AOAC Official Method 967.

21 Ascorbic Acid in Vitamin Preparations and

Juices 2,6-Dichloroindophenol Titrimetric Method First Action 1967 Final
Action 1968

(Aplicable a la determinación de ácido ascórbico reducido. No aplicable a jugos

altamente coloreados o en presencia de Fe ferroso, estannoso Sn, Cu cuproso,
SO2, sulfito o tiosulfato. Ver nota.)

PRINCIPIO
El ácido ascórbico reduce el colorante indicador de oxidación-reducción, 2,6-
dicloroindophenol, a una solución incolora. En el punto final, el exceso de
colorante no reducido es rosa rosa en solución ácida. Se extrae la vitamina y se
realiza la titulación en presencia de solución HPO3-CH3COOH o HPO3-
CH3COOH-H2SO4 para mantener la acidez adecuada para la reacción y para
evitar la autooxidación del ácido ascórbico a pH alto.

REACTIVOS

a) Soluciones de extracción .-

(1) Ácido metafosfórico-ácido acético solución.-Disolver, con agitación, 15 g

de gránulos de HPO3 o HPO3 en rama recién pulverizada en 40 ml de
CH3COOH y 200 ml de H2O; diluir a aproximadamente 500 ml, y filtrar
rápidamente a través de papel acanalado en una botella con tapón de
vidrio. (HPO3 cambia lentamente a H3PO4, pero si se almacena en
refrigerador, la solución permanece satisfactoria 7-10 días.)

(2) Solución de ácido metafosfórico-ácido acético-ácido sulfúrico. Proceda

como en (1), excepto use 0.3N H2SO4 en lugar de H2O

b) Solución estándar de ácido ascórbico.-1 mg / ml. Pese con precisión 50 mg

de estándar de referencia de ácido ascórbico USP que se haya almacenado
en un desecador alejado de la luz solar directa. Transfiera a un matraz
volumétrico de 50 ml. Diluir al volumen inmediatamente antes del uso con la
solución HPO3-CH3COOH, (a) (1).
 c) Solución estándar de Indophenol. Disuelva 50 mg de 2,6-dicloroindophenol.
Sal de Na (Eastman Kodak Co. n. ° 3463), que se ha almacenado en un
desecador sobre cal sodada, en 50 ml de H2O a los que se han añadido 42
mg de NaHCO3; agitar vigorosamente, y cuando el tinte se disuelva, diluir a
200 ml con H2O. Filtrar a través de papel estriado en una botella de vidrio
con tapón de vidrio. Mantenga el tapón, alejado de la luz solar directa, y
guárdelo en el refrigerador. (Productos de descomposición que hacen que
el punto final sea indistinto en algunos lotes de indofenol seco y que
también se desarrollen con el tiempo en solución madre) Agregue 5.0 ml de
solución de extracción que contenga ácido ascórbico en exceso a 15 ml de
reactivo de colorante Si la solución reducida no es prácticamente incolora,
deséchela y prepare una nueva solución madre. Si el tinte seco es
defectuoso, obtenga una nueva fuente).

Transfiera tres alícuotas de 2,0 ml de solución estándar de ácido ascórbico a cada

uno de tres Erlenmeyers de 50 ml que contengan 5,0 ml de solución de HPO3-
CH3COOH, (a) (1). Valorar rápidamente con una solución de indofenol de 50 ml
de bureta hasta que la luz, pero rosa rosa claro, persista ≥5 s. (Cada valoración
debe requerir aproximadamente 15 ml de solución de indofenol, y las valoraciones
deben controlarse en 0,1 ml). De forma similar, valore 3 espacios en blanco
compuestos de 7,0 ml de solución de HPO3-CH3COOH, (a) (1), más volumen de
H2O ca igual a la solución de volumen de indofenol utilizada en titulaciones
directas. Después de restar espacios en blanco promedio (usualmente alrededor
de 0.1 mL) de las valoraciones de estandarización, calcular y expresar la
concentración de solución de indofenol en mg de ácido ascórbico equivalente a
1.0 mL de reactivo. Estandarizar la solución de indofenol a diario con solución
estándar de ácido ascórbico recién preparada.

d) Indicador de pH azul del timol. -0,04%. Disuelva 0,1 g de indicador

triturando en mortero de ágata con 10,75 ml de NaOH 0,02 N y diluya a 250
ml con H2O. Rango de transición: 1.2 (rojo) -2.8 (amarillo).

PRUEBA PRELIMINAR PARA CANTIDADES APRECIABLES DE SUSTANCIAS

BÁSICAS.

