CULTIVO IN VITRO DE TEJIDOS VEGETALES

IN VITRO CULTURE OF PLANT TISSUES

SONALY COYLA BARREDA, SANDRA CHURA TAPIA.

Facultad de ciencias biológicas , Universidad nacional del altiplano, Puno , Perú

Summary

The in vitro cultivation of plants is based on the isolation of organs, tissues or plant cells
and the adjustment of the conditions necessary to obtain physiological or morphogenic
responses from these explants. In vitro cell and tissue culture (CCTV) involves different
techniques from different plant material such as chloroplasts, cells, tissues, organs and
even whole plants. The ability of a cell to generate an individual completely identical to
the mother cell, which has the same genetic information and the same function.
Contrary to these effects, its usefulness in the improvement of crops through the
creation of new variants The crop is incubated under conditions of controlled light,
temperature and humidity, which together with the physicochemical and nutritional lead
the development of the explant towards the formation of an amorphous cell mass called
callus, or towards differentiation into an organized tissue that will produce organs or
embryos. The calluses obtained by this procedure can be subcultured for their
maintenance and propagation or induce their differentiation to form organs
(organogenesis), embryos (embryogenesis) or pass to a liquid culture medium to obtain
cells and small aggregates in suspension.

Keywords:

Resumen

El cultivo in vitro de vegetales se basa en el aislamiento de órganos, tejidos o células

vegetales y en el ajuste de las condiciones necesarias para la obtención de respuestas
fisiológicas o morfogénicas a partir de estos explantes . El cultivo de células y tejidos
in vitro (CCTV) involucra diferentes técnicas a partir de diferente material vegetal tales
como cloroplastos, células, tejidos, órganos e incluso plantas completas.la capacidad
de una célula de generar un individuo completamente idéntico a la célula madre, la
cual tiene la misma información genética y la misma función .Contrariamente a estos
efectos, su utilidad en la mejora de los cultivos mediante la creación de nuevas
variantes El cultivo se incuba bajo condiciones de luz, temperatura y humedad
controladas, que junto con las fisicoquímicas y nutricionales conducen el desarrollo del
explante hacia la formación de una masa celular amorfa denominada callo, o hacia la
diferenciación en un tejido organizado que producirá órganos o embriones. Los callos
obtenidos mediante este procedimiento pueden subcultivarse para su mantenimiento
y propagación o inducir su diferenciación para formar órganos (organogénesis),
embriones (embriogénesis) o pasarse a un medio de cultivo líquido para obtener
células y pequeños agregados en suspensión

Palabras Clave: in vitro , tejidos, cultivo,semillas, explante

INTRODUCCION

La expresión cultivo in vitro de plantas, significa cultivar plantas dentro de un

frasco de vidrio en un ambiente artificial. Esta forma de cultivar las plantas tiene
dos características fundamentales: la asepsia (ausencia de gérmenes, etc), y el
control de los factores que afectan el crecimiento. El avance alcanzado por las
ciencias biológicas ha permitido en los últimos años el estudio detallado de las
plantas tanto a nivel celular como molecular, y en condiciones de laboratorio es
posible actualmente reproducir todos los factores que puedan incidir en el
crecimiento y desarrollo de las plantas. Este principio general se aplica también
al cultivo in vitro de plantas. Haberlandt, un científico alemán, postuló a
principios del siglo pasado que las plantas eran capaces de reproducir su
crecimiento a partir de células aisladas, originando la hipótesis de la totipotencia
celular en plantas. Sin embargo, este investigador no pudo demostrar en forma
práctica su hipótesis, debido a que la mayoría de los componentes complejos
que integran los medios de cultivo actuales todavía no habían sido
descubiertos. Sería recién en la década del ´50 cuando se determina la
importancia del balance hormonal en las plantas, con el descubrimiento de las
hormonas vegetales más usadas en la actualidad.

Reproducir en condiciones de laboratorio todos los factores que conforman el

ambiente de la planta en la naturaleza es técnicamente muy complejo. Por esa
razón se realiza una simplificación de la realidad escogiendo aquellos factores
que se puedan mantener controlados. Cuando no se realiza el estudio con todo
el ser vivo sino con solamente una parte del mismo, se utiliza el término
explante para indicar la parte del órgano o tejido vegetal que se cultiva in vitro.
A la dificultad de reproducir las condiciones naturales en condiciones de
laboratorio, se debe añadir en este caso la dificultad de suministrar al explante
todo aquello que antes obtenía del sistema completo. En resumen, el cultivo in
vitro de plantas es una técnica que exige un control específico del ambiente,
tanto físico como químico, en el que se sitúa al explante. Conviene, por tanto,
conocer cuáles son los principales factores que conforman dicho y que deberán
ser controlados.
MATERIAL Y METODOS

Material vegetal y condiciones de cultivo. El material utilizado fueron frascos de

Gerber que esterilizamos poniéndolos en una olla a presión cubiertos de papel
aluminio y papel craf encima y asegurados con una liga (figura 1) los dejamos
en la olla a presión durante 10 minutos, después que la olla empezara a sonar,
pasado este tiempo los sacamos y dejamos que enfríen por unos 5
minutos(figura 2) pasado este tiempo pusimos una mezcla de agar con macro
y micro (figura 3) nutrientes en las los frascos Gerber y esperamos a que estos
gelifiquen.

