Practica #11 – Asilamiento y cultivo de hongos

Alumnos: Ayala Gallardo Luis Joaquín – 13210993

Betancourt Lara Héctor José – 14211979
Ríos Dueñas Alejandra - 14211993

Profe. Solís Delgado Luis Ernesto

Materia: Microbiología

Grupo: “A”

Fecha: 8 de diciembre del 2017

 Introducción

Los hongos son organismos eucariotas, de mayor tamaño y complejidad que las
bacterias. Se distinguen de otros eucariontes, como los animales, por ser inmóviles y, de las
algas y plantas, por carecer de pigmentos fotosintéticos. Son de nutrición heterótrofa, es decir,
dependen de nutrientes orgánicos disueltos por sistemas enzimáticos específicos, que son
absorbidos a través de su pared celular y membrana plasmática.

En este grupo de organismos se encuentran formas unicelulares (levaduras) o

pluricelulares (filamentosos). Las levaduras son células de forma esférica u oval, ampliamente
distribuidas en la naturaleza; con frecuencia se encuentran formando una cubierta pulverulenta
fina sobre frutos y hojas. Las levaduras se reproducen en forma asexual por gemación, un
proceso por el cual brota una protuberancia o yema de la célula madre que, posteriormente se
separa como célula individual. Los hongos filamentosos (mohos) tienen una estructura
vegetativa característica denominada hifa. El conjunto de hifas ramificadas constituye el
micelio. Las hifas de algunos hongos presentan tabiques transversales o septos, aunque en el
caso de los hongos que pertenecen al grupo Zygomycota, las hifas no presentan estos septos
y se conocen como hifas cenocíticas.

El principal mecanismo de reproducción de los hongos es asexual por fragmentación de

hifas vegetativas o por la producción de esporas en conidióforos y esporangióforos, formados
en hifas aéreas, llamadas reproductivas. La presencia de estructuras de reproducción sexual
es el principal criterio de clasificación que permite ubicar a los hongos en tres divisiones o
phyla: Zygomycota, Ascomycota y Basidiomycota. Otros criterios importantes para la
clasificación de los hongos son las características de las hifas y las estructuras de producción
de esporas asexuales.
 Marco teórico

Hongos

Los hongos son organismos multicelulares, es decir que pueden ser unicelulares o
pluricelulares, que se alimenta mediante la absorción, estos vegetales no pueden sintetizar sus
propios alimentos, viven sobre otros organismos es por ello que se dicen que son saprofitos o
parásitos y forman líquenes. Los hongos son organismos sin clorofila, por lo que no pueden
realizar la función de fotosíntesis, obtienen sus alimentos en forma directa o indirecta,
almacenando sustancias nutritivas.

Los cuerpos de los hongos están formados por unos filamentos llamados hifas en la que
podemos encontrar la materia orgánica donde crece llamada micelio nutritivo. Son inmóviles,
pero con flujo protoplasmático en el micelio (los micelios son masas de filamentos ramificados
llamados hifas que constituyen el hongo). Su ciclo de reproducción es primordialmente sexual
y asexual.
 Sexual: todos los hongos con excepción de los hongos imperfectos (deuteromictos) poseen
una reproducción sexual.
 Asexual: esta reproducción ocurre solo en hongos inferiores acuáticos (ficomicetos).

Clasificación

Los hongos son agrupados según los diversos criterios que convergen en la taxonomía
o sea el arte de ordenar a los seres según sus interrelaciones fisiológicas, morfológicas o
moleculares. A continuación, se indican algunas características de los reinos del dominio
Eukarya que contienen a los diversos hongos y después se muestra un esquema de la división
de los hongos en grandes grupos. Los mixomicetos y mastigomicetos han sido reubicados en
los reinos Protozoa y Chromista que incluyen a los protozoos y las algas respectivamente.

Tabla 1. Características de los reinos del dominio Eucariota que contienen los hongos.

