BIOSÍNTESIS DE PARED FÚNGICA

DIMORFISMO
JUNTAS
SÍNTESIS = LUGAR Y TIEMPO POLIMERIZACIÓN
INTRACELULAR CANT. EXACTAS EXTRACELULAR

REGULACIÓN
PRECISA

SÍNTESIS DE PARED PROCESO POLARIZADO

 Transporte componentes y enzimas al punto crecimiento

citoesqueleto - vesículas secretorias - microvesículas

DRA. CECILIA L. FULGUEIRA  Síntesis proteínas, glicoproteínas, polisacáridos estructurales, glucanos

2013
FAC. CS. BIOQUÍMICAS Asociación en estructura U covalentes y
 
CENTRO DE REFERENCIA Y FARMACÉUTICAS superficie celular tridimensional no covalentes
DE MICOLOGÍA UNR

CRECIMIENTO EN LOS HONGOS

REGULACIÓN
PRECISA DE PARED FÚNGICA
 Morfotipo Hifal  Morfotipo Levaduriforme
Levaduriforme::
crecimiento continuo elongación o brote
 ∆ estructura pared celular por efectores internos y externos
extremo del tubo < cantidad

abundantes naturaleza
importancia económica
 ∆ morfología (ciclos celular, de vida)

 Interacción con otros organismos

 Utilización ambiente
 Hongos no limitados a un morfotipo específico

 Adaptación a stress

DIMÓRFICOS
 DIMÓRFICOS INFECCIÓN FÚNGICA Y MORFOTIPO PARTICULAR
Hongos que presentan al menos dos morfotipos predominantes ENFERMEDAD

HONGOS QUE PRODUCEN ENFERMEDAD

DIMORFISMO/MORFOGÉNESIS
Interconversión reversible entre ≠ morfotipos
 Hongos filamentosos monomórficos:
monomórficos : Aspergillus
plantas, animales, hombre fumigatus

Controlada En células en
ambientalmente MORFOGÉNESIS crecimiento y Inhalación,
Conidios
división ambiente
 depósito  Micelio invasivo
superficial
Disparadores de transición

 T°  fuente N2 ≠ Ciclos de vida

 pH  [CO2] (protozoos)  Levaduras monomórficas
monomórficas:: Candida
Respuesta
 [glucosa]  metales glabrata
evolutiva
 agentes quelantes 
 tamaño inóculo o ≠ ambientes Comensal Infección
No obligatoria
densidad celular inicial ≠ hospederos piel y  superficial o
mucosas sistémica

HONGOS QUE PRODUCEN ENFERMEDAD HONGOS DIMÓRFICOS

 Hongos dimórficos Saprófito ambiental Comensal

Morfotipo patogénico (suelo) MORFOTIPO piel y mucosas
Morfotipo no patogénico Hombre, animales, plantas NO PATOGÉNICO (flora normal)
HIFAS
> % Biomasa Conidios LEVADURAS
Esencial para producir enfermedad INFECCIOSO

Candida albicans
LEVADURAS
Ascomycetes
Candida albicans Filogenét. relacionados
Histoplasma capsulatum
Coccidioides inmitis Blastomyces dermatitides
Paracoccidiodes brasiliensis
Coccidioides inmitis/
inmitis/posadasii
Sporothrix schenkii
Penicillium marnefeii
Coccidioides inmitis
MORFOTIPO HIFAS
PATOGÉNICO PSEUDOHIFAS
Adaptado al hospedero
INVASIVO
Candida albicans
EJEMPLOS Candida dubliniensis
HOMBRE
Malassezia furfur
Muestras clínicas
Millones de infecciones/año ambos morfotipos
Latentes o reactivas
(inmunodeficientes)
inmunodeficientes)
 DIMORFISMO TERMAL ?? DISPARADORES DE LA
Histoplasma capsulatum TRANSICIÓN
Forma asociada al hospedero
25 °C
Medio de cultivo
Forma ambiental Microconidios
Áreas endémicas 37 °C

pulmón
In vivo + rápida

linfa
37 °C represión auxótrofo Cys Cys Levadura
sulfito reductasa 37°
37°C

sangre
Reductores -SH Oxidantes -SH
Filamentos con macro H.capsulatum
y microconidios Levaduras Filamentos
a cualquier T°
T°

DIMORFISMO NUTRICIONAL ??
Levadura intracelular facultativa O TERMO NUTRICIONAL ??

PIEL Y MUCOSAS
DISPARADORES DE LA TRANSICIÓN
Candida
Adhesión y
albicans colonización Levadura Pseudohifa
Levadura / Hifa

Penetración
hifal e invasión Hifa

∆ mecanismos defensa
del Hospedero Condiciones ~ piel y mucosas Condiciones ~ órganos profundos
37°C, pH H+
T < 37° 37°
37°C, pH neutro, suero
 Locales
(lesiones, ∆ flora x ATB,  Mutantes C.albicans L  H  << virulencia modelos infección animal
ciclo)
 Global Diseminación MORFOGÉNESIS CONTRIBUYE A VIRULENCIA
vascular
(inmunosupresión, VIH,
transplantes,, insufic.
transplantes insufic. renal,
Vasos sanguíneos  invadir fagocitos
Hifas necesarias para  salir de vasos sanguíneos
internaciones hospitalarias
prolongadas)  colonizar dispositivos médicos: BIOFILMS
Colonización Levaduras + móviles
endotelial y Diseminación
penetración x sangre y fluídos a órganos L ↔ H incompleta y compleja
profundos
 DISPARADORES DE LA TRANSICIÓN Densidad del inóculo y Morfogénesis en C.albicans BIOFILMS

