AGAR SANGRE

Para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. Con la adición de sangre, es

útil para microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de
una gran variedad de muestras, así como para la observación de reacciones de hemólisis.

Fundamento

La peptona y el almidón otorgan al medio un alto valor nutritivo que permite el

crecimiento de una gran variedad de microorganismos incluso aquellos que son
muy exigentes. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico. La adición de
sangre de cordero, en una concentración de 5% a 10 %, aporta nutrientes
esenciales para el crecimiento bacteriano; además, permite la observación de
hemólisis.

Fórmula típica x litro (componentes)

Peptona especial 23.0 gr

Almidón 1.0 gr

Cloruro de sodio 5.0 gr

Agar 10.0 gr

Suplemento:

Sangre de cordero 5% - 10%

pH final 7.3 +/- 0.2

Preparación

El medio de cultivo preparado debe retirarse de su empaque plástico, y debe ser

atemperado unos 30 minutos a temperatura ambiente antes de su uso, nunca
flamearlo. Antes de usarlo, siempre debe ser marcado o identificado
apropiadamente en su parte posterior, con los detalles de la muestra de manera
que no tape la parte del fondo del medio de cultivo para visualizar si se presenta
contaminación.
A partir del material en estudio, Inocule el medio usando une técnica aséptica y
apropiada de acuerdo a lo requerido, e incube bajo condiciones apropiadas de
temperatura y humedad, ambiente de aerobiosis, durante 24-48 horas, entre 35 y
37 °C. Algunos patógenos necesitan condiciones especiales de incubación para lo
cual necesitan dióxido de carbono para su aislamiento primario; esto se logra
incubando la placa en una atmósfera que contenga 3-10% de CO 2. Incubar a
35ºC +/- 2ºC durante 18 24 hora. Examine el medio de cultivo después de la
incubación para observar evidencia de crecimiento y realice las técnicas
apropiadas de identificación, de acuerdo a los protocolos establecidos.

Resultados control de calidad crecimiento

Microorganismo Crecimiento Hemolisis

E. Coli Abundante ---
S. Aureus Abundante Beta
S. Pyogenes Abundante Beta
S. Pneumoniae Abundante Beta

Almacenamiento

Los medios de cultivo preparados marca MDM científica deben ser almacenados con las siguientes
pautas:

 No exponer a la luz directa (artificial o natural), principalmente los medios de cultivo

cromogénicos. En caso que se suministren en caja de cartón, mantenerlos almacenados al interior
de esta.

 Una vez recibido el producto, almacenar entre 4°C y 12°C hasta su fecha de vencimiento.

 No almacenar cerca del congelador en caso de existir este compartimiento en la nevera de

almacenamiento, y así evitar cristalización del medio de cultivo (agar congelado).

http://mdmcientifica.com/wp-content/uploads/2016/11/O-P.PD-01-INSERTO-Agar-SANGRE.pdf
 AGAR CHOCOLATE
El Agar Chocolate es un medio no selectivo para cultivo y aislamiento de
microorganismos exigentes, especialmente de Neisseria y Haemophilus spp de
muestras clínicas.

Fundamento

Carpenter y Morton describieron un medio para el aislamiento de gonococcus en

veinticuatro horas. La base del Agar Chocolate contiene caseína y peptonas
seleccionadas como fuentes de nitrógeno, con un pH controlado , la hemoglobina
aporta la hemina (factor X) y el suplemento vitamínico que aporta entre otros el
factor V ( nicotinamida adenina dinucleótido), esencial para las diferentes especies
de Haemophilus, además de vitaminas, aminoácidos, coenzimas, glucosa,
factores esenciales para el crecimiento de Neisserias patógenas y otros
microorganismos exigentes.

