Unidad2 Transferenciadematerialgeneticoyseleccionbacteriana PDF

Genética molecular bacteriana
Unidad 2. Transferencia de material

genético y selección bacteriana
Sexto semestre
Índice
Unidad 2. Transferencia de material genético y selección bacteriana ....................... 2

Presentación de la unidad ........................................................................................ 2
Propósitos de la unidad ............................................................................................ 2
Competencia específica............................................................................................ 3
Temario de la
unidad……..............................................................................................4
2. Transferencia de material genético y selección bacteriana…….……………...........4
2.1. Sobrevivencia bacteriana: transferencia y recombinación de ADN y resistencia a
drogas…………………………………………………………………...……………….…...5
2.1.1. Recombinación .............................................................................................. .5
2.1.2. Transformación………………….……………..………………………………….....9
2.1.3. Conjugación……………………………………………………………….…….…..11
2.1.4. Trnsducción……………..…………………………………………………………..23
2.1.5. Resistencia a drogas……………………………………………………………….25
2.2. Herramientas en la clonación y expresión de genes para obtener bacterias
recombinantes…………………………………………………………………………...…28
2.2.1. Los plásmidos como vectores de clonación……………………………………..28
2.2.3. Cepas bacterianas………………………………………………………………….35
2.2.4. Selección de bacterias recombinantes por resistencia a drogas……………...38
Actividades ............................................................................................................. 40
Autorreflexiones ...................................................................................................... 40
Cierre de la unidad ................................................................................................. 40
Para saber más ...................................................................................................... 41
Fuentes de consulta ............................................................................................... 41
Universidad Abierta y a Distancia de México

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Unidad 2. Transferencia de material genético y selección bacteriana
Presentación
Las bacterias ocupan una posición única en el mundo biológico (Srivastava 2013). Sin ir
muy lejos podemos evidenciar su relevancia al revisar el microbioma humano
, donde por ejemplo, por cada centímetro cuadrado de superficie de la piel hay unas
10,000 bacterias, en la que existe una gran diversidad de especies. Para darnos una idea,
si utilizamos el ecosistema del suelo como analogía del ecosistema de la piel humana,
considerando que esta puede tener distintos nichos: "la axila podría ser tan diferente del
tronco como una selva tropical de un desierto" (Fredricks 2001).
Si deseas conocer más acerca del Microbioma humano, revisa el siguiente recurso:
Cárdenas Guzmán G (2012). “El microbioma humano”. ¿Cómo ves?

167:10-14 Recuperado de
http://www.comoves.unam.mx/assets/revista/167/el-microbioma-
humano.pdf
Pero ¿cómo es qué se conoce la identidad y fisiología de las bacterias si son tan
numerosas y diversas? El método tradicional ha sido aislar o separar las bacterias de las
muestras biológicas y cultivarlas en el laboratorio, siendo una labor lenta y costosa, ya
que se presenta complicada en términos de determinar las condiciones óptimas de cultivo,
como temperatura y nutrientes. Se estima que de todas las bacterias que existen en el
planeta, sólo se han cultivado menos del 1%. Afortunadamente, la tecnología avanza a
pasos agigantados y la biología molecular ha permitido el desarrollo de nuevas áreas de
investigación en este campo, como la metagenómica, donde a través de utilizar técnicas
similares a las que se utilizaron para descifrar el genoma humano, ahora se emplean para
la identificación de las diferentes especies de bacterias en nuestro planeta (Cárdenas
Guzmán, 2012).
Y ¿para qué y por qué nos interesaría conocer las diferentes especies bacterianas? Las
respuestas pueden ser muchas, desde el punto de vista de las ciencias de la salud,
definitivamente el identificar aquellas especies patógenas se puede relacionar
directamente con la búsqueda de medicamentos; algunos casos de bacterias claramente
identificadas han sido utilizadas como sistemas modelo de estudio que han permitido
comprender más de la estructura celular, el metabolismo, relaciones estructura-función de
proteínas, el crecimiento y reproducción bacteriana (Srivastava 2013).

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Para la biotecnología, este conocimiento es indispensable, ya que esta disciplina pretende

estudiar, modificar y utilizar los sistemas biológicos para un fin en específico y mínimo se
requiere la identificación de la especie en cuestión. Ahora bien, es de nuestro interés este
estudio porque contribuye importantemente al quehacer de la biotecnología, ya que
gracias al uso de las bacterias genéticamente modificadas esta disciplina ha tenido una
gran influencia en la solución de distintos problemas de la salud, de alimentos y
protección del ambiente.
En este sentido, la Unidad 1 del curso proporcionó las bases fundamentales de los
procesos moleculares que se expresan en las bacterias, en otras palabras se esboza el
flujo de la información genética en los procariontes, más ahora la tarea es desentrañar, en
forma detallada los mecanismos de regulación de la expresión genética y cómo este
conocimiento puede contribuir al desempeño eficiente de la biotecnología en cuanto al
desarrollo de bacterias genéticamente modificadas (BGM).
Acorde a lo anterior, primeramente revisaremos las estrategias de transferencia de

material genético que pueden manifestar las bacterias, para posteriormente identificar las
herramientas que nos permiten realizar su aislamiento.
Propósitos de la Unidad
Identificar y relacionar las estrategias de transferencia de

material genético y de selección bacteriana con objeto de
utilizarlas como herramientas en la generación de bacterias
genéticamente modificadas.
Competencia específica
Relacionar estrategias moleculares de ingeniería genética

mediante la descripción de técnicas de selección bacteriana y
genética molecular para la producción de BGM.

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Temario
2. Transferencia de material genético y selección bacteriana
2.1. Sobrevivencia bacteriana: transferencia y recombinación de ADN y resistencia

a drogas
2.1.1. Recombinación
2.1.2. Transformación
2.1.3. Conjugación
2.1.4. Transducción
2.1.5. Resistencia a drogas
2.2. Herramientas en la clonación y expresión de genes para obtener bacterias

recombinantes
2.2.1. Los plásmidos como vectores de clonación
2.2.2. Bacteriófagos
2.2.3. Cepas bacterianas
2.2.4. Selección de bacterias recombinantes por resistencia a drogas
2. Transferencia de material genético y selección bacteriana
En la presente Unidad 2, se revisarán dos aspectos fundamentales para poder determinar

y establecer en la práctica las utilidades y grandes ventajas que puede retribuir la genética
molecular bacteriana al desarrollo de toda biotecnología. Por ello, se revisará, conocerá y
comprenderá la dinámica que opera en los mecanismos a través de los cuales las
bacterias pueden transmitir su información genética, particularmente es de interés poder
saber cómo molecularmente estos microorganismos son capaces de transmitir su
adaptabilidad a diferentes condiciones ambientales, evidenciando al menos
inmediatamente una aplicación terapéutica, pero cabe aclarar que pueden ser
microorganismos con un alto potencial para estudiar, modificar y utilizar en diferentes
campos. Por tanto, se abordará las bases moleculares, los elementos asociados y
algunos ejemplos de cada uno de los tres diferentes mecanismos de transferencia de la
información genética bacteriana: transformación, conjugación y la transducción.
Como primera incursión, se reconocerá y fortalecerá el concepto de la recombinación

desde el punto de vista de la genética bacteriana y cómo es un evento que será común
para los diferentes mecanismos de transferencia a discutir.
Asociado a lo anterior, además de contar con todo este conocimiento previo que facilita a
la biotecnología la elección del mejor sistema para poder transmitir la información
genética de una forma dirigida, resulta crítico contar con un bagaje amplio en cuanto a las

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herramientas técnicas que pueden facilitar dicha transferencia de la información. Resulta

entonces comprensible, la necesidad de repasar diferentes técnicas, estudiadas
previamente en la carrera, pero ahora específicamente enfocadas a su aplicación en la
genética bacteriana. Con objeto de alcanzar estos propósitos se identificará de aquellas
herramientas que pueden establecer y determinar la clonación y expresión génica, las que
resulten ser las más adecuadas para la obtención específica de bacterias genéticamente
modificadas (BGM).
2.1. Sobrevivencia bacteriana: transferencia y recombinación de ADN y

resistencia a drogas
Los procariontes son microorganismos que sobresalen en cuanto a su fascinante

capacidad de adaptación a diferentes condiciones ambientales. Con objeto de dilucidar
los mecanismos que pueden estar involucrados resulta fundamental conocer desde la
estructura de su material genético hasta como fluye dicha información (Betancor et. al.,
2006) para entonces poder estudiar su regulación y finalmente reconocer su utilidad
biotecnológica.
Por ejemplo, la capacidad infecciosa de una bacteria patógena reside en que contiene la
información genética necesaria para colonizar, invadir y/o producir sustancias tóxicas
causantes de la enfermedad. Es importante puntualizar que dicha información se
transmite y se hereda a la siguiente generación, por lo que resulta necesario conocer su
funcionamiento genético. El hecho de que estos microorganismos sean de relativo fácil
manejo en el laboratorio, ha favorecido que podamos utilizarlas para sintetizar productos
útiles para distintos sectores (Betancor et. al. 2006).
Por ello, en esta Unidad revisaremos las estrategias de transferencia que pueden
manifestar las bacterias con objeto de recombinar su material genético y de este modo
adquirir cambios como la resistencia a ciertos antibióticos u otras drogas.
2.1.1. Recombinación
La recombinación es un proceso que combina elementos genéticos contenidos en los

genomas de diferentes individuos, dando como resultado en algunos casos que se
adquiera una nueva función, como una mejor adaptación a los cambios ambientales, lo
cual resulta ser un evento evolutivo de gran importancia, ya que implica una transferencia
de la información genética que puede permitir a una especie adquirir una mejor capacidad
de adaptación y por tanto, de sobrevivencia. En los procariontes, a diferencia de los

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eucariontes, la recombinación comprende una serie de mecanismos que son

independientes de su reproducción sexual.
Un requisito común de todas las formas de transferencia de genes entre bacterias,

exceptuando la transferencia de plásmidos (que pueden replicarse de forma
independiente), es que el fragmento de ADN, sujeto a ser transferido, debe ser insertado
en el cromosoma receptor, esto se logra a través de la ruptura de ambas moléculas de
ADN, su entrecruzamiento y su unión (Figura 1).
Figura 1. Recombinación entre dos moléculas de ADN lineal.
Existen diferentes formas de recombinación, donde la recombinación homóloga, se refiere

a que ambos fragmentos de ADN proceden del mismo tipo de especie o bien muy
cercana, es decir son muy similares, aunque no tienen que ser idénticos. Por su parte, en
la recombinación heteróloga, la fuentes del material genético provienen de diferentes
especies puede observarse en la siguiente figura.
Figura 2. Recombinación homóloga y heteróloga.

