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Manual de Procedimientos

de

Análisis de Agua

Nota: Se recomienda que estos procedimientos sean actualizados con el Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 21st Edition (APHA/AWWA)

martes 28 de septiembre de 2010


Ultima revisión: Enero 2001

Preparado y Revisado por: Ing. Germán Enrique Padilla Díaz, Ing. Azucena Espinales Martínez
& Téc. José Rivera

Managua, Nicaragua
Tabla de Contenido

1. METODOS DE ANALISIS VOLUMETRICOS 1.4

1.1 ALCALINIDAD 1.4

1.2 CLORUROS [Método argentométrico] 1.6

1.3 DUREZA TOTAL 1.7

1.4 CALCIO 1.9

1.5 MAGNESIO (Determinación por diferencia) 1.10

1.6 SULFUROS (METODO YODOMETRICO) 1.11

1.7 DETERMINACION DE CLORO 1.13

1.8 OXIGENO DISUELTO (METODO DE MODIFICACION DE AZIDA) 1.14

2. METODOS DE ANALISIS COLORIMETRICOS 2.15

2.1 ALUMINIO (CIANURO ERIOCROMO R.) 2.15

2.2 SULFATOS (M. TURBIDIMETRICO) 2.21

2.3 SULFATOS (M. TURBIDIMETRICO) 2.23

2.4 HIERRO TOTAL (O - FENANTROLINA) 2.24

2.5 FLUOR (SPADNS) 2.25

2.6 NITRITOS (DIAZOTIZACION) 2.26

2.7 NITRATOS ( METODO DE LA BRUCINA) 2.27

2.8 NITRATOS ( M. Ultravioleta) 2.29

2.9 FOSFATO Soluble ( A. VANADOMOLIBDOFOSFORICO) 2.32

2.10 COMPUESTOS FENOLICOS (4-AMINOANTIPIRINA) 2.33

3. METODOS DE ANALISIS POTENCIOMETRICOS 3.36

PAG 1.2
3.1 PH 3.36

3.2 CONDUCTIVIDAD ELECTRICA 3.38

3.3 NITRATOS 3.39

3.4 POTASIO 3.41

3.5 SODIO 3.43

3.6 TURBIEDAD 3.44

4. METODOS DE ANALISIS PARA DEMANDAS 4.45

4.1 DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (ENSAYO DE 5 DIAS) 4.45

4.2 DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO 4.48

5. METODOS DE ANALISIS BACTERIOLOGICOS 5.50

5.1 COLIFORMES FECALES - Métodos de Tubos Múltiples 5.50

5.2 COLIFORMES FECALES - FILTRO DE MEMBRANA 5.52

6. BALANCE DE ANIONES Y CATIONES 6.53

7. ELABORACION DE CARTAS DE CONTROL 7.54

8. METODOS DE ANALISIS DE PUREZA DE PRODUCTOS QUIMICOS 8.56

9. BIBLIOGRAFIA 9.57

10. RECONOCIMIENTOS 10.57

PAG 1.3
1. METODOS DE ANALISIS VOLUMETRICOS

1.1 ALCALINIDAD

1.1.1 Indicadores a utilizar

Fenolftaleína en solución alcohólica al 5% (ph = 8.3)- Pesar 5 g de fenolftaleína y disolverlos en


500 ml de etanol y 500 ml de agua destilada.

Indicador mixto (ph = 4.6): Pesar 0.02 g de rojo de metilo y 0.1 g de Verde bromocresol y llevar a
100 ml con alcohol etílico o isopropílico al 95%. Este indicador dá sucesivamente las coloraciones
siguientes:

azul verde  ph 5.2


azul espliego  ph 5
rosa gris  ph 4.8
rosa claro  ph 4.6

1.1.2 Acido sulfúrico 0.02 N


Medir 28 ml de H2SO4 concentrado, agregarlo en un balón de 1000 ml de agua destilada y llenar
hasta la marca con agua destilada. Luego de esta solución medir con una pipeta volumétrica 20 ml
de la solución H2SO4 0.1 N echando en un balón de 1000 ml y llenar con agua destilada hasta la
marca o graduación. La solución de H2SO4 queda al 0.02 N.

1.1.3 Procedimiento de análisis:

Medir 50 ml de muestra usando pipeta volumétrica, agregar de 2 a 3 gotas de fenolftaleína, si se


desarrolla un color rosa titular con H2SO4 0.02 N hasta que la solución sea incolora (anotar el
volumen gastado de titulante como Vfenolf ).

Añadir de 2 a 3 gotas de indicador mixto y seguir titulando con H2SO4 0.02 N hasta tono entre
rosa gris y rosa claro (anotar el volumen gastado como V tot).

Efectuar los cálculos como se denota a continuación.

PAG 1.4
1.1.4 Cálculos:

alcalinidad total como CaCO3 (mg/l) = ( Vtot * NH2SO4*1000 * 50.04)/ Vm

alcalinidad total meq/litro = alc total mg/l / 50.04

HCO3 mg/l = Vtablas * NH2SO4 *1000*61.02/Vmuestra

CO3 mg/l = Vtablas *NH2SO4*1000*30/Vmuestra

OH mg/l = Vtablas * NH2SO4 *1000*17.01/Vmuestra

A partir de las relaciones de alcalinidad se pueden determinar las especies presentes considerando
lo siguiente:

Determinación de V TABLA
TITULACION OH- CO32- HCO3-

F=0 0 0 T
F<1/2 T 0 2F T - 2F
F= ½ T 0 2F 0
F> ½ T 2F - T 2(T- F) 0
F=T T 0 0
F: volumen de ácido sulfúrico 0.02 N gastado en neutralizar la coloración roja que se produce al
agregar indicador de fenolftaleína a la muestra cuando ésta presenta pH mayor a
aproximadamente 8.3. F es solamente el volumen de ácido sulfúrico que se gastó en neutralizar el
color rojo y volver transparente la muestra T: volumen de acido sulfúrico total gastado hasta el
viraje a un pH aproximado de 4.5, incluye el volumen de acido sulfúrico gastado en la
neutralización de la coloración rojo a la fenolftaleína, en caso que hubiera.

1.1.5 Estandarización del H2SO4 0.02 N


Se prepara una solución de Na2CO3 0.02 N con agua destilada libre de CO2 , es decir, previamente
hervida y dejada enfriar a temperatura ambiente. De la solución anterior se toman 10 mls y se
valora el ácido sulfúrico.
El carbonato de sodio debe ser secado a 270 - 300C por 2 horas. Se pesan 1.06 gr exactamente y
se diluye a 1 litro. Utilizar el volumen total gastado como V 1 .
El cálculo es el siguiente: N1 = 10 * 0.02 / V1
Se aconseja usar N con 5 decimales.

ULTIMA MODIFICACION: 29 mayo de 2006

PAG 1.5
1.2 CLORUROS [Método argentométrico]

1.2.1 REACTIVOS

 Soln indicadora de cromato potásico: Disolver 50 g de K2 CrO4 en un poco de agua


destilada. Agregar sol de AgNO3 hasta formarse un precipitado rojo. Dejar reposar por
12 horas, filtrar y diluir a 1 litro con agua destilada.
 Titulante de nitrato de plata 0.0141 N: Disolver 2.395 g de AgNO 3 en agua destilada y
diluir a 1000 ml.
 Cloruro de sodio patrón 0.0141 N: Disolver 0.824 g de NaCl (secado a 140C) en agua
destilada y diluir a 1000 ml (1 ml=500g Cl- ).

1.2.2 PROCEDIMIENTO

 Se toma 50 ml de muestra medidas usando una pipeta volumétrica.


 Titular con AgNO3 (Nitrato de Plata) usando como soln. indicadora dicromato de potasio
(K2 CrO4 ) hasta un punto final amarillo rosado (color zapote) el cual debe aplicarse en
todos los análisis. Correr un blanco de reactivos siempre.
 Efectuar cálculos.

1.2.3 Cálculos:
1) mg Cl-/L = (A - B) *N*35450 / Volumen de muestra, ml
2 ) mg Cl-/L = (A - B) * 9.9969
En caso de utilizarse 50 ml de muestra y la normalidad del Nitrato de plata sea 0.0141 N emplear
la ecuación 2).

A = volumen de valoración de muestra, ml


B = volumen de valoración de blanco, ml
N = normalidad de AgNO3

ULTIMA MODIFICACION: 31 mayo de 2006

PAG 1.6
1.3 DUREZA TOTAL

[METODO TITULOMETRICO DE EDTA]

1.3.1 PREPARACION DE REACTIVOS

1. Soln Bufer: Disolver 16.9 g de NH4Cl ( cloruro de amonio) en 143 ml de hidróxido de


amonio (NH4OH) conc. Agregar 1.25 g de EDTA de magnesio y diluirlo en 250 ml.
2. En caso de no estar disponible el EDTA magnésico, disolver 1.179 g de EDTA de sodio
dihidrato y 0.78 g de sulfato de magnesio 7 hidrato (MgSO4 7 H2O) o 0.644 g de cloruro
de magnesio 6 hidrato (MgCl2 6H2O) en 50 ml de agua destilada, esta porción debe
mezclarse con 16.9 gr de NH4Cl (cloruro de amonio) en 143 ml de hidróxido de amonio
(NH4OH) conc y diluir a 250 ml con agua destilada. Ambas soluciones (1 y 2) deben
almancenarse en recipiente plástico o de borosilicato durante un período no superior a un
mes.
3. Titulante EDTA 0.01 M (0.02 N): Pesar 3.723 g de etilendiaminotetracetato disódico
dihidrato y disolver en 1000 ml de agua destilada.
4. Sol Negro Eriocromo Negro T : pesar 0.5 g y disolver en 100 g de trietanolamina o
etilenglicol monometil éter. Agregar 2 gotas por 50 ml de muestra.

1.3.2 PROCEDIMIENTO

 Medir 50 ml de muestra y agregar entre 1 y 2 ml de bufer para ajustar el pH entre 10 y


10.1.

 Agregar 1 o 2 gotas de soln indicadora de Eriocromo Negro T.

 Titular poco a poco con soln. de EDTA 0.02 N, hasta un viraje de color azul.

Nota: En caso de que se conozca que el agua tiene valores bajos de dureza, se recomienda usar
volúmenes mayores.

1.3.3 CALCULO

1) Dureza como mg de CaCO3/L = A* N * 1000*50.04/ volumen de muestra


2) Dureza como mg de CaCO3/L = A* 20.016 , Cuando se utilizan 50 ml de muestra y la conc. de
EDTA es 0.02 N.

PAG 1.7
A= volumen gastado de EDTA
N= NEDTA-Na2

1.3.4 PROCEDIMIENTO DE ESTANDARIZACION DEL EDTA 0.02 N

Pesar 2.467 g de MgSO4 7H2O y diluir a 1 litro exactamente, esto producirá una solución 0.02 N
de la cual se toman 10 mls para valorar la solución de EDTA cuyo valor teórico es 0.02 N.
El cálculo a realizarse es el siguiente:
V1N1 = V2 N2

por lo tanto : N1 = 10 * 0.02/ V1


Se aconseja usar 5 decimales para N1.

PAG 1.8
1.4 CALCIO

METODO TITULOMETRICO DE EDTA

1.4.1 PREPARACION DE REACTIVOS

 Indicador murexida : Disolver 150 mg del indicador en 100 g de etilenglicol absoluto.


 Debido a que las soluciones acuosas no son estables más de un día se recomienda
alternativamente preparar una mezcla de 200 mg de murexida y 100 g de NaCl,
triturandola hasta 40 - 50 mesh.
 Hidróxido de sodio 1 N: Pesar 40 gr de NaOH en lentejas y diluirlos en 1000 ml de agua
destilada.
 Soln. de EDTA 0.01 M (0.02N): Pesar 3.723 g de etilendiaminotetracetato disódico
trihidrato en 1000 ml de agua destilada. Equivalencia 400.8 g Ca = 1 ml.

