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Introducción:
El laboratorio consta de buscar un mecanismo con el fin de separar las partes de una
sustancia. Se experimentará con compuestos orgánicos para subdividir los diferentes
compuestos formados por elementos quimicos presentes en la mezcla (1)
Runge, Schoenbein, y Goeppelsroeder estudiaron el análisis de sustancias por
capilaridad en papel en el año 1850, este es un aspecto clave para el proceso de
cromatografía ya que sin capilaridad la cromatografía sería imposible. En 1906 Tswett, un
científico ruso descubrió la cromatografía de columna como mecanismo para la
diferenciación de pigmentos naturales presentes en las plantas, por medio de este
experimento se identificaron los pigmentos vegetales clorofila a, b y c3 (2) M, Tswett utilizó
una columna de vidrio en posición vertical, con carbonato de calcio como material
absorbente, dentro de la cual virtió una disolución que contenía éter y pigmentos de las
hojas morterizadas de una planta. Tras unos minutos el material de la columna empezó a
separarse en distintos pigmentos.(2)
La cromatografía se basa en una fase estacionaria y una fase móvil que es capaz de
fluir a través de la fase estacionaria.(2) La cromatografía puede funcionar como criterio de
pureza de la sustancia a separar.(5) La fase móvil recorre la fase estacionaria arrastrando
componentes de la mezcla, éstos son absorbidos en distintas partes de la fase
estacionaria.(4) La separación resultante es producto de las diferencias entre las polaridad
y afinidad a cada una de las fases de cada componente.
Los tipos de cromatografía incluyen de adsorción y de partición. En el laboratoruo se
tranbajará con tres tipos de cromatografía de adsorción; cromatografía de columna,
cromatografía de capa fina (TLC) y cromatografía de papel.
El método de adsorción se fundamenta en una fase estacionaria sólida en la que se
absorben los componentes de la muestra, que se encuentran distribuidos entre ambas
fases por un proceso de sorción-desorción y en ella se incluyen la cromatografía de capa
fina (TLC), de columna y gas-sólido y HPCL(6)
.
La cromatografía de capa fina permite determinar el grado de pureza de un compuesto,
además se pueden comparar muestras ya que si dos muestras posee un mismo Rf en la
placa podrían ser idénticas.
El Rf es la distancia que recorrió el componente y se calcula mediante la siguiente
fórmula:
Rf = distancia componente //distancia disolvente (1)
La Rf es igual para sustancias idénticas. Para llevar a cabo esta cromatografía la muestra
a analizar se deposita cerca de un extremo de una lámina de plástico o aluminio que
debe de estar cubierta por una fina capa de adsorbente. La placa se introduce ne un
beakermezclados (eluyente o fase móvil). A medida que la mezcla de disolventes
asciende por capilaridad a través del adsorbente, se produce un reparto diferencial de
los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente.7 En el caso
de que la muestra no sea facilmente visible en la lámina se pueden utilizar métodos de
revelación tales como una lámpara de rayos-ultravioleta.
La cromatografía de columna consiste en un sólido poroso que queda soportado en
el interior de una columna de vidrio o plástico y funciona como fase estacionaria. En
cambio, la fase móvil es formada por un líquido que atraviesa, constantemente es usado
el gel de sílice.
La cromatografía de papel permite observar de manera clara y cualitativa las distintas
fases resultantes. La fase estacionaria es papel de filtro, la cual posee un contenido natural
de agua. Las muestras se depositan en un extremo colocando pequeñas gotas de la
disolución y evaporando el disolvente. Luego el disolvente asciende por capilaridad. La
separación se realiza de acuerdo a la afinidad de los solutos con las dos fases, las más
solubles en agua se quedarán cerca del punto donde se aplicó la muestra, y las menos
solubles en agua y más solubles en el disolvente llegarán más lejos.
Sección experimental:
El procedimiento se tomó del Manual de Laboratorio de Fundamentos de Química
Orgánica, página 25, experimento: Eugenol extraído de clavo de olor. El procedimiento
consistió en una cromatografía de capa fina utilizando cuatro analgésicos; ibuprofeno,
acetaminofen, aspirina y cafeína. Además se evaluaron dos mezclas incóngnitas bajo el
mismo método.
Se realizó la extracción del pigmento de un material vegetal (espinaca). Se
separaron los pigmentos por cromatografía de columna y cromatografía de capa fina. Por
otro lado, se separaron los componentes coloros de los M&Ms por medio de una
cromatografía de papel.
Resultados:
Muestra de cálculo:
𝑑1
Rf=𝑑𝑑
Discusión:
Extracción de columna
Duarante la cromatografía de columna se le extrajeron pigmentos tales como beta
carotenos, xantofilas y clorofila a un extracto de planta de espinaca o spinaca olearea.
Para obtener el extracto se le agregó alcohol para solubilizar los pigmentos clorofílicos.