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El evento que determinó el surgimiento de lo que ahora conocemos como ingeniería

genética o ADN recombinante sucedió en 1970 cuando Hamilton Smith y Daniel Nathans
descubrieron una enzima capaz de reconocer y cortar el ADN en secuencias específicas.
Las enzimas de restricción, actoras determinantes durante la recombinación
Muchos microorganismos producen enzimas que modifican y digieren o rompen ADN, los
cuales son llamados sistemas de modificación-restricción, y son análogos a un sistema
inmune en cuanto a su función, es decir son protectores porque pueden inducir cambios
con objeto de lograr la sobrevivencia de la especie. En ciertas bacterias, el propio ADN
puede ser modificado en secuencias específicas a través de una enzima de modificación,
la cual puede cambiar una base por otra; por su parte, una enzima de restricción solo
realiza un corte (digestión) cuando reconoce una secuencia en específico. Las enzimas
de restricción suelen identificar secuencias palindrómicas, que son iguales si se leen en
una dirección, o en la dirección contraria, como las palabras oso o ala.
-5'CCCGGG3'- -5'TAACCG3'-
-3'GGGCCC5'- -5'GCCAAT3'-
Secuencias palindrómicas
En estas secuencias dependiendo de la posición del corte, implica que queden extremos
con características particulares, por ejemplo en forma escalonada y se definen como
extremos cohesivos o pegajosos, porque pueden hibridar nuevamente (Figura 3). Si ahora
los extremos no quedan escalonados sino rectos, se denominan extremos romos y estos
no hibridan fácilmente (Figura 3):
Figura 3. Mecanismo de acción de las enzimas de restricción.

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Una vez que las enzimas ejercen su acción, se produce un conjunto definido de diferentes
segmentos, mismos que pueden visualizarse si se utiliza una electroforesis, ya que los
fragmentos pueden separarse por su peso molecular, en un proceso que es análogo a la
separación de proteínas:
Ahora bien, si el fragmento de ADN producto de la digestión de una enzima de restricción

de un organismo se asocia con otro segmento de ADN, generado por la misma enzima
pero de un organismo diferente, se puede obtener una molécula híbrida o una molécula
de ADN recombinante (Soberón 2009).
Para que se reúnan las hebras cortadas, se requiere de la acción de otra enzima que es
la ADN ligasa, la cual cataliza la formación del enlace fosfodiéster necesario para que se
unan las hebras del material genético. Para que la recombinación sea exitosa es requisito
que la nueva secuencia se transcriba y traduzca en una célula y que además se replique.
La recombinación sucede tanto en eucariontes como procariontes, e implica la generación
de un nuevo genotipo como resultado del intercambio de material genético entre
secuencias homólogas de ADN de dos orígenes diferentes.
Recombinación genética en bacterias
A diferencia de las células eucariontes, las bacterias sólo tienen un único cromosoma.

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Por tanto, para que suceda la recombinación, el cromosoma homólogo debe ser
transferido de una bacteria donadora a una receptora, si se considera que el cromosoma
donador debe ser homólogo con el receptor, entonces es de esperarse que ambas
bacterias pertenezcan a la misma especie o a especies muy relacionadas. Por tanto, la
recombinación bacteriana sucede si y solo si sucede una transferencia del material
genético, fragmento de ADN, de la bacteria donadora hacia una célula receptora y se
manifiesta porque dicho fragmento se puede transcribir, traducir y replicar en la célula
aceptor. Si no hay recombinación, el fragmento de ADN de la bacteria donadora se
pierde, porque no se puede replicar de forma independiente.
Ahora bien, también puede suceder la recombinación heteróloga, la cual ha sido

ampliamente utilizada por la biotecnología, donde hay muchos ejemplos de genes de
origen animal expresados en bacterias y plantas con la finalidad de obtener diversas
proteínas recombinantes de gran interés en la industria farmacéutica y alimentaria.
Por tanto, la recombinación genética bacteriana sucede cuando se transfieren fragmentos

de ADN de una célula donadora a una receptora, ahora es de nuestro interés conocer
dichos mecanismos de transferencia que tienen características, ventajas y desventajas
particulares, los cuales son: transformación, conjugación o transducción.
2.1.2. Transformación
La transformación es un proceso de recombinación génica mediante el cual las bacterias

pueden incorporar ADN exógeno o extraño, que puede provenir de otras bacterias y que
se encuentra libre en el medio (Figura 4).

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Figura 4. Recombinación bacteriana por transformación.
No todas las bacterias pueden captar este ADN exógeno, cuando lo conservan en
forma estable e interaccionan con el mismo, se dice que son competentes. Esta
competencia depende de la presencia de un sistema de captación de ADN específico y
que se encuentra asociado a la membrana celular. Como ejemplos de bacterias
competentes se encuentran Haemophilus influenzae, Neisseria sp, Streptococcus
pneumoniae, etc. Aun cuando no todas las especies de bacterias pueden ser
competentes, esta se puede inducir en el laboratorio al generar alteraciones en la
membrana celular (Betancor et al. 2006).
Dentro de las técnicas comunes para inducir la competencia se encuentra la
electroporación, que consiste en la aplicación de un pulso eléctrico. También se puede
utilizar agentes químicos como el cloruro de calcio, y el choque térmico es una
herramienta ampliamente utilizada. Es importante precisar que no en todas las células
procariontes se puede inducir la competencia y lo usual es probar más de una técnica
para alcanzarla.

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2.1.3. Conjugación
En la conjugación, la transmisión de ADN se realiza directamente de una célula

bacteriana a otra. Los plásmidos son los elementos genéticos que con mayor frecuencia
se transmiten a través de este mecanismo. Esta capacidad de transferencia va a
depender de la presencia de plásmidos conjugativos que contienen los genes necesarios
para realizar dicho evento (Betancor et al. 2006).
Pero ¿qué características presenta y cómo es que se puede favorecer la conjugación?
Resulta que para que se dé la transferencia de genes generalmente contenidos en un

plásmido, ya sea de una bacteria a otra bacteria, o bien de una interacción bacteria-célula
hospedera, debe existir primeramente un contacto físico entre ambos tipos celulares y
establecerse un puente de unión entre las superficies de ambos, para poder introducir y
recombinar el material genético. Aun con todos los avances tecnológicos alcanzados,
dichos eventos aún no han sido del todo dilucidados, pero se tiene conocimiento muy
valioso de cómo pueden operar estos sistemas (Thanassi et al. 2012; Arutyunov y Frost
2013).
Acorde a lo anterior, el primer requisito es que se establezca una unión entre las bacterias
involucradas sujetas a ser modificadas genéticamente:
1) Debe existir un acercamiento físico entre ambos tipos celulares, lo cual se alcanza a
través de organelos de superficie como el pili, el cual se localiza en la bacteria donante
del plásmido y uno de sus objetivos es identificar y promover el acercamiento a la célula
receptora.
2) Una vez establecido el puente de comunicación entre los dos tipos celulares, comienza
un flujo de material desde la bacteria hacia la célula receptora, donde los sistemas de
secreción bacterianos, se encargan de producir y excretar diversas moléculas que no solo
pueden favorecer el fortalecimiento del puente de unión, sino también la entrada de
factores de virulencia y el ADN candidato a ser insertado en el cromosoma de la célula

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receptora. Hay que recordar que la recombinación es exitosa si y solo si el fragmento de

ADN se transcribe, traduce y replica.
Transferencia de genes
Bacteria sensible al Ácido Nalidíxico.
Bacteria donadora que acarrea el Bacteria resistente al Ácido Nalidíxico.
plásmido resistente a ampicilina
amp
Mezcla del cultivo
Agar selectivo que contiene

ácido nalidíxico y ampicilina
Bacteria receptora con mutación cromosomal

resistente a ácido nalidíxico que contiene el
plásmido que confiere resistencia a ampicilina
Figura 5. Transferencia por conjugación de un plásmido resistente. La cepa donadora es sensible

a ácido nalidíxico y acarrea un plásmido que confiere resistencia a ampicilina (amp). La bacteria
receptora es resistente a ácido nalidíxico, debido a una mutación cromosomal y es sensible a
ampicilina. Después de haber crecido en la mezcla de cultivo, el plaqueo sobre agar conteniendo
tanto ampicilina como ácido nalidíxico, selecciona aquellos receptores que han recibido el plásmido
(transconjugantes). El cromosoma bacteriano es omitido para mejorar la claridad (Basado en Dale
y Park, 2004).
La Figura 5 ilustra un ejemplo de una estrategia experimental para llevar a cabo la

conjugación, en breve, esta transferencia se obtiene por la mezcla de dos cepas, por
ejemplo cada una de ellas puede contener información genética que les confiere
resistencia a algún antibiótico, esta mezcla después de un periodo de incubación,
momento en el que sucede la conjugación, se coloca sobre un medio que contenga
ambas sustancias ante las que presentan la resistencia, por tanto solo crecerán las