Como fuente inicial fueron las semillas que utilizamos que fueron de quinua,
tomate, pensamiento y mastuerzo. Posteriormente se procedió a limpiar el
material vegetal, primero se pusieron las semillas sobre un poco de gasa los
envolvimos y los aseguramos con pabilo seguidamente pasamos las semillas
por tres frascos el primero de alcohol el segundo de legía y el ultimo con agua
destilada con tiempos de 3 minutos, 3 segundos y 5 minutos respectivamente.

Se seleccionaron 5 semillas que se distribuyeron en frascos Gerber tanto de

quinua, tomate, pensamiento y mastuerzo este procedimiento se hizo con
mucho cuidado para que no haya ningún tipo de contaminación se pusieron tres
mecheros alrededor de donde se estaba haciendo el cultivo, inmediatamente
después de implantar las 5 semillas en cada frasco lo cubríamos con papel wrap
y lo aseguramos con ligas (figura 4)

Terminada esta fase de cultivos in vitro en los frascos Gerber los pusimos en
ambiente limpio previamente esterilizado con legía con una temperatura
ambiente con sus respectivos nombres y fechas (figura 5) para posteriormente
esperar las 24 horas para observar si hubo algún tipo de contaminación y así
seguir su crecimiento y desarrollo hasta obtener resultados (figuras 6-7).

FIGURA 1.

Correcto envolvimiento de los frascos

Gerber listos para su respectiva
esterilización.
FIGURA 2.

Se retira los frascos Gerber de la olla a

presión después de 10 minutos de sonar
la olla.

FIGURA 3.

Se muestra la puesta de los micronutrientes en la

solución.

FIGURA 4

Se muestra la puesta de las semillas

en los frascos Gerber.
FIGURA 5.

Puesta de los frascos respectivamente

marcados.

FIGURA 6-7. Primer día de las semillas

RESULTADOS Y DISCUSION

Los resultados de supervivencia fueron similares, tanto para el medio de cultivo.

La tasa de mortalidad obtenida se asocia a la actividad de agentes de tipo
fúngico y bacteriano que se encuentran alojados en los tejidos internos del
material vegetal. A pesar de ser esterilizado antes del aislamiento, no siempre
es completamente estéril y sólo se hace visible cuando el centro infeccioso es
escindido y se pone en contacto con el medio de cultivo.

ETAPA DE PROLIFERACION

a) Número de brotes: según lo observado después de las 48 (figuras 8-11)

horas de ser cultivado in vitro no se observó ningún tipo de
contaminación en ninguno de los cultivos que se hicieron, sin embargo,
al pasar 7 días después de ser cultivados se puede observar que, se han
contaminado tres frascos entre los más afectados las semillas de
mastuerzo y pensamiento,(figura 12- 13) estos cultivos fueron los únicos
en contaminarse de bacterias lo que nos da a pensar que el
procedimiento que utilizamos en la limpieza del material vegetal solo
aplica a semillas pequeñas y no de más tamaño, la incorrecta cultivación
 de estas dos semillas o una inadecuada esterilización de los frascos
Gerber siendo los de las rápido crecimiento las semillas de quinua, que
han crecido favorablemente,(figura14-15) seguidos de las semillas de
tomate que no han presentado contaminación pero su crecimiento ha
sido poco evidente (figura 15)en estos este tiempo.

FIGURAS 8-11 LAS PRIMERAS 48 HORAS

Se observa los primeros brotes de las semillas de quinua y aun no hay evidencia
del crecimiento de las semillas de tomate. mastuerzo o pensamiento
FIGURAS 12-13 MASTUERZO Y PENSAMIENTO PRIMERA SEMANA DE
CRECIMIENTO

Se puede observas que en la primera semana el crecimiento de hongos se ha

hecho evidente sobre todo en el mastuerzo que esta totalmente infectado.

FIGURA 14 – 15. QUINUA PRIMERA SEMANA DE CRECIMIENTO

Se puede observas las semillas crecidas la que mayor crecimiento tuvieron

fueron las de quinua
FIGURA 15:

Se ha podido observar el poco crcimineto que ha tenido el tomate en

comparación con la quinua.

CONCLUSIONES

El cultivo de tejidos vegetales in vitro, representa una alternativa para el

desarrollo de nuevas técnicas en beneficio de las ciencias agrícolas, y así
contar con semillas y plántulas viables para su producción en campo.

El principal problema en la etapa de establecimiento fue la contaminación por

bacteria o la contaminación fúngica concluyéndose que las condiciones de
pretratamiento de la planta madre son un elemento de suma importancia para
el éxito del cultivo.

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen al Dr.Pauro Roque (, Universidad Nacional del Altiplano)

por proveer el material vegetal utilizado en este estudio y por su incondicional
apoyo científico a lo largo de nuestra investigación.

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