FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA

FUNDAMENTOS DE AYUA DIAGNÓSTICA I

ALUMNO(A):

LUIS ENRIQUE NOÉ CARRASCO MORETO

DOCENTE:

CARMEN LUISA ALBURQUEQUE ATOCHE

TEMA:

MEDIOS DE CULTIVO

PIURA- PERÚ

Martes, 02 de octubre del 2018.

 I. INTRODUCCIÓN

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el

crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie
que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente.
Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio
normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias
como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Existen medios cuya composición permite el crecimiento de:

1. Un gran número de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de

Sabouraud).
2. Determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son los
denominados medios selectivos.
3. Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas
fisiológicas o test bioquímicos (utilización de citratos, acidificación a partir de
azúcares, etc.).

Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:

1. Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgánicos

(hidratos de carbono, aminoácidos, vitaminas, etc) y nutrientes inorgánicos (P,
Fe, N, Mg, S, etc).
2. Alternativos: (NaCl), agente solidificante (agar-agar), tampones, indicador de
pH, etc.
Los medios de cultivo son de composición muy variada y de tres tipos diferentes en
cuanto a consistencia: medios sólidos, semisólidos y líquidos. Este último. Los
medios artificiales o sintéticos se pueden preparar a partir de sus componentes
individuales, se pueden adquirir comercialmente como medios deshidratados a los
que solamente hay que añadir la cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la
composición, la caducidad, y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar
e incluso como debe esterilizarse.

II. OBJETIVOS

1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el

desarrollo de los microorganismos in vitro.
2. Realizar un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos
mediante la siembra de muestras biológicas.

AGAR SABOURAUD

Sabouraud Glucose Agar es un medio de uso general para el cultivo que se utiliza para
el aislamiento y cultivo de todos los hongos. Las peptonas en Sabouraud Glucose Agar
son fuentes de factores de crecimiento nitrogenoso. La glucosa aporta una fuente de
energía para el crecimiento de microorganismos. La alta concentración de glucosa
presenta una ventaja para el crecimiento de hongos (estables osmóticamente),
mientras que la mayoría de las bacterias no toleran la alta concentración de azúcar.
Además, el bajo pH es óptimo para los hongos pero no para muchas bacterias.

AGAR SANGRE

Medio de cultivo altamente nutritivo, adecuado para el cultivo de una gran variedad
de microorganismos incluyendo aquellos de mayores exigencias para su desarrollo. Su
formulación permite la recuperación de la mayoría de los patógenos de importancia
clínica, obteniéndose características de desarrollo con valor predictivo. La adición de
sangre de cordero desfibrinada permite observar los distintos patrones de hemólisis y
a la vez aporta nutrientes específicos para los microorganismos más fastidiosos.

La infusión de músculo cardiaco y la peptona de carne aportan una gran variedad de

fuentes de nitrógeno,vitaminas y aminoácidos esenciales para el desarrollo
microbiano.
El cloruro de sodio contribuye al equilibrio osmótico del medio de cultivo. El agar actúa
como agente gelificante Agar Lowestein – Jansen Cultivo y diferenciación de
micobacterias, fundamentalmente Mycobacterium tuberculosis.

Los nutrientes de este medio de cultivo constituyen un rico soporte para el

crecimiento de una gran variedad de micobacterias excepto Mycobacteriumleprae. El
verde de malaquita inhibe el desarrollo de la flora acompañante Gram positiva y de
algunas bacterias Gram negativas. La glicerina estimula el crecimiento de
Mycobacterium tuberculosis, aunque gran parte de Mycobacterium bovis es inhibido.

III. MATERIAL Y MÉTODOS

1. Disolver los componentes del medio en agua destilada. En muchos casos se

parte de un preparado comercial con todos los componentes deshidratados.
Siguiendo las instrucciones del fabricante o del profesor, añadir la cantidad de
agua adecuada para conseguir la concentración deseada de los mismos. Si el
medio contiene un agente solidificante (agar-agar) hay que calentar el
preparado hasta la ebullición del mismo agitando de vez en cuando, para
asegurar una completa disolución del agar (medios sólidos y semisólidos);
para medios líquidos no es necesario calentar, únicamente se agita la mezcla
hasta la completa disolución de la misma.