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bacterias que contenga genes de ambos progenitores. Por ejemplo, en los experimentos
mostrados en la Figura 5, una cepa (la donadora) lleva un plásmido que le confiere
resistencia a ampicilina, mientras que la segunda cepa no tiene el plásmido pero tiene una
mutación cromosómica que la hace resistente a ácido nalidíxico. Después de la
incubación del cultivo mixto, una muestra es transferida dentro de un medio que contiene
ambos antibióticos. Ninguno de los progenitores puede crecer sobre este medio, por tanto
las colonias que se observen serán debido a la transferencia de una copia del plásmido
del donador a la célula receptora. Este evento tiene una elevada sensibilidad, ya que se
ha observado que basta con que 1 en 106 células receptoras haya obtenido una copia del
plásmido transferido, es suficiente para que se obtenga un crecimiento de la progenie en
el medio provisto por los dos antibióticos.
Entre las bacterias donde la conjugación se presenta con mayor frecuencia, se

encuentran miembros de las Enterobacterias y las bacterias Gram negativas (como los
Vibrios y Pseudomonas). Varios géneros de bacterias Gram positivas poseen sistemas de
conjugación razonablemente bien caracterizados. Estos sistemas caracterizados incluyen
las especias Streptomyces, que tienen importancia comercial como los mayores
productores de antibióticos; así como los estreptococos lácticos, que también tienen
importancia comercial por sus aplicaciones en varios aspectos de la industria láctea.
La significancia más evidente de la conjugación es que permite la transmisión de

plásmidos de un cultivo a otro. Considerando que la conjugación no necesariamente está
confinada a miembros de la misma especie, esto provee una ruta para el flujo de
información genética a través de una amplia frontera taxonómica. Una consecuencia
práctica por ejemplificar, sería que los plásmidos que están presentes en la flora intestinal
normal puede ser transferida a patógenos infectivos, los cuales pueden entonces volverse
resistentes a un amplio espectro de diferentes antibióticos (Dale y Park 2004).
MECANISMOS DE CONJUGACIÓN
Formación de parejas de apareamiento
En la mayoría de los casos, la incidencia de la conjugación, depende de la presencia de

una cepa donadora que contenga un plásmido que contiene los genes requeridos para
promover la transferencia de ADN. En E. coli y otras bacterias Gram-negativas, las células
donadoras acarrean apéndices sobre la superficie celular (pilis). Los pilis, varían
considerablemente en estructura, por ejemplo, el pili específico para el plásmido F es
largo, delgado y flexible, mientras que el pili para el plásmido RP4 es corto, grueso y
rígido. Los pilis hacen contacto con receptores sobre la superficie de la células, así forman
las parejas de apareamiento (Figura 6). El pili, por tanto, atrae la célula para un contacto
íntimo y hacer un canal o un poro por medio del cual el ADN pase del donador al receptor.

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Pilis Plásmido
Donador
Cromosoma
El pili hace contacto con el receptor
bacteriano
Receptor
Pareja de Copia del plásmido

apareamiento transferido al receptor
Transconjugante Donador
Figura 6. Transferencia de ADN por conjugación (Tomado de Dale y Park, 2004).
Interesantemente, este mecanismo tiene mucho en común con el sistema de secreción de

proteínas, el cual es usado por algunas bacterias para entregar proteínas tóxicas
directamente dentro de las células huésped.
Por transferencia de ADN
La transferencia de ADN de un donador a un receptor (Figura 7) se inicia por una proteína

que hace un corte sitio específico en una hebra de ADN, conocido como el origen de
transferencia (oriT). Un plásmido que codifica para una helicasa desenreda el ADN del
plásmido y la hebra cortada es transferida al receptor comenzando por el extremo terminal
5’ generado por el corte. Al mismo tiempo, el extremo terminal libre 3’ de la hebra cortada
es extendido para remplazar el ADN transferido, por un proceso conocido como
replicación en círculo rodante el cual es análogo a la replicación de hebras simples de
plásmidos y bacteriófagos. La proteína cortadora permanece unida al extremo terminal 5’
del ADN transferido. La síntesis de ADN en el receptor convierte la hebra en una molécula
de hebra doble.

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Hay que hacer notar que este es un proceso de replicación. Así, si bien se ha
puntualizado la transferencia de plásmidos de una célula a otra, lo que realmente significa
es la transferencia de la copia de un plásmido. La cepa donadora todavía tiene una
copia del plásmido y puede involucrarse en posteriores apareamientos con otros
receptores. Es también digno de mención que, después de la conjugación, la célula
receptora tiene una copia del plásmido y puede transferir la copia a otra célula receptora.
Las consecuencias pueden ser la diseminación de un plásmido a través de una población
mezclada.
Donador Receptor
El plásmido es cortado
Pareja de
en un sitio específico,
apareamiento
oriT
Sintesis de ADN en el
donador por extensión Hebra simple
del extremo terminal transferida
3’ de la hebra cortada
ADN transferid
es copiado en la
célula receptora.
Figura 7. Mecanismo de transferencia por conjugación de ADN plasmídico. Para mayor claridad,
solo el plásmido es mostrado (Basado de Dale y Park, 2004).

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Movilización y transferencia cromosomal
No todos los plásmidos son capaces de ser transferidos a otra célula, los plásmidos que
pueden hacerlo, como ya se había comentado previamente, son conocidos como
plásmidos conjugativos. En algunos casos los plásmidos conjugativos son capaces de
promover la transferencia (movilización) de un segundo plásmido no conjugativo de la
misma célula donadora. Esto no sucede por casualidad y no todos los plásmidos no
conjugativos pueden ser movilizados.
La movilización involucra un gene mob, el cual codifica una nucleasa específica, y el sitio
bom (=oriT, el origen de la transferencia), donde la nucleasa mob hace un corte en el
ADN. ColE1 tiene los genes para la transferencia de ADN, pero no trae consigo los genes
requeridos para la formación de una pareja de apareamiento. La presencia de otro
plásmido (conjugativo) permite que el donador pueda formar una pareja de apareamiento
con la célula receptora y así puede usar su propia maquinaria para acarrear el ADN
transferido.
Algunos plásmidos pueden ser movilizados sin importar el gene mob, dicha movilización
depende sobre la habilidad de la nucleasa mob del plásmido conjugativo para reconocer
el sitio bom del plásmido a ser movilizado. Esto sólo funciona si los dos plásmidos están
estrechamente relacionados. Por otro lado, el sitio bom es esencial para la movilización.
Este es un factor importante durante la modificación genética promovida por la
conjugación, la remoción del sitio bom de un vector plasmídico asegura que el plásmido
modificado no podrá ser transferido a otras cepas bacterianas.
En la mayoría de los casos, el ADN que es transferido de un donador a un receptor

consiste únicamente de una copia de un plásmido. Sin embargo, algunos tipos de
plásmidos pueden promover la transferencia del ADN cromosomal. El primero que fue
descubierto, y mejor conocido, es el plásmido F (fertilidad) de E. coli, pero sistemas
similares existen en otras especies, como en Pseudomonas aeruginosa. En algunos
casos, como se describe a continuación, esto involucra la integración del plásmido
conjugativo dentro del cromosoma donador (por tanto si el cromosoma es en efecto
transferido como parte del plásmido). Sin embargo, en muchos casos la transferencia
cromosomal ocurre sin ninguna asociación estable con el plásmido, posible por un
mecanismo análogo a movilizarse de un plásmido no conjugado.
Cuando un plásmido es transferido de una célula a otra por conjugación, el plásmido

completo ha sido transferido. En contraste, la transferencia cromosómica no involucra una
copia intacta. Una razón para esto es el tiempo que es requerido para la transferencia. El
proceso es menos eficiente que la replicación normal de ADN y la transferencia de todo el
cromosoma podría tomar 100 min (en E. coli). La pareja de apareamiento muy raramente
permanece junta por mucho tiempo. En contraste, un plásmido de unos 40 kb (kb = kilo

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bases, 1 kb = 1000 nucleótidos) es equivalente al 1% del tamaño del cromosoma, - así la

transferencia del plásmido podría esperarse que se complete en 1 min. La transferencia
incompleta del ADN cromosómico significa que esto no constituye un replicón intacto de la
célula receptora (Dale y Park, 2004).
El plásmido F
El plásmido fue descubierto originalmente durante intentos para demostrar el intercambio

genético en E. coli por cultivos mezclados de dos o más cultivos auxotróficos, por tanto se
cultivaban sobre medios mínimos para permitir que únicamente los recombinantes
crezcan. Fue mostrado muy pronto que los recombinantes eran todos derivados de una
cepa progenitora y que una sola vía de transferencia de información era la que estaba
involucrada, por parte del donador (macho) al receptor (hembra). La cepa donadora
acarreaba el plásmido (F+) mientras que el receptor es F-. Una característica de este
sistema que parece ser curioso al mismo tiempo es que la co-cultivación de una cepa F+ y
una cepa F- resulta en que las hembras son convertidas en machos. Esto es debido a que
la transmisión del plásmido F, por sí mismo, ocurre muy frecuentemente, en contraste a la
transferencia de marcadores cromosomales, los cuales son ineficientes ante un F+
donador.
Cepas Hfr
La utilidad de la conjugación para el análisis genético fue enormemente incrementada por

el descubrimiento de las cepas donadoras en las cuales la transferencia de ADN
cromosomal ocurría más comúnmente. Estas cepas Hfr (High Frequency of
Recombination, por sus siglas en ingles que significa alta frecuencia de recombinación)
surgen de la integración del plásmido F dentro del cromosoma bacteriano. Una
característica adicional de una cepa Hfr es que la transferencia cromosomal empieza de
un punto definido y procede en una dirección específica. El origen de la transferencia está
determinada por un sitio de inserción del plásmido F y la dirección está gobernada por la
orientación del plásmido insertado. Esto puede quedar aclarado remarcando la molécula
circular en la Figura 7 que contiene un plásmido F integrado al ADN cromosomal. La
transferencia es así iniciada del sitio oriT del plásmido integrado, pero que ahora resulta
en la transferencia de una copia del cromosoma bacteriano en vez de solamente el
plásmido. Un donador F+, en contraste, transfiere genes de una forma más o menos
aleatoria, ya que la transferencia no se inicia desde un sitio definido en el cromosoma. La
combinación de la transferencia parcial de ADN cromosómico con la transferencia
ordenada de los genes, hizo de la conjugación una herramienta importante en el mapeo
de los cromosomas bacterianos.