Fungi Chromista Protozoa

Nutrición Heterotrófica (por Autotrófica Heterotrófica
absorción u (fotosintética o por (fagotrófica) o
osmotrófica) absorción) autotrófica
(fotosintética)
Pared celular Celulosa con Quitina y β-glucanos Ausente en forma
frecuencia, sin trófica, variable si
quitina ni β-glucanos está presente
Crestas Tubulares Achatadas Tubulares
mitocondriales
Mastigonemas Tubulares Ausentes No tubulares
flagelares
 Los mastigomicetos son hongos que forman zoosporos. Muchos son saprobios del suelo
que actúan como descomponedores importantes. También se encuentran en agua dulce,
así como en aguas residuales. Algunas especies son parásitas de plantas, algas, peces e
insectos, por ejemplo, Phytophthora infestans causa el tizón de la papa. Los
quitridiomicetos difieren de los oomicetos, entre otras cosas, en el número de flagelos de
los esporos y la composición de la pared celular.
 Los zigomicetos son saprobios comunes en el suelo. Algunas especies están asociadas al
estiércol y otras, como Entomophthora, son parásitas de insectos. También incluye hongos
asociados simbióticamente con plantas formando micorrizas vesículo arbusculares, como
Glomus y Acaulospora
 Los ascomicetos abarcan hongos miceliales y levaduras. Entre éstas que se encuentra
Saccharomyces empleado en la panificación y la producción de cerveza. Las levaduras
están asociadas a frutas, pero también se hallan en agua dulce y ambientes marinos.
 Los macromicetos están formados por largas hifas ramificados que se reúnen en cordones
rizomorfos y cuerpos de reproducción (ascomas, basidiomas) visibles y medibles en
centímetros. Son organismos saprobios que absorben la materia orgánica muerta de los
residuos donde crecen, o son parásitos de árboles, o viven en simbiosis con plantas
formando ectomicorrizas. Los hay comestibles y venenosos. Su ciclo de vida es complejo
y varía según las clases de hongos.

Tabla 2. Clasificación de acuerdo a los caracteres macroscópicos.

Reino División Subdivisión Clase Orden

Agaricales
Hymenomycetes Aphyllophorales
Tremelales
Hymenogasterales
Basidiomycotina Lycoperdales
Nidulariales
Gasteromycetes
Phallales
Podaxales
Fungi Eumycota Tulostomatales
Heliotales
Dyscomycetes Pezizales
Tuberales
Cordyceps
Ascomycotina
Hypomyces
Pyrenomycetes Podostroma
Xylaria
Daldinia

Diversas especies de Hongos

 Penicillum crysogenum.
Es el hongo productor de penicilina más conocido y también puede producir algunos
alcaloides como la roquefortina C, meleagrina y chrisogina. Está ampliamente distribuido en la
naturaleza, suele formar colonias verdeazuladas sobre el pan duro y los cítricos, y sus esporas
se encuentran frecuentemente en el polvo doméstico. Se encuentra con frecuencia en los
edificios húmedos y mohosos donde deteriora diferentes materiales de construcción, entre los
que resaltan el papel de decoración (crece bien en la cola empleada para su adhesión a las
paredes).

No muestra una notable variación estacional. Las máximas concentraciones de conidios

en el aire se alcanzan en invierno y primavera (mayores en las áreas urbanas que en las
rurales). Su temperatura óptima de crecimiento es de 23 °C, pero crece entre 5 y 37 °C. Es
alimento de ácaros como Acarus siro y Tyrophagus pultrescentiae.

Puede encontrase colonizando las vías respiratorias de pacientes con alergias

respiratorias y producir reactividad cutánea. Se han descrito casos de otomicosis,
endoftalmitis, queratitis, infecciones cutáneas, esofagitis, neumonías necrotizantes o
infecciones diseminadas en pacientes con neoplasias o inmunodepresión. 

 Asprgillus niger.
Es un hongo que produce un moho negro en vegetales (muy común en la lechuga, el
tomate o la acelga). Es una de las especies más corrientes del género Aspergillus. El
Aspergillus es un género de alrededor de 200 hongos. Puede existir en dos formas básicas:
levaduras e hifas. El Aspergillus es filamentoso (compuesto de cadenas de células, llamadas
hifas, el tipo de hongos opuesto a las levaduras, que se componen de una sola célula redonda).

