Espectroscopia Ultravioleta – Visible

Rutinas de Diagnóstico
Objetivo General

 Conocer las partes principales y el manejo de un Espectrofotómetro UV-Visible y

verificar las condiciones del equipo.

Objetivos Particulares

 Realizar correctamente las Rutinas de diagnóstico para que los análisis cualitativo y
cuantitativo sean confiables.
 Identificar los posibles parámetros que ocasionan un error en el análisis de la
absorbancia.

Introducción
 ¿Qué Es una forma de calibración de los instrumentos para
son? obtener análisis exactos.

Se define como la cercanía de una medida a su valor real.

Fundamento: El estudio de la exactitud fotométrica consiste
Exactitud en la medición de absorbancias de soluciones certificadas y
Fotométrica en la comparación de los valores hallados con los de
referencia. Las soluciones comúnmente usadas como
estándares de absorbancia.

Ancho de banda Es el ancho de banda de un instrumento operado a un

espectral y ancho de periodo de integración y una relación señal a ruido fija.
banda observada de
la banda de Están relacionadas si las rendijas son demasiado
adsorción anchas, la altura del pico observado es mayor, dando
los valores de absorbancia erróneos.
Rutinas de
Diagnostico

Se define como la capacidad de un sistema fotométrico

Linealidad para dar una relación lineal entre la potencia radiante
Fotométrica incidente a su detector y la lectura.
La linealidad se fundamenta en los valores de absorbancia.

Se refiere a cuán cerca del valor real se encuentra el

Exactitud
valor medido.

Se refiere a la dispersión del conjunto de valores

Precisión obtenidos de mediciones repetidas de una magnitud.
Cuanto menor es la dispersión mayor la precisión.
Material y Equipo
 Matraz aforado de 500 ml
 Matraz aforado de 100 ml
 Matraces aforados de 10 ml
 Pipeta graduada de 1 ml
 Pipeta graduada de 5 ml
 Filtro de Oxido de Holmio
 Espectrofotómetro UV-Visible
 Celdas de cuarzo de 1 cm

Preparación del equipo

Desarrollo Experimental
El procedimiento de las siguientes lecturas es el mismo, solo que se va ir
modificando las características de la lámpara:

Tener las sigs. C) Ancho de banda ESPECTRAL

características: (Deuterio).
- Lámpara UV.
- Modo CAL.
-Intervalo 490-480.
-Velocidad 15 nm/min.
-Ordenada 0-100.

C) Ancho de banda ESPECTRAL

Tener las sigs. (Deuterio).
características:
- Lámpara UV.
- Modo ABS
-Intervalo 280-230.
-Velocidad 15 nm/min.
-Ordenada 0-1.

-Ordenada 0-100.
D) VAPOR DE BENCENO
Tener las sigs. - Lámpara UV.
características: - Modo ABS
-Intervalo 280-230.
-Velocidad 15 nm/min.
-Ordenada 0-1.

-Ordenada 0-100.
LINEALIDAD FOTOMETRICA

LINEALIDAD
FOTOMETRICA

- Lámpara UV-VIS
- Modo ABS
-Intervalo 450-250.
-Velocidad 120
nm/min.
-Ordenada 0-3.

EMPLEANDO FILTRO DE OXIDO DE HOLMIO

ÓXIDO DE
HOLMIO.

- Lámpara UV-VIS
- Modo ABS
-Intervalo 700-200.
-Velocidad 120 nm/min.
-Ordenada 0-3.
 CÁLCULOS PREVIOS DE LAS SOLUCIONES
C1= 100 ppm
C1V1=C2V2
Despejando V1:
V1=C2V2/C1
Conociendo los valores de:
V1 [mL] V2 [mL] C2 [PPM]
2.5 10 25
5 10 50
7.5 10 75