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Integración y la escisión de F: formación de plásmido F’
La integración del plásmido F se produce por recombinación entre una secuencia en el

plásmido y un sitio cromosómico. En la Figura 8a se muestra que ocurre adyacente al
operón de lactosa, pero puede ocurrir en un gran número de sitios. Después de la
integración, el plásmido F se encuentra en una forma lineal en el sitio de integración
(Figura 8c). La integración es reversible ya que la recombinación entre los sitios en los
extremos del plásmido integrado dará lugar a su escisión del cromosoma como una
molécula circular independiente (Figura 8, pasos c-a). Sin embargo, es posible que para
esta escisión se produzca de forma, es decir, la recombinación se produce en un sitio
diferente. Si esto sucede, el plásmido resultante habrá incorporado una pequeña cantidad
de ADN bacteriano. Esta forma se le conoce como una plásmido F’ (F-prima). Figura 8c-e
muestra la formación de un plásmido F’lac, donde el evento de recombinación que lleva a
la escisión ha ocurrido en un sitio más allá del operón lac (lactosa), en lugar de entre los
sitios que flanquean el plásmido F integrado. El operón lac por lo tanto, se ha incorporado
en el plásmido (al mismo tiempo que genera una deleción en el cromosoma) y será
transferido con el plásmido a una cepa receptora. Este es un mecanismo por el cual un
plásmido puede adquirir genes adicionales a partir de un cromosoma y transferirlos a otra
cepa o especie.
Antes de la llegada de la clonación de genes, los plásmidos F’ fueron útiles en un buen

número de formas, incluyendo el aislamiento de genes específicos y su transferencia a otras
cepas huésped. Esto permitió la creación de diploides parciales, es decir, cepas con una
copia de un determinado gen en el plásmido además de la copia cromosómica.
Conjugación en otras bacterias
La descripción anterior de la conjugación se aplica principalmente a bacterias Gram-

negativas tales como E. coli y Pseudomonas. Muchas de las especies Gram-positivas, que
van desde Streptomyces a Enterococcus, también poseen plásmidos que son transmisibles
por conjugación y en muchos casos, el mecanismo de transferencia de ADN es bastante
similar a lo descrito anteriormente. Sin embargo, hay diferencias sustanciales en los demás
aspectos.

18
lac Cromosoma
a
Escisión Integración
d
Escisión aberrante
Delecion e
de lac
c
Plásmido F
Figura 8. La integración y la escisión del plásmido F. La integración se produce mediante

recombinación con un sitio cromosómico (a-c). Escisión exacta se produce por recombinación en el
mismo sitio, pero la recombinación con diferentes sitios cromosómicos resulta en la incorporación
de ADN cromosómico adyacente (en este caso el gene lac) dentro del plásmido (d, e), formando un
plásmido F’ y causando una deleción cromosómica (Dale y Park 2004).
En general, el número de genes necesarios para la transferencia por conjugación es de

tan sólo como cinco genes, y es mucho menor que en las bacterias Gram-negativas,
donde se necesitan 20 o más genes. El número de plásmidos conjugativos en bacterias
Gram-positivos, por lo tanto, pueden ser considerablemente más pequeño. Una de las
razones para un menor número de genes que se requieren es que parece que no hay
necesidad para producir un pili. Esta es probablemente, al menos en parte, un reflejo de la
arquitectura diferente de la pared celular en bacterias Gram-positivas que carecen de la
membrana exterior característica de los Gram-negativos.
Un grupo de bacterias Gram-positivas, donde los sistemas de conjugación han sido

estudiado en detalle son los enterococos, principalmente Enterococcus faecalis. Algunas
cepas de E. faecalis secretan péptidos difusibles que tienen una acción similar a las
feromonas que puede estimular la expresión de los genes de transferencia (tra) de un
plásmido específico en una célula vecina. Hay que hacer notar que, de manera
sorprendente es la célula receptora la que produce las feromonas. La célula donante, que
lleva el plásmido, tiene un receptor plásmido codificado en la superficie celular al que se
une la feromona. Diferentes tipos de plásmidos codificado para diferentes tipos de
receptores y que son estimulados por diferentes feromonas. Sin embargo, el receptor
produce una gama de feromonas y por lo tanto es capaz de aparearse con las células que
llevan plásmidos diferentes.

19
Después de que la feromona se ha unido al receptor de la superficie celular, es

transportado al citoplasma por una proteína de transporte específica, donde interacciona
con una proteína llamada TraA. Esta proteína es un represor de los genes tra en el
plásmido y la unión del péptido alivia aquella represión, estimulando de este modo la
expresión de los genes tra. Un resultado es la formación de productos de agregación que
causan la formación de un agregado de acoplamiento que contiene unidas las células
donantes y receptoras. Una consecuencia adicional de la expresión de los genes tra es la
estimulación de los eventos necesarios para la transferencia del plásmido, que se produce
por un mecanismo similar al descrito anteriormente.
Una ventaja de este sistema es que las células que contienen el plásmido no expresan los
genes necesarios para la transferencia de plásmido a menos que exista un receptor
adecuado en las proximidades. Esto no sólo reduce la carga metabólica en la célula, sino
que también significa que no están expresando antígenos de superficie (tales como pili
conjugativo) que podrían ser reconocidas por el sistema inmune del huésped.
Transposones conjugativos
E. faecalis también proporciona un ejemplo de una excepción a la regla general de que la

conjugación es mediada por plásmidos. Algunas cepas de E. faecalis contienen un
transposón conocido como Tn916. Los transposones no se cubren particularmente en
esta Unidad, pero por el momento es suficiente saber que son elementos genéticos
móviles que son capaces de moverse de un sitio a otro del ADN. Lo que diferencia a
Tn916 aparte de otros transposones es su capacidad de transferir de una célula a otra por
conjugación.
Transposones conjugativos tales como Tn916 difieren de los plásmidos en que se replican
y heredan como parte del cromosoma. No hay forma estable de replicación independiente
como la hay con un plásmido. Sin embargo, una inspección más detallada del método de
transferencia (Fig. 9) muestra que existe una similitud significativa a la transferencia de un
plásmido. En particular, Tn916 contiene un origen de transferencia (oriT) que es bastante
similar a la que se encuentra en muchos plásmidos. El primer paso en la transferencia es
la escisión del transposón a partir del cromosoma, usando enzimas transposón-
codificadas (Int y Xis) que están relacionadas con los responsables de la integración y la
escisión del bacteriófago lambda. Produce una molécula circular que se asemeja a un
plásmido en todos menos un rasgo vital - que no tiene un origen de replicación por lo que
es incapaz de ser copiados en la forma normal. Sin embargo, ya que tiene un sitio de oriT
y lleva los genes tra necesarios para la transferencia conjugacional, es como puede ser
transferido a una célula receptora.

20
Al igual que con los sistemas de transferencia de plásmido descrito anteriormente, la

transferencia de Tn916 implica la síntesis de ADN de hebra sencilla iniciado en oriT y la
transferencia de la cadena desplazada al receptor. La única hebra transferida a
continuación, se circularizá y convierte a una forma circular de doble cadena que se
inserta aleatoriamente en el cromosoma receptor por la acción de la integrasa.
Una característica adicional de Tn916 que vale la pena considerar es, si la transferencia
se produjo sin la escisión a partir del cromosoma entonces, se esperaría que la
movilización del cromosoma ocurriera con la transferencia incompleta del transposón.
Transferencia comienza a partir de oriT y tendría que trabajar justo a la vuelta del
cromosoma antes de llegar al resto del transposón. Esto no parece suceder. La razón es
que el promotor para la expresión de los genes tra se encuentra hacia el extremo
izquierdo del transposón (en la Fig. 9) y se encuentra lejos de los genes tra. En la forma
lineal no se pueden expresar los genes tra. Sin embargo, cuando el transposón se
escinde del cromosoma y es circularizado, esto trae al promotor a la posición y orientación
correcta para la transcripción de los genes tra. Por lo tanto, se expresan a partir del
intermediario circular, pero no de la forma lineal. Esto asegura que el sistema de
transferencia sólo se activará después de haberse producido la escisión.

21
Escisión
Donador
Iniciación
de la transferencia
a partir de oriT
Hebra sencilla
transferida y
circularizada
Síntesis de
la segunda
hebra
Receptor
Integración
Figura 9. Transferencia del transposón conjugativo Tn916. El transposón se escinde del

cromosoma, usando las enzimas Int y Xis y posteriormente es circularizado. Esto permite a los
genes tra ser expresados a partir del promotor mostrado y la transferencia por conjugación se inicia
a partir de oriT. En el receptor, el ADN transferido es circularizado, la segunda hebra se hace y el
transposón se integra en el cromosoma (Dale y Park 2004).
Tn916 es el prototipo de una familia de transposones conjugativos relacionados que son

especialmente extendido en cocos Gram-positivos, aunque los elementos relacionados
también se producen en bacterias Gram-negativas (por ejemplo, Bacteroides). Para
muchos de estos elementos, incluyendo Tn916, la transmisión conjugativa es promiscua
ya que se puede transferir a otras especies o géneros. Es de suponer, pues, que los
transposones conjugativos han jugado un papel importante en la difusión de material
genético, incluidos los genes de resistencia a antibióticos en todo el reino bacteriano. En

22
particular, muchos de estos transposones, incluyendo Tn916, llevan un gen de resistencia

a tetraciclina (tetM) que se encuentra en una amplia gama de especies bacterianas, lo
que sugiere que han desempeñado un papel en la dispersión de este gen en particular.
2.1.4. Transducción
Transducción es la transferencia mediada por fagos de material genético. El paso clave

en la transducción es el envase de ADN en las cabezas de fagos durante el crecimiento
lítico del fago. Este proceso es normalmente altamente específico para el ADN del fago.
Sin embargo, con algunos fagos, los errores pueden ocurrir en fragmentos de ADN
bacteriano (producido por la degradación del cromosoma del huésped mediada por fagos)
se empaquetan de vez en cuando por error conduciendo a partículas tipo fago que
contienen un segmento de genoma bacteriano (véase la Figura 10).
Estas partículas de transducción son capaces de infectar una célula receptora, ya que la
información necesaria para la unión y la inyección de ADN se realiza por las proteínas de
la partícula del fago, cualquiera que sea el ácido nucleico que contenga. El segmento de
ADN transducido se puede inyectar en una nueva célula huésped.
No todos los bacteriófagos son capaces de llevar a cabo la transducción. Los requisitos
básicos de un fago transductor eficaz son que, la infección debería dar como resultado un
nivel apropiado de la degradación del ADN cromosómico para formar fragmentos de
tamaño adecuado en el momento adecuado para el envasado y que la especificidad del
proceso de envasado debe ser comparativamente baja.
En algunos casos, el ADN transducido es un plásmido bacteriano, en cuyo caso la

molécula de ADN inyectado es capaz de ser replicado y heredado. Más comúnmente el
ADN incorporado en la partícula de transducción es un fragmento de ADN cromosómico
que será incapaz de replicarse en la célula receptora. Para que sea replica y heredada,
debe ser incorporada en el cromosoma receptor (por recombinación homóloga), como es
el caso con otros mecanismos de transferencia de genes.
Este proceso se conoce como transducción generalizada (en oposición a la transducción

especializada), ya que prácticamente cualquier gen tiene la misma probabilidad de ser
transducido.

