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CONTENU
• INTRODUCTION ET RAPPEL
• Comment détruire une protéine?
• Mécanismes de sauvetage UPR
• ERAD et destruction de protéines
• L’Ubiquitination, trafic et protéasome
• Le protéasome: assemblage, structure et
fonction
• lien entre protéasome et chaperone (pliage
et destruction)
• la déchetterie cellulaire
PLIAGE DE PROTEINES Cours1
Repliement spontané
Aggrégation
Dégradation
• Eukaryotes ca 30% protéines « misfold » à un moment ou l’autre
• Aggrégats toxiques; formes « dominants négatives
• mutations
• oligomères
• postsynthetic damage, e.g., by oxidation, glycationand deamidation
PLIAGE DE PROTEINES Cours1
pliage et destruction – »les agents doubles »
Pliage Dégradation
DEGRADATION ET PROTEASOME
la question
Extracellulaire
Ex.: trypsine etc
Protéolyse intracellulaire
Lysosome
protéasome
Surcharge =
Stress
Dérangement ER
influence toute la cellule
Stress:
-Protéines mutées
-Augmentation synthèse
(infection, différenciation)
-Stress métabolique
(p.e. diabète)
Contrôle protéines
résidents
DEGRADATION ET PROTEASOME
Répliage des protéines et contrôle de qualité II
Exemple de l’importance/conséquence ERAD
Une cinquantaine de maladies sont actuellement liées à des
problèmes UPR/ERAD et peut induire l’ apoptose
Observation
CFTR, transport chlorure membrane plasmique; mucoviscidose
CFTR DF506; pliage nécessaire avant ER-Golgi
CFTR DF506 pas au niveau de la membrane plasmique
(chaperonnes chimiques)
DEGRADATION ET PROTEASOME
UPR
Induction de la transcription
Trois voies
PERK:
similarité avec IRE
kinase (eIF2-a)
-/- cellules: plus
sensitive
Risques:
contrôle spatiale/temporelle
compartimentalisation (lysosomes)
procaryotes: absence d’endomembranes
(proteasome; archae, pro-, eucaryotes)
Besoins de:
« dépliage » passage
« chaperonnes reverses »
- escorts (Rad23)
- ubiquitination – ou?
DEGRADATION ET PROTEASOME
ERAD
ER-associated degradation
Contrôle de qualité
Envoyer substrat malreplié vers la dégradation
« proteasome »
ERAD: interaction de système d’induction et
de dégradation
induction nécessaire pour dégradation
1) Induction, Atténuation
2) Rétrotransport
3) Dégradation
ER rapidement saturé
« Le système est conçu pour le bon fonctionnement »
Dégradation de protéines – le protéasome
CONTENU
• INTRODUCTION ET RAPPEL
• Comment détruire une protéine?
• Mécanismes de sauvetage UPR
• ERAD et destruction de protéines
• L’Ubiquitination, trafic et protéasome
• Le protéasome: assemblage, structure et
fonction
• lien entre protéasome et chaperone (pliage
et destruction)
• la déchetterie cellulaire
UBIQUITINE
Prix Nobel 2004
• "for the discovery of ubiquitin-mediated protein
degradation”
• Aaron Ciechanover
– Technion – Israel Institute of Technology, Haifa, Israel,
• Avram Hershko
– Technion – Israel Institute of Technology, Haifa, Israel and
• Irwin Rose
– University of California, Irvine, USA
– Ubiquitination:
Signal localisation
Destruction de protéines ERAD; transcription
Dégradation de protéines – le protéasome
exemples de fonctions biologiques
DEGRADATION ET PROTEASOME
ubiquitination et protéasome – la vue générale
Modèle hypothétique
Ubiquination pour diriger vers le « protéasome »
Relation translocon/protéasome?
Protéolyse:
« housekeeping », éradication des erreurs
Déterminer la vie des protéines régulatrices
Cyclines (cycle cellulaire); Facteurs de transcription; Transduction de signaux; Système immunitaire
Processus dangereux
-protéolyse spécifique
-glycosylation
-lipidation
-phosphorylation etc.
Ubiquination:
Attachement d’une protéine a une
autre protéine!
« modificateur stérique »
Négatif: obstacle stérique
Positif: nouvelles interactions
« le phosphate de Darwin »
(possibilités d’évolution)
DEGRADATION ET PROTEASOME
Ubiquitination – la réaction
« bucket brigade »
complexe de multienzymes
isoformes multiples
e-NH2 de Lys
Mono/Multi- et polyubiquination
Ubiquitine possède 7 LYS
Mono/Multi-ubiquination:
Endocytose et réapparition a la surface (4 Ubi)
TGN
Signaux « 3 dimensionnels »
Polyubiquination:
(« réseau » via différents Lys d’ubiquitine)
Riche en information 3D
Protéasome
Fonction de signalisation
(« facteur de réparation des erreur commis par l’ADN »)
DEGRADATION ET PROTEASOME
MONO/MULTI-UBIQUITINATION
Internalisation et métabolisme/recyclage d’un RTK
Le récepteur EGF Ub-Ligase
Différents récepteurs
Ub-Récepteur
Ubiquitine
DEGRADATION ET PROTEASOME
MONO/MULTI-UBIQUITINATION
Ubiquination de protéines
Membranaires
DESTRUCTION BOX
Cyclines : RTALGDIGN
PEST : PEST
Dégradation de protéines – le protéasome
CONTENU
• INTRODUCTION ET RAPPEL
• Comment détruire une protéine?
• Mécanismes de sauvetage UPR
• ERAD et destruction de protéines
• L’Ubiquitination, trafic et protéasome
• Le protéasome: assemblage, structure et fonction
• lien entre protéasome et chaperone (pliage et
destruction)
• la déchetterie cellulaire
DEGRADATION ET PROTEASOME
Le protéasome - introduction
- Découverte initiale: les années 60 In situ
Activités requises:
- dépliage (chaperonnes reverses)
- reconnaissance
- protéolyse
Bactéries: non-essentielle
Levure: essentielle
Bactéries: sans compartiments
Membranaires/vésicules
« protéasome sans chapeau »
Cible thérapeutique:
Bortezomib: myélome multiple; peptide-acide
boronique
DEGRADATION ET PROTEASOME
Protéasome: les étapes
Régulateur (IF)
Activation du pro-peptide b
Autocatalytique
Inter- et intramoléculaire
DEGRADATION ET PROTEASOME
Protéasome: protéases
Trypsine:chymotrypsine
DEGRADATION ET PROTEASOME
Protéasome: la structures des chambres
Tyr 126 du a (points blancs)
accès
Hélices et sandwiches;
site interaction;
15x11 nm;
Extension N term a en « top »:
accès ?
Accès restreint aux peptides
depliés
avec PA
Sans PA
DEGRADATION ET PROTEASOME
Protéasome: la mécanique et mètre moléculaire
a [
b
[
b
[
a
[
Comment bouge le peptide?
Sites catalytiques et Mètre géométrique
Jaune: le plus hydrophobe
Processif
Dégradation de protéines – le protéasome
CONTENU
• INTRODUCTION ET RAPPEL
• Comment détruire une protéine?
• Mécanismes de sauvetage UPR
• ERAD et destruction de protéines
• L’Ubiquitination, trafic et protéasome
• Le protéasome: assemblage, structure et fonction
• lien entre protéasome et chaperone (pliage et
destruction)
• la déchetterie cellulaire
DEGRADATION ET PLIAGE
lien entre protéasome et chaperonnes
PROTEASOME