1.4.2 PROCEDIMIENTO

 Medir 50 ml de muestra con pipeta volumétrica.


 Agregar 2 ml de NaOH 1 N para ajustar el ph entre 12 y 13 .
 Agregar 0.1 a 0.2 g de la mezcla de indicador (o de 2 a 3 gotas).
 Titular con EDTA 0.02 N agitando continuamente hasta un cambio de color de rosa a
púrpura.

1.4.3 CALCULOS

mg Ca2+ / L = A * N * 20.04*1000/Ml muestra


mg Ca2+ / L = A *8.016, en caso de utilizarse 50 ml de muestra y que la conc. del EDTA sea 0.02
N.

A = volumen gastado de EDTA


N = NEDTA-Na2

PAG 1.9
1.5 MAGNESIO (Determinación por diferencia)

METODO POR DIFERENCIA (Por cálculo)

El magnesio puede calcularse como diferencia entre la dureza y el calcio como CaCO3, si los
metales que interfieren están presentes en concentraciones mínimas en la titulación del calcio.
Cómo efectuar cálculos

A partir de los volúmenes obtenidos en la titulación de Dureza total y calcio, se procede a


introducirlos en la fórmula de abajo:

Mg++(MG/L)= (VDUREZA T - VCALCIO) * 1000*12.16*NEDTA/VMUESTRA

VDUREZA : volumen de EDTA gastado para dureza


VCALCIO : VOLUMEN DE EDTA GASTADO PARA CALCIO
NEDTA : NORMALIDAD DEL EDTA DE SODIO
Vmuestra : Volumen de muestra utilizado en la titulación de la Dureza T. y el Calcio

PAG 1.10
1.6 SULFUROS (METODO YODOMETRICO)

1.6.1 Preparación de Reactivos

 Acido clorhídrico 6 N : Diluir en relación 1:1 ácido clorhídrico conc. en agua destilada.
 Solución estandar de yodo, 0.025 N: disuelva 20 a 25 g KI en un poco de agua y agregue
3.2 g de yodo. Después que el yodo se ha disuelto, diluir a 1000 ml y estandarizar contra
0.025 N de Na2S2O3 , usando solución de almidón como indicador.
 Solución Standar de tiosulfato de sodio, 0.025 N : disolver 6.205 g de Na2S2O35H2O en
agua destilada. Agregar 1.5 ml 6N de NaOH o 0.4 g de NaOH sólido y diluya a 1000 ml.
Estandarizar con solución de biyodato.
 Solución estandar de biyodato de potasio, 0.0021 M: disolver 812.4 mg KH(IO 3)2 en agua
destilada y diluir a 1000 ml.

1.6.2 ESTANDARIZACION DEL TIOSULFATO DE SODIO:

Disolver aproximadamente 2 g KI en agua libre de yodato en un erlenmeyer con 100 a 150 ml de


agua. Agregar 1 ml de H2SO4 6 N o unas pocas gotas de H2SO4 conc y 20 ml de solución estandar
de bi-yodato. Diluir a 200 ml y titular el yodo liberado con titulante de tiosulfato, agregando
solución de almidón al punto de vire, cuando se forme un amarillo pálido. Cuando las soluciones
son de la misma fuerza 20 ml de 0.025 M de tiosulfato de sodio son usados.

1.6.3 PROCEDIMIENTO DE ANALISIS:

 Medir desde una bureta en un balón de 500 ml una cantidad de solución de yodo estimada
a exceder la cantidad de sulfuro presente.
 Agregar agua destilada, si es necesario, para completar el volumen a 20 ml y agregar 2
ml de Hcl 6N.
 Pipetear 200 ml de muestra en un balón descargando la muestra bajo la superficie de la
solución. Si el color del yodo desaparece, agregue más yodo hasta que el color se
mantenga.
 Valore por retroceso con solución de Na2S2O35H2O agregando pocas gotas de solución de
almidón a medida que se aproxima el punto de vire, y continúe hasta que desaparezca el
color azul.

1.6.4 CALCULO

Se debe tomar en cuenta la siguiente relación: 1 mililitro de solución de yodo 0.025N reacciona
con 0.4 mg S2-, donde:
mg S2-/L = [(A * B) - (C * D) ] * 16 000 / ML MUESTRA

A : volumen de solución de yodo

PAG 1.11
B : normalidad de la solución de yodo
C : volumen de solución Na2S2O3, y
D : normalidad de solución de Na2S2O3

PAG 1.12
1.7 DETERMINACION DE CLORO
METODO YODOMETRICO (Para Análisis de Calidad de Hipoclorito de sodio comercial y
Demanda de Cloro)

1.7.1 Preparación de Reactivos

1) Solución Standar de tiosulfato de sodio, 0.025 N : disolver 6.205 g de Na2S2O35H2O en agua


destilada y diluir a 1 L.
2) Cristales de KI (yoduro de potasio).
3 ) Acido acético conc.

1.7.2 Cristalería

Bureta de 25 ml
Balón aforado de 150 ml (1), de 100 ml (2), de 500 ml (1)
Beakers de 100 ml (4), de 400 ml (2)
Erlenmeyers de 125 ml (5)

1.7.3 PROCEDIMIENTO

 Colocar en un balón de 150 ml de capacidad, 50 ml de agua destilada, adicionar 0.5 ml de


muestra de hipoclorito de sodio comercial y aforar a 150 ml.
 Tomar 25 ml de la solución de NaOCl diluida y colocarlos en un erlenmeyer de 200 ml.
 Nota: En el análisis de Demanda de cloro, los pasos 1 y 2 se reemplazan por la toma de
un volumen de la muestra a analizar (100 o 200 ml).
 Agregar 5 ml de ácido acético concentrado y agitar para lograr la acidificación de la
muestra.
 Agregar cristales de KI, yoduro de potasio. Agitar.
 Titular la muestra hasta decoloración total, usando como titulante tiosulfato de sodio
0.025 N.

1.7.4 CALCULO

MG/LITRO (CLORO) = A x 0.025 N x 35450 x 150/ 12.5


= A x 10635
A: volumen gastado de Na2S2O35H2O

PAG 1.13
1.8 OXIGENO DISUELTO (METODO DE MODIFICACION DE AZIDA)

1.8.1 Preparación de Reactivos

 Solución de sulfato manganoso: Disolver 480 g de MnSO4 4H2O, 400 g de MnSO4 2H2O o
364 g de MnSO4 monohidrato en agua destilada, filtrar y diluir a 1 litro. La solución de
MnSO4 no debe dar color con almidón cuando se agregue a una sol. acidificada de yoduro
potásico (KI).

 Reactivo alcali/yoduro/azida: Para muestras saturadas o menos que saturadas: disolver


500 g de NaOH y 135 g NaI en agua destilada y diluir a 1 litro. Agregar 10 g NaN 3
disueltos en 40 ml de agua destilada.

Para muestras sobresaturadas: disolver 10 g NaN3 en 500 ml de agua destilada. Agregar 480 g de
hidróxido de sodio y 750 g de yoduro de sodio (NaI) y agitar hasta disolución.

 Acido sulfúrico conc. : 1 ml es equivalente a unos 3 ml de reactivo álcali-yoduro-azida.

 Almidón: disolver 2 g de almidón soluble calidad laboratorio y 0.2 g de ácido salicílico


como preservante en 100 ml de agua destilada caliente.

 Titulante de tiosulfato de sodio patrón: disolver 6.205 g Na 2S2O3 5H2O en agua


destilada. Agregar 1.5 ml de NaOH 6 N o 0.4 g de NaOH sólido y diluir a 1000
ml.

1.8.2 Procedimiento

 A la muestra recogida en un frasco de 250 a 300 ml se agrega 1 ml de solución de MnSO 4


y después añadir 1 ml de álcali-yoduro-azida. Mezclar invirtiendo varias veces. Cuando
el precipitado se ha depositado a la mitad aproximadamente , se agrega 1 ml de H2SO4
conc., para dejar un sobrenadante claro por encima del hidróxido de manganeso floculado.

 Titular un volumen correspondiente a 200 ml de muestra original tras corregir la pérdida


de muestra por desplazamiento con los reactivos. Así para un total de 2 ml (1 ml de cada
uno) de MnSO4 y reactivos álcali-yoduro-azida en un frasco de 300 ml, titulénse 200 x
300/ (300 - 2) = 201 ml.
 Titular con Na2S2O3 5H2O 0.025 M hasta color paja pálido. Agregar unas gotas de
solución de almidón y continuar valorando hasta la primera desaparición del color azul.

1.8.3 Cálculo
Para titular 200 ml de muestra: 1 ml Na 2S2O3 5H2O 0.025 M = 1 mg OD/L

PAG 1.14
2. METODOS DE ANALISIS COLORIMETRICOS

2.1 ALUMINIO (CIANURO ERIOCROMO R.)


Metodo: CIANURO ERIOCROMO R.

2.1.1 Principio del Método:

Al diluir una solución de Aluminio con R Cianuro Eriocromo tamponada a un pH de 6.0, produce
un complejo de color rojo a rosado, que presenta una máxima absorción a 535 nm. La intensidad
del desarrollo del color está influenciada por la concentración de aluminio, tiempo de reacción,
temperatura, pH, alcalinidad y concentración de otros iones en la muestra. Para compensar el color
y la turbidez del aluminio, una porción de muestra se mezcla con EDTA para proporcionar un
blanco. Las interferencias de Fe y Mn, dos elementos comúnmente encontrados en el agua, se
elimina por la adición de ácido ascórbico. El rango óptimo de lectura del Aluminio, está entre 20 y
300 g/L, pero puede ser extendido hacia arriba por simple dilución

2.1.2 Interferencias:

Pueden causar errores negativos, los iones Fluoruros y Polifosfatos, cuando la concentración de
fluoruro es constante, el % de error disminuye con el aumento de la concentración de Al, ya que la
concentración de F- frecuentemente es conocida ò puede ser determinada directamente,
ajustándose a resultados que pueden ser obtenidos por la adición de una cantidad conocida de
fluoruro a un grupo de estándares.

Una simple corrección puede ser determinada desde la familia de curva en la figura 3500-Al:1.
Para la eliminación de la interferencia de los complejos de polifosfato está dado el siguiente
procedimiento. Los ortofosfatos en concentraciones menores de 10 mg/L no causan interferencias.
Las interferencias ocasionadas por un nivel de pequeñas cantidades de alcalinidad es eliminada
precisamente por la acidificación de la muestra, después del punto de neutralización del
metilnaranja. Los sulfatos no interfieren hasta una concentración de 2000 mg/L.

Mínima Concentración Detectable:

La mínima concentración de aluminio detectable por este método en ausencia de fluoruros y


complejos de fosfatos es aproximadamente 6 g/L.

2.1.3 Manipulación de la Muestra:

Las muestras son colectadas en limpio en frascos lavados con ácidos, preferiblemente plásticos, los
cuales son examinados tanto como sea posible, antes de la colección. Si se va a determinar
únicamente el aluminio soluble, filtrar una porción de la muestra a través de un filtro de membrana
de 0.45 um, desechar los primeros 50 ml de filtrado y utilizar el filtrado sucesivo para la
PAG 2.15
determinación. No se debe utilizar filtros de papel, algodón absorbente ó vasos de vidrio para
filtrar cualquier solución que puede estar contaminada con aluminio, porque ellos removerán parte
de el aluminio soluble:

2.1.4 APARATOS

Equipo Colorimétrico: Se requiere uno de los siguientes:

Espectofotómetro, para ser utilizado a 535 nm, con un haz de luz de 1 cm de longitud.

Filtro fotométrico, que proporciona un haz de luz de 1 cm de largo y equipado con un filtro verde
con una máxima trasmitancia entre 525 y 535 nm.

Tubos Nesler, de 50 ml de forma alta y esmerilada.

Cristalería: Tratar toda la cristalería calentando con 1 + 1 HCL y enjuagando con agua destilada
libre de aluminio para evitar errores debido al material absorbido en el vidrio. Enjuague
suficientemente para remover todo el ácido.

