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MARCO TEÓRICO

El primer paso en cualquier protocolo de separación es el rompimiento del material inicial, ya


sea de origen viral, bacteriano, vegetal o animal. El método utilizado para romper la célula
debe ser tan leve como sea posible con el fin de causar el menor daño posible al ADN. La lisis
celular se puede hacer por acción mecánica, pulverizando el tejido con hielo seco o nitrógeno
líquido, también se puede utilizar la degradación enzimática de la pared celular (si está
presente) y lisis con detergentes de las membranas celulares. Seguido al rompimiento celular
la mayoría de métodos involucran una desproteinización, lo cual se lleva a cabo con un
solvente orgánico, seguido de una precipitación con isopropanol o etanol y posterior
solubilización con agua o tampón. Existen diferentes técnicas para la extracción del ADN,
aunque todas conservan el uso de los mismos principios y fundamentos.
Para obtener ADN a partir de leucocitos totales (obtenidos de sangre periférica), células en
cultivo, tejidos animales, vegetales, levaduras y bacterias; se usa generalmente una técnica de
cuatro pasos secuenciales:
• El primer paso consiste en la lisis de las células y los núcleos.
• Luego, la separación del ADN a partir de sangre total involucra la lisis de eritrocitos, seguida
por una lisis de leucocitos y de sus núcleos.
• Las proteínas celulares son entonces removidas por un paso de precipitación salina, y
• Finalmente el ADN genómico es concentrado por precipitación con isopropanol.
El ADN purificado por medio de este proceso, está listo para ser utilizado en diferentes
aplicaciones, las cuales involucran: amplificaciones (PCR), digestión con endonucleasas de
restricción, Southern blot y Dot blot. Existen otras técnicas que permiten la obtención de ADN
genómico a partir de muestras sólidas y líquidas, que permiten la separación simple, rápida,
segura y eficiente del ADN. Esta separación se basa en la utilización del isotiocianato de
guanidina, como solución de lisis celular, lo cual permite una precipitación selectiva del ADN
con etanol y solubilización en agua o en 8 mM de NaOH. Este procedimiento se puede realizar
en 30 minutos, recobrando un 70% a un 100% del ADN.
Diferentes métodos y tecnologías están disponibles en el mercado para realizar el aislamiento
de ADN genómico. En términos generales la separación del ADN de los componentes celulares
puede ser dividida en cuatro etapas:
a. Obtención de la muestra
b. Disrupción o alteración de la membrana
c. Lisis
d. Remoción de proteínas y contaminantes
e. Recuperación del ADN

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