 Para 25 ppm:
V1=(25 mg/L)(10 mL)/100 mg/L =2.5 mL

 Para 50 ppm:
V1=(50 mg/L)(10 mL)/100 mg/L =5 mL

 Para 75 ppm:
V1=(75 mg/L)(10 mL)/100 mg/L =7.5 mL

Cálculo del porcentaje error (%E)

λ máxima teórica(nm) − λ máxima exp (nm)

%𝑬 = ∗ 100
λ máxima exp (nm)
242.2 − 242
%𝑬 = ∗ 100
242
%𝑬 = 𝟎. 𝟎𝟖%
 Gráficas y tabla de resultados

Ancho de banda espectral

Lámpara Modo Intervalo λ Velocidad de Ordenada Velocidad de

barrido límite carta
UV ABS 280-230 nm 15 nm/min 0–1 30 mm/min

Resultados para “Ancho de banda espectral”

λ máxima teórica(nm) λ máxima experimental (nm) % Error

237.0 237 0.00%
242.2 242 0.08%
247.8 247 0.32%
253.6 254 0.16%
259.6 259 0.23%
266.8 266 0.30%
 EMPLEANDO EL FILTRO DE ÓXIDO DE HOLMIO

Lámpara Modo Intervalo λ Velocidad de Ordenada Velocidad de

barrido límite carta
UV-VIS ABS 700-200 nm 120 nm/min 0–3 60 m/min

Resultados para “ÓXIDO DE HOLMIO”

λ máxima teórica(nm) λ máxima experimental (nm) % Error

648.5 649 0.08%
637.0 635 0.31%
536.0 535 0.19%
459.5 460 0.11%
453.0 450 0.66%
445.0 445 0.00%
418.0 420 0.48%
360.5 365 1.25%
333.5 330 1.05%
287.0 280 2.44%
279.0 270 3.23%
 Resultados para “LINEALIDAD FOTOMÉTRICA”

LINEALIDAD FOTOMÉTRICA (DATOS EXPERIMENTALES)

Lámpara Modo Intervalo λ Velocidad de Ordenada Velocidad de

barrido límite carta
UV-VIS ABS 450-250 nm 120 nm/min 0 – 1.5 60 mm/min

Resultados para “LINEALIDAD FOTOMÉTRICA”

Absorbancias Experimentales
λ máx. ( nm ) ABS C ( mg/L )
350 0.36 25
350 0.73 50
350 1.04 75
 GRAFICA DE LINEALIDAD FOTOMETRICA

GRAFICA DE ABS VS CONCENTRACION

1.2 1.04
ABSORBANCIA

1 0.73
0.8
0.6 0.36
0.4
0.2 y = 0.0136x + 0.03
0 R² = 0.9974
0 10 20 30 40 50 60 70 80
CONCENTRACION (ppm)

Observaciones

 Para cada calibración es necesario una muestra estándar.

 El ancho de la celda es de 1 cm.
 La muestra de vapor de benceno fue relativamente pequeña para una mejor
experimentación.
 Las celdas cuentas con una parte esmerilada para que se sostengan desde allí y no
llegar a rayar la parte donde pasa la luz.
 La lámpara de Deuterio se ocupa para la zona UV.
 En cada experimentación se observaron luces de diferentes colores.
Conclusiones

Al utilizar el espectrofotómetro es necesario llevar a acabo rutinas de diagnóstico ya que con

estas se puede realizar un análisis del equipo y con ello evitar error en los datos analíticos.
Con respecto de la calibración del K2Cr2O7 se pudo comprobar que el equipo sigue la ley de
Lambert-Beer ya que se observó que a una mayor concentración se tenía una mayor
absorbancia.
Al conocer las partes del Espectrofotómetro se podrá utilizar de la manera más adecuada,
desde cual es la lámpara adecuada según la zona en que resida la solución problema como
la manera de manejar las muestras.
Mientras que se cumpla con todas las rutinas necesarias para la calibración del equipo se
obtendrán análisis más exactos y así tener mayor eficiencia al calcular la absorbancia y
concentración de cualquier muestra, siempre cabe recalcar que los equipos utilizados son de
un valor monetario muy alto por lo que se deben de utilizar con responsabilidad.

