Faculdade de Ciências Farmacêuticas

Dep. Tecnologia Bioquímico-Farmacêutica

Curso de Tecnologia Químico-Farmacêutica

Dissertação
para obtenção do grau de Mestre

Alzira Maria da Silva Martins

Orientadora:Prof. Titular Dra Thereza Christina Vessoni Penna

 Identificação e verificação da
resistência aos sanitizantes dos
microrganismos presentes na água
destinada ao abastecimento público
e em diferentes pontos de um
sistema de purificação .
Introdução:
Aplicações da água:
•Água potável
•Água industrial
•Água purificada
•Água para injetáveis
Principais contaminantes da água
• Contaminantes particulados
• Contaminantes inorgânicos
• Contaminantes orgânicos
• Contaminantes microbiológicos
Características químicas da água para abastecimento público
(Portaria n° 1469 de 29/12/200)

Aspecto Límpido

Odor Cheiro de cloro levemente perceptível/ agradável

Sólidos dissolvidos Totais Até 1000mg/litro

pH Entre 6 a 9,5

Oxigênio consumido Até 10mg/litro em oxigênio

Nitrogênio nítrico Até 10mg/litro em nitrogênio

Ferro Até 0,3mg/litro em ferro

Cloretos Até 250mg/litro íon cloreto

Sulfatos Até 250mg/litro em íon sulfito
Cloro residual 2,0mg/litro em cloro residual
Parâmetros microbiológicas da água para abastecimento público
Escherichia coli ou coliformes Ausência em 100 mL
termotolerantes
Coliformes Totais Ausência em 100 mL
 Determinação de padrões de qualidade de água,
segundo a Farmacopéia

Água purificada Limites

Condutividade < 1,3uS/cm

TOC < 0,5mg/L

Bactérias < 100UFC/mL

Água para injetáveis Limites

Condutividade < 1,3uS/cm

TOC < 0,5mg/L

Bactérias < 10UFC/mL

Pirogênio < 0,25UE/mL

•
Sistema de água purificada da Edwards Lifesciences Macchi

Água de alimentação –Ponto 1

Filtros Multimeios – Ponto2
Abrandadores – Ponto 3

Filtro de Carvão – Ponto 4

Filtro de 5 micras – Ponto 5

Osmose Reversa – Ponto 6
Deionização continua – Ponto 7
Água Purificada – Ponto 8
UV- Ponto 9
Filtros de 0.05 micras – Ponto 10
Pontos de Uso –Ponto 11,12,13
 A Edwards Lifesciences Macchi fornece na linha
cardiovascular uma extensa gama de produtos e serviços
divididos em 4 quatro grandes áreas.

Cuidado Intensivo
Perfusão/CEC

Cirurgia Cardíaca
Vascular
•Pontos de uso

LAVAGEM DE LAVAGEM DE FILTROS TESTE DE ESTANQUEIDADE

COMPONENTES
 •Agentes químicos utilizados na higienização dos subsistemas de tratamento de água

Agente Conc. de Valor Ponto de uso Tempo de aplicação

químico uso (%) final do contato
pH (minutos)

Minncare PAA(0,4 2.1 Osmose reversa 180 Desinfetante

5%)+H2 Unidade deionização
O2
(2,2%)
Álcool 70,0 7.2 Pontos de amostragem(externo) 01 Desinfetante

Hipoclorito 0,5 11,9 Tanque de água purificada 60 Desinfetante

de sódio Linha de distribuição aos pontos
de uso
Bissulfito 1,0 4,0 Filtros multimeios 90 Declorinação
de sódio Abrandadores
Filtro de Carvão
Hidróxido 0,4 12,8 Osmose Reversa 30 Ajuste de pH
de Sódio Deionização Continua
Ácido cítrico 0,5 2,4 Osmose Reversa 30 Ajuste de pH

Ácido 0,5 0,3 Unidade de Deionização 30 Ajuste de pH

clorídrico
Material e Métodos
Amostragem: Todos os pontos foram sanitizados com álcool 70%,
seguido pela coleta em sacos estéreis de polietileno

Filtração: As amostras foram submetidas ao método de filtração de

membrana 0,45 um. Incubadas em meio TSA 35°C/72 horas
(contagem total), em meio m Endo Agar Less 34,5-35,5°C/22 horas
(coliformes total)
Isolamento
•Contagem das colônias
•Subcultura das colônias
•Coloração de Gram
•Indol
•Oxidase
Identificação
•BBL Crystal

Substratos enzimáticos e
bioquímicos. As reações são
baseadas na habilidade do
microrganismo em metabolizar o
substrato, provocando alteração
de cor do indicador de pH.