Muela la muestra representativa o exprese el contenido de la cápsula y añada

aproximadamente 25 ml de solución de HPO3-CH3COOH, (a) (1). Pruebe el pH
colocando el indicador de pH azul de timol en una mano o usando una placa de
puntos. (pH > 1.2 indica cantidades apreciables de sustancias básicas.) Para
preparaciones líquidas, diluya la muestra representativa dos veces con solución de
HPO3-CH3COOH, (a) (1), antes de realizar la prueba con el indicador.
PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DEL ENSAYO DE MUESTRA

A. Para materiales secos que no contienen una cantidad apreciable de

sustancias. Pulverizar la muestra mediante un molido suave, agregar la
solución de HPO3-CH3COOH, (a) (1) y triturar hasta que la muestra esté en
suspensión. Diluir con la solución de HPO3-CH3COOH, (a) (1), al volumen
medido. Designe este volumen como V ml. (Use aproximadamente 10 ml de
solución de extracción / g de muestra seca. La solución final debe contener
10-100 mg de ácido ascórbico / 100 ml).

B. Para materiales secos que contienen cantidades apreciables de sustancias

básicas.-Pulverizar la muestra mediante molienda suave, agregar solución
de HPO3-CH3COOH-H2SO4, (a) (2), para ajustar el pH a
aproximadamente 1.2 y triturar hasta que la muestra esté en suspensión.
Diluir con la solución de HPO3-CH3COOH, (a) (1), al volumen medido.
Designe este volumen como V ml. (Use aprox. 10 ml de solución de
extracción / g de muestra seca. Solución final debe contener 10-100 mg de
ácido ascórbico / 100 ml.)

C. Para materiales líquidos.-Tomar la cantidad de muestra que contiene

aproximadamente 100 mg de ácido ascórbico. Si hay cantidades
apreciables de sustancias básicas, ajuste el pH a aproximadamente 1.2 con
la solución HPO3 CH3COOH-H2SO4, (a) (2). Diluya con solución de HPO3-
CH3COOH, (a) (1), hasta un volumen medido que contenga 10-100 mg de
ácido ascórbico / 100 ml. Designe este volumen como V ml.

Para jugos de frutas y vegetales. Mezcle completamente agitando para asegurar

una muestra uniforme y filtre a través de algodón absorbente o papel rápido.
Prepare jugos frescos presionando la fruta bien despulpada y
filtración. Exprima el jugo de cítricos por dispositivo comercial y filtro. Agregue
alícuotas de ≥100 ml de jugo preparado a volúmenes iguales de solución de
HPO3-CH3COOH, (a) (1). Designe el volumen total como V mL.
Mezcle y filtre a través de papel doblado rápido (Eaton-Dikeman No. 195,18.5 cm,
o equivalente).

DETERMINACIÓN
Valorar 3 alícuotas de muestra que contengan aproximadamente 2 mg de ácido
ascórbico y realizar determinaciones en blanco para la corrección de titulaciones
como en 967.21B (c), utilizando volúmenes adecuados de solución de HPO3-
CH3COOH, (a) (1) y H2O. Si hay 2 mg de ácido ascórbico en la muestra alícuota
<7 ml, agregue la solución de HPO3-CH3COOH para obtener 7 ml para la
titulación.

mg de ácido ascórbico / g, tableta, mL, etc. = (X - B) × (F / E) × (V / Y)

donde X = ml promedio para la titulación de la muestra, B = ml promedio para la

titulación de muestra en blanco, F = mg de ácido ascórbico equivalente a 1,0 ml de
solución estándar de indofenol, E = número de g, tabletas, ml, etc. analizados, V =
ensayo inicial del volumen solución, e Y = volumen de muestra alícuota titulada.

Nota: Productos que contienen Fe ferroso, Sn estannoso y Cu cuproso dar valores

en exceso de su contenido real de ácido ascórbico por este método. Las
siguientes son pruebas simples para determinar si estos iones reductores están
presentes en tales cantidades como para invalidar la prueba: Agregue 2 gotas de
solución acuosa al 0,05% de azul de metileno a 10 ml de mezcla recién preparada
(1 + 1) de solución de muestra y HPO3-CH3COOH y mezcle . La desaparición del
color azul de metileno en 5-10 indica la presencia de sustancias interferentes.
Stannous Sn no realiza esta prueba y puede analizarse de la siguiente manera: a
otra solución de muestra de 10 ml a la que se le han agregado 10 ml de HCl (1 +
3), agregue 5 gotas de una solución acuosa de índigo carmín al 0,05% y mezcle.
La desaparición del color en 5-10 s indica presencia de Sn estannoso u otra
sustancia interferente.