2.1.5 REACTIVOS

Utilizar reactivos bajos en aluminio y agua destilada libre de aluminio.

 Solución Stock de Aluminio

Utilizar cualquiera de los dos, el metal (1) ó la sal (2), para preparar una solución stock: 1.00 ml =
500 ug Al.

1) Disolver 500 mg de aluminio metálico en 10 ml de HCL concentrado con


calentamiento suave. Diluir a 1000 ml con H2O destilada ó

2) Disolver 8.791 g de sulfato potásico de aluminio (también llamado aluminio potásico),


AlK (SO4)2 . 12 H2O, en agua y diluir a 1000 ml. Corregir este peso por la división de la fracción
decimal de la aleación AlK (SO4)2 . 12 H2O,en el reactivo utilizado.

 Solución Standard de Aluminio:

Diluir 10 ml de solución stock de aluminio a 1000 ml con agua destilada: 1.00 ml = 5.00
ug/Al. Preparar diariamente.

 Acido Sulfúrico: H2SO4, 0.02N y 6N


PAG 2.16
 Solución de Acido Ascorbico:

Disolver 0.1 g de ácido ascórbico en agua y enrasar a 100 ml en un frasco volumétrico.


Preparar diariamente.

 Reactivo Buffer:

Disolver 136 g de acetato de sodio, NaC2H3O2.3H2O en agua destilada, añadir 40 ml 1N


de ácido acético y diluir a 1 litro.

 Solución Stock de Color:

Utilizar cualquiera de los siguientes productos:

Cianuro Solocromo R-200* ó Cianuro Eriocromo. Disolver 100 mg en agua y diluir a 100 ml en
un frasco volumétrico. Esta solución debe tener un pH cerca de 2.9.

Cianuro Eriocromo R. Disolver 300 mg de colorante en aproximadamente 50 ml de agua


destilada. Ajustar pH desde 9 hasta 2.9 con una proporción 1 + 1 ácido acético (aproximadamente
3 ml serán requerido). diluir con agua destilada a 100 ml.

Cianuro Eriocromo R. Disolver 150 mg en aproximadamente 50 ml H2O destilada. Ajustar pH


desde 9 hasta 2.9 con 1 + 1 ácido acético (aproximadamente 2 ml serán requerido). Diluir con
H2O destilada hasta 100 ml.

Esta solución stock tiene una estabilidad excelente y puede ser almacenada hasta por un año.

 Solución coloreada de Trabajo:

Diluir 10.0 ml de la solución stock coloreada seleccionada a 100 ml en un frasco


volumétrico con agua destilada. Las soluciones de trabajo son estables por al menos 6 meses.

 Solución Indicadora de Metilnaranja: ó indicador verde bromocresol

 Solución especificada en la determinación de la alcalinidad total. (sección 2320 B. 3d).

 EDTA: Sol. sódica de ácido etilendiamin-Tetracético dihidrato, 0.01 M: Disolver 3.7 g


en agua destilada y diluir a 1 litro.

 Hidróxido de Sodio, NaOH, 1N y 0.1N.

PAG 2.17
2.1.6 PROCEDIMIENTO

 Preparación de Curva de Calibración - Preparar una serie de standares de Aluminio desde


0 hasta 7 ug (O hasta 280 ug/L basado en una muestra de 25 ml) midiendo exactamente
los volúmenes calculados de la solución standard de aluminio en un frasco volumétrico de
50 ml ó tubos nessler. Agregar agua hasta un volumen total de aproximadamente 25 ml.

 Agregar 1 ml 0.02N H2SO4 a cada standard y mezclar. Añadir 1 ml de sln. de ácido


ascórbico y mezclar. Añadir 10 ml de soln. buffer y mezclar. Con una pipeta
volumétrica, adicionar 5.0 ml del reactivo colorante de trabajo y mezclar.
Inmediatamente enrasar hasta 50 ml con agua destilada. Mezclar y dejar reposar desde 5
hasta 10 min. El color iniciará hasta desaparecer después de 15 min.

 Leer transmitancia o absorvancia utilizando una longitud de onda de 535 nm. Ajustar el
instrumento a cero absorvancia con un standard que no contiene aluminio. (Plotear la
concentración de Al (microgramos Al en 50 ml de volumen final) Vs. absorvancia
obtenida.

2.1.7 Tratamiento de la muestra en ausencia de fluoruro y complejos fosforados

 Medir 25.0 ml de muestra, ó diluir una porción a 25 ml, en una cápsula ó frasco de
porcelana, añadir unas cuantas gotas de indicador metilnaranja y titular con H2SO4 0.02N
hasta un ligero color rosado.

 Registrar la lectura, y descartar la muestra. Para dos muestras similares a la misma


temperatura ambiente, añadir la misma cantidad de H2SO4 0.02 N para eliminar HCO3
utilizado en la titración más 1 ml en exceso.

 A una muestra, agregar 1 ml de solución EDTA. Esta servirá como un blanco para
cualquier complejo de aluminio presente y compensar la turbidez y el color. Para ambas
muestras agregar 1 ml de ácido ascórbico, 10 ml de reactivo buffer y 5.00 ml de reactivo
colorante de trabajo, como se describió anteriormente.

 Fijar el equipo a cero absorvancia ó 100 % transmitancia utilizando el blanco de EDTA.


Después de 5 a 10 min. de reacción, leer transmitancia ó absorvancia y determinar la
concentración de aluminio a partir de la curva de calibración previamente preparada.

2.1.8 Eliminación de las interferencias de Fosfatos:

PAG 2.18
 Agregar 1.7 ml de H2SO4 6N para 100 ml de muestras en un erlenmeyer de 200 ml.
Calentar en un plato caliente por un período de 90 minutos cuidando que la temperatura
de la solución esté justamente por debajo del punto de ebullición. Al finalizar el período
de calentamiento el volumen de la solución debe estar cerca de 25 ml. Agregar agua si es
necesario para completar el volumen.

 Después de enfriarse la muestra, neutralizar a un pH de 4.3 a 4.5 con NaOH, utilizando


NaOH 1N al inicio y NaOH 0.1N para el ajuste final. Monitorear con un pHmetro.
Enrasar a 100 ml con H2O destilada y tomar una porción de 25 ml para la prueba de
aluminio.

 Correr un blanco en la misma forma, empleando 100 ml de agua destilada y 1.7 ml H2SO4
6N. Restar la lectura del blanco de la lectura de la muestra ó utilizar el mismo para poner
en cero el equipo antes de leer la muestra.

2.1.9 Corrección para las muestras que contienen Fluoruro:

 Medir la concentración de fluoruro en la muestra por el SPADNS ó el método del


electrodo. Cualquiera de los dos:

 Agregar la misma cantidad de fluoruro como en la muestra para cada standar de aluminio,
ó

 Determine la corrección de fluoruro desde el set de curvas de la fig 3500-AL:1, página 3-


57 del STANDARD METH. EDICION 20.

2.1.10 CALCULOS

gAl (en50. ml. volumen. final )


mg Al/L =
ml. muestra

2.1.11 DESVIACION Y PRECISION

Una muestra sintética que contiene 520 g Al/L y sin interferencia en agua destilada fue
analizada por el método de Cianuro Eriocromo, en 27 laboratorios. La desviación relativa de los
estandares fue de 34.4 % y el error relativo 1.7 %.

PAG 2.19
Una segunda muestra sintética que contiene 50 g Al/L, 500 g Ba/L y 5 g Be/L en
agua destilada fue analizada en 35 laboratorios. La desviación relativa del estandard fue de 38.5 %
y el error relativo 22.0 %.

Una tercer muestra sintética que contiene 500 g Al/L, 50 g Cd/L, 110 g G/L, 1000
g Cu/L, 300 g Fe/L, 70 g Pb/L, 50 g Mn/L, 150 g Ag/L y 650 g Zn/L en agua destilada
fue analizada en 26 laboratorios. La desviación relativa del estandard fue de 28.8 % y el error
relativo de 6.2 %.

Una cuarta muestra sintética que contiene 540 g Al/L y 2.5 mg polifosfato/L en agua
destilada fue analizada en 16 laboratorios. La muestra se hidrolizó de la forma descrita. La
desviación relativa del estandard fue de 44.3 % y el error relativo de 1.3 %. En 12 laboratorios
donde no fueron aplicadas las medidas correctivas, la desviación relativa del estandard fue de 49.2
% y el error relativo de 8.9 %.

Una quinta muestra sintética que contiene 480 g Al/L y 750 g F/L en agua destilada
fue analizada en 16 laboratorios en las que se realizó la corrección del contenido de fluoruro en las
curvas. la desviación relativa del estandar fue de 25.5 % y el error relativo de 2.3 %.

Los 17 laboratorios que agregaron fluoruro a los estandares de aluminio presentaron una
desviación relativa del estandar de 22.5 % y el error relativo de 7.1 %.

PAG 2.20
2.2 SULFATOS (M. TURBIDIMETRICO)
METODO #1: Turbidimetrico - Rango 10 - 40 Mg/L So4

2.2.1 Equipos empleados

 Un agitador magnético - Usarlo a velocidad constante, asimismo los magnetos deben ser
de igual tamaño y forma.
 Espectrofotómetro - para usarlo a 420 nm.
 Un cronómetro.
 Una cuchara con capacidad de 0.2 a 0.3 ml.

2.2.2 Preparación de Reactivos

 Solución bufer rango alto (para concentraciones mayores a 10 mg/l y menores a 40 mg/l):
Disolver 30 g de cloruro de magnesio MgCl 6 H20, 5 g de acetato de sodio CH3COONa
3H20 , 1 g nitrato de potacio KNO3 y 20 ml de ácido acético, CH3COOH (99 %) en 500
ml de agua destilado y aforar a 1000 ml.
 Solución bufer rango bajo (< 10 mg/l): Disuélvase 30 g MgCl 2 6 hidrato; 5 g acetato de
sodio 3 hidrato; 1 g de KNO3 ; 0.111 g de sulfato de sodio Na2SO4 y 20 ml de ácido
acético (99 por 100), en 500 ml de agua destilada completando a 1000 ml.
 Cloruro de Bario, cristales 20 a 30 mesh.
 Solución standard: diluir 10.4 ml de H2SO4 100 ml de agua destilada, o bien disolver
0.1479 g de Na2SO4 anhidro en agua destilada y diluir a 1000 ml, (1 ml = 100 g SO42-).

2.2.3 Procedimiento

 Medir 100 ml de muetra clara y verterlo en un erlenmeyer de 125 ml.

 Introducir el magneto y mantener agitación constante, luego agregar 20 ml de bufer (ya


sea Rango Bajo o Rango Alto, según sea la concentración estimada) y seguidamente una
cucharadita de cloruro de bario. Mezclar por 1 minuto. Tras finalizar el período de
agitación, se vierte la solución en la celda del espectrofotómetro y se mide la turbidez
después de 5  0.5 minutos, usando una longitud de onda de 420 nm. El Método a
utilizar en el Espectrofotómetro HACH DR/2000 es el # 620.

 Corríjanse el color y turbidez realizando blancos a los que no se ha añadido BaCl2


(cloruro de Bario).

 Calcular el contenido de sulfatos por regresión lineal de standares utilizando dos curvas:
Rango Bajo (2, 4 6 8 y 10 mg/l) y Rango Alto (10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 mg/l).

PAG 2.21
 Para las muestras que excedan el límite de absorbancia del Rango alto, se procederá a
diluir la muestra de tal manera que permita obtener una absorbancia dentro del Rango
establecido en el Método.

PAG 2.22
2.3 SULFATOS (M. TURBIDIMETRICO)
METODO #2: Turbidimetrico - Rango 10 - 40 Mg/L SO4

2.3.1 Preparación de reactivos

 Solución Bufer para sulfatos - Disuelva 75 g. de cloruro de sodio en 300 ml de agua


destilada y agréguele 30 ml de ácido clorhídrico concentrado, luego 50 ml de glicerina y
finalmente 100 ml de alcohol etílico al 95%. Agite unos 15 minutos para lograr una buena
homogenización de la mezcla.

