Universidad  de  La  Serena  
     Facultad  de  Ciencias     Química  Analítica  Instrumental  I.  
Departamento  de  Química              Msc.  Fabiola  Jamett  Díaz.  
ESPECTROFOTOMETRÍA    MOLECULAR.  
APLICACIONES  2  
 
 
 
DETERMINACIÓN DE NITRITOS EN PRODUCTOS CÁRNICOS.
APRENDIZAJE DE LA TÉCNICA DE ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN MOLECULAR
EN LA REGIÓN VISIBLE DEL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO.

1. Principio.

Al reaccionar el ion nitrito presente en el extracto del producto cárnico con el reactivo de ácido
sulfanílico α-naftilamina se produce una reacción colorimétrica por la formación de un
compuesto de color rosado, de tal modo que la intensidad de color es proporcional a la
cantidad de nitrito presente en la muestra. La concentración se determina tras medir la
absorbancia mediante espectrofotometría en la región visible a 520 nm y comparación con
una recta patrón.

2. Material y aparatos.

Definir según los requerimientos de curvas de calibración y muestra problema.

3. Reactivos.

3.1. Solución preparada patrón de nitrito de 1000 mg/L. Solución patrón lista para ser usada
de origen comercial.

3.2. Reactivo colorimétrico: El reactivo colorimétrico se obtiene mezclando volúmenes

iguales de las siguientes soluciones.

Solución I: Disolver calentando en baño María 6 g de ácido sulfanílico en 200 mL de ácido

acético glacial (PA) y 400 mL de agua destilada. Añadir 200 mL de una solución de cloruro
sódico de concentración 100 g/L de NaCl. Diluir con agua hasta 1000 mL.

Solución II: Disolver calentando en baño María 0.3 g de cloruro de a-naftilamina en 100 mL
de agua destilada. Filtrar si es necesario y añadir 200 mL de acético glacial. Diluir hasta 1000
mL con agua destilada. Manipular con precaución esta disolución por su carácter cancerígeno.

Nota: Ambas soluciones deben conservarse en frascos topacios (opacos) bien cerrados.

3.3. Reactivo de clarificación o Carrez I: Disolver 21,9 g de acetato de zinc di hidrato

(Zn(CH3COO)2.2H2O) en agua, agragar 3 mL de ácido acético glacial (CH3COOH) y diluir
  
 
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a 100 mL con agua destilada.

3.4. Reactivo de clarificación o Carrez II: Disolver 10,6 g de ferrocianuro de potasio

K3[Fe(CN)6] en 100 mL de Agua destilada.

4. Procedimiento.

4.1. Preparación de la curva patrón.

Preparar por dilución correcta en matraces aforados de 50,0 mL, a partir de la solución madre
de nitrito de 1000 mg/L, 12 soluciones patrones cuyas concentraciones finales estén entre 0,1
a 1,5 mg de NO2-/L. Antes de enrasar con agua destilada agregue a cada matraz 10 mL del
reactivo colorimétrico. Mezclar y dejar reposar las soluciones 15 minutos a temperatura
ambiente al abrigo de la luz (oscuridad). A partir de 20 minutos y antes de 4 horas, medir la
absorbancia de la solución a 520 nm. Recuerde llevar un blanco de calibración.

4.2. Preparación del extracto:

Pesar con precisión de 0,1 mg en balanza analítica, un peso de 10 g de la muestra problema

(molida y homogenizada previamente) e introducir en un Erlenmeyer de 250 mL. Añadir 200
mL de agua destilada y adicionar consecutivamente 5 mL de cada uno de los reactivos de
Carrez. Agitar durante 1 hora y dejar 10 min en reposo y filtrar. (Si el filtrado resulta coloreado
es necesario decolorar para ello tomar 25 mL del extracto y añadir 1 g aproximado de carbón
activo, luego filtrar hasta que el filtrado sea transparente).

4.3. Análisis Espectrofotométrico del extracto:

Del filtrado tomar una alícuota de 10 mL y ponerla en un matraz de aforo de 50 mL, añadir 10
mL del reactivo colorimétrico, enrazar a volumen con agua destilada, mezclar y dejar reposar
la solución 15 minutos a temperatura ambiente al abrigo de la luz (oscuridad). A partir de 20
minutos y antes de 4 horas, medir la absorbancia de la solución a 520 nm. Si la solución
problema presenta una coloración superior a la de la solución patrón más concentrada, tomar
una alícuota menor de 10 mL, y si es menor al patrón menos coloreado, tomar una alícuota
mayor (20 o 25 mL). Efectuar dos determinaciones de la misma muestra. Recuerde llevar un
blanco de la muestra.
  
 
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4.4. Interpretación y Resultados.

4.4.1. Curva de calibración.

a. Realizar la gráfica de sus datos Row.

b. Establecer el rango en el cual se cumple la ley de Beer, calcular para ello las
absortividades : a y ε .
c. Realizar una discusión de los valores obtenidos para la curva de calibración y establecer
el mejor modelo lineal de la curva de calibración aplicando regresión o mínimos cuadrados
e informe: ecuación de la recta, e incertidumbre de la pendiente y del intercepto.
d. Establecer el coeficiente de regresión e interpretar.
e. Realizar un análisis de residuos e indicar homo o heterocedasticidad. Graficar.
f. Determinar la sensibilidad de calibración y la sensibilidad analítica para el método
desarrollado.
g. Establecer el límite de detección y de cuantificación.
h. Establecer el Rango lineal y/o dinámico.

4.4.2. Calcular el contenido en nitritos de la muestra expresando el resultado en mg/Kg e

indicar su incertidumbre. Realizar el mismo ejercicio pero aplicando la ley de Beer.

4.4.3. Investigue en el Reglamento Sanitario de los Alimentos Chileno (RSA) el valor de NO2-
permitido en el alimento analizado.

4.5. Realice una discusión y conclusión de la técnica aplicada en función del aprendizaje de
la Técnica de Espectroscopía de Absorción Molecula en el Visible..