No causa tantas enfermedades como otras especies de Aspergillus, pero en altas

concentraciones puede producir aspergilosis, que provoca alteraciones pulmonares. Esta
enfermedad aparece con más frecuencia en horticultores, ya que inhalan el polvo del hongo
con más facilidad.

Se cultiva para varios productos químicos como el ácido cítrico y el ácido glucónico, y
enzimas como glucoamilasa, galactosidasa, fitasa, etc.

 Rhizopus oligosporus.
Es un hongo de la familia Mucoraceae que es ampliamente utilizado cultivo iniciador
para la producción doméstica de un producto alimenticio procedente de la fermentación de la
soja que se presenta en forma de pastel. Las esporas producen suaves, blancos micelio, la
unión de los granos juntos para crear un comestible "torta" de la soja parcialmente fermentado.

Produce un antibiótico que inhibe bacterias gram positiva, incluyendo la potencialmente

dañina Staphylococcus aureus y el beneficio de Bacillus subtilis, incluso después de que se
consume Rhizopus. Esto apoya la evidencia anecdótica de que los que comen con regularidad
tienen menos infecciones intestinales.
 Objetivo

 Aplicar las técnicas para aislar, cultivar y observar la morfología colonial y microscópica de
hongos filamentosos y levaduras.
 Fomentar la investigación a través de las preparaciones observadas.
 Propiciar una discusión de resultados y comparar las diferencias que existen con otros
grupos microbianos en cuanto a su cultivo, observación macroscópica y microscópica.

Metodología y experimentación

Material y equipo:
 Matraz con 150 mL de agar papa
dextrosa (PDA).
 Tubo con 5 mL de ácido tartárico al 10%
 2 cajas para microcultivo.
 Tubo con 8 mL de glicerol al 10%
 5 cajas Petri.
 5 tubos con 9 mL de agua destilada.
 Muestra de suelo o alimento (es este
caso, la muestra nos fue proporcionada
por el profesor, la cual fue un hongo
crecido).
 2 pipetas de 1 ó 2 mL
 Espátula.

Procedimiento:
1. Tomar una serie de 5 tubos con 9 mL de agua destilada, previamente esterilizados y
rotularlos cada uno con la dilución correspondiente (10-1 hasta 10-5).
2. Manteniendo las condiciones de esterilidad y asepsia correspondientes, colocar 1 gr de la
muestra (hongo) en el primero de los 5 tubos de dilución (10-1).
3. Agitar bien el tubo 10-1, dejar sedimentar las partículas grandes y con una pipeta estéril,
transferir 1 mL al segundo tubo (10-2) y volver a agitar y sedimentar y continuar hasta
completar la serie de diluciones.

Para la siembra por vaciado en caja.

1. Fundir el agar papa dextrosa previamente preparado.
2. Rotular cada una de las cajas por duplicado, con la dilución correspondiente.
3. Con otra pipeta estéril tomar 1mL comenzando con la dilución 10-5 y vaciar a la caja
4. correspondiente, hasta llegar a 10-1.
5. Una vez fundido el agar y enfriado a 45°C, acidificar el medio con ácido tartárico.
6. Proceder el vaciado del agar en cada una de las cajas y homogeneizar con movimientos
suaves.
Una vez solidificado el medio, incubar a 28°C de 5 a 7 días una serie de cajas y la otra
incubarla a 35°C por 48 horas. Es necesario revisar las cajas cada 24 horas si es posible y
a las 48 horas realizar el conteo de levaduras.
 Resultados

Ilustración 1. Dilución 10-1, incubado a 35 °C por 48 horas.

Ilustración 2. Dilución 10-2, incubado a 35 °C por 48 horas.

Ilustración 3. Dilución 10-3, incubado a 35 °C por 48 horas. Ilustración 4. Dilución 10-4, incubado a 35 °C por 48 horas.