23
Bacteria donadora Replicación de ADN

Síntesis de partículas del fago
Infección lítica
Empaquetamiento del ADN

Dentro de las cabezas de los
fagos
Lisis Incorporación del

ADN cromosomal
Partícula
transductora
Infección del
receptor
Recombinación con
el ADN del huésped
Fragmento de ADN
transducido
Figura 10. Transducción generalizada (Dale y Park, 2004).
Transducción especializada
Algunos fagos (fagos atenuados) son capaces de establecer un estado conocido como
lisogenia, en la que se reprime la expresión de genes del fago y de replicación del fago.
En muchos casos, el profago se inserta en el ADN bacteriano y se replica como parte del
cromosoma. Cuando empieza la lisogenia y el fago entra en el ciclo lítico, que se escinde
del cromosoma por recombinación entre las secuencias en cada extremo del profago
integrado. Si este evento de recombinación ocurre en el lugar equivocado, una región

24
adyacente de ADN bacteriano se incorpora en el ADN del fago. Toda la progenie de este
fago contendrá entonces este gen bacteriano que por lo tanto, será transducido a una
frecuencia muy alta (efectivamente 100 por ciento por partícula de fago) una vez que el
fago transductor ha sido aislado. Dado que el ADN transferido se limita a una región muy
pequeña del cromosoma, el fenómeno se conoce como transducción especializada (o
restringida). Esto es muy similar a la formación de plásmidos F' mencionados
anteriormente (véase la Figura 8). Al igual que con los plásmidos F', ahora es mucho más
fácil añadir genes lambda ADN creando recombinantes in vitro.
Otro fago que se ha empleado de forma similar es el fago Mu que tiene la ventaja de
insertarse en múltiples sitios en el cromosoma por un mecanismo tipo transposón. Por lo
tanto, es mucho más fácil para crear una amplia gama de fagos transductores
especializados con Mu que se puede utilizar tanto en el mapeo genética y en
mutagénesis.
2.1.5. Resistencia a drogas
Durante los últimos años el público está cada vez más alarmado por los nuevos datos
científicos en los medios de comunicación sobre la conexión entre el abuso drogas en la
medicina, la industria agroalimentaria y la agricultura, y la aparición y propagación de
bacterias resistentes a drogas. La resistencia de bacterias a drogas va en aumento. Más
de 150 drogas antibacterianas están disponibles, los cuales se clasifican en 20 diferentes
clases y 10 de estas clases tienen objetivos específicos de acción, incluyendo las paredes
y membranas celulares, ácidos nucleicos y proteínas y la síntesis de ácido fólico. Con un
menor número de nuevas drogas que llegan al mercado, el problema de resistencia a
drogas que ya están en uso se ha convertido en una crisis de salud pública. Un estudio
estima que los costos hospitalarios directos de la gestión de resistencia a drogas en los
Estados Unidos son de $ 100 a 10,000 millones de dólares al año, y la Oficina de
Evaluación de Tecnologías de Estados Unidos ha estimado que los costos hospitalarios
mínimos de 5 tipos de infección nosocomial (por ejemplo, infección de la herida quirúrgica
y la neumonía) debido a la resistencia a drogas fueron de $ 4500 millones de dólares por
año.

25
La resistencia microbiana a drogas va en aumento, en parte, debido al uso inadecuado de

los antibióticos en medicina, así como también a las prácticas inadecuadas de la industria
agrícola, donde la producción animal intensiva implica dar a los animales de ganado
grandes cantidades de drogas (antibióticos) para promover el crecimiento y prevenir
infecciones. Estos usos promueven la selección de resistencia a antibióticos en
poblaciones bacterianas. Las bacterias resistentes de entornos agrícolas pueden ser
transmitidas a los seres humanos, en los que causan la enfermedad que no puede ser
atendida por los antibióticos convencionales que actualmente existen en el mercado.
Se necesitan dos condiciones para para desarrollar resistencia a drogas en bacterias. En

primer lugar, el organismo debe entrar en contacto con la droga. Entonces, la resistencia
contra el agente se debe desarrollar, junto con un mecanismo para transferir la resistencia
a la progenie o directamente a otros miembros de la misma especie.
Cada droga actúa en un sitio específico dentro de la célula bacteriana. Por ejemplo,
algunos se dirigen a las paredes celulares (por ejemplo, bacitracina, cefalosporinas y
penicilinas), otras tienen como blanco la membrana celular (por ejemplo, los ionóforos y
polimixinas), componentes de las células responsables de la síntesis de proteínas (por
ejemplo, aminoglicósidos, cloranfenicol y tetraciclina), ARN (por ejemplo, rifamicinas),
ADN (por ejemplo, ácido nalidíxico y quinolonas) o particulares vías bioquímicas tales
como la síntesis de ácido fólico (por ejemplo, metotrexato y sulfonamidas). Por lo tanto,
cuando surgen organismos resistentes, su resistencia es específica a drogas particulares.
Las bacterias han desarrollado diversos mecanismos para transmitir rasgos de resistencia
a otros miembros de su propia especie y para otras especies. Rasgos genéticos para la
resistencia a drogas se codifican en dos lugares en bacterias: los cromosomas y los
elementos extra-cromosómicos (plásmidos y transposones). Las mutaciones pueden

26
provocar que los genes cromosómicos que por lo general codifican para sensibilidad a las
drogas, comiencen a codificar resistencia; tales mutaciones se producen a razón de uno
por millón a uno por mil millones de células. Los elementos extra-cromosómicos
(plásmidos y transposones) son piezas más pequeñas de ADN circular, cada uno
equivalente en tamaño a aproximadamente 1% del cromosoma bacteriano. Los plásmidos
pueden ser no conjugativos o conjugativos; este último puede moverse desde una
bacteria a otra.
El intercambio genético es otro mecanismo por el cual los plásmidos resistentes a drogas
se pueden mover entre bacterias (Figuras 6, 7 y 9). Algunas bacterias son consideradas
como "promiscuas", porque una vez que han adquirido plásmidos resistentes a drogas,
realizan la transferencia de la resistencia tanto entre la misma especie como con otras
especies bacterianas con independencia del medio ambiente (es decir, si las drogas están
presentes o no).
Transferencia inusual de secuencias de ADN resistentes a los antibióticos entre especies

bacterianas y entre los diferentes nichos ecológicos (por ejemplo, entre los seres
humanos y rumiantes) se han documentado. Por ejemplo, en Staphylococcus aureus, una
bacteria gram-positiva, el gen cromosómico para la resistencia a la meticilina se originó
como un gen de β-lactamasa estafilocócica y un segmento de un gen de unión a penicilina
procedentes de una bacteria donante desconocido, tal vez Escherichia coli, un gramo
bacteria-negativo.
En lo que se refiere a mecanismos de resistencia, algunas especies de bacterias son

intrínsecamente insensibles a ciertos antibióticos, mientras que otras son sensibles. La
sensibilidad tiene 3 requisitos: 1) un objetivo para la reacción, 2) un mecanismo para el
transporte en la célula antes de la acción de los antibióticos y 3) la ausencia de enzimas
que podrían inactivar o modificar el antibiótico. Un cambio en cualquiera de estos
requisitos previos podría hacer que una bacteria se vuelva resistente a la droga o
antibiotico. Por ejemplo, una o más mutaciones pueden ser adquiridas al cambiar el
objetivo de la acción, la captación, el flujo de salida de extrusión de los antibióticos, o la
capacidad de la bacteria para inactivar o modificar el antibiótico.
Los fármacos antimicrobianos utilizados para la terapia humana a menudo tienen

importantes similitudes estructurales a los que se usan para los animales, lo que lleva a la
posibilidad de problemas adicionales. Por ejemplo, la resistencia a la ormetoprim, un
medicamento veterinario, podría fomentar la resistencia a la trimetoprima, un compuesto
estructuralmente similar que se especifica para su uso en seres humanos.

27
Las bacterias resistentes a la estreptogramina, quinupristina y dalfopristina se han

encontrado en los pavos que se habían dado virginiamicina, pero no cualquiera de los
otros antibióticos, sin embargo, todos estos compuestos tienen una estructura similar.
El uso de alimentos para animales suplementado con tilosina se ha traducido en el
desarrollo de resistentes cepas resistentes a eritromicina de estreptococos y
estafilococos, no sólo en los animales, sino también en sus cuidadores.
2.2. Herramientas en la clonación y expresión de genes para obtener

bacterias recombinantes
La genética bacteriana está pasando por una fase interesante de su historia. Las nuevas
metodologías y comprensión concomitante de la biología molecular han dado a los
científicos nuevos conocimientos que hasta ahora es complicado estimar su impacto final.
La genética bacteriana se está convirtiendo en una herramienta poderosa para el estudio
de sistemas genéticos diferentes al de las mismas bacterias, así como desarrollo de
procesos aplicables a problemas específicos a nivel industrial, ecológicos, farmacéuticos,
u otros problemas específicos en desarrollo (por ejemplo, problemas de fermentación y
problemas bioquímicos).
Así, dentro de la genética bacteriana hay varias herramientas, algunas de las cuales
serán abordadas en los presentes tópicos.
2.2.1. Los plásmidos como vectores de clonación
La constitución genómica de varias bacterias puede consistir en dos componentes, a

saber, el cromosoma que lleva los genes para todas las funciones esenciales y su
regulación, y de una unidad cromosómica adicional pero autónoma denominado plásmido
que inicialmente se pensó para llevar las funciones necesarias para su propia replicación,
mantenimiento, y distribución. Sin embargo, los plásmidos no deben ser considerados
moléculas egoístas o promiscuas ya que muchos de ellos se han descrito para transportar
genes que proporcionan funciones de ventaja selectiva. Por ejemplo, se pueden codificar
resistencia a varios agentes antimicrobianos, tales como antibióticos, metales pesados o
toxinas, o para la producción de antibióticos, pigmentos, toxinas, H2S, y otros, o pueden
proporcionar capacidades catabólicas inusuales, o dotar fertilidad, etc. También pueden
inducir tumores de plantas, y otras respuestas simbióticas y patógenas en plantas y
animales, para nombrar unos pocos. Además, un plásmido también puede llevar algunos
genes esenciales.

