UNIFRANZ.

LABORATORIO 9

TITULACION DE AMINOACIDOS

1.- OBJETIVOS. –
Al finalizar la practica el estudiante estará capacitado para:
 Describir la estructura de un aminoácido.
 Explicar las propiedades acido base de los aminoácidos.
 Determinar el pk de diferentes aminoácidos por métodos volumétricos.

2.- INTRODUCCIÓN TEÓRICA.

Curvas de titulación de los aminoácidos

Un aminoácido puede existir en varias formas iónicas, dependiendo del pH del medio en donde se encuentre
disuelto. Esta propiedad se describe mejor utilizando la ecuación de Henderson – Hasselbach (ecuación
3.27). Los aminoácidos tienen al menos dos grupos disociables, el amino y el carboxilo; pueden tener más
si el grupo R tiene a su vez grupos que se puedan ionizar. Para cada uno de estos grupos existe un pK, el
del carboxilo se le llamará PKCOOH y PKNH2 al del amino.
La forma más protonada de un aminoácido que no tiene grupos ionizables en el grupo R es:

4.3 (Figura elaborada por el autor).

Esta especie totalmente protonada puede sufrir la pérdida de un protón del carboxilo y pasar a la siguiente
forma iónica:

4.4 (Figura elaborada por el autor).

BIOQUIMICA Y METABOLISMO. 1
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Finalmente, cuando el grupo -NH3+ pierde un protón, el aminoácido pasa a la forma menos protonada
posible (-NH2):

4.5 (Figura elaborada por el autor).

En la Fórmula 4.6 se puede ver el proceso completo.

4.6 (Figura elaborada por el autor).

Si se aplica la ecuación de Henderson – Hasselbach a la reacción anterior, es fácil darse cuenta, que las
formas iónicas en las que puede existir un aminoácido, están determinadas por el pH del medio en el que se
encuentra disuelto, de tal manera que, (ver la Figura 4.7):
1. Cuando el pH < pKCOOH se encontrará únicamente (100%) la forma más proto nada, (ácida), del
aminoácido, es decir la que se señala como A en la Fórmula 4.6. (Ver también la Figura 4.7).
2. Se sabe que cuando el pH = pKCOOH existen la sal y el ácido en la misma cantidad, para este caso se
tendrá el 50% de la forma A, (ácido), y 50% de la forma B, (sal). (Ver también la Figura 4.7).
3. Cuando el pH > pKCOOH y pH < pKNH2, la forma A ya no se encuentra puesto que toda, (100%), se ha
convertido a la forma B. (Ver también la Figura 4.7).

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4. Cuando el pH se acerca al valor del pKNH2, el compuesto B, que a pHs más bajos se comportó como sal,
ahora es un ácido y dona protones para transformarse en el compuesto C. De tal forma que cuando pH =
PKNH2 se tendrá 50% del compuesto B, (ácido) y 50% del compuesto C, es decir, su sal. (Ver también la
Figura 4.7).
5. Finalmente, cuando pH > pKNH2, la forma B ya no se encuentra y el 100% del aminoácido se encuentra
en la forma C. (Ver también la Figura 4.7).
En la Tabla 4.1 se encuentran los valores de pKCOOH, pKNH2 y pKR para algunos aminoácidos. El
pKR está relacionado con los aminoácidos que tienen en el grupo R un grupo ácido o básico, de tal manera
que solamente este tipo de aminoácidos poseen algún valor de pKR. Nótese como el valor de pKCOOH es
más pequeño que el de pKNH2, o sea que el carboxilo es un ácido más fuerte, se disocia más fácilmente,
que el grupo amino.

Tabla 4.1: Valores de pKCOOH, pKNH2 y pKR de algunos aminoácidos.

En la Tabla 4.1 se aprecia que el ácido glutámico tiene los siguientes valores de pK: pKCOOH= 2.19,
pKNH2=9.67 y pKR=4.25. Las diferentes formas moleculares en las que se puede encontrar este compuesto
dependiendo del pH son las siguientes:

BIOQUIMICA Y METABOLISMO. 3
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4.7 (Figura elaborada por el autor).

La siguiente figura muestra la curva de titulación para el ácido glutámico:

Figura 4.8: Curva de titulación del ácido glutámico. Las letras representan las fórmulas que se encuentran
en 4.6. (Figura elaborada por el autor).
Se sugiere que el lector, usando los valores de pK que se encuentran en la Tabla 4.1, trace las curvas de
titulación de otros aminoácidos y diga el estado de ionización en que se encuentran, dependiendo del pH.
Curva de titulación y volumetría de neutralización
La titulación ácido-base es un procedimiento analítico cuyo objetivo es determinar la concentración de un
analito con propiedades ácidas o básicas, utilizando una disolución valorada de una base o ácido, mediante
una reacción de neutralización para formar una sal y agua.
Asimismo, mediante una titulación también es posible deducir el pK del analito.

3.- MATERIALES DE LABORATORIO.

MATERIAL Reactivos. Muestras

Tubos de ensayo ácido clorhídrico 0.1 m Aminoácido Glicina
Gradilla hidróxido de sodio 0.1m Aminoácido Leucina
Mechero
Probetas
Vasos precipitados.
Pipetas
Baño maría
Hornilla.
Varillas.
Espátulas
Termómetro.
Tiras de ph
PHMETRO.

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4.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

•TITULACION CON •TITULACION CON

ACIDO HIDROXIDO DE
CLORHIDRICO 0.1 SODIO 0.1 M
M

AMINOA
AMINOACIDOS
CIDOS

PREPRACION DE REACTIVOS.
 Solución de hidróxido de sodio 0.1 M
 Pesar 0.25 gr de hidróxido de sodio y diluirlo con 100 ml de agua destilada.
 Solución de ácido clorhídrico
 Medir en una pipeta 8.5 ml de ácido clorhídrico y diluir con 100 ml de agua destilada.