2. Esterilizar la disolución.- Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para

evitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya
a utilizarse el medio, el procedimiento será diferente:

a) Medios sólidos en placa.- Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrir

con papel de aluminio.
Llevar a esterilizar al autoclave (121 0C) durante 15-20 minutos. Una vez
estéril repartir en placas de Petri estériles y dejar en reposo para que
solidifique.
 b) Medios líquidos.- Una vez disueltos los componentes repartir en tubos a
razón de unos 2-4 ml por tubo, tapar con tapón de aluminio y llevar a
esterilizar en autoclave.

3. A partir de la muestra de raspado de uñas realizar un examen microscópico

y además sembrar la muestra en Agar Sabouraud. Incubar a 37 0C por 7 –
14 dias.Observar la característica de crecimiento de la colonia.

IV. RESULTADOS
 V. PREGUNTAS DE APLICACIÓN

1. ¿Qué medios se pueden utilizar para aislamiento de hongos?

AGAR AGUA
Es un medio pobre en el cual el micelio crece en forma muy rala. Es especialmente
usado para hacer aislamientos de punta de hifa. De acuerdo a la consistencia que se
quiera dar al medio, se puede hacer con mayor o menor cantidad de agar.

PAPA DEXTROSA AGAR (PDA)

Es un medio muy usado que sirve para aislar todo tipo de hongos. Beauveria,
Paecilomyces, Lecanicillium (Verticillium) y Metarhizium, los más importantes hongos
parásitos de insectos, al igual que los parásitos de plantas y los hongos saprofitos
crecen muy bien y esporulan en este medio. Cuando se aíslan hongos a partir de
insectos colectados del suelo, es recomendable acidificar el medio con ácido láctico al
25%. Se agregan 3 ó 4 gotas sobre el agar solidificado de la placa con el objeto de
evitar el desarrollo de bacterias. Con los mismos ingredientes, excluyendo el agar, se
obtiene el medio líquido de Papa Dextrosa (PD), muy utilizado para la preparación del
inóculo en forma masiva.

FITOLEVADURA
Este medio se usa para aislar hongos a partir de animales. Los hongos aislados de
insectos crecen exuberantemente con micelio bien algodonoso y buena producción de
esporas.

MIEL PEPTONA AGAR

Este medio se recomienda porque tiene un pH que inhibe el desarrollo de algunas
bacterias. Se pueden utilizar antibióticos como Penicilina + Estreptomicina (30 – 50
ppm) que deben agregarse a los medios de cultivo después de ser esterilizados en
autoclave y enfriarlos a una temperatura menor a 60 o C.

2. ¿Cuál es el fundamento de agregar KOH en la observación microscópica de

muestras clínicas?
 Es el medio de montaje de las muestras clínicas más universalmente aceptado.
 El KOH disuelve rápidamente los elementos celulares, para observar los hongos
(protegidos por la pared celular).
 El efecto clarificador del KOH puede demorar desde 10 min hasta horas, en el caso
de las muestras de uñas, y puede reducirse calentando ligeramente la
preparación.
 Se suelen utilizar dos concentraciones, una más fuerte del 20-30% para uñas, y del
10% al 15% para el resto de muestras.

VI. DISCUSIÓN

Sabouraud Dextrose Agar es un medio de propósito general diseñado por Sabouraud

para el cultivo de dermatofitos. Un bajo pH (de 5,6 aproximadamente) favorece el
crecimiento de hongos, en especial los dermatofitos, con efecto ligeramente inhibidor
para las bacterias contaminantes en muestras clínicas. Mediante la clase se conoce
que los hongos tienen que estar a temperatura ambiente; también sabemos que su PH
es acido5,5- 6,5 y crecen de mayor cantidad de azucares y glúcidos lo cual el medio de
cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los
microorganismos y es efectivamente lo que se puso observar en la realización de la
práctica de cultivo.

VII. CONCLUSIONES

 Concluimos que el KOH es el método de elección directo para la identificación

de los hongos, sirve para el estudio de micosis de cualquier origen, según su
localización.
  Los hongos tiene un PH acido de 5,5 a 6,5; necesitan mayor cantidad de agua;
son a temperatura de ambiente.
 Concluimos que el medio de cultivo saboraud es efectivo en los cultivos de
hongos por lo que pudimos observar hifas.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Roberts GD. Detection of fungi in clinical specimens by phase-contrast

microscopy. J Clin Microbiol 1975; 2: 261- 265

 American Society for Microbiology; 2011.
 Introducción a la microbiología los hongos

https://books.google.com.pe/books?id=K_ETVnqnMZIC&pg=PA97&dq=medios+de+cul
tivo+en+hongos&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwiowrKO3ubdAhWG0VMKHXroBwwQ6AEIJzAA#v=onepage&q
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