología, Grupo B Facultad de Ciencias Básicas, Universidad de la Amazonia.

RESUMEN

En el laboratorio de biología de la universidad de la amazonia, realizamos la práctica

de frotis sanguínea periférica, donde en ella obtuvimos el extendido del frotis de
sangre, con la tinción de los colorantes de Wright y Giemsa, en ello adquirimos que
la sangre da una información como el número y forma de las células sanguíneas,
que a menudo hace parte de un conteo completo de sangre, en una muestra de
sangre se evalúa en un microscopio y se provee información como el número de
glóbulos blancos, el número y tipo de células formadas anormales y
aproximadamente de los conteos de glóbulos blancos y plaquetas.

En esta práctica de laboratorio se desarrollaron destrezas en técnicas de tinción

y a la vez ayudo a conocer diferentes tinciones como es el caso de Wright y Giemsa
que son de vital importancia saber sus pasos y destrezas de cada una de ellas que
permite destacar sus diferencias morfológicas.

Palabras claves: Colorantes Wright y Giemsa, Frotis sanguíneo, glóbulos.

Abstract:

In the biology laboratory of the University of the Amazon, we performed the

peripheral blood smear, where we obtained the smear of the blood smear, with the
stain of the Wright and Giemsa stains, in this we acquired that the blood gives a
Information such as the number and shape of blood cells, which is often part of a
complete blood count, in a blood sample is evaluated under a microscope and
information is provided such as the number of white blood cells, the number and type
of cells formed abnormally and approximately white blood cell counts and platelets.
Keywords: Wright and Giemsa dyes, blood smear, globules.

In this laboratory practice to develop skills in staining techniques and at the same
time I help to know different stains as is the case of Wright and Giemsa that are of
vital importance to know their steps and skills of each of them that allows to highlight
their morphological differences.

INTRODUCCIÓN

La sangre es una forma especializada del tejido conjuntivo, compuesta por una
sustancia intercelular líquida llamada plasma, en la cual se encuentran en
suspensión los elementos figurados: hematíes, leucocitos y
plaquetas.(Marquez;2010).

En la sangre se encuentran los leucocitos o glóbulos blancos que son las células
del sistema inmunitario. Todos ellos difieren en cuanto a su función y morfología.
Los leucocitos no desempeñan sus funciones cuando se encuentran en la sangre,
sino cuando abandonan esta y entran a los tejidos linfoides o a las zonas donde hay
inflamación intensa. En este sentido, la sangre es un medio de trasporte, que le
permite a las células sanguíneas recircularlo entre los diferentes tejidos del cuerpo.
Normalmente en la sangre se encuentra cinco tipos de leucocitos; monocitos,
linfocitos, neutrofilos, eosinofilos y basofilos. Además de estas células se
encuentran las plaquetas o trombocitos. (BARCO J.2002)

Neutrofilos: son los más abundantes, Su núcleo tiene lóbulos que aumentan en
número con la edad de la célula, por esta razón se les conoce también con el
nombre polimorfonucleares. Su citoplasma presenta gránulos muy finos que
corresponden a lisosomas, en cuyo interior hay enzimas hidroliticas entre las que
se destaca las lisozimas y peroxidasa. Los neutrofilos constituyen las primeras
líneas de defensa del organismo, principalmente contra un ataque bacteriano.

Eosinofilos: su núcleo es bilobulado y en el citoplasma se encuentran gran cantidad

de gránulos grandes de color púrpura que consisten en lisosomas, en los qué hay
enzimas hidroliticas como histomidasa y peroxidasa. El número de estas células se
incrementa generalmente cuando hay una infección parasitaria.

Basofilos: son los leucocitos más escasos, su núcleo es sinuoso. Ósea en forma
ondulada, y en su citoplasma también se encuentra gránulos grandes, pero en este
caso son de color morado y contienen heparina e histamina. Este tipo de células se
incrementa en los procesos alérgicos.