Posteriormente se filtró para separar el etanol extra. Se agrega éter de petróleo y hexano
a los pedazos de espinaca que disuelven los carotenoides y las clorofilas por lo que los
pigmentos salen del tejido y quedan en los solventes (7) Luego de esto se filtró para
extreaer la fase acuosa y mantener la fase orgánica dobde se encuentran los pigmentos.
Después de esto el filtrado se lleva al rotavapor para deshacerse de los disolventes. El
eter etpilico y el hexano se convierten en gas y solo quedan los pigmentos. (9)
Para armar el equipo se puso un algodón, 1 centímetro de arena, una capa de sílice (fase
estacionaria) y otro centímetro de arena. Luego se pasó el disolvente (hexano y acetato
de etilo) que conforma la fase móvil para separar las fases. El dióxido de sílice tiene un
carácter polar y la mezcla de disolventes tiene un caracter no polar por lo que el pigmento
amarillo (el cual es menos polar) pasa major a traves de la fase sólida ya que tiene una
mayor afinidad a la fase móvil mientras que el pigmento verde no es capaz de traspasar
la fase estacionaria debido a su alta polaridad y afinidad a la fase estacionaria. Los
pigmentos visibles en la separación cromatográfica fueron las xantofilas las cuales son
amarillo claro y la clorofila la cual es color verde. (10)
El compuesto del pigmento rojo presenta mayor afinidad a la fas estacionaria que a la
fase móvil, ya que fue menos arrastrado por la fase móvil que los demás pigmentos. Esto
puede ser causado debido a que la composición molecular del pigmento rojo posee tres
oxígenos con electrones desapareados lo cual le da cierta polaridad y capacidad en
formar enlaces con el agua presente en la fase estacionaria.
Se observó de igual manera basado en los datos del cuadro que el pigmento de
coloración azul fue el que obtuvo un Rf más alto traduciendose a una mayor afinidad a
la fase móvil.
En el experimento se pudo observar como los pigmentos son mezclas de varios
colorantes de colores primarios. Es decir, las coloraciones que no sean amarillo, rojo y
azul son compuestas de estos.
Conclusiones:
La cromatografía permite separar los componentes de una mezcla
Mismos compuestos tienen el mismo Rf
La cámara de yodo y la luz UV permiten revelar los resultados de cromatografía de capa
fina de compuestos incoloros.
El valor del Rf depende de la afinidad que tenga la muestras hacia las dos fases: si es
mas soluble a la fase estacionaria va a obtener un Rf bajo, si una muestra es más soluble
a las fase la móvil se traduce en un valor Rf más alto.
Bibliografía:
1. Audesirk et al. Biología la vida en la tierra. Novena edición. Pearson Education,
México, 2012, pp 37,116
2. García, A. Curso de Métodos; cromatografía. Instituto de biotecnología, UNAM, 2002.
pp 2-3, 11-16.
3. Senchenkova, E. Michael Tswett, The creator of cromatography.
Davankov & Ettre, L.S ed. Academia rusa de ciencias, Moscú, 2003.
4. Kenndler, E. Introduction to chromatography. Institute for analytical
chemistry, University of Vienna.
5. Lamarque, A.; Zygadlo, J.; Labuckas, D.; López, L.; Torres, M.; Maestri,
D. Fundamentos teórico prácticos de química orgánica, 1a ed.
Encuentro: Córdoba, 2008, pp. 55.
6. Pavia, D. L.; Lampman, G. M.; Kriz, G. S.; Engel, R. G. A Small Scale
Approach to Organic Laboratory Techniques , 3 a ed; Cengage Learning:
Canadá, 2011; pp. 693-707, 777-800, 801-811.
7. Cromatografía en capa fina
https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-p6.pdf
(accessed Oct 9, 2018).
8. Quimica experimental, Google books
https://books.google.co.cr/books?id=xiqTfEO1a2gC&pg=PA89&lpg=PA89&dq=c
amara+de+yodo&source=bl&ots=iIo6H5LUVx&sig=g9ljGJio7AE3zEMy22RUR3S
0nKU&hl=es&sa=X&ved=2ahUKEwiMsZHFvv_dAhVRzlMKHQBYDncQ6AEwB3
oECAkQAQ#v=onepage&q&f=false (accessed Oct 9, 2018).
9.
10. Johnston, A., Scaggs, J., Mallory, C., Haskett, A. Warner, D., Brown, E.,
Hammond, K., McCormick, M., McDougal, O. A Green Approach To Separate
Spinach Pigments by Column Chromatography. J. Chem. Educ., 2013, 90 (6), pp
796–798.
11. Propiedades de la luz. Cómo absorben la luz las clorofilas y otros pigmentos. Khan
academy https://es.khanacademy.org/science/biology/photosynthesis-in-
plants/the-light-dependent-reactions-of-photosynthesis/a/light-and-
photosynthetic-pigments (accessed Oct 9, 2018).