 Solución de cloruro de bario - Se debe preparar una solución de tal forma que por mililitro
de solución sean equivalentes a 1 g. de cloruro de bario. Disuelva 100 g de cloruro de
bario adicionando pequeños volúmenes de agua destilada y agitando para saturar la
solución. Luego afore a 250 ml. ( 2.5 ml = 1 g).

2.3.2 Procedimiento

 Coloque 100 ml de muestra (o una alícuota aforando a 100 ml) en un erlenmeyer de 250
ml, introduzca un magneto y agite, colocando el erlenmeyer en un agitador magnético.
 Adicione 5 ml de solución Bufer para sulfatos.
 Adicione 2.5 ml de cloruro de bario y agite durante dos minutos.
 Lea la concentración de sulfatos a 420 nm y exprese los resultados como mg/l SO 42-.

ULTIMA REVISION: 31 May. 06

PAG 2.23
2.4 HIERRO TOTAL (O - FENANTROLINA)

2.4.1 Equipos empleados


Espectrofotómetro para usarse a 510 nm.

2.4.2 REACTIVOS

 Acido clorhídrico HCl concentrado que contenga menos de 0.000 05% de hierro.
 Solución de hidroxilamina: Disolver 10 g NH2OH HCl en 100 ml de agua.
 Solución bufer de acetato de amonio: disolver 250 g de NH4C2H302 en 150 ml de agua.
Agregar 700 ml de ácido acético glacial concentrado.
 Solución de fenantrolina: Disolver 0.10 gramos de 1,10-fenantrolina monohidrato
(C12H8N2H2O), en aproximadamente 70 ml de agua con agitación y calentamiento a
80°C; luego aforar a 100 ml de agua destilada. El calentamiento es innecesario si se
agregan 2 gotas de ácido clorhídrico concentrado.

2.4.3 PROCEDIMIENTO

 Medir 50 ml de muestra y verterlos en un erlenmeyer de 125 ml.


 Agregar 2 ml de HCl conc. y 1 ml de sol. de hidroxilamina al 10%.
 Proceder a digestar la muestra hasta reducir el volumen original a 20 mL. Para muestras
muy coloreadas o con mucha materia orgánica, se deben evaporar completamente y luego
acidificarlas en aproximadamemte 10 ml de agua destilada.
 Dejar enfriar la muestra hasta que adquiera la temperatura ambiente.
 Proceder a verter 10 ml de solución bufer y 4 ml de soln de fenantrolina. Aforar con agua
destilada a 50 ml y agitar por inversión repetida.
 Dar 15 minutos para desarrollo del color.
 Leer en el Método 265 del Espectrofotómetro HACH a una longitud de onda de 510 nm.
 Calcular el contenido de hierro (Fe) de las muestras por regresión lineal de estandares de
hierro que vayan desde aproximadamente 0.10 a 3 mg/l.
 Se debe correr siempre un blanco de reactivos.

PAG 2.24
2.5 FLUOR (SPADNS)
METODO DEL SPADNS

2.5.1 Equipos a Emplear

 Espectrofotómetro, para uso a 570 nm, con paso de luz de al menos 1 cm.

2.5.2 Preparación de Reactivos

 Solucion estandar de flúor: disolver 221 mg de fluoruro de sodio anhidro NaF, en agua
destilada y diluir a 1000 ml, 1 ml = 100 g F-.
 Solucion de SPADNS: Disolver 0.985 gramos de SPADNS en agua destilada y diluir a
500 ml. Esta solución es estable por al menos 1 año si es protegida de la luz solar.
 Reactivo acido de zirconilo: disolver 0.133 gramos de cloruro de zirconilo 8 hidrato, en
cerca de 25 ml de agua destilada, agregar 350 ml de Hcl concentrado y diluir a 500 ml
con agua destilada.
 Reactivo combinado: mezclar igual volúmenes de solución de SPADNS y cloruro de
circonilo ácido. El reactivo combinado es estable por al menos 2 años.
 Solución de Referencia: Añadir 20 ml de la solución SPADNS - Hcl zirconilo (solución
combinada) a 200 ml de agua destilada. Agregar 14 ml de ácido clorhídrico previamente
diluido a 20 ml con agua destilada.

2.5.3 Procedimiento

 Correr un blanco con solución de Referencia antes de leer los estandares y las muestras,
así se fija el valor de absorbancia a 0 mg/l de Flúor.
 Correr una curva de calibración usando estandares en el rango de 0 a 1.4 mg F -/L por
dilución adecuada de la solución madre de fluroruro en 50 ml de agua destilada.
 Mida 50 ml de estandar usando una pipeta volumétrica, agregar luego 10 ml del reactivo
combinado y agitar suavemente. Leer después de 5 minutos en el Método 190 del HACH
DR/2000 a una longitud de onda de 570 nm.
 Las muestras deben tratarse de igual forma que los estandares. Se debe tener especial
cuidado en la temperatura de las muestras y los estandares, la cual debe ser igual.

2.5.4 CALCULO

Se introducen los valores de absorbancia en la curva de Regresión lineal obtenida y calcular la


concentración.

Una ecuación típica es la siguiente:

Y = 3.11635 - 1.4717 * X , r = 0.9994


donde

PAG 2.25
X : absorbancia
Y: concentración de flúor en mg/litro Nota: La pendiente de esta curva es negativa.

2.6 NITRITOS (DIAZOTIZACION)


METODO: Diazotización

2.6.1 APARATOS

1. Espectrofotómetro para ser usado a 543 nm.


2. Beakers de 50 ml

2.6.2 REACTIVOS

 Reactivo colorante: Añádase a 600 ml de agua 100 ml de ácido clorhídrico o Acido


Fosfórico al 85% y 10 gramos de sulfanilamida. Tras disolver completamente la
sulfanilamida, agréguese 1 gramo de diclorhidrato de N-(1-naftil)-etilendiamina.
Mézclese para disolver y dilúyase con agua hasta 1 litro. La solución es estable por un
mes si es almacenada en un frasco oscuro en refrigeración.
 Solución madre: Disuélvase 1.232 g de NaNO2 en agua y dilúyase a 1000 ml; 1 ml = 250
g. Consérvese con 1 ml de cloroformo.

2.6.3 Procedimiento

 Agréguese 2 ml de reactivo colorante a 50 ml de muestra clara.

 Mídase la absorbancia a 543 nm, entre 10 minutos y 2 horas después de añadir el reactivo
a las muestras y patrones. Preferiblemente ½ hora.

 Observaciones: No usar nunca la conservación ácida en las muestras destinadas a análisis


de nitritos, hacer la determinación inmediatamente, o conservarse a 4°C por 1 a 2 días.

 Para celdas de 1 cm de paso de luz, el rango de concentración óptimo es de 0.006 hasta


0.076 mg/l de nitritos, o sea 2 - 25 g /L de NO2-N.

 Calcule el contenido de nitritos de las muestras por regresión lineal a partir de estandares
de 0.01 a 0.44 mg/l.

PAG 2.26
2.7 NITRATOS ( METODO DE LA BRUCINA)
METODO: BRUCINA

2.7.1 Preparación de Reactivos

Solución Acido Sulfúrico 28.82 N - Disolver 500 ml de Acido Sulfúrico concentrado en 125 ml de
agua destilada (625 ml de VT).

NOTA: Tener cuidado de adicionar poco a poco el ácido al agua y nunca en sentido contrario.
Colocar el recipiente en un baño de agua para lograr un enfriamiento homogéneo, ya que esta
reacción es altamente exotérmica.

Solución de Brucina/Acido Sulfanílico - Disolver 1.0 g de Sulfato de Brucina y 0.1 g de ácido


sulfanílico en aproximadamente 70 ml de agua destilada caliente, adicione 3 ml de ácido
clorhídrico concentrado y enfríe, afore a 100 ml con agua destilada.

2.7.2 Procedimiento Tradicional:

 Colocar en un beaker de 50 ml de capacidad, 10 ml de ácido sulfúrico 28.82 N. (Rotular el


beaker como Ar)

 Colocar en otro beaker de 50 ml, 2 ml de muestra y adicionar 1 ml de soln brucina-ácido


sulfanílico, agitar para obtener un buen mezclado. (Rotular el beaker como A 2).

 Adicionar el contenido del beaker (A1) al del beaker (A2) y transfiera el contenido de un
beaker a otro unas cinco veces.

 Dejar reposar en la oscuridad durante diez minutos.

 Adicionar al beaker vacío 10 ml de H2O destilada y viceversa, repitiendo la misma


operación unas cinco veces.

 Guarde en la oscuridad durante unos veinte minutos

 Leer la concentración de Nitrato a 410 nm y expresar los resultados como mg/lt de


Nitrato.

 Procedimiento alterno en el cual se eliminan interferencias:

 Tomar 10 ml de muestra

 Adicionar 2 gotas de Arsenito de Sodio (Elimina interferencias por cloro residual)

 Colocar la muestra en baño de agua fría

PAG 2.27
 Adicionar 2.0 ml de NaCl

 Adicionar 10 ml de H2SO4

 Adicionar 1 ml de Brucina

 Colocar la muestra en baño maría 20 min. 95 oC

 Dejar enfriar a temperatura ambiente

 Medir absorbancia a 410 nm

PAG 2.28
2.8 NITRATOS ( M. Ultravioleta)

2.8.1 Principio
Se utiliza esta técnica para el monitoreo de muestreas que tienen bajo contenido de materia
orgánica, por ejemplo, aguas naturales no contaminadas y suministros de agua potable. La curva
de calibración cumple la ley de Beer hasta 11 mg/L de N.

La medida de absorción de ultravioleta a 220 nm posibilita la rápida detección de nitratos. Debido


a que la materia orgánica disuelta puede absorber a 220 nm y los nitratos no absorben a 275 nm,
una segunda medida a 275 nm puede utilizarse para corregir el valor de nitrato. El grado de la
corrección empírica se relaciona a la naturaleza y concentración de la materia orgánica y puede
variar de un agua a otra. Consecuentemente, este método no se recomienda si se requiere una
corrección significativa de la absorbancia de materia orgánica, aunque puede ser útil al monitorear
los niveles de nitratos en cuerpos de agua con un tipo constante de materia orgánica. Pueden
establecerse factores de corrección para absorbancia de materia orgánica mediante el método de
adiciones en combinación con análisis del contenido original de nitratos por otro método. La
filtración de muestra se utiliza para remover la posible interferencia de partículas suspendidas. La
acidificación con HCl 1 N se diseña para prevenir la interferencia de hidróxidos y carbonatos en
concentraciones superiores a 1000 mg/L como CaCO3. Cloruros no tienen efecto en la
determinación.

2.8.2 Interferencias
Materia orgánica disuelta, surfactantes, nitritos cromo hexavalente (Cr 6+) interfieren. Varios iones
inorgánicos no encontrados normalmente en aguas naturales como cloritos y cloratos pueden
interferir. Sustancias inorgánicas pueden compensarse por análisis independiente de sus
concentraciones y la preparación de curvas individuales de corrección.

2.8.3 Equipos
Espectrofotómetro para uso en rango ultravioleta a 220 nm y 275 nm con celdas pareadas de silica
o cuarzo de 1 cm de paso de luz.

2.8.4 Reactivos
 Agua libre de nitratos: utilice agua desionizada, redistalada o destilada, de la más alta
pureza para preparar todas las soluciones y diluciones.
 Solución stock de nitratos: Secar Nitrato de potasio (KNO3) en un horno a 105°C por 24
horas. Disuelva 0.7218 g en agua y diluya a 1000 mL; 1.00 mL = 100 g NO3- - N.
Preserve con 2 mL de cloroformo por litro. Esta solución es estable por al menos 6 meses.
 Solución intermedia de nitratos: Diluya 100 mL de solución stock de nitratos a 1000 mL
con agua; 1.00 mL = 10 g NO3- - N.
 Solución de ácido clorhídrico 1 N HCl.