TITULACIÓN DEL AMINOÁCIDO LEUCINA.

 Medir pH inicial del aminoácido
 En un vaso introducir el aminoácido
leucina
 con la ayuda de una bureta cargada con
25 ml de ácido clorhídrico 0.1 M ir
introduciendo a goteo lento el ácido
sobre el aminoácido las siguientes
cantidades del ácido 0.25ml , 05 ml.
1ml,1,5 ml. 2ml, 5ml y medir pH a cada adición .
 Se medirá pk de y se manifestará la neutralización

TITULACIÓN DEL AMINOÁCIDO

GLICINA.
 Medir pH inicial del
aminoácido
 En un vaso introducir el
aminoácido glicina
 con la ayuda de una bureta
cargada con 25 ml de
Hidróxido de sodio 0.1 M ir
introduciendo a goteo lento el ácido sobre el aminoácido las siguientes cantidades del hidróxido de
sodio 0.1 M :0.25ml, 05 ml. 1ml,1.5ml, 2ml, 5ml y medir pH a cada adición.
 Se medirá pk de y se manifestará la neutralización

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4.- RESULTADOS.
Hidróxido de sodio
Ácido clorhídrico 1M PH 0.1 M PH
0 3,93 0 3,93
0,25 2,87 0,25 3,93
0,5 1,6 0,5 3,93
1,5 1,14 1 3,97
2 1,13 1,5 4
3,5 0,9 2 4,02
7 0,6 5 4,47
 con los datos realizar una gráfica pH vs volumen y calcular pk.

Curva titulada con NaOH

4.5

4.4

4.3
pH medido

4.2

4.1
pH
4

3.9

3.8
0 1 2 3 4 5 6
Volumen utilizado

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Curva titulada con HCl

4.5
4

pH medido
3.5
3
2.5
2
1.5 pH
1
0.5
0
8 6 4 2 0

Volumen utilizado

5.-DISCUSION DE RESULTADOS.
 compara tus resultados encontrados con la bibliografía, menciona si tus resultados se asemejan
al de la bibliografía.
Podemos ver claramente las mesetas de la curva de calibración de una solución tampón en algunas zonas,
pero no alcanzamos a ver toda la curva.
Como la solución es una mezcla de muchos aminoácidos las constantes pueden ser un promedio de las
constantes de todos los aminoácidos
Mirando la gráfica podemos aproximar:
 pk cooh entre 0,8 y 1
 pR = 4
 pk nh2 = no se llegó a medir ese valor de pH
6.- ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS.
 Elabora un diagrama de flujo de procedimiento del tema.

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Calcular el
pH inicial

Introducir
0.25 ml

Mezclar la
solucion

Medir pH

 Dibujas las estructuras químicas del aminoácido leucina y glicina

Leucina = C6H13NO2 Glicina = C2H5NO2

 Describe el estado zwiterion de las proteínas, por lo presentan.

Prácticamente el 100% del aminoácido se encuentra como ion dipolar o zwitterion, de forma tal que el
aminoácido presenta una carga neta nula (el aminoácido es eléctricamente neutro
 Menciona la utilidad de llevar a cabo una titulación de aminoácidos.
Calcular la curva te titulación de una solución tipo tampón y ver a que pH la molécula pierde su habilidad
de amortiguar.
Estos datos nos dan que forma tiene la molécula en ese momento ya sea que este en forma A, B o C
como se vio en la teoría.
7.- CONCLUSIONES.

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 Pudimos ver como los aminoácidos tienen una estructura amortiguadora y como punciona en
especial al amortiguar la alcalinidad que podrían encontrar.
 La forma que funciona dependen de su naturaleza de amina y acido que son capaces de donar
protones y en menor medida absorber protones por su grupo amino.
 Sus propiedades amortiguadoras se pueden ver en la curva de titulación de pH
 No se calculó el pK ya que es una solución mezclada y los diferentes aminoácidos se encontraban
en diferentes concentraciones en una solución azucarada.
8.- ANEXOS.
 Todo calculo extra que hayas manejado está en esta sección.
Hidróxido de sodio
25g NaOH x 1 mol = 0.625/0.1 = 6.25 M 
40g
m = CxVxPM = 0.1 x 0.1 x 40 = 0.4g NaOH
Ácido clorhídrico
1.19 g x 37g x 1 mol x 1000ml = 12.06 M
1ml 100g 36.5 g 1L

C2 = C1 V1 = 12.06 x 0.0085 = 1.02 M

V2 0.1
ml NaOH milimol NaOH pH pOH ml HCl milimol HCl pH pOH
0 0 3,93 10,07 0 0 3,93 10,07
0,25 1,5625 3,93 10,07 0,25 0,25 2,87 11,13
0,5 3,125 3,93 10,07 0,5 0,5 1,6 12,4
1 6,25 3,97 10,03 1,5 1,5 1,14 12,86
1,5 9,375 4 10 2 2 1,13 12,87
2 12,5 4,02 9,98 3,5 3,5 0,9 13,1
5 7,5 4,47 9,53 7 7 0,6 13,4
Con. 6,25 Con. 1

9.- BIBLIOGRAFIA.
 http://www.unne.edu.ar/unnevieja/Web/cyt/cyt/2002/08-Exactas/E-016.pdf
 https://prezi.com/oc2inzt13agr/titulacion-de-aminoacidos/
CURVAS DE TITULACION DE AMINOACIDOS, http://diarium.usal.es/vgnunez/files/2012/11/4.-Curvas-
de-titulaci%C3%B3n-de-aminoacidos.pdf

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