FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

CICLO ACADÉMICO: ABRIL – SEPTIEMBRE 2016

MÓDULO: Microbiología II

NIVEL: Cuarto

PROFESOR: Dr. Carlos Rodríguez

AUXILIAR DE LABORATORIO: Ing. Maura Fiallos

Nombre: Wilmer Tene

PRÁCTICA DE LABORATORIO:
TEMA: CONTEO DE ESPORAS EN EL HEMOCITOMETRO

1. OBJETIVOS

General

Conocer las características y funciones que tiene el hemocitómetro

Específicos

Observar el número esporas mediante el uso del hemocitómetro.

Calcular mediante fórmulas la concentración de esporas que se encuentran en la muestra.

2. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tabla N°1

CONTEO DE ESPORAS

Concentración ARRIBA
Cuadro 1 10 14 15 9
Cuadro 2 8 10 4 9 15
Cuadro 3 17 26 12 17
1x10-2 ABAJO
Cuadro 1 7 6 12 9
Cuadro 2 7 7 2 7 5
Cuadro 3 6 13 8 10
Concentración ARRIBA
Cuadro 1 3 4 0 2
1x10-3 Cuadro 2 0 0 1 2 0
Cuadro 3 2 3 1 2
 ABAJO
Cuadro 1 1 2 14 9
Cuadro 2 0 2 4 5 0
Cuadro 3 1 5 1 5
Fuente: UTA-FCIAL

Autor: Wilmer Edison Tene Moyolema

CONCENTRACIÓN 𝟏 ∗ 𝟏𝟎−𝟐

𝑋̅1 = 11.93 = 12 𝑋̅2 = 7.4 = 7

Volumen cuadrante 1 y 3 Volumen cuadrante 2

𝑉1 = 0.1𝑚𝑚 ∗ 0.25𝑚𝑚 ∗ 0.25𝑚𝑚 𝑉2 = 0.1𝑚𝑚 ∗ 0.2𝑚𝑚 ∗ 0.2𝑚𝑚

𝑉1 = 6.23𝑥10−3 𝑚𝑚3 𝑉2 = 4𝑥10−3 𝑚𝑚3

Concentración
𝐸𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠 𝐸𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶1 = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛
𝐶2 = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛

12𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠 7 𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶1 = 6.23𝑥10−3 𝑚𝑚3
𝐶2 = 4𝑥10−3 𝑚𝑚3

𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠 𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶1 = 1,92 𝑥 106 𝐶2 = 1,75 𝑥 106
𝑚𝑙 𝑚𝑙

𝐶1 + 𝐶2
𝐶̅ =
2
𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶̅ = 1835 𝑥 106
𝑚𝑙

Concentración Final
𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶 = 1835 𝑥 106 𝑥 𝐹𝐷
𝑚𝑙
𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶 = 1835 𝑥 106 𝑥 102
𝑚𝑙
𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶 = 183,5 𝑥 106
𝑚𝑙

CONCENTRACIÓN 𝟏 ∗ 𝟏𝟎−𝟑

𝑋̅1 = 3.43 = 3 𝑋̅2 = 1.4 = 1

Volumen cuadrante 1 y 3 Volumen cuadrante 2

𝑉1 = 0.1𝑚𝑚 ∗ 0.25𝑚𝑚 ∗ 0.25𝑚𝑚 𝑉2 = 0.1𝑚𝑚 ∗ 0.2𝑚𝑚 ∗ 0.2𝑚𝑚

𝑉1 = 6.23𝑥10−3 𝑚𝑚3 𝑉2 = 4𝑥10−3 𝑚𝑚3

Concentración
𝐸𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠 𝐸𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶1 = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛
𝐶2 = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛

3 𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠 1 𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎
𝐶1 = 6.23𝑥10−3 𝑚𝑚3
𝐶2 = 4𝑥10−3 𝑚𝑚3

𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠 𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶1 = 481.540 𝐶2 = 250
𝑚𝑚3 𝑚𝑚3
𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠 𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶1 = 4.815 𝑥 105 𝐶2 = 2,5 𝑥 105
𝑚𝑙 𝑚𝑙

𝐶1 + 𝐶2
𝐶̅ =
2
𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶̅ = 3.6575 𝑥 105
𝑚𝑙

Concentración Final
𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶 = 3.6575 𝑥 105 𝑥 𝐹𝐷
𝑚𝑙
𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶 = 3.6575 𝑥 105 𝑥 103
𝑚𝑙
𝑒𝑠𝑝𝑜𝑟𝑎𝑠
𝐶 = 36.75 𝑥 106
𝑚𝑙

DISCUSION

En esta práctica se usó el hemocitómetro o cámara de neubauer ya que es un método

rápido usado microbiología para el conteo de esporas o de otros microorganismos se
preparo dilusiones de una muestra de suelo del cual se prepararon tres diluciones desde
10−1 , 10−2 𝑦 10−3 luego del cual se colocó una gota de cada uno de estos para ponerlos
en el hemoctitometro y poder realizar el conteo.

