ANTIBIOGRAMA

INTRODUCCION

¿Qué es un antibiograma?
El antibiograma es el estudio "in vitro" de la sensibilidad de las bacterias a los agentes
antimicrobianos, para su posterior utilización clínica.

¿Cuándo debe realizarse un antibiograma?:

Cuando de una muestra biológica relacionada con un proceso infeccioso se aísle perfectamente un
microorganismo considerado responsable de dicho proceso.
No obstante existen microorganismos que muestran un patrón de susceptibilidad muy constante, por
lo que en ellos no sería necesario el ensayo de un amplio grupo de antimicrobianos.

¿Qué es necesario conocer antes de realizar el antibiograma?:

1. Identificación correcta de la bacteria o, al menos, sus características morfológicas y tintoriales
con la tinción de Gram.
2. Procedencia de la muestra.
3. Edad y sexo del paciente.

¿En qué se basa la realización del antibiograma?:

En la disminución o inhibición del crecimiento de un microorganismo en un medio de cultivo en
presencia de cantidades conocidas de antimicrobianos.
Se efectúa enfrentando una suspensión bacteriana estandarizada con diferentes concentraciones del
antibiótico, comprobando donde tiene lugar la inhibición del crecimiento bacteriano.

Sensibilidad bacteriana a los antibióticos

La determinación de la Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la base de la medida de la

sensibìlidad de una bacteria a un determinado antibiótico. La CIM se define como la menor
concentración de una gama de diluciones de antibiótico que provoca una inhibición de cualquier
crecimiento bacteriano visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una
escala de actividad del antibiótico frente a diferentes especies bacterianas.

Hay diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina, y de manera
semicuantitativa, las CIM (métodos manuales y métodos automatizados o semiautomatizados).
Estos diferentes métodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en función de su
sensibilidad frente al antibiótico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia (I) o
Resistente (R) al antibiótìco.

Para un determinado antibiótico, una cepa bacteriana es, según la NCCLS:

Sensible, si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un

tratamiento a la dosìs habitual.

Resistente, si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida. No es de

esperar ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo de tratamiento.
 Intermedia, cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede conseguir efecto
terapéutico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la
posología).

OBJETIVOS

Determinar la sensibilidad de los microorganismos a los diferentes antibióticos

según su clasificación (gram positivos/ negativos), para brindar un tratamiento
efectivo.
Conocer y aprender el procedimiento mediante la técnica de difusión, a través de su
correlación con los halos de inhibición.

MÉTODO EMPLEADO:

TÉCNICA DE DIFUSIÓN DISCO PLACA (TÉCNICA DE KIRBY & BAUER )

Es el procedimiento más sencillo y generalizado. Es cómodo, barato, rápido y reproductible.
Proporciona indirectamente las C.M.I. a través de una correlación con los halos de inhibición
producidos. Es el método recomendado por el N.C.C.L.S. (National Commitee for Clinical
Laboratory Standarisation)

El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar y sobre su superficie se

disponen los discos correspondientes a varios antibióticos. Se incuban las placas durante 16-24
horas a 35ºC y al cabo de este tiempo se estudia el crecimiento en ellas. Se valora el diámetro de la
zona de inhibición que se forma alrededor de cada disco y se compara con las referencias oportunas
publicadas por el NCCLS. Con esta referencia podemos informar si el microorganismo es Sensible,
Intermedio o Resistente (S, I, R) a cada uno de los antibióticos ensayados en las placas.

RESULTADOS

ANTIBIOGRAMA REALIZADO POR EL MÉTODO DE DIFUSIÓN EN AGAR

En esta fotografía se muestra un ejemplo de antibiograma realizado por el método de difusión en

agar por medio de discos.

En la imagen de la izquierda se muestra una vista general de una placa con crecimiento bacteriano y
con seis discos de antibióticos. La zona de color claro que ocupa la mayor parte de la placa es el
crecimiento bacteriano en las zonas no inhibidas. Los círculos negros que rodean a cinco de los seis
discos marcan las zonas en que los respectivos antibióticos han inhibido, con mayor o menor
eficacia, el crecimiento del microorganismo a estudio. El sexto disco (AM-10) no tiene a su
alrededor halo de inhibición lo que indica la resistencia del microorganismo a ese antibiótico.
ESCHERICHIA COLI

CEPA 1 2 3
Ampicilina RRR
Cefradina SRR
Cefotaxima SSR
Gentamicina SRR
Amikacina SSS
Ciprofloxacina SSR
Cotrimoxazol SRR
Nitrofurantoina SSS
Amoxi-Clavul SSR

DISCUSIÓN

Los halos que se forman nos indican el grado de inhibición del crecimiento bacteriano, por ejemplo
la . E. coli es sensible a CTX, AMK y no es sensible a Ampicilina; es por esa razón que alrededor
de la placa de AMP no se observa ninguna reacción es decir es RESISTENTE; y alrededor de la
placa de CTX y AMK se observan halos de más o menos 3mm es decir son sensibles a esos
medicamentos.