28
Los plásmidos han jugado un papel muy importante en la evolución bacteriana ya que
célula que contuvo, en su momento, un plásmido puede haber tenido una ventaja
adaptativa sobre las bacterias libres de plásmidos. En los últimos años, su importancia se
ha incrementado enormemente debido a su aplicación en la investigación en ingeniería
genética como un portador de ADN recombinante, y les ha traído reconocimiento
generalizado. Una célula bacteriana puede o no llevar a un plásmido o puede llevar más
de un tipo o de copias de un plásmido. Los plásmidos que a menudo han sido
comparados con los organismos vivos mediante la aplicación de los mismos atributos que
se hace en busca de virus. Por lo tanto, un organismo'' es el elemento unidad de un linaje
continuo con una historia evolutiva individuo''. Esta definición se ajusta muy bien sobre los
virus, plásmidos, y ciertos transposones, todos los cuales han sido considerados para
pertenecer a una familia de organismos primitivos. La característica común entre estas
unidades es su replicación, el mantenimiento, y la difusión.
Así, los plásmidos son moléculas circulares de ADN de doble cadena que constituyen una
unidad de replicación independiente del cromosoma, razón por la que pueden presentarse
en más de una copia dentro de la célula bacteriana. Los plásmidos representan uno de los
principales agentes que contribuyen en la diseminación de la resistencia antimicrobiana.
Contribuyen en la expansión de importantes determinantes de resistencia, promueven la
transferencia de genes horizontal entre especies no relacionadas, Curiosamente, los
plásmidos fueron identificados en cepas de bacterias no relacionadas que se aislaron de
áreas geográficamente muy separadas sin ningún problema epidemiológico involucrado.
Los plásmidos provienen de familias de bacterias que prevalecen importantemente en
forma natural, normalmente poseen múltiples determinantes genéticos que les confieren a
las bacterias la resistencia a múltiples clases de antibióticos. Pero además contienen
factores de virulencia y sistemas adicionales que promueven su estabilidad y
mantenimiento en la bacteria hospedera en diferentes condiciones ambientales (Carattoli
2013).

29
La características transmitidas por los plásmidos que ha sido más estudiada, es el de la

resistencia a los drogas (Figura 11). Muchas bacterias pueden volverse resistentes a
drogas por la adquisición de un plásmido. Aunque no todas las resistencias a antibióticos
son transferidas por plásmidos como lo es la resistencia a algunos fármacos tales como el
ácido nalidíxico y la rifampicina (en ambos casos, la resistencia se produjo por la mutación
del gen que codifica para la proteína blanco en ambos casos). Los genes involucrados en
la resistencia a antibióticos son muchos y variados, que van desde enzimas llamadas beta
lactamasas codificadas en plásmidos que destruyen las penicilinas, hasta proteínas de
membrana que reducen la acumulación intracelular de tetraciclina. La capacidad de los
plásmidos para ser transferido de una bacteria a otra, a veces incluso entre especies muy
diferentes, ha contribuido en gran medida a la amplia difusión de genes de resistencia a
antibióticos. Las bacterias pueden volverse resistentes a un número variado de
antibióticos, ya sea por la adquisición de varios plásmidos independientes o mediante la
adquisición de un único plásmido con muchos determinantes de resistencia en él. Se cree
que los transposones han desempeñado un papel importante en el desarrollo de
plásmidos con resistencia a drogas, mediante la circulación, entre diferentes plásmidos,
de los genes responsables de la resistencia a drogas o directamente a partir del
cromosoma de un organismo resistente, copiado y transmitido, naturalmente, en un
plásmido.
Se debe apreciar que también se producen otros mecanismos de resistencia a drogas y

que tal resistencia no siempre es debido a plásmidos: de hecho muchas de las bacterias
que actualmente están causando problemas en hospitales debido a infecciones cruzadas
son o bien intrínsecamente resistentes o deben su resistencia a drogas por genes
cromosómicos propios.

30
Figura 11. La resistencia a una droga es el resultado de una recombinación exitosa.

2.2.2. Bacteriófagos
Los bacteriófagos (fagos o para abreviar) son simplemente los virus que infectan
bacterias. Ellos jugaron un papel central en el desarrollo de la biología molecular,
especialmente en nuestra comprensión de la estructura del gen, la expresión y son
también importantes en el laboratorio y en la naturaleza como proveedores de medios por
los cuales los genes se pueden transferir de una bacteria a otra. Con el desarrollo de la
clonación de genes, los fagos se llevaron en un papel adicional como vectores para la
clonación de ADN.
En muchas de sus propiedades básicas, los fagos son similares a otros virus. Ellos
contienen ARN o ADN encerrado en una capa de proteína. El fago infecta mediante la
unión a un receptor específico en la superficie de la bacteria y el ácido nucleico entra en la
célula. Algunos de los genes del fago (los genes tempranos) se expresan casi de
inmediato, utilizando enzimas del huésped pre existentes, en general, éstos codifican para
las proteínas necesarias para la replicación del ácido nucleico del fago. A continuación, se
realizan varias copias del ácido nucleico del fago, y la expresión de los genes tardíos
comienza: estos genes son los que se necesitan para la producción de la partícula del
fago. La naturaleza de la transición desde la primera expresión del gen a la expresión
tardía del mismo varía entre diferentes fagos. Las partículas de fago se ensamblan y la
célula sufre lisis, liberando una serie de partículas de fago, cada uno de los cuales pueden
luego pasar a infectar otra célula bacteriana (véase la Figura 12).

31
Inyección del ADN del Fago
Replicación del ADN

Infección
Sintésis de partículas
del fago
Lisis Empaquetamiento
del ADN en las
cabezas del fago
Figura 12. Crecimiento lítico de bacteriófagos (Dale y Park, 2004).
Si un bacteriófago infecta un cultivo líquido de bacterias, puede dar como resultado un

aclaramiento completo del medio. Por otro lado, si las bacterias están esparcidas en la
superficie de una placa de agar, las partículas de fago liberadas de una célula infectada
individual sólo será capaces de infectar a bacterias vecinas que se traducirá en un
aclaramiento localizado en las cercanías de la colonia bacteriana, misma que son
conocidas o referidas como placas. Esto nos permite determinar la concentración de
partículas de bacteriófago en una suspensión (esto recibe el título de fago), usando la
suposición de que el número de placas se corresponde con el número de partículas de
bacteriófagos presentes en la muestra. Dado que la suposición no siempre es válida, los
resultados se expresan generalmente en términos de Unidades Formadoras de Placa, o
UFP.
En la práctica, dichos ensayos son realizados generalmente con el cultivo bacteriano (las
células indicadoras) y el fago suspendido en agar blando que se vierte como una
sobrecapa en la parte superior de una placa de agar, en lugar de esparcirla en la
superficie. Esto le da a una placa de tres dimensiones, que es más fácil de ver.
Algunos bacteriófagos, tales como  (lambda), no siempre entran en el ciclo lítico descrito
anteriormente. Estos fagos son llamados temperamentales y pueden establecer una
relación más o menos estable con la célula huésped, conocido como lisogenia. En este
estado, casi todos los genes del fago están completamente reprimidos, como es la
replicación del ácido nucleico, por lo que no se producen partículas de fago hasta que se

32
rompe el estado lisogénico una vez más. Los bacteriófagos temperamentales por lo
general producen placas en una capa de agar utilizando un indicador bacteriano
adecuado ya que muchas de las células infectadas se lisan en lugar de convertirse
lisogénicas. Sin embargo, como las células que entran en el estado lisogénico seguirán
creciendo (y son más resistentes a una posterior infección), las placas serán turbias en
lugar de las placas claras se observan con un fago virulento (por ejemplo, un fago que no
puede establecer lisogenia).
Muchos fagos se han caracterizado en mayor o menor medida, los principales ejemplos
son todos los virus que infectan a E. coli. Estos vienen en una variedad de formas y
tamaños como se muestra en la Figura 13, incluyendo estructuras simples y pequeñas
como X174 y MS2 a estructuras más complejas con cabezas y colas identificables
(lambda, T4) y estructuras filamentosos tales como M13.
Figura 13. Morfología de algunos bacteriófagos seleccionados. Hay que hacer notar que la
estructura filamentosa del fago M13 es muy larga y no puede ser tomada su representación en
este esquema como representativa de su verdadero tamaño (Dale y Park, 2004).
La partícula de fago se compone de una molécula de ácido nucleico contenido dentro de

una capa de proteína. En los fagos más simples, tales como MS2, la capa contiene un
número de copias de una sola proteína importante que esencialmente polimeriza
espontáneamente. La forma en que se asocian define tanto la forma como el tamaño de la
partícula del fago. En principio, estructuras filamentosas también se pueden producir por
polimerización espontánea de subunidades proteicas, pero esto no es suficiente para
definir la longitud del filamento. Una forma común de asegurar que se producen
filamentos de una longitud definida es utilizar una plantilla o molde, alrededor de la cual la

33
proteína se polimeriza. Con fagos filamentosos tales como M13 el ADN del fago
proporciona la plantilla o molde.
El montaje de M13, donde las proteínas de la cubierta del fago se polimerizan alrededor
del ADN, hace un marcado contraste con fagos más grandes, tales como  (lambda) y T4,
en donde el DNA se empaqueta en cabezas de fagos vacíos pre formados y por lo tanto
el tamaño de la cabeza del fago se define por las proteínas de las que está compuesto. El
tamaño y la complejidad de estas estructuras requiere un enfoque diferente para su
producción, la polimerización espontánea sería demasiado ineficiente y las estructuras
son generalmente inestables hasta que están completas. El ensamblaje de estos fagos se
dirige por lo tanto por la presencia temporal de un número de proteínas adicionales, que
se eliminan antes de la maduración final del fago (véase la Figura 14). Estos
componentes que ayudan con el montaje, pero no están presentes en la partícula final se
denominan proteínas de andamiaje.
Montaje del Eliminación del andamio

andamio
Subunidad
de la cápside
Estructura
Ensamble madura
Figura 14. Montaje del andamiaje. Ensamble de fagos complejos con la asistencia de proteínas
andamios. Estas se eliminan una vez ensamblado la estructura (Dale y Park 2004).
Los bacteriófagos también difieren en la naturaleza de su contenido de ácido nucleico. Los

fagos M13 y X174 contienen ADN circular de cadena sencilla, MS2 tiene un genoma de
ARN, mientras  y las partículas del fago T4 contienen ADN de doble hebra.