En el caso del 10−1 al verlo el número de esporas que se contaban eran muchas que
imposibilitaron realizar el conteo esto debido a que hay que tomar precacuiones para
realizar el conteo como son:
a) En todos los recuentos con cámaras, el diagrama del condensador en el microscopio
deberá estar cerrado en gran parte.

b) La diferencia de las células contadas entre los cuadrados grandes y los cuadrados de
grupos no deberá ser superior a 10 células.

c) En todos los recuentos de células, hay que realizar dobles determinaciones. Después
del recuento del retículo superior, se recuenta como control también el retículo inferior.
Hay que tener en cuenta que la cámara no esté resecada. Esto se puede evitar si se llena
la cámara inferior justo poco antes del recuento y se recuente después del tiempo de
sedimentación.

d) La diferencia entre las sumas de los recuentos de ambos retículos de recuento no debe
ser superior a 10 células. El valor intermedio de los recuentos se aplica luego en la fórmula
de cálculo o se multiplica con el factor correspondiente (Marienfeld, 2010).

3. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Conclusiones
Se conoció las funciones y características del hemocitómetro ya que fue un equipo
que presentaba cuadriculas visibles al ponerlo bajo el microscopio, además fue
utilizado para el conteo de esporas de la muestra y posteriormente mediante el uso
de formula se calculó su concentración presente en la muestra
Se observo las esporas que se encontraban dentro de cada cuadrito el mismo que
fue anotado para posteriores cálculos de concentración
Se calculo la concentración de esporas mediante los datos recolectados del conteo
realizado por cada cuadro grande
Recomendaciones
Se recomienda tener cuidado con el uso del hemocitómetro especialmente con el
portaobjetos ya que es un material muy frágil y puede romperse fácilmente.
Se recomienda al momento de iniciar el conteo desplazarse de manera calmada
recordando de donde se inició para que no se pierda el sentido del conteo.
Se recomienda poner la gota normal en el centro de la placa del hemocitómetro
para que este se expanda y se pueda apreciar de una manera óptima las esporas
bajo el microscopio.
4. CUESTIONARIO
¿Cuál es el porcentaje de error en el cálculo de concentración de la cámara de
Neubauer?
 En la cámara de Neubauer se pueden presentar errores de hasta 20% y 30% que son
comunes con este método de recuento debido al pipeteo, a los errores estadísticos
por ser la muestra poco representativa, errores del volumen de muestra realmente
introducido en la cámara, etc. Sin embargo, el hematocitómetro sigue siendo uno
de los métodos más ampliamente utilizados en los laboratorios de todo el mundo
(Martinez,2012).
Explique otros métodos de conteo de esporas para el cálculo de concentraciones
Método directo LA CÁMARA DE NEUBAUER: Es un portaobjetos especial con una
graduación en superficie y unas medidas muy concretas. Método de Filtración Se
basa en el hecho de que la suspensión microbiana fluye a través de un papel filtro,
donde las formas celulares quedan retenidas. Con la ayuda de pinzas estériles, se
retira el papel filtro y se deposita en la superficie de agar nutritivo. Se incuba la placa,
y se contabiliza el número de colonias que aparecen en ella, deduciendo el número
de microorganismos por mililitro de suspensión. Métodos Indirectos: Permiten el
recuento de todas las células. Se basan en la medida de la evolución del número de
células vivas o del número de partículas. Requieren de preparaciones limpias, sin
partículas extrañas. Miden el total de bacterias viables. Se basan en la medida de
algún parámetro de cultivo que nos permite deducir información sobre la evolución
del número de microorganismos (Zambrano, 2014).
Indique las áreas científicas donde se utiliza la cámara de Neubahuer y el motivo
En la medicina las cámaras de conteo se utilizan principalmente para el análisis de
sangre (conteo de leucocitos, eritrocitos, trombocitos) (Zambrano, 2014).
Indique ventajas y desventajas de la cámara de Neabahuer
Desventajas
 Es muy tedioso
 No es práctico para un gran número de muestras
 No es muy sensible, se necesitan al menos 106 bacterias/mL para que sean
observadas al microscopio
 No permite conocer microrganismos viables debido a que no distinguen células vivas
de muertas.
Ventajas
 Permite el conteo de esporas
 Es de tamaño pequeño lo cual facilita su manipulación
 Es un método rápido
 Es muy eficaz para para células relativamente grandes (Velastegui, 2012).
Con que lente del microscopio se observan los hongos
Primero se enfoca con el lente de 10X y para el conteo de las células se utiliza el
lente de 40X se cuenta todas las células que están dentro de cada cuadrado mediano
 y aquellas que están tocando los lados superior y derecho de dicho cuadrado
(aunque estén parcialmente fuera) (Bastidas, 2013).
5. BIBLIOGRAFIA
Martínez F, (2012). “Manual de Biometría Hemática”. CBTis199, México. Pp. 22-24
Velastegui D, (2012). “Cámara de recuento Neabauer”. Recuperado de:
https://es.slideshare.net/eliciruela/camara-de-recuento-neubauer
15/06/2017
Marienfeld, (2010). “El hemocitometro”. Recuperado de:
file:///D:/Descargas/Documents/2010-Marienfeld-info-camaras-de-
recuento.pdf
Bastidas O, (2013). “Hematocitometro”. Recuperado de:
http://www.celeromics.com/es/resources/docs/Articles/Conteo-Camara-
Neubauer.pdf 15/06/2017
Zambrano S, (2014). “Cámara de recuentoNeabauer”. Recuperado de:
http://insilico.ehu.es/camara_contaje/neubauer_improved.php
15/06/2017