Linfocitos: su núcleo es grande y redondeado ocupando la mayor parte de la

célula; su citoplasma es escaso y de un color azulado en el que también se
encuentran gránulos que no son visibles al microscopio de luz convencional. Existen
varios tipos de linfocitos; entre ellos los linfocitos B que participan en mecanismos
de defensa humoral, produciendo anticuerpos que circulan libremente en la sangre
ayudando en el mecanismo de defensa de otras celulas; y los linfocitos T que
intervienen en procesos de defensa celular, ósea que ejercen efectos citotocicos
sobre otras células y no requieren la ayuda de anticuerpos circulantes.

Trombocitos: tambien conocidos como plaquetas. Se originan de la médula ósea

a partir de a partir de una celulas gigantes llamadas megacarioblastos, las que
después de madurar sufren un proceso de fragmentación ingresando a la corriente
sanguínea pequeños trozos de dichas células que reciben el nombre de
trombocitos. Consisten en pequeñas bolsas membranosas que contienen poca
cantidad de citoplasma y una pequeña porción del núcleo de la célula madre.
(GENESER, Finn. 1993)

Por otro lado el estudio e interpretación del frote de sangre periférica como parte
del hemograma representa la extensión morfológica del estado de los elementos
celulares de la sangre. Constituye un examen rutinario que cuando es debidamente
interpretado por el observador tiene una enorme utilidad diagnóstica para el médico
y puede considerarse el paso más importante en la identificación del mecanismo
responsable de una anemia. (López;2005).Se define como frote, frotis o extendido,
a la preparación microscópica delgada y transparente, extendida entre dos cristales
(porta o cubreobjetos), obtenida de un líquido orgánico espeso o tejido semilíquido
o pastoso (sangre, aspirados, secreciones, exudados, etc.) (Gonzales; 2002).El
frote periférico se utiliza para el estudio de las características citológicas de las
células de la sangre, lo cual permite valorar el funcionamiento general de la médula
ósea a través de sus componentes celulares, lo cual implica la evaluación de las
líneas eritrocíticas, leucocitaria y megacariocítica, determinando anormalidades en
forma, tamaño, color e inclusiones citoplasmáticas, dando una medida cuantitativa
y cualitativa de los elementos que lo conforman. (Bernstein R & Bernstein S;2004).

En esta práctica de laboratorio se desarrollaron destrezas en técnicas de tinción

y a la vez ayudo a conocer diferentes tinciones como es el caso de Wright y Giemsa
que son de vital importancia saber sus pasos y destrezas de cada una de ellas que
permite destacar sus diferencias morfológicas.

METODOLOGÍA

En el laboratorio de Biología de la Universidad de la Amazonia, se procedió a

realizar la práctica de frotis de sangre, tinciones Wright y Giemsa y células
sanguíneas . En la cual se procedio con el Frotis Periférico ;En un porta objetos se
agregó una gota de tinta china, para ensayo del extendido homogéneo donde deba
tener cabeza, cuerpo y cola. Una vez realizado los ensayos se realizó con el
extendido de la sangre y dejándolo secar. Por otro lado se realizo la Tinción Wright
Después de seco se procede a colocar el porta objetos en una rejilla y agregamos
abundante coloración Wright dejamos reposar 5 minutos, luego se agregó
amortiguador y se dejó por 6 minutos, terminado el tiempo se lavó el colorante con
agua destilada, teniendo el portaobjetos horizontalmente.

Se realizó con la tinción de Giemsa un nuevo frotis de sangre, una vez hecho esto,
se llevó a la rejilla aplicando metanol y se dejó por 3 minutos, luego adicionamos el
colorante de Giemsa por 10 minutos, pasado el tiempo lavamos con agua destilada
y lo dejamos secar. Finalmente realizado las tinciones, se procedió al microscopio
para la localización de las células utilizando primero el objetivo fuerte (40x), luego
cambiándolo al objetivo de inmersión (100x), pero antes se agregó una gota de
aceite de inmersión en la parte central del porta objetos. Posteriormente se Realizó
búsquedas de los diferentes tipos de células sanguíneas y esquemas de cada una
de ellas.