CONCLUSIÓN
El antibiograma se realiza de acuerdo a la edad, sexo e identificación correcta del
microorganismo gram (+/-).
De acuerdo al tipo de microorganismo se elegirán los antibióticos adecuados.
El antibiograma es muy importante porque nos ayuda a determinar el uso del antibiótico
ideal para combatir el microorganismo que está ocasionando la patología.

UROCULTIVO

El urocultivo Es el cultivo de orina para diagnosticar infección sintomática del tracto urinario o
infección asintomática (bacteriuria asintomática) en pacientes con riesgo de infección.

Está basada en la presencia de un número significativo de bacterias (generalmente +100.000

bacterias ml.)

La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para el diagnóstico de infección del
tracto urinario, ya que prácticamente está presente en todas las infecciones urinarias. Una excepción
es la bacteriuria asintomática en la que la piuria puede estar ausente.

RECOGIDA DE MUESTRAS

Para la recogida, transporte y manipulación de muestras podrán tenerse en cuenta los protocolos
establecidos por la SEIMC.
La correcta recogida y conservación de la orina para urocultivos es fundamental para que puedan
obtenerse resultados fiables.

Los puntos clave son:

§ Mujeres: Obtención de la orina después de separar los labios vaginales de manera que el chorro de
orina no toque genitales externos.

§ Hombres: Retracción del prepucio de manera que el chorro de orina salga directamente.

AGENTES ETIOLÓGICOS A INVESTIGAR RUTINARIAMENTE

 Escherichia coli
 Klebsiella spp.
 Enterobacter spp.
 Serratia spp. Enterococus spp.
 Proteus spp
OBJETIVOS:

 Conocer las aplicaciones del urocultivo.

 Adquirir conocimientos sobre la siembra en urocultivo.
 Identificar la bacterias que crecen en el urocultivo.
 Conocer las enfermedades que diagnostica el urocultivo.

Materiales:
- Muestra de orina.
- Asa bacteriológica (4mm. De diámetro)
- Placas de agar (Agar sangre o Agar cled)
- Estufa bacteriológica.
- Mechero.
- Papel destraza.

PROCEDIMIENTO
Procedimiento:
1°Recolectar una muestra de orina.
2°Tomar una gota de orina con el asa (antes de tomar la gota calentar el asa en el mechero)
3°En una placa de agar con medio de cultivo, sembrar por estría masiva.
4°Rotular la placa de agar y dejar incubar entre 24 y 48 horas.
 Urocultivo

El urocultivo es el cultivo de orina para diagnosticar infección sintomática del tracto

urinario o infección asintomática (bacteriuria asintomática) en pacientes con riesgo de
infección.

Está basada en la presencia de un número significativo de bacterias (generalmente

+100.000 bacterias ml.)

La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para el diagnóstico de

infección del tracto urinario, ya que prácticamente está presente en todas las infecciones
urinarias. Una excepción es la bacteriuria asintomática en la que la piuria puede estar
ausente.

AGENTES ETIOLÓGICOS A INVESTIGAR RUTINARIAMENTE

- Escherichia coli

- Klebsiella spp.

- Enterobacter spp.

- Serratia spp.

- Enterococus spp.

- Proteus spp.

- Pseudomonas spp.

- Acinetobacter spp.

- Cándida spp.

- Staphylococus spp.

- Estreptococo grupo B (imprescindible en embarazadas)

RECOGIDA DE MUESTRAS

Para la recogida, transporte y manipulación de muestras podrán tenerse en cuenta los

protocolos establecidos por la SEIMC.

La correcta recogida y conservación de la orina para urocultivos es fundamental para

que puedan obtenerse resultados fiables.

Los puntos clave son:

§ Mujeres: Obtención de la orina después de separar los labios vaginales de manera que
el chorro de orina no toque genitales externos.

§ Hombres: Retracción del prepucio de manera que el chorro de orina salga

directamente.

CULTIVO

Debe permitir el aislamiento y el recuento cuantitativo desde 1.000 Unidades

Formadoras de Colonias (UFC)/ml. de los uropatógenos más comunes:

Se sembrará cuantitativamente, generalmente con asa calibrada de 0.01 LANDAS en

Agar cromogénico de orina Incubar a 35-37° C en aerobiosis durante 24-48 horas.

