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Análisis de perfil plásmidos:

Se define como perfil plasmodio al contenido total de plásmidos presente en un


microorganismo representado por un patrón de bandas, donde cada banda representa un
plásmido. Este perfil plasmodio varía dependiendo de la cantidad y el tamaño de los plásmidos
presentes en el microorganismo en cuestión.

Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. Métodos moleculares


de tipificación epidemiológica en bacteriología. 2005

http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/handle/cybertesis/4292/Suarez_rc.pdf?sequence=3

Ribotipificación:

Al igual que en otros métodos de análisis de ADN, se utilizan enzimas que cortan el ADN. Estas
enzimas dividen el ARN sólo cuando ocurre una secuencia específica. De este modo, si una
cepa bacteriana tiene dicha secuencia en su ARNr, éste será cortado en esa ubicación. Si otra
cepa bacteriana tiene unas pocas bases distintas en el mismo lugar, el ARNr no será cortado. El
ARNr luego se observa sobre un gel de manera que es posible ver el número y tamaño de los
segmentos (ver figura 4). El ARNr que ha sido cortado en los sitios esperados se verá distinto
del ARNr que no fue cortado.

https://nciph.sph.unc.edu/focus/vol4/issue4/4-4LabTechniques_espanol.pdf

Riboprinter:

PFGE (pulsed-field gel electrophoresis): electroforesis de campo pulsante

1-el PFGE explora todo el cromosoma detectando la variabilidad existente en los lugares de -
restricción del enzima utilizado para la digestión del ADN o la inserción o deleción de grandes
fragmentos entre dos lugares de restricción.

2-se observó que bajo la acción de un campo eléctrico, las moléculas de ADN se reorientaban y
se desplegaban avanzando en dirección al polo positivo. Cuando el campo eléctrico cesaba, las
moléculas de ADN se relajaban recuperando su estado inicial. La aplicación de un segundo
campo eléctrico, con una orientación distinta del primero, obligaba al ADN a cambiar su
conformación y reorientarse de nuevo para poder avanzar en la dirección del segundo campo
eléctrico. El tiempo requerido para esta reorientación era dependiente de la longitud de la
molécula, esto es de su peso molecular. Tras el cambio de orientación del campo eléctrico, las
moléculas grandes tardan más tiempo en alinearse y poder comenzar el avance a través del gel
de lo que tardan las moléculas de ADN

RAPD:

La técnica RAPD (Random amplified polymorphic DNA) se basa en la utilización de cebadores


de 9 a 10 bases de longitud, que hibridan con suficiente afinidad con ciertas regiones del
cromosoma bacteriano a bajas temperaturas, permitiendo amplificar las regiones que se
encuentran localizadas entre dos cebadores consecutivos. Si dos cebadores hibridan a una
distancia óptima uno de otro y en la dirección apropiada, se obtendrá un producto de PCR con
un tamaño correspondiente a la distancia entre los dos cebadores.
REP o ERIC PCR (repetitive extragenic palindrom): utiliza cebadores cuya secuencia se ha
diseñado en función de las secuencias cromosómicas repetidas. Estas secuencias están
presentes en diferentes localizaciones a lo largo del cromosoma bacteriano. Cuando dos
secuencias están situadas lo suficientemente cerca, el fragmento de ADN que hay entre ambas
es amplificado. Dado que el número y localización de estas secuencias repetidas entre cepas es
variable, el número y tamaño de los fragmentos de ADN generados también variará.

RFLP ((restriction fragment length polymorphism): se consigue separando los fragmentos


obtenidos mediante una electroforesis en un gel de agarosa que se tiñe con bromuro de etidio.
Cada banda corresponde a la suma de todos los fragmentos generados del tamaño
correspondiente a aquella movilidad electroforética.

AFLP (Amplification fragment length polymorphism):

es un marcador molecular que combina dos estrategias diferentes: digestión del ADN con
enzimas de restricción y amplificación selectiva mediante PCR selectiva. Básicamente, se basa
en la utilización de adaptadores que “reparan” los fragmentos de ADN obtenidos en la
digestión, con una posterior amplificación mediante iniciadores complementarios de la
secuencia diseñada en los adaptadores.

MLST (Multilocus sequence typing)

El método está basado en el principio desarrollado en el análisis de isoenzimas (multilocus


enzyme electrophoresis -MLEE-), en el que se estudia la movilidad electroforética de un
número concreto (generalmente entre 15 y 20) de enzimas metabólicos en geles de almidón o
poliacrilamida.

MLVA: Multiple-Locus Variable number tandem repeat Analysis (MLVA)


In MLVA the number of repeats in a set of VNTR loci is assessed. For the bacterial species
presented here this is achieved by performing PCR of the VNTR loci followed by accurate sizing of
the PCR products on an automated DNA sequencer. The assessed product size is used to calculate
the number of repeat units in each locus. The calculated numbers of repeats of the VNTR loci
(alleles) are combined into a string which consists of integers e.g. 14-0-2-4-1-7-1-6 and is
referred to as the MLVA profile. Each unique MLVA profile is given a MLVA type designation e.g.
MT0021. The MLVA profile can be used for comparison and clustering and often complex
assignments can be made. The unambiguous assessment of the number of repeats results in
numerical data that can easily be compared to those in central databases via the Internet.

https://www.mlva.net/

Checar Pagina 7 de
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/seim
c-procedimientomicrobiologia18.pdf

MAS INFORMACION:

http://www.posgradoeinvestigacion.uadec.mx/AQM/No.%201/AQMmicroorganismos.html

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