RESULTADOS

1.Tinta china
Se realizo ensayos de extendido con tinta china mas de 10 veses para haci
hacer una muestra buena que se mostratara cabeza, cuerpo cola.

A B C D
2.Extendido de la sangre en el portaobjeto
Hubo ciertas complicaciones a la HORA de hacer en el extendido de la sangre
sobre el portaobjeto, ya que la sangre debe estar bien extendida y que recubra
totalmente la lámina, el error, más común a la hora de extender la sangre fue el de
la muestra en escalera (extensión con estrases transversales).

-Despues de 5 extentidos de sangre se dice aquella muestra con características

confiables para la observación seleccionado la muestra cabeza, cuerpo y cola.

Esta muestra es errónea ya Esta muestra es correcta ya

que el frotis debe observarse que se recubrió toda y no
continuo. quedo espacio.

3.TINCION CON WRIGHT

El total de muestras que fueron sometidas a esta tinción fueron 2. Una por cada
estudiante al aplicar directamente el colorante de Wright. Se observó que la
laminas tomaron un color azul oscuro pasados los 5 minutos el colorante se
impregno en la sangre. Al aplicar el amortiguador de Wright, se observó que en
las partes donde hablan coloraciones débiles el color se volvió a intensificar. Y
al lavar las laminillas la coloración solo permaneció en la sangre.
Se observó que las laminillas tomaron un color azul oscuro pasados 5 minutos el
colorante se impregno en la sangre.

4.TINCION CON GIEMSA.

Al aplicar el metanol a la muestra y dejarlo actuar durante 3 minutos no se
notó un gran cambio en específico solo que la sangre de la muestra estaba
más fija. Cuando se le agrego el colorante de giemsa. Pasados 10 minutos La
muestra tomo una tonalidad violeta oscura y en la parte de la sangre, algunas
partes se tiñeron de rosado y al lavar las muestras su coloración final fue
rosada.

TABLA1TINCION DE GIEMSA DONANTE 1

imagen Células observación

sanguíneas

neutrófilo (10-18 micras) son células

que tienen citoplasma
con gránulos de color
rosa o púrpura. Ellos
componen la mayoría de
los glóbulos blancos en
un adulto sano. Están
implicados en la defensa
contra las infecciones.
 linfocito (10-12 micras) y tienen
un citoplasma
homogéneo y un núcleo
liso, redondo. Un tipo de
linfocitos son las células
B, son responsable de la
producción de
anticuerpos (
inmunoglobulinas )
Estos son fragmentos de
células que se derivan de
grandes en la médula
ósea, llamadas
células megacariocitos
plaquetas . Tras la liberación de la
médula ósea, aparecen
como fragmentos en la
sangre periférica. Cuando
hay un daño de los
v.sanguíneos

TABLA2 TINCIÓN DE WRIGHT 2

imagen Células observación

sanguíneas

Estos son los glóbulos

blancos ya maduros
que viajan a través de
la sangre, destruyendo
microbios y eliminando
Neutrófilos inflamaciones. El
segmentados. número o valores que
habitan en el cuerpo
debe ser de 1,500 si
este es más bajo o
más alto indica
problemas en las
defensas
 Conforman el tipo de
leucocito menos
abundante en la
sangre. Tiene núcleo
irregular, difícil de ver
por la granulación
Basófilos basófilo que lo cubre
casi siempre. Se
denomina basófilo a
cualquier célula que se
tiñe fácilmente con
colorantes básicos
(hematoxilina
principalmente).
Son un tipo de glóbulo y
uno de los componentes
de sistema inmunológico,
que se encarga
principalmente de
combatir infecciones de
eosinofilos tipo parasito. Son
leucocitos de tipo
granulocito, debido a su
citoplasma posee
grandes gránulos.