Ilustración 5. Dilución 10-5,

incubado a 35 °C por 48 horas.
 Ilustración 6. Dilución 10-1, incubado a 28 °C por 48 horas. Ilustración 7. Dilución 10-2, incubado a 28 °C por 48 horas.

Ilustración 8 Dilución 10-3, incubado a 28 °C por 48 horas. Ilustración 9. Dilución 10-4, incubado a 28 °C por 48 horas.

Ilustración 10. Dilución 10-5, incubado a 28 °C por 48 horas.

Ilustración 11. Dilución 10-1, incubado a 28 °C por 7 días. Ilustración 12. Dilución 10-2, incubado a 28 °C por 7 días.

Ilustración 13. Dilución 10-3-, incubado a 28 °C por 7 días.

Ilustración 14. Dilución 10-4, incubado a 28 °C por 7 días.

Ilustración 15. Dilución 10-5,

incubado a 28 °C por 7 días.
 Cuestionario
Tabla 3. Conteo de colonias.

UFC de hongos/gr de muestra, después

Dilución
de 7 días
10-1 -
10-2 -
10-3 15
10-4 9
10-5 5

Tabla 4. Morfología del hongo.

Morfología macroscópica del hongo

Tamaño Depende de la disolución
Aspecto Circular y rugoso
Color del micelio aéreo Verde muy oscuro
Color del micelio vegetativo Verde muy oscuro
Pigmento difusible Verde

1.- Explicar por qué en el caso del aislamiento de hongos se efectúan menos diluciones que
con respecto a las bacterias.
R=

2.- ¿Qué utilidad tienen los microcultivos?

R= Permiten la observación e identificación de las estructuras microscópicas de hongos
filamentosos que se distinguen con facilidad sin distorsión, alteración o rompimiento de las
mismas.

3.- Investigar los componentes de los medios de cultivo utilizados y mencione otros dos medios
de cultivo para hongos, sus componentes y su uso.
R=

4.- Explicar por qué las levaduras pertenecen al reino de los hongos.
R= En realidad, las levaduras pertenecen al Reino Protista. Son Protistas que se nutren
mediante la absorción de materia orgánica a través de su pared celular no celulósica. Viven en
presencia de materia orgánica a la que descomponen, ya que son descomponedores. Son
seres unicelulares Eucariotas porque presentan un núcleo bien organizado con membrana
nuclear. Los hongos que pertenecen al Reino Fungi son pluricelulares y las levaduras no son
pluri sino unicelulares.

5.- Mencionar las diferencias con otros grupos microbianos por ejemplo las bacterias.
R= Las bacterias y los hongos son generalmente organismos heterótrofos que se alimentan
de materia orgánica en descomposición o de materia viva. Se encuentran en una gran variedad
de hábitat, tales como cuerpos de agua dulce, mar, suelo, hojarasca, restos vegetales, restos
animales, estiércol y organismos vivos; y están distribuidos desde las zonas desérticas hasta
las áreas más gélidas del planeta. Ambos son vitales en el equilibrio ecológico del suelo,
participan en la degradación de materia orgánica que permite el reciclaje de nutrientes, así
como la transformación de nitrógeno a formas disponibles para las plantas.

Conclusión

Desconocemos la identidad del hongo, sin embargo, sabemos que su temperatura

óptima de crecimiento oscilas a las 28°C. A juzgar por su aspecto, creemos que es del tipo de
hongo que crece en los alimentos como en el pan.

Referencias
https://es.slideshare.net/jheezzihdtticsehuaman/informe-n-9-aislamiento-de-hongos-grupo-n-i-1

https://es.slideshare.net/carolinacartagenad/cultivo-y-aislamiento-de-bacterias

http://www.bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf

https://issuu.com/holmaneduardo/docs/informe_microbiologia_practica_de_m

https://www.academia.edu/9286004/INFORME_7_CULTIVO_DE_MICROORGANISMOS

https://www.academia.edu/10486686/Reporte_final_de_microbiolog%C3%ADa_general