•API 20 NE

É composto por 20 microtubos (8

testes convencionais e 12 de
assimilação).
As reações durante o período de
incubação, se traduzem em
rinsagens espontâneas coloridas e
reveladas por adição de reativos.
Nos testes de assimilação as
bactérias crescem se forem
capazes de utilizar o substrato
correspondente.
Eficácia dos desinfetantes

•Concentração inibitória mínima(CIM)

A avaliação do espectro da ação do agente químico quanto a

resistência dos microrganismos é realizada através de diluições,
onde é determinada a menor concentração inibitória mínima.
 •Tempo de redução decimal (Valor D)

É o intervalo de tempo necessário para a redução de um ciclo

logarítmico de uma população microbiana quando em contato com
agentes desinfetante ou esterilizante.
 •RESULTADOS

Contagem total de heterotróficos (UFC/100mL)

9000
8000
7000
U F C /1 0 0 m L

6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 1 2 13
pontos de amostragem
Resultados
% de bactérias identificadas
Microrganismos N° colônias %de identificação

Pseudomonas aeruginosa 25 32.05

Pseudomonas picketti 18 23.08

Pseudomonas vesiculares 10 12.82

Pseudomonas diminuta 09 11.54

Flavobacterium aureum 05 6.42

Pseudomonas fluorescens 04 5.13

Acinetobacter lwoffi 02 2.56

Pseudomonas putida 02 2.56

Pseudomonas alcaligenes 01 1.28

Pseudomonas paucimobilis 01 1.28

Flavobacterium multivorum 01 1.28

Contagem Total 78 100.0

•Resultados
•Concentração inibitória mínima

Agente químico Pseudomonas E. Coli

aeruginosa ATCC 25922
identificada
(%)
0,5% acido cítrico 0,25 0,125

0,5% acido clorídrico 0,16 0,16

70% álcool 17,5 2,18
0,5% Bissulfito de sódio 0,078 0,03
0,4% Hidróxido de sódio 0,3 0,1
0,5% Hipoclorito de sódio 0,25 0,06
1% Minncare 0,50 0,06
(acido peracético+ H2O2)
Resultados
Valor D - Pseudomonas aeruginosa isolada e identificada
Agente químico Log N= R2 Valor D 6log10
Log N0-1/Dt (min)

0.5% acido cítrico 1.77-0.244 0.97 4 24

0.5%Acido clorídrico 2.32-0.1502 0.92 6 36

70% Álcool 1.71-0.103 0.95 9 54

0.5% Bissulfito de 2.02-0.1619 0.95 6 36

sódio

0.4% Hidróxido de 2.22-0.121 0.94 8 48

sódio
0.5% Hipoclorito de 1.50-0.1063 0.98 9 54
sódio

1% Minncare 1.27-0.1808 0.98 5 30

(acido peracético +
H2O2)
Resultados
Valor D Eschericihia coli ATCC 25922

Agente químico Log N= R2 Valor D 6log10

Log N0-1/Dt (min)

0,5%Acido cítrico 2,05-0,12 0,95 7 42

0,5% Acido clorídrico 1,50-0,24 0,98 4 24

70% Álcool 1,31-0,17 0,98 6 36

0,5% Bissulfito de sódio 1,77-0,20 0,97 5 30

0,4% Hidróxido de sódio 1,81-0,19 0,94 5 30

0,5% Hipoclorito de sódio 1,16-0,22 0,99 4 24

1%Minncare 1,11-0,24 0,90 4 24

(acido peracético+H2O2)
Discussão

♦Hipoclorito de sódio
♦Valor D
Hipoclorito de Sódio 0,5%

2,00 P.aeruginosa D=9min

Log (UFC/mL) 1,50 E.coli D=4min
1,00
0,50
0,00
0 2 4 6 8 10 12
tempo de contato (min)

♦ CIM
•P.aeruginosa = 0,25%
•E.coli = 0,06%
♦Minncare
♦Valor D
Minncare 1%

2,00
P.aeruginosa D=5min
Log (UFC/mL)

1,50
E.coli D=4min
1,00

0,50

0,00
0 1 2 3 4 5 6
tempo de contato (min)

♦ CIM
•P.aeruginosa = 0,50%
•E.coli = 0,06%
Conclusões
A Pseudomonas aeruginosa foi a bactéria com
maior % de identificação e maior resistência ao
cloro.
O Hipoclorito de sódio na concentração 0,5%/
60min, mostrou-se adequado para sanitização
dos reservatórios de água, linhas de distribuição e
pontos de uso.
O MinncareR na concentração de 1%/ 180 min,
mostrou-se adequado para sanitização das
membranas de osmose reversa e unidade de
deionização.
 As bactérias gram negativas não fermentadoras
de glicose, se mostraram adequadas para
monitoração da sanitização em sistemas de
tratamento de água.
Em águas tratadas a análise para P.aeruginosa e
faz necessária, pois sua presença é marcante e
também por sua capacidade de formar biofilme,
que causa interferência em processos
farmacêuticos e hospitalares.
O procedimento de higienização de tanques de
armazenamento da água do abastecimento
público e sistemas de tratamento de água devem
ser rigorosos, de forma a assegurar a ausência de
microrganismos patógenos e pirogênio