PAG 2.29
2.8.5 Procedimiento
1. Tratamiento de la muestra: a 50 mL de muestra clara, filtrada si es necesario, agregue 1 mL de
solución de HCl y mezcle completamente.
2. Preparación de la curva estándar: Prepare estándares de calibración en el rango de 0 a 7 mg
NO3- - N/L por dilución a 50 mL de los siguientes volúmenes de solución intermedia de
nitratos: 0 – 1.00 – 2.00 – 4.00 – 7.00 - ..... – 35.0 mL. Trate los estándares de nitratos en la
misma manera como las muestras.
3. Medida espectrofotométrica: Lea absorbancia o transmitancia contra agua redistilada fijada a
cero absorbancia o 100% transmitancia. Use una longitud de onda de 220 nm para obtener
lecturas de nitratos y un longitud de onda de 275 nm para determinar la interferencia debida a
materia orgánica disuelta.

2.8.6 Cálculos
Para muestras y estándares, sustraiga 2 veces la lectura de absorbancia a 275 nm de la lectura de
220 nm para obtener la absorbancia debida a nitratos. Construya una curva estándar graficando
absorbancia debida a nitratos contra la concentración de nitratos del estándar. Usando las
absorbancia corregidas de muestra, obtenga las concentraciones de muestra directamente de la
curva estándar. Nota: Si el valor de corrección es más del 10% de la lectura a 220 nm, no use este
método.

2.8.7 Referencia bibliográfica del procedimiento

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 20 th Edition: Lenore Clesceri, Arnold
Greenberg, Andrew Eaton. pag. 4-115. Método 4500 - NO3- B. ¨Ultraviolet Spectrophotometric Screening
Method¨.

Fecha de Revisión última: 31 may. 06

PAG 2.30
PAG 2.31
2.9 FOSFATO Soluble ( A. VANADOMOLIBDOFOSFORICO)
METODO: ACIDO VANADOMOLIBDOFOSFORICO

2.9.1 EQUIPO

Espectrofotómetro para uso a 400 - 490 nm

Material de vidrio lavado al ácido: Para determinar concentraciones bajas de fósforo úsese material
de vidrio lavado con ácido. Evitese el uso de detergentes que contengan fosfato. Lávese todo el
material de vidrio con Hcl diluido caliente y aclárese bien con agua destilada.

2.9.2 REACTIVOS
 Pretratamiento: Se debe filtrar la muestra previamente usando filtros de membrana de 0.45 m.
 Acido clorhídrico 1 + 1: Se recomienda una concentración final en muestra 0.5N.
 Reactivo vanadato-molibdato: Disuélvanse 25 g de molibdato amónico, (NH4)6Mo7O24 4H2O en
300 ml de agua destilada.
 Disuélvanse 1.25 g de metavanadato de amonio NH4VO3 calentando hasta ebullición en 300 ml de
agua destilada. Enfríese y agréguese 330 ml de Hcl concentrado. Enfríese la solución B a
temperatura ambiente, viértase la solución A sobre la B y dilúyase a 1 litro.
 Sol patrón de fosfato: disolver 219.5 mg de KH2PO4 anhidro en agua destilada y diluir a 1000 ml;
1 ml = 50 g de PO4-3 - P.

2.9.3 PROCEDIMIENTO

Ajuste el ph de la muestra: Si el ph de la muestra es mayor de 10, añadir 0.05 ml (una gota) de


indicador de fenolftaleína a 50 ml de muestra y decolorar el color rojo con a. clorhídrico 1+1 antes
de diluir a 100 ml.
Desarrollo del color: Poner 35 ml de muestra en un matraz aforado de 50 ml. Agregar 10 ml de
reactivo de vanadato-molibdato y diluir hasta la marca con agua destilada. Preparar un blanco con
35 ml de agua destilada en lugar de la muestra. Al cabo de 10 minutos o más, medir la
absorbancia de la muestra frente a un blanco a longitud de onda de 400 a 490 nm. ver tabla abajo.

RANGO DE P, mg/l longitud de


onda, nm
1-5 400
2 - 10 420
4 - 18 470

3- Correr una curva de calibración efectuando una regresión lineal sobre los datos de
absorbancia vs concentración de estandares.

PAG 2.32
2.10 COMPUESTOS FENOLICOS (4-AMINOANTIPIRINA)
METODO: 4-AMINOANTIPIRINA

2.10.1 APARATOS Y CRISTALERIA

 Espectrofotómetro para usarse a 460 nm


 pH-metro
 Cronómetro
 Balón de 1000 ml con cuello lateral provisto de condensador
 Erlenmeyer de 400 ml graduado
 Probeta de 300 ó 500 ml
 Calentador amiantado (manta de calentamiento)
 Pipetas vd. de 20 ml y 3 ml
 Embudo de separación de 500 ml
 Balón de 25 ml
 Embudo de vidrio
 Algodón lavado con hexano

2.10.2 REACTIVOS

 Solución BUFER (pH = 9.5): Disolver 5.14 g de cloruro de amonio (NH4cl) en 280 ml de
agua, adicionar con agitación 20 ml de amoníaco (30 %) y aforar a 300 ml. Estable lo
más por tres meses, botella plástica.

 AMINOANTIPIRINA (0.006 M) Disolver 1.20 g de Aminoantipirina (C3H3N3O) en 100


ml con agua destilada desgasificada. Estable lo más por 1 semana a 4 o C.

 FERRICIANURO DE POTASIO (0.015 M) Disolver 4.8 g de Ferricianuro de potasio


(K3Fe(CN)6 en 100 ml de agua destilada desgasificada. Descompone por exposición a la
luz (utilizar frasco oscuro). Estable a lo más una semana.

 CLOROFORMO CCl3H

 CRISTALES DE SULFATO DE SODIO (Na2SO4) secado a 105oC.

 FENOL (PARA CURVA DE CALIBRACION) Disolver 1000 mg (1g) en un litro


como solución madre. Mantener refrigerado.

 HIDROXIDO DE SODIO AL 50 %.

2.10.3 MUESTREO

PAG 2.33
Tomar muestra en botella de vidrio ambar. Preservar con 2 ml de ácido sulfúrico conc. (H 2SO4)
por cada litro de muestra. Almacenar máximo por 28 días a 4oC.

PAG 2.34
2.10.4 PROCEDIMIENTO

 Medir 300 ml de agua y verterlo en un beaker de 400 ml.

 Ajustar el pH a 4.5 - 5 goteando hidróxido de sodio (NaoH. 50 %), incluyendo el blanco.

 Adicionar la muestra en un balón de codo lateral , utilizando un embudo de vidrio,


provisto de condensador.

 Destilar aproximadamente 250 ml, recolectándolo en un erlenmeyer graduado de 400 ml.

 Agregar al balón 50 ml de agua destilada precalentada y destilar nuevamente hasta ajustar


los 300 ml. Dejar enfriar a Temperatura ambiente.

 Preparar dos embudos de separación (500 ml) para la muestra y el blanco.

 Adicionar:

- 20 ml de buffer amoníaco - cloruro de amonio


- 3 ml de amino antipirina
- 3 ml de ferrocianuro potásico

 Agitar rápidamente y dejar reaccionar durante 5 minutos.

 Extraer con:

- 10 ml de cloroformo agitando durante un minuto y recolectar la capa


clorofórmica en un balón de 25 ml provisto de embudo con sulfato de sodio y
algodón.

- Repetir “a” con 10 ml de cloroformo

- Repetir “a” con 5 ml de cloroformo y agitar por ½ minuto.

 Aforar a 25 ml con cloroformo.

 Leer las muestras en el espectrofotómetro a 460 nm, utilizando como blanco cloroformo.

 Repetir desde el paso 6 para realizar la curva de calibración de fenol, utilizando


estandares con concentraciones de 1, 5, 10 ug/l. Partir de una solución madre de 1000
mg/l a 10 mg/l y luego a los standares.

 De la curva de calibración de los estandares obtener la concentración de las muestras.

PAG 3.35
3. METODOS DE ANALISIS POTENCIOMETRICOS

3.1 PH

3.1.1 EQUIPOS

 pH metro: Se sugiere el modelo 320 CORNING, el cual provee lectura digital de pH, mV
y oC. Posee una resolución de 0.01 pH.
 Electrodo 3 en 1 (pH/referencia/temperatura): Este electrodo se suministra con el equipo
detallado anteriormente.
 Agitador Corning PC 320
 Magnetos
 Varilla para recuperar magnetos

3.1.2 REACTIVOS

 Solucion bufer pH 7.00: Esta solución generalmente se adquiere a través de catálogos. En


caso de no contarse con ella, pero sí se tienen los reactivos, puede prepararse una solución
pH 6.86 a 25oC de la siguiente manera: se pesan 3.533 g de fosfato de sodio dibásico
Na2HPO4 y 3.387 g de fosfato de potasio monobásico (KH2PO4), ambos previamente
secados entre 110 y 130oC durante 2 horas. Se disuelven ambos en 300 ml de agua
destilada, se transfieren a un frasco volumétrico de 1000 ml y se diluyen a la marca con
agua destilada.

 Solución bufer pH 4.01: Se prepara pesando 10.12 g de biftalato de potasio (KHC 8H4O4),
se disuelve en 300 ml de agua destilada, se transfiere la solución a un frasco volumétrico
de 1000 ml y se diluye a la marca.

 Solución bufer pH 9.18 a 25oC: Se pesan 3.8 g de borato de sodio decahidratado (llamado
también borax) (Na2B4O7 10H2O) , disolver en 300 ml de agua destilada, transferir a un
frasco volumétrico de 1000 ml y diluir a la marca.

3.1.3 PROCEDIMIENTO DE CALIBRACION DEL PH METRO:

Para calibrar un medidor de pH se siguen las instrucciones dadas por el fabricante para cada tipo
de equipo en particular.

PAG 3.36
En general, se sigue el siguiente procedimiento:
 Antes de usar un electrodo, retirarlo de la solución en la que estaba almacenado, lavarlo y secarlo
con un papel suave.

 Seleccionar dos soluciones buffer de referencia, una de pH 7 y la otra para el ajuste de la pendiente,
de preferencia dentro de 2 unidades de ph reprecto al pH, con relación al pH de la muestra
problema.

 Colocar sobre el agitador el primer vaso con el buffer 7. Sumergir el o los electrodos. Seguir
instrucciones del fabricante, ajustar al valor de la solución buffer.

Repetir la medición con la solución buffer hasta obtener 2 lecturas sucesivas que no deben diferir
en másde 0.02 unidades de pH del valor del buffer correspondiente.

 Retirar los electrodos del primer buffer , lavar 3 veces cn agua destilada, secar y sumergir en el
segundo buffer en agitación. Registrar la temfperatura a la cual se realiza la medición. Ajustar con
el dispositivo de compensación de temperatura hasta que el medidor indique el valor de pH del
buffer a la temperatura de la medición (esto es ajuste de pendiente).

 Retirar los electrodos del segundo buffer, lavarlos y secarlos.

 El o los electrodos están listos para su uso.

3.1.4 OBSERVACIONES

Si ocasionalmente se realizan mediciones, estandarizar el equipo cada vez que se use.


Cuando se realice una serie de mediciones de pH, chequear lal estandarización a intervalos
regulares.
En mediciones de alta precisión, la solución buffer debe estar dentro de 1 a 2 unidades de pH del
valor de la muestra problema. Asimismo, la temperatura del buffer debe estar dentro de 10oC de la
temperatura de la muestra problema
Mantener los electrodos sumergidos en una solución adecuada cuando no están en uso,
generalmente es buffer 7.
Los electrodos de vidrio reaccionan muy rápidamente en solucifones fuertemente amortiguadas.
Sin embargo en soluciones débilmente amortiguadas es difícil obtener lecturas exactas,
particularmente al cambiar de soluciones amortiguadas a no amortiguadas, como ocurre después de
la estandarización. Las muestras, sobre todo las poco amortiguadas, deben ser agitadas durante la
medición.