Composición por litro

Proteasa Peptona nº3 15,0 g

Hidrolizado de hígado 2,5 g

Extracto de Levadura 5,0 g

Cloruro sódico 5,0 g

Sangre de Caballo calentada 7%

Cloruro sódico 5,0 g

Agar 12,0 g

Factores de crecimiento 0,5 g

PH 7,4+/- 0,2

Preparación
RESULTADOS

Cepas Crecimientos
Haemophilus influenzae ATCC 10211 De bueno a excelente
Neisseria gonorrhoeae ATCC 43069 De aceptable a excelente
Neisseria meningitidis ATCC 13090 De bueno a excelente
Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 De bueno a excelente
No inoculada Color Chocolate- marrón

Caracteristicas del Medio

Las placas Agar Chocolate enriquecido , han sido controladas
microbiológicamente, pueden requerir el uso de otros medios de cultivo auxiliares,
reactivos y equipos de laboratorio de forma complementaria. Este medio puede
ser utilizado para muestras que contengan gérmenes exigentes. Es un medio no
selectivo para Neisseria, Haemophilus y otras bacterias que no crecen en un
medio de agar sangre. Debe utilizarse un medio de transporte adecuado para las
muestras, ya que estos gérmenes son muy sensibles a las condiciones
ambientales, no deben mantenerse las muestras sin inocular más de 24 horas y
mantenidas entre 20 y 25 ºC, y no refrigeradas. Las morfologías típicas de
crecimiento de las colonias son las siguientes:

Organismos Agar Chocolate aspecto de las

Haemophilus influenzae
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
colonias
Pequeñas colonias ( 1 mm) de aspecto
perlado húmedo y olor característico
metálico
Pequeñas colonias mucoides de color
blanco –grisáceo a incoloras
Colonias medias , mucoides y de color
azul-grisáceo
Streptococcus pneumoniae
Granulicatella (Abiotrophia) adiacens*
Pequeñas colonias planas mucoides
verdosas, incluso puede presentarse un
halo verdoso
Pequeñas colonias de color gris-
verdoso, llegando a presentar un halo
verdoso.

Almacenamiento
Estas placas han sido inoculadas con la cepas que a continuación se indican,
incubadas a 35 +/- 2 ºC en atmósfera aeróbica enriquecida con dióxido de carbono
y examinadas transcurridas de 42 a 48 horas de la inoculación, obteniéndose los
siguientes crecimientos, tamaños de colonias , como procedimiento de control de
calidad.

http://f-
soria.es/Inform_soria/Difco%20Fichas%20tecnicas/PLACAS
%20DIFCO%20Y%20CROMOGENICAS%20BD/FT%20CHO
COLATE%20%20AGAR.pdf
 AGAR SAL MANITOL
Se utiliza para el aislamiento selectivo de estafilococos y para la detección de
Staphylococcus aureus a partir de muestras clínicas.

Fundamento

El agar sal manitol en una fórmula diseñada por Chapman para la diferenciación
de estafilococos positivos a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) de
los estafilococos negativos a la coagulasa1 . Este agar se utiliza para el
aislamiento de estafilococos a partir de muestras clínicas2 , de cosméticos3 y de
pruebas de límite microbiano4, 5. El agar sal manitol contiene peptonas y
extractos de carne bovina, que suministran los nutrientes esenciales. Una
concentración de cloruro sódico de 7,5% tiene como resultado una inhibición
parcial o completa de los organismos bacterianos diferentes de los estafilococos.
La fermentación de manitol, indicada por el cambio del indicador de rojo fenol,
facilita la diferenciación de la especie de estafilococos. Los estafilococos positivos
a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) producen colonias de color
amarillo y un medio circundante de color amarillo, mientras que los estafilococos
negativos a la coagulasa producen colonias de color rojo y no producen cambio de
color en el indicador de rojo fenol.

Fórmula* por litro de agua purificada

Extracto de carne bovina 1,0 g

Digerido pancreático de caseína 5,0

Digerido péptico de tejido animal 5,0

Cloruro sódico 75,0

D-manitol 10,0

Rojo fenol 0,025

Agar 15,0

pH 7,4 ± 0,2
Preparación

Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el
laboratorio. La placa de extensión se utiliza principalmente para aislar los cultivos
puros de las muestras que contienen flora mixta. Si, por el contrario, el material se
cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección
pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área inoculada.
También debe inocularse un medio no selectivo tal como el agar Columbia con
sangre de carnero al 5% para proporcionar una indicación de otros organismos
presentes en la muestra. Incubar las placas a 24 – 48 h a 35 ± 2 °C en una
atmósfera aerobia.