Discusión

El estudio e interpretación del frote de sangre periférica como parte del

hemograma representa la extensión morfológica del estado de los elementos
celulares de la sangre. Constituye un examen rutinario que cuando es
debíaamente interpretado por el observador tiene una enorme utilidad
diagnóstica para el médico y puede considerarse el paso más importante en la
identificación del mecanismo responsable de una anemia. (Salomón, g; 2008)

El frotis de sangre nos permite identificar los tipos de glóbulos presentes en

las muestras de sangre de esta manera nos lleva a reconocer que tan
importantes son para cada uno circulen en nuestro organismo que en el cual
encontramos cinco tipos de leucocitos; monocitos, linfocitos, neutrófilos,
eosinofilos y basófilos. Además de estas células se encuentran también las
plaquetas o trombocito. Que cada uno posee funciones diferentes.

Los neutrófilos son leucocitos de tipo granulocito también denominados

polimorfonucleares en el cual miden 10-18 micras de color rosado o purpura y
 son los más abundante de la sangre en el ser humano, representando en torno
al 60-70 % de los mismos. (Robbins &Cotran; 2009).

Su color se bebe a que no se tiñen con colorantes ácidos , por lo que su

citoplasma al microscopio óptico aparece de color rosa suave. A la vez se
caracterizan por presentar un nucleo con cromatina compactada segmentada
multilobulado. Y tambien su citoplasma contiene granulos finos de color purpura
por el colorante de Giemsa que contienen abundantes enzimas líticas, así como
una sustancia antibacteriana llamada fagocitina, todo esto necesario para la
lucha contra los gérmenes extraños.

Por otro lado en el laboratorio de biología se aprendió las destrezas en las

técnicas d tinción de Wright y de giemsa en el cual se aplico dos protocolos para
la realización de extendido de sangre periférica como método para la
observación celular.

CONCLUSIONES

 Se demostró en la práctica de sangre periférica tinción de Wright y de

Giemsa. A la vez diferentes tipos de células que se encuentra en la sangre
como linfocitos, monocitos y además leucocitos o glóbulos blancos. Gracias
a esos resultados nos sirvieron para saber que deficiencia hay o que
enfermedades hay en la muestra. Además, esta práctica nos ayudó para
saber que en la sangre hay muchas células que nos ayuda a combatir
enfermedades.

 Se identificaron las principales líneas celulares (hematíes, Leucocitos y

plaquetas) que componen el tejido sanguíneo a partir de la observación de la
microscópica de extendidos de sangre periférica.

 Se desarrollaron destrezas en la toma de muestras en la realización de

extendidos de sangre periférica

BIBLIOGRAFÍAS

 BARCO RIOS JOHN. Fundamentos Teórico-Prácticos de Biología Celular"

En: Colombia 2002. ed:LITOAS ISBN: v. 1 pags. 250.
 Bernstein Ruth, Bernstein Stephen. (2004) .Frotis sanguíneo.Disponible:

http://scielo.sld.cu/pdf/ms/v15n3/ms12315.pdf

 GENESER, Finn. Histología. 2ª ed. Edit. Médica Panamericana. Buenos

Aires, 1993.

 Gonzales, (2002). Frote periférico. Disponible:

http://www.bvs.hn/RMH/pdf/1985/pdf/Vol53-4-1985-5.pdf

 López c, (2005). Guía realización de frotis sanguíneo, tinción de láminas.

http://www.herrerobooks.com/pdf/pan/9786079356156.pdf

 Marquez, (2010) frotis de sangre.disponible:

http://med.javeriana.edu.co/fisiologia/nguias/other/sangreall.pdf

 Robbins and Cotran Pathologic Basis of Disease, 8.ª edición, Saunders

(Elsevier) «Ch.2 Acute and chronic inflammation», (2009)

 Salomón (2003) Sangre periférica. Disponible en:

http://www.nparangaricutiro.gob.mx/Libros/Atlas.de.Hematologia.Celulas.Sa
nguineas.pdf

 Salomón, g (2008).frotis de sangre. Disponible:

www.scielo.org.co/pdf/suis/v48n3/v48n3a06.pdf