Interpretación en placa 1 colonia = 100 UFC/ml

Lectura de cultivo en UFC/ml.:

CULTIVO NEGATIVO

Menos de 1.000 UFC, se informará:

“menos de 1.000 UFC”.

UN SOLO PATOGENO

Con recuento >1.000 UFC/ml se informará:

Se considera cultivo POSITIVO en los siguientes casos:

- Siempre que el recuento sea mayor de 100.000 UFC/ml

- Hombres con recuento superior a 10.000 UFC/ml

- Mujeres con clínica florida de cistitis aguda y recuento superior a 1.000 UFC/ml

Se informa identificación y antibiograma.

DOS PATOGENOS

Con recuento entre 1.000 UFC/ml y 100.000 UFC/ml se informará:

POSIBLE CONTAMINACIÓN

Se le informa microorganismos, número de colonias y solicitar nueva muestra.

Con recuento es superior a 100.000 UFC/ml se informará:

CULTIVO POSITIVO

Con identificación y antibiograma.

TRES PATÓGENOS

Con recuento >1.000 UFC/ml se informará:

POSIBLE CONTAMINACIÓN

Se le informa microorganismos, número de colonias y solicitar nueva muestra.

SITUACIONES ESPECIALES

1. En embarazadas adicionar medio de Granada

se incubará en anaerobiosis (o bajo un cubre)

Estreptococo grupo B en embarazadas, se informará en cualquier cantidad.

2. Orinas obtenidas por técnica invasiva (punción suprapúbica o por citoscopia):

Sembrar siempre con asa calibrada o con pipeta estéril al menos 10 ml. Incluyendo una
placa de agar sangre. Reincubar hasta 48 horas y tomar como significativo cualquier
crecimiento a partir de 100 UFC /ml. La orina de punción suprapúbica es la muestra
adecuada para investigación de Anaerobios o de mycoplasmas genitales. Si se considera
procedente o se solicita por el clínico en una muestra adecuada estas muestras se
trabajarán para detección de estos microorganismos y se informará el resultado.

3. En orinas obtenidas y conservadas con garantía de que se ha evitado la contaminación

y en enfermos sintomáticos en que urocultivos previos no hayan ofrecido un número
significativo de colonias se podrían estudiar microorganismos más exigentes y
recuentos más bajos. Por ejemplo sembrando más cantidad de muestras (0,1 ml.) en agar
sangre e incubando las placas 48 ó 72 horas.

4. Solicitud por el clínico de investigación de otros microorganismos. Si la muestra es

correcta y la petición esta motivada se debe efectuar el procedimiento de trabajo
adecuado a la solicitud.

5 Para el cultivo de Micobacterias se tendrá en cuenta lo establecido en el protocolo de

la SEIMC de diagnóstico de Micobacterias.

NO SE CULTIVARAN NUNCA por no ser muestras adecuadas:

• Catéteres de Foley.

• Orina de micción o de catéter para anaerobios.

• Orinas de más de 2 horas de su recogida sin conservación adecuada.

En caso de que no exista posibilidad de recibir las muestras de orina en el laboratorio

con menos de dos horas desde el momento de la recogida y no se puedan refrigerar las
muestras, se podrá optar entre uno de los siguientes procedimientos.

a) Enviar la muestra con un conservante.

b) Enviar la muestra ya sembrada por el sistema de laminocultivo o similar.

En este último caso sería recomendable que el personal del centro de salud en el
momento de la siembra introdujese una tira para detección de leucocitos/nitritos en la
orina y anotase los datos correspondientes a los leucocitos en el vale de solicitud del
cultivo.

Método de despistaje automatizado. Los métodos automatizados de despistaje de

infecciones urinarias tiene un excelente valor predictivo negativo por lo que si el
número de muestras es elevado podrá ser un método alternativo a los métodos
convencionales.