PAG 3.37
3.2 CONDUCTIVIDAD ELECTRICA

3.2.1 EQUIPOS Y REACTIVOS

Conductivímetro digital: Se recomienda el modelo 1054 VWR. Este equipo posee 6 rangos.
También es factible el conductivímetro portátil modelo 2052 VWR.
Celdas de conductivímetro
REACTIVOS

Solución estandar de Kcl 0.0100 M: Disolver 745.6 mg de cloruro de potasio anhidroen agua grado
reactivo y diluir a 1000 ml en un balón aforado clase A a 25oC. Esta solución tiene una
conductividad de 1412 umhos/cm. Es satisfactoria para la mayoría de muestras cuando la celda
tiene una constante entre 1 y 2 cm-1.

3.2.2 PROCEDIMIENTO DE CALIBRACION

 Enjuague la celda con al menos tres porciones de solucion de KCl 0.0100 M. Ajustar la
temperatura de la cuarta porción a 25 +/- 0.1 oC.
 Los conductivímetros generalmente dan el valor directamente. Verifique la lectura del
equipo y ajuste mediante el botón de estandarización el valor de la conductividad de la
solución la cual es 1412 umhos/cm.

3.2.3 MEDICION DE LA CONDUCTIVIDAD

 Enjuague la celda con uno o más porciones de muestra. Ajuste la temperatura de la


porción final a 25oC. Proceda a introducir la celda y lea el valor.
 El coeficiente de temperatura en la mayoría de las aguas es aproximadamente el mismo al
de la solución estandar de Kcl, entre más se desvía la temperatura de la muestra de 25oC,
más grande será la incertidumbre de aplicar la corrección de temperatura.
 Reporte todas la conductividades a 25oC.

PAG 3.38
3.3 NITRATOS (METODO DEL ELECTRODO ION SELECTIVO)

3.3.1 EQUIPOS

 pH metro, escala expandida o digital, con 0.1 mV de resolución. Se sugiere considerar el


Medidor pH/mV Corning modelo 320 cuyo # Corning es 475817, o bien el Analizador de
iones Corning Modelo 355 o 455.

 Electrodo de referencia doble unión. Rellenar la cámara exterior con solución de


(NH4)2SO4 1 M.

 Electrodo sensor de nitrato. Alternativamente puede escogerse un electrodo de


combinación para nitrato tal como el Corning No. 476137. Nota: para poner a punto los
electrodos, tanto el de referencia como el ion selectivo, deben seguirse los consejos que da
el fabricante los cuales vienen en manuales.

 Agitador Corning PC 320 o sustituto.

 Magnetos

3.3.2 REACTIVOS

 Sol madre de nitratos: Secar KNO3 en un horno a 105°C por 24 horas. Disolver 0.7218 g
en agua y diluir a 1000 ml; 1 ml = 100 g NO3- - N. Preserve con 2 ml de CHCl3/ L. Esta
solución es estable por al menos 6 meses.
 Sol de relleno del electrodo de referencia (NH4)2SO4 1 M. Disuelva 13.215 g de
(NH4)2SO4 en agua y diluya a 100 ml.
 Solución bufer: Prepare una solución 2 M de (NH4)2SO4 mezclando 264.3 g de Sulfato de
Amonio, (NH4)2SO4, en 1 litro de Agua dest.
 Solución Bufer que elimina interferencias: Disolver 17.32 gramos de Sulfato de Aluminio
18 hidrato, 3.43 gramos de Sulfato de plata, 1.28 gramos de Acido Bórico y 2.52 de ácido
sulfámico en 800 ml de Agua destilada. Ajustar a pH 3 adicionando hidróxido de sodio
entre 0.1 y 1 N. Aforar hasta 1000 ml.
 Solución de NaOH 1 N: Disolver 40 gramos de perlas de NaOH en 1 litro de agua
destilada.

3.3.3 PROCEDIMIENTO:

 Se deben preparar tres standares con concentraciones de 6.2, 62 y 620 mg/l de NO 3-.
Tanto el volumen de las muestras como de los estandares deben ser los mismos, midiendo
en cada caso 100 ml utilizando una pipeta volumétrica. En caso de utilizar un pHmetro
de escala expandida con lectura de mV se debe efectuar una curva de calibración,

PAG 3.39
colocando los estandares en un beaker sobre el agitador, introduciendo los magnetos y
colocando la celda de nitratos (electrodo de nitratos y el de referencia) bajo la superficie
de los estandares. Si el equipo no posee compensación automática de temperatura,
debe leerse la temperatura de los estandares y compensarse manualmente.

 Agregar 2 ml de solución bufer 2 M de (NH4)2SO4 o 5 ml de Bufer que elimina


interferencias.

 Debe iniciarse el proceso de calibración con el standard más bajo, la agitación debe ser
constante y no muy violenta. Después de asegurarse que el medidor está en el modo de
mV ( o modo Concentración si utiliza el Analizador de iones Corning Modelo 355 o 455),
baje las puntas de los electrodos en la solución. Después que la lectura se ha estabilizado,
registre la lectura en mV.

 Continuar luego con el standard intermedio, para lo cual enjuáguense los electrodos con
agua destilada, séquense suavemente con un paño y sumérjanse en la solución. Cuando la
lectura se ha estabilizado, registrar los mV.

 Proceder de igual manera con el estandar más alto, registrando el valor de mV.

 Usando un papel semi logarítmico, graficar la lectura de mV en el eje de las „y‟ y la


concentración en el eje x (eje log). O bien graficar en un papel milimetrado mV vs log
concentracion de nitratos.

 Las muestras se ejecutan de igual forma que los standares, cuidando que la temperatura de
éstos últimos sea la misma que aquéllas.

 Después de finalizado el trabajo, el electrodo de referencia debe ser guardado en solucion


de (NH4)2SO4 1 M, en tanto el electrodo selectivo de nitratos, en el standar más bajo,
generalmente 10 mg/l de NO3.

PAG 3.40
3.4 POTASIO (METODO ELECTRODO ION SELECTIVO)

3.4.1 EQUIPOS

 pH metro, escala expandida o digital, con 0.1 mV de resolución. Se sugiere considerar el


Medidor pH/mV Corning modelo 320 cuyo # Corning es 475817.
 Electrodo de referencia doble unión. Rellenar la cámara exterior con solución de NaCl 1
M eliminando la solución de fábrica que contiene KNO3 1 M.
 Electrodo sensor de potasio. Nota: para poner a punto los electrodos, tanto el de referencia
como el ion selectivo, deben seguirse los consejos que da el fabricante los cuales vienen en
manuales.
 Agitador Corning PC 320 o sustituto.
 Magnetos

3.4.2 REACTIVOS

 Soluciones standar de cloruro de potasio, 0.1 M.


 Solución bufer de NaCl 2 M.
 Solución de relleno del electrodo de referencia NaCl 1 M.

3.4.3 PROCEDIMIENTO DE ANALISIS

 Efectuar la curva de calibración con 3 standares de 1, 5 y 10 mg/l de potasio K +.

 Siempre se deben medir los estandares y las muestras a la misma temperatura, un


1°C de diferencia en temperatura puede producir un 2% de error en la medición. De lo
contrario debe efectuarse compensación de temperatura manual o automática, según sea
aplicable.

 Medir 100 ml de estandar más bajo con una pipeta volumétrica, verterlo en un beaker,
aplicar agitación constante y a baja revolución, agregar 2 ml de bufer de cloruro de sodio
2 M, registrar la lectura en mV. De igual forma proceder con el standar más alto y luego
con el intermedio.

 Antes de cada lectura las puntas de los electrodos deben enjuagarse con agua destilada y
secarse con un paño. Las muestras deben ser tratadas de la misma forma que los
estandares.

 Para construir la curva de calibración, debe usarse un papel semilog de 4 ciclos, con la
concentración en mg/l ploteados en el eje log y los mV en el eje lineal.

 El electrodo de referencia debe ser almacenado en sol de NaCl 1 M y el electrodo selectivo


de potasio en la solución estandar de potasio más baja.

PAG 3.41
PAG 3.42
3.5 SODIO (METODO DEL ELECTRODO ION SELECTIVO)

3.5.1 EQUIPOS

 pH metro, escala expandida o digital, con 0.1 mV de resolución. Se sugiere considerar el


Medidor pH/mV Corning modelo 320 cuyo # Corning es 475817.
 Electrodo de combinación de sodio codigo CORNING 476138, o similar. Nota: para poner
a punto el electrodo deben seguirse los consejos que da el fabricante los cuales vienen en
manuales del usuario
 Agitador Corning PC 320 o sustituto.
 Magnetos

3.5.2 REACTIVOS

 Soluciones standar de cloruro de sodio, 1000 mg/l


 Solución bufer de Trietanolamina 0.5 M (33.3 ml de Trietanolamina en 500 ml) y 3%
NH4OH en proporción 1:1.

3.5.3 PROCEDIMIENTO DE ANALISIS

 Efectuar la curva de calibración con 3 standares de 1, 10, 100 mg/l de Na +.

 Siempre se deben medir los estandares y las muestras a la misma temperatura, un


1°C de diferencia en temperatura puede producir un 2% de error en la medición. De lo
contrario debe efectuarse compensación de temperatura manual o automática, según sea
aplicable.

 Medir 100 ml de estandar más bajo con una pipeta volumétrica, verterlo en un beaker,
aplicar agitación constante y a baja revolución, agregar 2 ml de bufer TEA+NH4OH,
registrar la lectura en mV. De igual forma proceder con el standar más alto y luego con el
intermedio.

 Antes de cada lectura las puntas de los electrodos deben enjuagarse con agua destilada
solamente. Las muestras deben ser tratadas de la misma forma que los estandares.

 Para construir la curva de calibración, debe usarse un papel semilog de 4 ciclos, con la
concentración en mg/l ploteados en el eje X -log y los mV en el eje lineal.

 El electrodo de combinación debe ser almacenado en una solución del estandar más bajo,
por ejemplo 1 mg/l de Na+.

 La pendiente de la curva de calibración debe estar entre +50 y 60 mV.

 El electrodo debe rellenarse en caso necesario con solución de Kcl saturado. Para su
mantenimiento deben seguirse los consejos que da el fabricante, principalmente en lo que

PAG 3.43
respecta a no dejar secar la punta del electrodo, la cual siempre debe estar húmeda. Para
ponerlo a punto de análisis, el electrodo debe sumerjirse por 18 horas en solución bufer y
solución standard de 100 mg/l de Na+ 1:1 antes de usarse.

 Al finalizar los análisis, el electrodo de Referencia debe almacenarse en solución Bufer de


Trietanolamina.

3.6 TURBIEDAD (METODO NEFELOMETRICO)

3.6.1 EQUIPO

Turbidímetro: Se sugiere el turbidímetro HACH 2100N, o en su defecto, el modelo anterior el


2100A.

3.6.2 PROCEDIMIENTO:

 Calibración del equipo: se deben seguir las instrucciones que da el fabricante. Asegúrese que el
turbidímetro da lecturas estables en todos los rangos de sensibilidad usados. Altas turbideces
determinadas por medición directa son probables a diferir apreciablemente de aquellas
determinadas por la técnica de dilución.

 Medidas de turbidez menores a 40 NTU: Agite completamente la muestra, espere hasta que las
burbujas de aire desaparezcan y vierta la muestra en el tubo del turbidímetro. Lea la turbidez
directamente en la escala del instrumento.