Portillo Mera Luis Ricardo

Cuestionario.
1. ¿Cuál es el fundamento de los métodos espectroscópicos de análisis?
Se basa en las interacciones de la radiación electromagnética con la materia. Y esta se divide en dos
absorción y emisión (la absorción de radiación ultravioleta, visible y la espectroscopia de fluorescencia
molecular).
2. ¿Qué se entiende por transición electrónica?
Es la transferencia de un electrón que se halla en un nivel bajo de energía molecular, u orbital atómico,
a un orbital de mayor energía, es decir, es la transición de un electrón entre los diferentes niveles de
energía.
3. ¿Cuáles son las principales transiciones electrónicas que se presentan en compuestos
orgánicos?
Transiciones de los electrones n y π, al estado excitado π*, porque la energía requerida para estos
procesos lleva las bandas de absorción hacia dentro de la región de uv-visible (200 a 700 nm).
1) σ→ σ*
2) σ→ π * π → σ*
3) n→σ*
4) n→ π *

4. ¿Qué tipo de compuestos se pueden analizar por la técnica UV-Visible?

Se pueden analizar metales de transición, compuestos orgánicos, inorgánicos y macromoléculas
biológicas.

5. Dé la estructura de dos compuestos orgánicos que absorban en la región de UV-Visible

Antraceno Ácido Acético Etileno Benceno

6. Describa brevemente cuál es el objetivo de la práctica

Manejar e identificar las partes del espectrofotómetro uv-visible, así como las condiciones de
operación.
7. Mencione cada una de las partes que constituyen a un espectrofotómetro UV-Vis
Fuente de luz (lámpara), Monocromador, Rejilla, Compartimiento de muestra, Celdas, Detector y
Sistema de procesamiento y Lectura de señales.

8. Explique cuál es el propósito de calibrar los equipos antes de realizar cualquier tipo de análisis
Para disminuir la incertidumbre (poca exactitud) o errores que tenga el equipo y así asegurar que se
puede usar el instrumento de manera segura y confiable obteniendo resultados certeros.
9. Explique qué se entiende por barrido espectral
Es el análisis que se realiza cuando no se conoce la naturaleza de la muestra en todo el intervalo del
equipo, permitiéndonos conocer la máxima longitud de absorción del analito.
10. ¿Qué tipo de información analítica proporcionan los resultados de un espectrograma?
Un gráfico de la radiación emitida en función de la frecuencia o de la longitud máxima de onda.
11. ¿En qué industrias tiene aplicación la técnica UV-Vis? Mencione ejemplos específicos
Farmacéutica, toxicológica, alimentos, etc. Por ejemplo, en Comex el colorímetro de pinturas.
Asimismo, se utiliza para el aseguramiento de la calidad hasta mediciones de desarrollo de producto
de textiles, colorantes, papel y vidrio.
 Determinación de grupos funcionales en moléculas orgánicas.
 Análisis de muestras bioquímicas
 Recubrimientos, reflejantes, anti reflejantes, corrección de color de recubrimientos.
 Determinación de metales en compuestos de coordinación.
 Análisis de semiconductores.
 Determinación cuantitativa; caracterización superficial de sólidos hasta el análisis fotométrico
de muestras turbias, coloidales, transparentes y traslúcidas.

Bibliografía

Department of Chemistry, U. o. (30 de SEPTEMBER de 2010). Espectroscopy ("filled-empty")

Orbital Interactions. Obtenido de http://chemistry.umeche.maine.edu/CHY252/HOMO-
LUMO.html

McBride, J. M. (2011). Espectroscopia UV-VIS. Obtenido de https://sstti.ua.es/es/instrumentacion-

cientifica/unidad-de-rayos-x-de-monocristal-y-espectroscopias-vibracional-y-
optica/espectroscopia-ultravioleta-visible.html