UROCULTIVO

El urocultivo es el cultivo de orina para diagnosticar infección sintomática del

tracto urinario o infección asintomática (bacteriuria asintomática) en pacientes
con riesgo de infección.
Está basada en la presencia de un número significativo d
e bacterias
(generalmente
>
100.000 bacterias
/
ml.)
La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para el diagnóstico
de infección del tracto urinario, ya que prácticamente está presente en todas las
infecciones urinarias. Una excepción es
la bacteriuria asintomática en la que la
piuria puede estar ausente.
AGENTES ETIOLÓGICOS A INVESTIGAR RUTINARIAMENTE
-
Escherichia coli
-
Klebsiella
spp.
-
Enterobacter
spp.
-
Serratia
spp.
-
Enterococus
spp.
-
Proteus
spp.
-
Pseudomonas
spp.
-
Acinetobacter
spp.
-
C
an
dida
spp.
-
Staphylococus
spp.
-
Estreptococo grupo B (imprescindible en embarazadas)
RECOGIDA DE MUESTRAS
Para la recogida, transporte y manipulación de muestras podrán tenerse en
cuenta los protocolos establecidos por la SE
IMC.
La correcta recogida y conservación de la orina para urocultivos es fundamental
para que puedan obtenerse resultados fiables.
Los puntos clave son:
-Mujeres: Obtención de la orina después de separar los labios vaginales de
manera que el chorro de orina no toque genitales externos.
-Hombres: Retracción del prepucio de manera que el chorro de orina salga
directamente.
EXAMEN MICROSCÓPICO (recomendado)
El procedimiento elegido debe permitir:
2
-Recuento de leucocitos al menos semicuantitativo
-
Detección de células epiteliales (CE): su presencia indica muy probablemente
contaminación de la muestra por contacto con genitales externos. Ante un
resultado (urocultivo) positivo si se observa presencia de células epiteliales debe
pedirse nueva mues
tra para confirmar.
CULTIVO
Debe permitir el aislamiento y el recuento cuantitativo desde 1.000 ó 10.000
Unidades Formadoras de Colonias (UFC)/ml. de los uropatógenos más
comunes:
Se sembrará cuantitativamente, generalmente con asa calibrada de 1 ó 1
0 ml. en uno de los siguientes medios en placa:
-Cled
-Agar cromogénico de orina o
-Agar sangre + agar MacConkey (Levine)
Incubar a 35
-37° C en aerobiosis durante 24
-48 horas.
Lectura de cultivo en UFC/ml:
-Menos de 1.000 ó 10.000 UFC, se informará:
“Menosde 1.000 ó 10.000 UFC/ml”
.
-De 10.000 a 100.000 UFC.
-Un patógeno sin células epiteliales: informar microorganismo, número de
colonias, antibiograma y valorar clínicamente.
-Dos patógenos: informar microorganismos, número de colonias y solicitar nueva muestra.
-Más de dos patógenos: informar “Cultivo mixto, probable contaminación”

->100.000 ó más UFC: Uno o dos patógenos: informar identificación más antibiograma
Más de dos especies: informar
“cultivo mixto, probable contaminación”
.
SITUACIONES ESPECIALES
1. En embarazadas adicionar (sembrando con escobillón) medio de Granada o
Agar sangre nalidíxico. El primero se incubará en anaerobiosis (o bajo un cubre)
y el segundo en 5
-
7% CO2. Estreptococo grupo B en embarazadas, se
informará
en cualquier cantidad.
3
2. Orinas obtenidas por técnica invasiva (punción suprapúbica o por citoscopia):
Sembrar siempre con asa calibrada o con pipeta estéril al menos 10 ml.
Incluyendo una placa de agar sangre. Reincubar hasta 48 horas y tomar como
sign
ificativo cualquier crecimiento a partir de 100 UFC /ml. La orina de punción
suprapúbica es la muestra adecuada para investigación de Anaerobios o de
mycoplasmas genitales. Si se considera procedente o se solicita por el clínico en
una muestra adecuada est
as muestras se trabajarán para detección de estos
microorganismos y se informará el resultado.
3. En orinas obtenidas y conservadas con garantía de que se ha evitado la
contaminación y en enfermos sintomáticos en que urocultivos previos no hayan
ofrecido
un número significativo de colonias se podrían estudiar
microorganismos más exigentes y recuentos más bajos. Por ejemplo sembrando
más cantidad de muestras (0,1 ml.) en agar sangre e incubando las placas 48 ó
72 horas.
4. Solicitud por el clínico de inv
estigación de otros microorganismos. Si la
muestra es correcta y la petición esta motivada se debe efectuar el
procedimiento de trabajo adecuado a la solicitud.
5 Para el cultivo de se tendrá en cuenta lo establecido en el protocolo de la
SEIMC de diagnó
stico de Micobacterias.
NO SE CULTIVARÁ
N NUNCA
por no ser muestras adecuadas:
-
Catéteres de Foley.
-
Orina de micción o de catéter para anaerobios.
-
Orinas de más de 2 horas de su recogida sin conservación adecuada.
En caso de que no exista po
sibilidad de recibir las muestras de orina en el
laboratorio con menos de dos horas desde el momento de la recogida y no se
puedan refrigerar las muestras, se podrá optar entre uno de los siguientes
procedimientos
:
a) Enviar la muestra con un conservante
.
b) Enviar la muestra ya sembrada por el sistema de laminocultivo o similar.
En este último caso sería recomendable que el personal del centro de salud en
el momento de la siembra introdujese una tira para detección de
leucocitos/nitritos en la orina
y anotase los datos correspondientes a los
leucocitos en el vale de solicitud del cultivo.