Resultados

Después de la incubación, las placas se examinan para detectar la presencia de colonias de

estafilococos La morfología característica de las colonias en BD Mannitol Salt Agar es la siguiente:

Organismos Resultados del crecimiento

Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Estafilococos diferentes de S. aureus y S.
epidermidis
Micrococos
Enterococcus, Streptococcus
Bacterias gram negativas
Las colonias que muestran una apariencia de estafilococos deben ser sometidas a otras pruebas de
diferenciación para confirmar su identidad.
Colonias amarillas de tamaño medio, amarillo
medio.
Colonias blancas de tamaño pequeño a medio,
rojo medio.
Colonias de tamaño pequeño a grande, con
zonas de color rojo o amarillo, según la especie.
Grandes, de color blanco a anaranjado
Sin crecimiento a crecimiento muy débil
Sin crecimiento a crecimiento débil
Caracteristicas del Medio

Es una fórmula estándar utilizada para el aislamiento y la diferenciación por

fermentación de manitol por parte de los estafilococos de fuentes clínicas y no
clínicas. Se recomiendan períodos de incubación de 48 – 72 h para detectar todas
la especies de estafilococos presentes en la muestra . Varias especies de
Staphylococcus diferentes de S. aureus son positivas al manitol y producen
colonias de color amarillo, rodeadas de zonas de color amarillo en este medio (por
ej., S. capitis, S. xylosus, S. cohnii, S. sciuri, S. simulans y otras especies). Por
consiguiente, se necesitan más pruebas bioquímicas para la identificación de S.
aureus u otras especies.

http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8771
 AGAR MULLER HINTON
El Mueller Hinton Agar es un medio de cultivo general , utilizado para el cultivo de
microorganismos variados.

Fundamento

El extracto de carne y peptonas presentes en el medio proporcionan las fuentes de

carbono, nitrógeno y vitaminas suficientes para el crecimiento de estos
microorganismos. Ha sido uno de los primeros medios utilizados en microbiología,
tiene utilidad en el mantenimiento y transporte de cultivos puros . Es el medio
recomendado para la realización de pruebas de sensibilidad a antibióticos.

Composición* Concentración
del medio:
Caseína hidrolizada 17.5g/litro
Infusión de carne de 300 g 2.0g/litro
Almidón 1.5g/litro

pH final a 25°C: 7.3

Preparación

1. Referirse a la etiqueta del envase para cantidades y volúmenes

requeridos. Preparar MAST® Mueller Hinton Agar (DM170) suspendiendo
el medio en agua destilada o desionizada. Para los envases de sobre,
disolver el contenido entero del sobre en el volumen mostrado en la
etiqueta.
2. Autoclavar a 121 C (15 p.s.i.) durante 15 minutos.
3. Si se requiere, enfriar a 50 a 55 C y mantener a esta temperatura al baño
Maria. Si se requiere, añadir el 5 a 7% de sangre desfibrinada estéril de
caballo para aumentar el crecimiento de microorganismos fastidiosos o
antibióticos (MAST® ADATAB) para las diluciones en los métodos
utilizados para examinar la susceptibilidad.
4. Suplementos de crecimiento alternativos pueden ser usados.
5. Verter las placas y dejar solidificar

6. Las placas de cultivo preparadas deben ser usadas inmediatamente o

almacenadas en bolsas de plástico a 2 a 8 C hasta un máximo de una
semana antes de su uso.
7. El examen de la Susceptibilidad Antimicrobiana debe ser llevado a cabo
 de acuerdo a los estándares que establecen los autoridades reguladoras
como CLSI® (Clinical and Laboratory Standards Institute) y EUCAST
(The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing).

Resultados
Microorganismos
Enterococcus faecalis Crecimiento y patrón de
ATCC 29212 susceptibilidad correcto
Escherichia coli Crecimiento y patrón de
ATCC 25922 susceptibilidad correcto
Pseudomonas aeruginosa Crecimiento y patrón de
ATCC 27853 susceptibilidad correcto
Staphylococcus aureus Crecimiento y patrón de
ATCC 25923 susceptibilidad correcto

Comprobar si hay signos de deterioro. El control de calidad debe ser llevado

a acabo con al menos un organismo que demuestre la actuación esperada.
No usar si el resultado del control del microorganismo es incorrecto La
siguiente lista muestra los resultados de las cepas de control de uso rutinario,
que el usuario final puede obtener fácilmente.

Almacenamiento

Todos los contenedores de medios de cultivo deshidratados deben

permanecer herméticamente cerrados y almacenados en un lugar seco a 10 a
25°C hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del envase.

http://www.mastgrp.com/IFUS/IFU335_SPA.pdf