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Cuestionario:

1. Una suspensión aislada de E. coli da una absorbancia de 0.793 a 260 nm


1%

en una celda de 1 cm a pH 4,5. Si el E1cm es 197, calcular la concentración en


mg/mL.

A=e.l.c
0.7930 = 197 cm-1 . M-1 . 1cm . c
c = 0.00403 mg/mL

2. Calcule el coeficiente de extinción molar a 361 nm para la acuocobalamina


en tampón fosfato 0,1M a pH 7,0 a partir de los siguientes datos obtenidos en una
celda de 1 cm.

SOLUCIÓN CONC. x 10-5 M Io I

A 2,23 93,1 27,4

B 1,90 94,2 32,8


Nota.- Halle el coeficiente de extinción molar para cada solución y luego el
promedio de estos valores.

Solución A:
Io
Log  EM361 b c
I
93.1
Log  A EM361x1x2.3x10 -5 A EM361 = 2.3821x10 4 cm-1M-1
27.4

Solución B:
Io
Log  EM361 b c
I
94.2
Log B EM361x1x1.90x10 -5  B EM361 = 2.4115x10 4 cm-1M-1
32.8

Promedio:
EM361 = A EM361 B EM361
EM361 = 2.3821x10 4 cm-1M-1 + 2.4115x10 4 cm-1M-1
EM361 = 2.3968x10 4 cm-1M-1

3. En una determinación de glucosa se obtuvieron los siguientes resultados:

Glucosa (mg%) 50 75 100 125 150 175 200 250


Transmitacia 92,9 89,9 86,3 84,3 81,3 78,7 73,8 70,5

ABSORBANCIA 0,032 0,046 0,064 0,074 0,09 0,104 0,132 0‘,15

Hallar el factor de calibración promedio, y la concentración de dos muestras de


suero que resultaron con una transmitancia de 88,3 y 85,1.
Fc1 = 0.50 mg/ 0.032 = 15.625 mg
Fc2 = 0.70 mg/ 0.046 = 15.217 mg
Fc3 = 1.00 mg/ 0.064 = 15.625 mg
Fc4 = 1.25 mg/ 0.074 = 16.892 mg
Fc5 = 1.50 mg/ 0.090 = 16.667 mg
Fc6 = 1.75 mg/ 0.104 = 16.827 mg
Fc7 = 2.00 mg/ 0.132 = 15.152 mg
Fc8 = 2.50 mg/ 0.152 = 16.447 mg
FcPromedio = (Fc1 + .........+ Fc8 ) / 8 = 6.0565

Cálculo de la concentración:
Amp = 2 - T%
Amp1 = 0.054
Amp2 = 0.070
Cmp = Fc x Amp
Cmp1 = 16.0565 x 0.0540 = 0.8611 mg/mL
Cmp2 = 16.0565 x 0.0700 = 1.1239 mg/mL

4. Para evaluar un metabolito “X”, una muestra fue sometida a dilución tomando
una parte de ella con 4 partes de agua y luego fue comparada
espectrofotométricamente con un estándar de 10 mg/mL obteniéndose las
siguientes lecturas de absorbancias: blanco = 0,023, estándar 0,357, y muestra
0,677. Calcule la concentración de la muestra en mg%.

● Ablanco = 0.023
● AST = 0.357
● AM = 0.677
● [st] = 10 mg/mL
● [M] = 0.25 mg / mL
Ast corregido = Ast - Ablanco = 0.357 - 0.023 = 0.334
Amp corregido = Amp - Ablanco = 0.677 - 0.023 = 0.654
volumen = 0.2
Cmp = Cst x Amp /Ast = 10 mg/mL x (0.654/0.334) = 19.5808 mg/mL

5. ¿Qué es el factor de dilución? Explique mediante un ejemplo.

El factor de dilución es el número total de volúmenes al que se lleva


un volumen dado de muestra original, o parte alícuota. En otros
términos, el factor de dilución también corresponde a la división de
la concentración de la muestra original sobre la concentración de
la muestra diluida.