34
2.2.3. Cepas bacterianas
Acorde a lo revisado, los procariontes modifican su expresión genética acorde a las

condiciones ambientales, ya sea promoviendo o inhibiendo la síntesis de proteínas. Estos
mecanismos determinan la variación fenotípica, lo cual se manifiesta con cambios en el
fenotipo celular o de la población procarionte. A su vez, también tienen mecanismos de
variación genotípica, que serán igualmente traducidos en cambios fenotípicos, pero que
se basan en una modificación de la información genética contenida en la célula (Betancor
et. al. 2006).
La diversidad genética en última instancia, puede explicar la variabilidad fenotípica en la

mayoría de las bacterias, como la distribución geográfica, la especificidad de huésped, de
patogenicidad o resistencia a los antibióticos, y la virulencia. Esto, nos lleva a la
generación de variantes, la selección de variantes con propiedades deseables y el surtido
de características entre las cepas por intercambio genético. Por ende, a la aplicación de
programas de mejora de cepas de microorganismos comercialmente útiles, sobre todo
para aumentar la formación de un producto deseado (Li, et.al. 2009).
Se definirá, antes de proseguir, que es una cepa bacteriana. De acuerdo con la primera
edición del Manual de Bergey’s de Bacteriología sistemática, “una cepa se compone de
los descendientes de un solo aislamiento en cultivo puro y por lo general se compone de
una sucesión de cultivos que en última instancia son derivados de una sola colonia inicial”
(Dijkshoorn et al. 2000).
Así, dada esta definición, podemos mencionar que hay cuatro tipos de bacterias, de las
cuales se obtienen cepas bacterianas de interés práctico para la actividad humana. Estos
tipos de bacterias son:
Staphylococcus aureus
El Staphylococcus aureus es una bacteria Gram positiva de forma esférica que crece
entre los 10° y45°C, con un pH de entre 4 y 9. Sin embargo, su temperatura óptima de
desarrollo está comprendida entre los 30° y 37°C, y el rango óptimo de pH oscila entre 7 y
7,5.A pesar de no ser esporógenas, las bacterias estafilococos muestran una notable
resistencia a las condiciones ambientales desfavorables. Generalmente, se encuentra en
el agua, en la piel y en las mucosas. Cuando se introduce en nuestro organismo, puede
generar infecciones de distinta naturaleza.
Las infecciones provocadas por el Staphylococcus aureus, contraídas en ambientes

hospitalarios, suelen estar causadas por estípites resistentes a las quimioterapias y, a
menudo, se manifiestan en forma epidémica. El brote de estas epidemias puede significar,

35
en determinadas salas, un evento de particular gravedad, que puede ocasionar serios

problemas profilácticos y terapéuticos (Suzuki et. al. 2012, Rolo et. al. 2012).
Escherichia coli (E.coli)
Pertenece a la familia de las Enterobacteriaceae, microorganismos Gram negativos

ubiquitarios, que se encuentran en el suelo, el agua, la vegetación y forman parte de la
flora intestinal de la mayor parte de los animales, incluido, el ser humano. Su cultivo es
muy sencillo y presenta una gran tolerancia de variación de pH, con un valor óptimo de
7.5; la temperatura ideal de crecimiento es 37°C. Esta bacteria es resistente al calor:
temperatura de encubado 45°C.
El Escherichia coli es un huésped habitual del organismo humano y representa la especie

predominante de la comunidad bacteriana facultativa que reside en el intestino grueso;
por ello, su presencia en un material determinado (por ejemplo, agua) puede considerarse
un indicio seguro de contaminación fecal (Jafari et. al. 2012, Pobiega et. al. 2013).
Pseudomonas aeruginosa
La Peudomonas aeruginosa es una bacteria Gram negativa, que crece a temperaturas

que oscilan entre los 4° y 42°C. Sin embargo, no puede desarrollarse con un pH inferior a
4,5. Generalmente se le encuentra en el agua, el suelo y, como huésped, en la piel y el
intestino. Su desarrollo se vea favorecido por cualquier tratamiento con medicamentos
antibacteriales, ya que su desarrollo se ve favorecido por cualquier antibiótico. Al reducir
el resto de la población microbiana, permite que la bacteria incremente su número; bajo
otras circunstancias, este incremento resultaría imposible (Haynes 1951).
Enterococcus faecalis
Dentro de las especies de procariontes clasificadas como Gram positivas, los enterococos
representan una especie que suele estar presente de forma natural en la microbiota
intestinal de los animales, aunque también pueden estar presentes en las plantas e
insectos. Acorde a lo anterior suelen ser empleados como indicadores de contaminación
fecal en el agua y en los alimentos. Las condiciones de crecimiento que las favorecen,
involucran temperaturas entre los 10o y los 45o, incluso pueden sobrevivir a 60o durante un
tiempo de 30 minutos; en medios con soluciones de NaCl al 6,5% y pH de 9,6.
Los enterococos son bacterias dotadas de un bajo poder patógeno pero poseen genes
que codifican la resistencia a algunos antibióticos y, por consiguiente, logran sobrevivir en

36
ambientes en los que éstos son muy utilizados. De hecho, en los últimos 15 años, han
sido frecuentemente causa de infecciones hospitalarias (Jett et. al. 1994).
Las cepas bacterianas relacionadas con las bacterias relacionadas anteriormente se

presentan en la siguiente tabla:
Tabla I.Cepas bacterianas

Número
Nombre de cepa Característica
Identificación
Bacilo gramnegativo
Enteropatógeno Grupo E. coli
Escherichia coli O157:H7 Sin número
Enterohemorrágico, ECEH. Cepa
No Toxigénica
Bacilo gramnegativo, familia
Escherichia coli ATCC 25922
Enterobacteriaceae
Bacilo gramnegativo
Escherichia coli ATCC 35218
Familia Enterobacteriaceae
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Cocácea grampositiva
Cocácea grampositiva, resistente a
Enterococcus faecalis ATCC 51299
vancomicina fenotipo Van B.
Pseudomonas Bacilo gramnegativo, no
ATCC 27853
aeruginosa fermentador (BNF)
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Cocácea grampositiva, en racimo
Cocácea grampostiva, negativa
Staphylococcus aureus ATCC BA 976 resistencia inducible a
clindamicina. gen msrA
Cocácea grampostiva, positiva
Staphylococcus aureus ATCC BA 977 resistencia inducible a
clindamicina. gen ermA
* Las siglas ATCC significan American Type Culture Collection.
Como las cepas bacterianas suponen cada vez mayores retos para la salud humana,
incluyendo aumento de la virulencia y la transmisibilidad, la resistencia a múltiples
antibióticos, la expansión de los espectros de acogida, y la posibilidad de manipulación
genética para el bioterrorismo. Se han creado nuevas herramientas para la tipificación de
cepas bacterianas o la identificación de las bacterias a nivel de cepa, es particularmente
importante para el diagnóstico, tratamiento y vigilancia epidemiológica de las infecciones
bacterianas. Este es especialmente el caso para las bacterias que exhiben altos niveles

37
de resistencia a los antibióticos o la virulencia, y aquellos implicados en las infecciones

nosocomiales o pandemias.
Así, durante las dos últimas décadas, los métodos moleculares han reemplazado
progresivamente ensayos fenotípicos para describir cepas bacterianas. En teoría, hay dos
sistemas de tipificación distintos: fenotipificación y genotipificación. El fenotipo bacteriano
es determinado por la morfología de las colonias en diversos medios de cultivo, pruebas
bioquímicas, serológicas, patogenicidad y susceptibilidad a los antibióticos. Más
recientemente, la genotipificación, que se refiere a la discriminación de las cepas
bacterianas en función de su contenido genético, se ha convertido en la tipificación
ampliamente utilizada para una cepa bacteriana debido a su alta resolución. El perfil
genético de una cepa dada generada por un método de determinación del genotipo
específico puede ser tan único como una huella dactilar. Por lo tanto, genotipificación
también se conoce como huella de ADN.
Métodos de caracterización de cepas bacterianas actuales pueden clasificarse en tres

categorías principales: patrón de bandas de ADN, secuenciación de ADN, y los métodos
basados en la hibridación de ADN. Los métodos basados en el patrón de bandas ADN
discriminan las cepas estudiadas sobre la base de las diferencias en el tamaño de las
bandas de ADN (fragmentos) generados por la amplificación de ADN genómico o
mediante la escisión de ADN utilizando enzimas de restricción (ER).
Los métodos basados en la secuenciación de ADN generan una secuencia original de

nucleótidos y discrimina entre las cepas bacterianas directamente de polimorfismos en el
ADN. Los métodos basados en la hibridación de ADN se refiere principalmente a que el
estudios de microarreglos de ADN. En esta técnica, las cepas bacterianas se discriminan
por el análisis de la hibridación de su ADN para sondas de secuencias conocidas.
Con la excepción de la secuenciación del genoma, la capacidad discriminatoria de
métodos de genotipificación es dependiente de la especie (Li et. al. 2009)
2.2.4. Selección de bacterias recombinantes por resistencia a drogas
Con objeto de identificar el éxito de la recombinación, resulta fundamental revisar el

concepto de selección, ya que cuando se trata de examinar una población bacteriana
(más de 108 células/mL promedio en un cultivo celular) no es factible realizar un análisis
macroscópico, ya que en muchas ocasiones los cambios involucrados suelen ser a nivel
de una ruta metabólica y resulta imposible distinguir un cambio físico a simple vista en la
población bacteriana. Por tanto, valorar el crecimiento en determinadas condiciones
nutrimentales o bien ambientales, resulta ser una excelente estrategia, ya que solo
aquellas células que hayan adquirido un nuevo fenotipo (una o más característica
observables) como resultado de la transferencia de ADN serán capaces de crecer y

38
dividirse en dichas condiciones. Ejemplos de agentes de selección utilizados para prevenir

el crecimiento de las células parenterales (aquellas que carecen de ADN recombinante)
son: antibióticos, bacteriófagos y pueden requerir de factores de crecimiento (Birge 2006).
Ahora bien la elección de dichos agentes para la selección bacteriana va a depender del
sistema de expresión que se utilice, es decir, en el caso de un plásmido, el uso de un
antibiótico determinado dependerá de que dicho vector de expresión tenga el gen que le
confiere la resistencia al antibiótico (Figura 11).
A continuación se presentan los pasos generales para determinar el éxito del evento de
transferencia del material genético a través de valorar su transmisión a la progenie por su
resistencia a una droga que fue adquirida por la célula receptora, siendo el principio para
la obtención de una bacteria genéticamente modificada.