 Medidas de turbidez mayores a 40 NTU: Diluya la muestra con uno o más volúmenes de agua libre
de turbidez hasta que este valor caiga entre 30 y 40 NTU. Compute la turbidez de la muestra
original a partir de la muestra diluida y el factor de dilución. Por ejemplo si 5 volúmenes de agua
libre de turbidez fueron agregados a un volumen de muestra y la muestra diluida mostró un
turbidad de 30 NTU, entonces la turbidez de la muestra original es 180 NTU.

PAG 3.44
4. METODOS DE ANALISIS PARA DEMANDAS

4.1 DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (ENSAYO DE 5 DIAS) [DBO5]

4.1.1 EQUIPOS
 Botellas de incubación: capacidad de 300 ml, deben limpiarse con detergente, enjuagarse
completamente y drenarse ante de usarse.
 Incubadora o Baño María: debe estar controlada termostáticamente a 20 +/- 1oC. Se debe
excluir toda luz solar para prevenir la posibilidad de producción fotosintética de oxígeno
disuelto.

4.1.2 REACTIVOS

 Solución bufer de fostato: disuelva 8.5 g de KH2PO4, 21.75 g K2HPO4, 33.4 g


Na2HPO47H2O y 1.7 g NH4Cl en cerca de 500 ml de agua destilada y diluir a 1 L. El ph
debe ser 7.2 sin ajuste.
 Solución de sulfato de magnesio: disolver 22.5 g de MgSO47H2O en agua destilada y
diluir a 1 L.
 Solución de cloruro de calcio: disolver 27.5 g de CaCl2 en agua destilada y diluir a 1 L.
 Solución de cloruro férrico: disolver 0.25 g de FeCl3 6H2O en agua destilada y diluir a 1
L.
 Soluciones ácidas y alcalinas 1 N para neutralización de muestras ácidas o básicas.
 Acida: Lentamente y con agitación agregue 28 ml de ácido sulfúrico concentrado al agua
destilada. Diluir a 1 L.
 Básica: disolver 40 g de hidróxido de sodio en agua destilada, diluir a 1 L.
 Solución de sulfito de sodio: disolver 1.575 g de Na2SO3 en 1000 ml de agua.Preparar
diariamente.

4.1.3 PROCEDIMIENTO

Preparación del agua de dilución: Coloque el volumen deseado de agua en una botella y agregue 1
ml de solución bufer de fosfato, sulfato de magnesio, cloruro de calcio y cloruro férrico por cada
litro utilizado. Antes de usarse el agua de dilución, llévele a 20oC y satúrela con oxígeno por
aeración con aire libre de compuestos orgánicos.

TECNICA DE DILUCION

Las diluciones que resultan en un OD residual de al menos 1 mg/L y un cambio de OD de al


menos 2 mg/l al final de 5 días de incubación producen los resultados más confiables. Se pueden
usar las siguientes diluciones: 0.0 a 1.0% para residuos industriales fuertes, 1 a 5% para aguas
residuales sedimentadas o crudas, 5 a 25 % para efluentes tratados biológicamente, y 25 a
100 % para aguas de rios contaminados.

PAG 4.45
Prepare diluciones en cilindros graduados y transfiéralos a botellas de DBO o prepárelas
directamente en las botellas.

DILUCIONES PREPARADAS DIRECTAMENTE EN BOTELLAS DE DBO

Usar pipeta volumétrica de pico ancho, agregar el volumen deseado a las botellas de DBO
individuales de capacidad conocida, agregar cantidades apropiadas de material semilla a las
botellas de DBO individuales o al agua de dilución (se inocula con semilla en caso de que el agua
esté altamente contaminada con material tóxico).
Llene las botellas con suficiente agua de dilución, inocúlelas con semilla en caso necesario, de tal
forma que la inserción del tapón desplace todo el aire, no dejando burbujas.
Para diluciones mayores que 1:100 haga la dilución primaria en un cilindro graduado ante de hacer
la dilución final en la botella. Si usa el método iodométrico para medir el OD , prepare dos
botellas en cada dilución. Determine el OD inicial en una botella. Tape la segunda botella
fuertemente, selle con agua, e incube por 5 días a 20oC. Si se usa el método del electrodo de
membrana para medir el OD, prepare solamente una botella de OD para cada dilución. Determine
el OD inicial en esta botella y reemplace cualquier contenido desplazado con agua de dilución
hasta llenar la botella. Tape firmemente, selle con agua, e incube a 20oC por 5 días. Enjuague el
electrodo OD entre determinaciones para prevenir contaminación cruzada de las muestras.

DETERMINACION INICIAL DE OD

Si la muestra contiene materiales que reaccionan rápidamente con OD, determine el OD inicial
inmediatamente después de llenar fla botella de DBO con muestra diluida. Si el cambio inicial de
OD es insignificante, el período entre preparar dilución y medir el OD inicial no es crítico.

Use la modificación azida del método iodométrico o el método del electrodo de membrana para
determinar el OD inicial en todas las diluciones de muestras, blancos de agua de dilución y control
inoculados con semilla cuando sea apropiado.

BLANCO DE AGUA DE DILUCION

Use el blanco de agua de dilución como un chequeo aproximado de la calidad del agua de dilución
no inocoluda con semilla y del limpieza de las botellas de incubación. Junto a cada tanda de
muestras incube una botella de agua de dilución on inoculada. Determine el OD inicial y final tal
como se explicó en el apartado anterior. El cambio de OD no debe ser mayor que 0.2 mg/l y
preferiblemente no más de 0.1 mg/L.
INCUBACION

Incube a 20o +/- 1 oC en botellas de DBO que contengan diluciones deseadas, controles con
siembra (inoculadas), blancos de agua de dilución y chequeos con glucosa -ácido glutámico. Selle
con agua las botellas.
DETERMINACION DEL OD FINAL

Después de 5 días de incubación determine el oxígeno disuelto en muestras diluidas y blancos.


CALCULO

PAG 4.46
Cuando el agua de dilución no ha sido sembrada o inoculada.
DBO5 , MG/L = (D1 - D2)/P

DONDE
D1 : OD de la muestra diluida inmediatamente después de la preparación, mg/L
D2 : OD de la muestra diluida después de 5 días de incubación a 20 C , mg/L
P : Fracción volumétrica decimal de la muestra usada

Si más de una muestra diluida cumple con los criterios de un residual de OD de al menos 1 mg/L y
un decremento de OD de al menos 2 mg/l y no hay evidencia de toxicidad en la concentración de
muestra más alta o la existencia de una anomalía obvia, promedie los resultados en un rango
aceptable.

PAG 4.47
4.2 DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO
METODO DEL REFLUJO ABIERTO

EQUIPOS

o Aparato de reflujo: Se sugiere el uso de erlenmeyers de 500 o 250 ml con cuello


24/40 vidrio esmerilado ( Corning 5000 o equivalente), y el condensador con
juntura de vidrio esmerilado 24/40.
o Plato caliente: de suficiente potencia que produzca al menos 1.4 W/cm 2 de
superficie de calentamiento.
o En caso de usarse balones fondo redondo, deben usarse mantas de calentamiento.

REACTIVOS

A. Solución estandar de dicromato de potasio 0.0417M :disolver 12.259 g de K2Cr2O7, grado


estandar primario previamente secado a 103 C por 2 horas en agua destilada y diluido a 1 L.

B. Reactivo de Acido Sulfúrico: Agregar Ag2SO4 grado técnico o reactivo, en cristales o


polvo al ácido sulfúrico concentrado en la proporción de 5.5 g de Ag 2SO4 por Kg de H2SO4 . Deje
reposar por 1 a 2 días hasta que se disuelva el Ag2SO4.

C. Solución indicadora de Ferroín: Disolver 1.485 g de 1,10-fenantrolina monohidrato y 695


mg de FeSO4 7H2O en agua destilada y diluir a 100 ml.

D. Solución estandar de FAS (Sulfato amonical ferroso) como titulante, de aproximadamente


0.25M: Disolver 98 g de Fe(NH4)2(SO4)2 6H2O en agua destilada. Agregar 20 ml de ácido sulfúrico
concentrado, enfríe y diluya a 1000 ml. Estandarice esta solución diariamente contra solución
standard de K2Cr2O7 de la siguiente forma:

Diluya 10 ml de standard K2Cr2O7 en aproximadamente 100 ml. Agregue 30 ml de H2SO4 conc y


enfríe. Titule con FAS usando 0.1 0.15 mL (2 a 3 gotas) de indicador de ferroín.

Normalidad de la solucion de FAS:

= Volumen de sol K2Cr2O7 0.0417titulado, mL/ volumen FAS usado, mL * 0.25

E. Sulfato de Mercurio: cristales HgSO4.

F. Acido Sulfámico: Sólo si se deben remover interferencias por nitritos.

G. Standard de ftalato de hidrógeno y potasio: Ligeramente morteree y seque el ftalato de


hidrógeno y potasio (HOOCC6H4COOK) a peso constante de 120 C. Disuelva 425 mg en agua
destilada y diluya a 1000 ml. KHP tiene un COD teórico de 1.176 mg O2/mg y esta solución tiene
un COD teórico de 500 uG O2/ mL.Esta solución es estable cuando se refrigera hasta 3 meses en
absencia de crecimiento biológico visible.

PAG 4.48
PROCEDIMIENTO:

1. Tratamiento de muestras con COD>50 O2/L: Coloque 50 ml de muestra ( para muestras


con COD de >900 mg/L, use una porción de muestra más pequeña diluida a 50 ml) en un balón de
reflujo de 500 ml. Agregue 1 g de HgSO4 , varios pedacitos de vidrio, y muy lentamente agregue 5
ml del reactivo de acido sulfúrico con agitación para disolver elHgSO4. Enfríe mientras agita para
evitar posible pérdida por materiales volátiles. Agregue 25 ml de K 2Cr2O7 0.0417 M y mezcle.
Pegue el condensador al balón y ponga a funcionar el grifo de agua para enfriamiento. Agregue el
remanente del reactivo de ácido sulfúrico (70 ml) a través de la abertura del condensador.
Continúe agitando mientras se termina de agregar el reactivo de a. sulfúrico.

Cubra la parte abierta del condensador en el extremo superior con un pequeño beaker para prevenir
que material foráneo entre a la mezcla en reflujo y reflujar por 2 horas. Enfríe y lave el
condensador con agua destilada. Desconecte el condensador de reflujo y diluya la mezcla
alrededor 2 veces su volumen con agua destilada. Enfríe a temperatura ambiente y titule el exceso
de K2Cr2O7 con FAS, usando 0.1 a 0.15 ml de indicador ferroín. Aunque la cantidad de ferroín no
es crítico, use el mismo volumen para todas las titulaciones. Tome como punto final de vire el
primer cambio de color de azul verdoso a cafe rojizo. El verde zul puede reaparecer. En la misma
forma, refluje un blanco que contenga los reactivos y un volumen de agua destilada igual al de la
muestra.

DETERMINACION DE LA SOLUCION ESTANDAR:

Evalúe la técnica y la calidad de los reactivos por medio de una prueba de un standard de ftalato de
hidrógeno potásico.
CALCULO
COD como mg O2/L = (A - B) x M x 8000/ mL muestra

donde A = mL FAS usado para el blanco


B = mL FAS usado para la muestra
molaridad del FAS

PAG 4.49
5. METODOS DE ANALISIS BACTERIOLOGICOS

5.1 COLIFORMES FECALES - Métodos de Tubos Múltiples

PREPARACION DE REACTIVOS

a- AGUA DE DILUCION:

PATRONES

1. Disuelva 34 gr. de potasio dihidrogeno fosfato, en 500 ml. de agua destilada, ajuste el
pH a 7.2 con hidróxido de sodio 1 N. y diluya a un litro con agua destilada.