Ejemplo: Cuando un volumen de una solución A de concentración


0,1 M se diluye con un volumen de agua destilada, haciendo un
total de 2 volúmenes de solución diluida, se habla de una dilución
1:2 (también expresada como ½), y la concentración B teórica así
lograda es 0.05 M. Si la dilución buscada es 1:10, se tomaría un
volumen de la solución 0,1M y se añadirían 9 volúmenes de
disolvente, con lo que la concentración teórica lograda sería 0,01
M.

En las diluciones en serie es fácil usar factores de dilución muy


grandes como 1:1000 o 1:10.000, que se hacen mediante sucesivas
diluciones consecutivas de factor 1:10

6. ¿Qué es el factor de calibración? Explique mediante un ejemplo.


Es un término que relaciona la concentración de una sustancia con su
absorbancia.

Es un término que relaciona la concentración de una sustancia


con su absorbancia, dicho de otro modo relaciona la intensidad
de luz que absorbe una sustancia de concentración conocida.

7. Explique la preparación de la muestra problema (sangre) para la


determinación de creatinina.

En un tubo de prueba de 50 ml de capacidad colocar 2 ml de


sangre oxalatada (con anticoagulante). Adicionar 14 ml de agua
destilada, 2 ml tungstato 10%. Agitar el tubo después de cada
adición. Observar la precipitación de proteínas de la sangre por
formación de un precipitado marrón chocolate por formación de
metahemoglobina oxidada. Filtrar a través de papel de filtro rápido.
Desechar el precipitado y reservar al líquido filtrado como muestra
clarificada.

8. Diferencias entre una solución stock, solución estándar y solución trabajo.


Una solución stock es una solución concentrada que se diluye en
cierta inferior concentrada para el uso real. Las soluciones stock se
utilizan para ahorrar tiempo de preparación, la conservación de
materiales, reducir el espacio de almacenamiento, y de la que se
puede diluir en una concentración de trabajo.
La solución estándar o solución de trabajo es una solución que
contiene una concentración conocida de un elemento o sustancias
conocidas, y por ende sus propiedades como el pH también se
conocen. Se usan como punto de comparación, o referencia
cuando se va a hacer una estandarización o valoración de alguna
otra sustancia.

9. ¿Qué función bioquímica cumple la creatinina? Escriba su fórmula.

El mejor parámetro bioquímico sanguíneo de la función renal es la


creatinina. En principio, cuanto mayor es el descenso de la función
renal, tanto más elevado es el valor de la creatinina sérica.
La creatinina es el anhídrido de la creatina, la cual una vez que pasa
a sangre no vuelve a ser utilizada y se excreta de forma constante
por la orina.
La técnicas analíticas de determinación de la creatinina se resumen
en el método colorimétrico de Jaffé y en el método enzimático de
la creatininasa. (Díaz,1997)

Fórmula de la Creatinina:

10. ¿Qué papel cumplen los siguientes reactivos en la cuantificación de


creatinina?
● Tungstato de sodio
● Ácido sulfúrico
● Ácido pícrico
El tungstato de sodio junto con el ácido sulfúrico sirven para formar
ácido túngstico que funciona como agente desproteinizante que
ayudará a obtener la muestra clarificada. Mientras que el ácido
pícrico reacciona con la creatinina en medio alcalino formando
picrámico, siendo este el compuesto que absorba luz junto con el
picrato. Sin el ácido pícrico no podríamos saber la concentración
de creatinina.

11. El coeficiente de extinción molar de un complejo yodo - glucógeno a 450 nm


es 0,20. Calcule la concentración del glucógeno en una solución de complejo
en yodo que tiene una absorbancia de 0,36, medida en una cubeta de 3 cm.

E=0.2
C=?
A=0.36
L=3cm

A=cxlxE
0.36=cx(3cm)x(0.2M)
C=0.6