39
Actividades
La elaboración de las actividades estará guiada por tu docente en línea, mismo

que te indicará, a través de la Planeación didáctica del docente en línea, la dinámica
que tú y tus compañeros (as) llevarán a cabo, así como los envíos que tendrán que
realizar.
Para el envío de tus trabajos usarás la siguiente nomenclatura: BGMB _U2_A1_XXYZ,

donde BGMB corresponde a las siglas de la asignatura, U2 es la unidad de
conocimiento, A1 es el número de actividad, el cual debes sustituir considerando la
actividad que se realices, XX son las primeras letras de tu nombre, Y la primera letra
de tu apellido paterno y Z la primera letra de tu apellido materno.
Autorreflexiones
Para la parte de autorreflexiones debes responder las Preguntas de

Autorreflexión indicadas por tu docente en línea y enviar tu archivo. Cabe
recordar que esta actividad tiene una ponderación del 10% de tu evaluación.
Para el envío de tu autorreflexión utiliza la siguiente nomenclatura:

BGMB _U2_ATR _XXYZ, donde BGMB corresponde a las siglas de la
asignatura, U2 es la unidad de conocimiento, XX son las primeras letras de tu
nombre, y la primera letra de tu apellido paterno y Z la primera letra de tu
apellido materno
Cierre de Unidad
En la presente Unidad se revisó básicamente las bases moleculares que sustentan la

recombinación bacteriana a través de revisar detalladamente los mecanismos de
transferencia del material genético.
Los mecanismos de transferencia revisados fueron la transformación, la conjugación y la

transducción, enfocándonos a definir el evento celular, detallar sus características
generales y en algunos casos, como la conjugación, ejemplificar más especificamente
algunos mecanismos. Lo anterior obedece a que una vez revisados dichos tópicos se
cuenta con el conocimiento básico para poder comprender las bases moleculares que
operan para que las bacterias puedan tener una mejor adaptabilidad a diferentes
condiciones ambientales, en particular la resistencia a drogas. Si bien, lo anterior permite

40
comprender el significado biológico y evolutivo de este evento, resulta además, ser una
estrategia para el desempeño de la biotecnología con objeto de generar organismos
genéticamente modificados y que a través de esta adquisición de nuevo material genético
pueda ser una herramienta para su aislamiento.
Por su parte y para complementar lo previamente señalado, se revisaron las herramientas

necesarias para promover la generación de bacterias genéticamente modificadas,
particularmente, los vectores de expresión, los criterios de selección bacteriana y la
resistencia a drogas como estrategia para su aislamiento adecuado.
Para saber más
Si te interesa conocer más de la relación que guardamos con los procariontes te

recomiendo revisar la lectura del microbioma humano:
Cárdenas Guzmán G (2012). El microbioma humano. ¿Cómo ves? 167:10-14 Recuperado
de http://www.comoves.unam.mx/assets/revista/167/el-microbioma-humano.pdf
¿Sabías que existe una normatividad para el manejo de los organismos genéticamente
modificados? puedes enterarte al respecto:
Ley de bioseguridad de organismos genéticamente modificados. Recuperado de
http://www.diputados.gob.mx/LeyesBiblio/pdf/LBOGM.pdf
Debemos o no producir organismos genéticamente modificados, conoce la opinión de la

Academia Mexicana de Ciencias:
Comité de Biotecnología de la Academia Mexicana de Ciencias (2007). Por un uso
responsable de los organismos genéticamente modificados. Recuperado de
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/por_un_uso_responsable_ogms.pdf
Fuentes de consulta
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Betancor, L., Gadea, P., Flores, K. (2006). Genética Bacteriana. Temas de Bacteriología y
virología médica. 2a Edición. Uruguay: Universidad de la República.
Birge, E. A. (2006). Bacterial and Bacteriophage genetics. 5a Edición. Tempe: Springer.
Carattoli, A. (2013). Plasmids and the spread of resistance. J. Med. Microbiology, Vol.
303:298-304.

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Dale, J. W. y Park, S. F. (2004). Molecular Genetics of Bacteria. 4ª Edición. West Sussex:

John Wiley and Sons Ltd.
Dijkshoorn L., Ursing, B. M., y Ursing, J. B. (2000). Strain, clone and species: comments
on three basic concepts of bacteriology. J. Med. Microbiol. Vol. 49:397-401.
Fredricks, D. N. (2001). Microbial ecology of human skin in health and disease. J. Invest
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Haynes, W. C. (1951). Pseudomonas aeruginosa – its characterization and identification.

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Jafari, A., Aslani, M. M., Bouzari S. (2012). Escherichia coli: a brief review of diarrheagenic
pathotypes and their role in diarrheal diseases in Iran. Iran: J. Microbiol. Vol. 4:3, 102-117.
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Suzuki, H., Lefébvre, T., Pavisnki-Bitar, P. y Stanhope, M. J. (2012). Comparative genomic

analysis of the genus Staphylococcus incluiding Staphylococcus aureus and its newly
described sister species Staphylococcus simiae. BMC Genomics 13:38, 1471.
Thanassi, D. G., Bliska, J. B., Christie, P.J. (2012). Surface organelles assembled by
secretion systems of Gram-negative bacteria: diversity in structure and function. FEMS
Microbiol Rev. 36:1046-82.

42
Imagen de crecimiento bacteriano. Recuperado de

http://www.slideshare.net/pablongonius/crecimiento-bacteriano-ilse-valderrama

43

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Genética molecular bacteriana

Unidad 2. Transferencia de material

Unidad 2. Transferencia de material genético y selección bacteriana ....................... 2

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Unidad 2. Transferencia de material genético y selección bacteriana

Cárdenas Guzmán G (2012). “El microbioma humano”. ¿Cómo ves?

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Para la biotecnología, este conocimiento es indispensable, ya que esta disciplina pretende

Acorde a lo anterior, primeramente revisaremos las estrategias de transferencia de

Identificar y relacionar las estrategias de transferencia de

Relacionar estrategias moleculares de ingeniería genética

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2. Transferencia de material genético y selección bacteriana

2.1. Sobrevivencia bacteriana: transferencia y recombinación de ADN y resistencia

2.2. Herramientas en la clonación y expresión de genes para obtener bacterias

2. Transferencia de material genético y selección bacteriana

En la presente Unidad 2, se revisarán dos aspectos fundamentales para poder determinar

Como primera incursión, se reconocerá y fortalecerá el concepto de la recombinación

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herramientas técnicas que pueden facilitar dicha transferencia de la información. Resulta

2.1. Sobrevivencia bacteriana: transferencia y recombinación de ADN y

Los procariontes son microorganismos que sobresalen en cuanto a su fascinante

La recombinación es un proceso que combina elementos genéticos contenidos en los

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eucariontes, la recombinación comprende una serie de mecanismos que son

Un requisito común de todas las formas de transferencia de genes entre bacterias,

Figura 1. Recombinación entre dos moléculas de ADN lineal.

Existen diferentes formas de recombinación, donde la recombinación homóloga, se refiere

Figura 2. Recombinación homóloga y heteróloga.

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El evento que determinó el surgimiento de lo que ahora conocemos como ingeniería

Las enzimas de restricción, actoras determinantes durante la recombinación

Figura 3. Mecanismo de acción de las enzimas de restricción.

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Ahora bien, si el fragmento de ADN producto de la digestión de una enzima de restricción

Recombinación genética en bacterias

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Ahora bien, también puede suceder la recombinación heteróloga, la cual ha sido

Por tanto, la recombinación genética bacteriana sucede cuando se transfieren fragmentos

La transformación es un proceso de recombinación génica mediante el cual las bacterias

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Figura 4. Recombinación bacteriana por transformación.

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En la conjugación, la transmisión de ADN se realiza directamente de una célula

Pero ¿qué características presenta y cómo es que se puede favorecer la conjugación?

Resulta que para que se dé la transferencia de genes generalmente contenidos en un

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receptora. Hay que recordar que la recombinación es exitosa si y solo si el fragmento de

Mezcla del cultivo

Agar selectivo que contiene

Bacteria receptora con mutación cromosomal

Figura 5. Transferencia por conjugación de un plásmido resistente. La cepa donadora es sensible

La Figura 5 ilustra un ejemplo de una estrategia experimental para llevar a cabo la

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Entre las bacterias donde la conjugación se presenta con mayor frecuencia, se

La significancia más evidente de la conjugación es que permite la transmisión de

Formación de parejas de apareamiento

En la mayoría de los casos, la incidencia de la conjugación, depende de la presencia de

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Pareja de Copia del plásmido

Interesantemente, este mecanismo tiene mucho en común con el sistema de secreción de

Por transferencia de ADN

La transferencia de ADN de un donador a un receptor (Figura 7) se inicia por una proteína