2. Disolver 50 g de MgSO4 7H2O en 1000 ml.

SOLUCION STOCK

Adicione 1.25 ml. de Stock buffer fosfato y 5.0 ml. de sulfato de magnesio a un litro de
agua destilada. De esta solución stock se toman 9.5 ml y se vierten en frascos con tapón de vidrio
y se esterilizan en autoclave (15 psi, 15 min, 121oC).

b- CALDO LACTOSADO:

Disuelva 13 g. de caldo lactosado en un litro de agua destilada. Coloque 10 ml.


en tubos de ensayo e inserte tubos DURHAM, INVERTIDOS, tape la boca del tubo de ensayo con
algodón. Esterilice en autoclave ( 15 min. a 121 oC ). Enfríe los tubos a temperatura ambiente y
guárdeles en refrigeración.

c- VERDE BRILLANTE CON BILIS DE BUEY.

Disuelva 40 gr. en un litro de agua destilada, coloque 10 ml. en tubos de ensayo e inserte tubos
DURHAM invertidos, tape los tubos de ensayo con algodón.

Esterilice en autoclave (15 minutos a 121oC) enfríe y luego guarde en refrigeración.

SIEMBRA DE MUESTRAS

Se toman 8 a 6 frasquitos con agua de dilución (entrada y salida respectivamente).


Se agita la muestra y se toma 1 ml con una pipeta esterilizada y se vierte al 1er frasquito, se agita
por inversión ( como mínimo 6 veces) y de este se toma 1 ml y se pasa al siguiente frasquito
usando otra pipeta esterilizada, así sucesivamente y en los últimos 4 frasquitos, se toman 6 ml para

PAG 5.50
agregar 1 ml a cada tubo de ensayo de la 1er serie de 5 y 1 ml al siguiente frasquito hasta llegar al
último, del cual se toman 5 ml.

PROCEDIMIENTO: - A - ( PRUEBA PRESUNTIVA )

a) Seleccionar en una gradilla bacteriológica 15 tubos de ensayo, esterilizados conteniendo


caldo lactosado.
b) Disponerlos en tres series:
5 tubos para sembrar 10-5 ml de muestra
5 tubos para sembrar 10-6 ml. de muestra
5 tubos para sembrar 10-7 ml. de muestra.
5 tubos para sembrar 10-8 ml. de muestra

c) Agitar cada uno de los tubos por 25 veces, e incubarlos durante 24 horas a 37 oC.
d) Tomar nota de los tubos positivos al cabo de 24 horas y sólo los tubos positivos se les
somete a la prueba confirmativa.

Si al cabo de 24 horas no hay tubos positivos, entonces se dejan los tubos en incubación otras 24
horas.

Si a las 48 horas hay tubos positivos, se les practica la prueba confirmativa.

PROCEDIMIENTO: - B - ( PRUEBA CONFIRMATIVA )

Esterilizar en la llama del mechero de BUNSEN la lupa de inocular (al rojo vivo).
Introducir ligeramente la lupa de inocular dentro del medio de cultivo que resultó positivo.
Introducirla totalmente en el medio y hacer rotar el tubo suavemente para atrapar las especies
microbiológicas.
Retirar la lupa con la película e introducirla en el medio de verde brillante y hacer rotar el tubo
lentamente.
Agitar los tubos unas 25 veces.
Incubar por 24 horas y al cabo de los cuales anotar aquellas que resultaran positivas.
Si ninguna resulta positiva, incubar otras 24 horas y luego leer.
Repetir el mismo procedimiento para E.C.

PAG 5.51
5.2 COLIFORMES FECALES - FILTRO DE MEMBRANA

PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO:

Para preparar 1 litro de medio de cultivo, pesar los siguientes reactivos:


71.2 gr de lauril sulfato (BBL)
14 gr de agar técnico # 3
0.2 gr de rojo fenol

Mezclar en un balón aforando a 1 litro con agua destilada, esterilice en autoclave por 15 minutos a
121oC. Enfriar a 45oC y verter en las placas petri aproximadamente 3 ml del medio de cultivo.

PROCEDIMIENTO:

Se esteriliza el sistema de filtración adicionando 1 ml de metanol y flameando en el mechero.

Si se usa el sistema Gelman de plástico, esterilice en Baño María a 100oC por 5 minutos, previoa
cada análisis.

Se coloca el filtro de membrana sobre la pflaca filtrante y se procede a filtrar 100 ml de muestra

Con la pinza se toma la membrana y se coloca sobre la plaquita petri con medio de cultivo y se
incuba a 44oC por 24 horas.

Se cuentan los puntos amarillos y se reportan como # de colonias colifecales /100 ml.

Este método es únicamente para agua con baja contaminación, de fuentes superficiales o
subterráneas, con turbidez menor a 5 UNT. En caso de muestras con turbidez entre 5 y 30 UNT se
filtran 50 ml y el número de colonias detectadas se multiplica por 2.

PAG 5.52
6. BALANCE DE ANIONES Y CATIONES

En un análisis químico completo debe verificarse que la suma de miliequivalentes de aniones es


aproximadamente igual a la suma de miliequivalentes de cationes. Esto se debe a que
normalmente el agua es eléctricamente neutra a menos que existan ciertos fenómenos que
distorsionen esta propiedad.
Normalmente, el balance iónico es más adecuado implementarlo en fuentes subterráneas en vez de
las fuentes superficiales, por cuanto estas últimas presentan diversos componentes químicos que tal
vez no se consideran en un análisis completo.
Para poder realizar el balance iónico se deben efectuar por lo menos los siguientes parámetros:

ANIONES CATIONES
BICARBONATOS SODIO
CARBONATOS CALCIO
CLORUROS MAGNESIO
SULFATOS POTASIO
NITRATOS

% Balance Ionico 
 (Cationes, meq/l) -  (aniones, meq/l) * 100%
 (Cationes,meq / l)  (aniones, meq/l)

El porcentaje de balance iónico se define de la siguiente manera:

Este porcentaje de balance ionico no debe exceder de 10 %, se pueden aceptar valores mayores en
caso que exista sospecha de factores que interfieren en la neutralidad eléctrica del agua que está
siendo examinada.

Por ejemplo, aguas muy aireadas pueden sufrir este tipo de perturbaciones originando que el
porcentaje no encaje dentro de los límites que se han definido.

Para realizar el procedimiento de balance iónico, las concentraciones de los principales parámetros
descritos anteriormente deben ser convertidos a miliequivalentes por litro, para lo cual deben
multiplicarse las concentraciones halladas por los factores de conversión que se presentan en la
tabla de abajo.

Luego se procede a sumar los miliequivalentes por litro de los aniones y de los cationes
procediéndose a aplicar la fórmula del % de balance iónico.

PAG 6.53
A continuación detallamos los factores de conversión de los iones principales:

ION mg/l a milieq. x


litro
HCO3 0.0164
CO3= 0.0333
CL- 0.0282
SO4= 0.0208
NO3- 0.0161
Na+ 0.0435
Ca++ 0.05
K+ 0.0256
Mg++ 0.0826

Este procedimiento es muy conveniente efectuarlo porque provee de una buena herramienta de
análisis para detectar errores analíticos y evaluar la confiabilidad de los análisis.

7. ELABORACION DE CARTAS DE CONTROL

Las cartas de control son de mucha utilidad para determinar si los análisis caen dentro de ciertos
límites fuera de los cuales se puede afirmar que el proceso está fuera de control estadístico. El
objetivo es identificar la influencia de los dos principales tipos de errores: el sistemático y
aleatorio. Se puede afirmar que esta labor es una de las primeras a ser realizadas para instalar un
control de calidad analítico interno (CCA interno).
El primer paso en la confección de este tipo de cartas es asumir los criterios de errores tolerables
del Programa GEMS/AGUA, para el cual si se fija un +/- 20% de error total, se está aceptando un
máximo de error permisible de 5% para cada tipo de error, tanto el alaeatorio como el sistemático.
Las desviación standard para el promedio de análisis duplicados resulta ser 3.6%.
En un primer momento el promedio de los análisis duplicados debe asumirse igual al valor de las
soluciones standard que se escojan para cada parámetro. Dicho sea de paso, estos standares deben
ser valores promedios a los analizados rutinariamente en el laboratorio.

PAG 7.54
Existen dos tipos fundamentales de cartas de control : la carta X (léase X barra) y la D. Para los
fines del presente manual, se considera suficiente con la implementación de la carta X por lo cual
se procederá a identificar los pasos principales para efectuar esta carta:
Escoger un valor de solución patrón ( por ejemplo 10 mg/l de cloruros)
Con este valor ya definido se procede a calcular los limites de advertencia y los límites de control,
tanto superiores como inferiores. La fórmula es la siguiente:

LIMITE DE ADVERTENCIA: 100% +/- 2*3.6%


LIMITE DE CONTROL : 100% +/- 3*3.6%

EJEMPLO
Si se escogió 10 mg/l de cloruros como el valor del standard a ser analizado rutinariamente para
fines de control, el 100 % equivaldrá a 10 mg/l, de igual manera se calcula el 3.6% del valor del
standard. Los límites de advertencia y/o control serán:
Límite Advertencia=10 +/- 2* 0.036*10
Límite Control = 10 +/- 3* 0.036*10
Por lo tanto,
el límite superior de advertencia será : 10 + (2*0.036*10) = 10.72 mg/l
el límite inferior de advertencia será : 10 - (2*0.036*10) = 9.28 mg/l

el límite superior de control será : 10 + (3*0.036*10) = 10.72 mg/l


el límite inferior de control será : 10 - (3*0.036*10) = 9.28 mg/l

De manera rutinaria, es decir cada vez que se efectúe una tanda de muestras, se deben correr
patrones por duplicado y el promedio de estos resultados deben plotearse en la carta de control. Si
se encuentra fuera del límite de control, se procede a detectar la fuente de error y a corregirlo. Un
gráfico de ejemplo se presenta en la página siguiente.

PAG 7.55
8. METODOS DE ANALISIS DE PUREZA DE PRODUCTOS QUIMICOS

ENSAYO PARA DETERMINAR EL CLORO DISPONIBLE EN LA CAL CLORADA Y EN


HIPOCLORITO DE CALCIO

A - REACTIVOS

1: Yoduro de potasio en cristales


2: Solución indicadora de almidón
3: Tiosulfato de sodio 0.1 N
4: Acido acético glacial

B- Cristalería

Bureta de 25 ml (1)
Erlenmeyers de 125 ml (6)
Beakears de 100 ml (3), de 400 ml (3)
Balón aforado de 1 Lt (1), de 500 ml (1), de 100 ml (2)

B- PROCEDIMIENTO

Se colocan 5 gr de cal clorada o hipoclorito de calcio en un mortero no metálico, se humedece con


agua destilada y se tritura hasta que las partículas sean impalpables. Se transfiere a un balón
aforado de 1 litro adicionando agua destilada, en seguida se lleva a volumen y se mezcla.

Se toman 25 ml de la solución del balón aforado de 1 litro y se colocan en un Erlenmeyer de 250


ml, a continuación se adiciona aproximadamente 1 gr de cristales de yoduro de potasio y se
acidifica con más o menos 4 ml de ácido acético glacial. Después se titula con tiosulfato de sodio
0.1 N hasta cuando el color amarillo del yodo tienda a desaparecer. Se adiciona alrededor de 1 ml
de la solución de almidón y se continúa la titulación hasta que el color azul desaparezca
completamente.

CALCULO

(V X N ) DE TIOSULFATO DE SODIO * 40 * 0.03545 * 100 / GRAMOS DE


MUESTRA
= cloro disponible en % en masa

1 ml x N de Tio. de sodio x 28.37 = Cloro disponible en 5 g de muestra, en %

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9. BIBLIOGRAFIA

1) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 18 th Edition, 1992, APHA,
AWWA,WEF.
2) Curso sobre Captación y Análisis de Muestras de Agua, preparado por Luis Tapia Berríos, junio
de 1984.
3) Catálago HACH 95.
4) Catálogo VWR 94/95.

10. RECONOCIMIENTOS

Han colaborado en el mejoramiento del presente Manual:

Lic. Juan Quintana T., Ing. Katia Montenegro R., Ing. Azucena Espinales, Lic. Haydée Selva V.,
Lic. Narciso Romero P., Ing. Germán Padilla D.

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