Densidad del inóculo (in vitro)

vitro) C.albicans Suero - 37°
37°C
L-prolina / N
N--Ac
Ac--Glc Biofilms sobre matrices / dispositivos médicos (catéteres , prótesis)

 Densidad ≥ 106 células/ml 
infección x C.albicans Farnesol

 Densidad < 106 células/ml  morfología biofilm
Levaduras brotantes
Tubo germinativo  Hifa
Hasta 3 hs. y
Impenetrables a
después de 24 hs.
respuesta inmume
Hospedero y ATF Liberación L

Nuevos biofilms

Fenómeno de Quorum sensing Colonización

Efecto durante tiempo limitado inicial x L
QSMs mediadores
extracelulares producidos x L 3-6 hs. Formación
En cultivos líquidos fase inicial y en
T.G. cuerpo del
Farnesol (C15H26O) fase estacionaria  células vuelven a
biofilm
ser sensibles al farnesol 24-48 hs. Biofilm

L  H maduro: L, H y PsH

MORFOTIPOS Y DIVISIÓN CELULAR

MORFOTIPOS Y DIVISIÓN CELULAR

MORFOGÉNESIS EN CÉLULAS EN CRECIMIENTO Y DIVISIÓN

PSEUDOHIFAS Polarisoma
LEVADURAS Banda septina
Polarisoma

Núcleo Crecimiento polarizado Patrón crecimiento celular ≠

Polarisoma + cercano a L
Crecimiento polarizado crecimiento isotrópico
Polarisoma Casi sin crecimiento isotrópico
Complejo proteínas  dirección Tendencia de sus células a
permanecer unidas
HIFAS
Spitzenkorper Septo
DISPARADORES DE LA TRANSICIÓN
Levadura ↔ Pseudohifa
Polarisoma
 Medios ricos en fosfatos o alcanos  ≠ regulación ciclo división celular
Crecimiento apical polarizado permanentemente
Estruct. membranosa
Tiempo Crecimiento polarizado / isotrópico
Polarisoma + Spitzenkorper

del extremo hifal
 MORFOTIPOS Y DIVISIÓN CELULAR MORFOTIPOS Y DIVISIÓN CELULAR

TRANSICIÓN ??? Células Blancas ↔ Células Opacas

CLAMIDOCONIDIOS Septo Clamidoconidio

???

Célula suspensora

Polarisoma y Spitzenkorper Células ovoides

 ≠ Crecimiento celular  ≠ rol fisiológico??
 Células de latencia??
DISPARADORES DE LA TRANSICIÓN
Levadura ↔
Clamidoconidio
  O2,  luz,  Ta.,  nutrientes
ovoides,, brotantes Células elongadas
elongadas,, pared irregular
Colonias crema Colonias planas grises
< viabilidad

Viabilidad ??
PROLONGACIÓN DE CRUZAMIENTO
Prolongación
Célula
opaca

 Medios con arroz, leche, harina de maíz + Tween 80 ~ zigosforos

Cruzamiento sexual Células de polaridad
 células suspensoras y clamidoconidios
Hormonas fúngicas opuesta

MORFOGÉNESIS EXPRESIÓN GENÉTICA ESPECÍFICA DEL MORFOTIPO PATOGÉNICO

Cambios metabólicos y bioquímicos en la célula

H. capsulatum + 500 genes con expresión
≠ en las 2 fases
 ∆ composición membrana Expresión diferencial de genes
plasmática y pared celular MICELIO LEVADURA
 Componentes estructurales
 ∆ Ag Inmuno β-(1,3) glucanos
 Reguladores del ciclo celular estimulantes
 ∆ rasgos de virulencia Receptores dectina-
dectina-1 α-(1,3) glucanos  Respuesta
fagocitos Fagocitos  virulencia Hospedero
Hospedero Clearence

EXPRESIÓN GENÉTICA ESPECÍFICA DEL MORFOTIPO PATOGÉNICO

¿Cómo detecta el hongo las ∆ ambientales y regula
C. albicans Genes con expresión >>> en Hifas que en Levaduras
la transición de fase?

 ECE1  extensión de elongación celular

 HWP1  proteína de pared celular que se U covalentemente Red de vías de transducción de señales
a células Hospedero coordinada por reguladores de transcripción
 ALS3  proteína de adhesión superficial
 Proteína receptora Molécula señal extracelular
Vías de Activación de proteínas de señalización
Mem brana plasmática
transducción de
CITOSOL
señales TRANSDUCCIÓN AMPc,, Ca2+
 Por U de pequeños mediadores intracelulares: AMPc
PRIMARIA
Proteínas de
andam iaje
Com plejos de
señalización Transm isión en  Por modificaciones covalentes
cadena

 Por U a otras moléculas de señalización

∆ función proteínas
Am plificación
Rápida (seg-
(seg-min)  Por ganancias de grupos fosfato (P)

Señalización x fosforilación
∆ maquinaria Integración Proteín quinasas
citoplasmática
Disem inación
Cascadas de fosforilación
Anclaje

∆ síntesis proteínas Mem brana Modulación Protein Protein

nuclear fosfatasa
Lenta (min-
(min-horas) quinasa
amplificación
Núcleo
Proteína efectora
activada
Gen activado
Activación Proteína Ser/Thr, Tyr quinasas,
efectora
∆ comportamiento mixtas
celular Elem ento de
respuesta a señal Transcripción de genes

Regulación de la Morfogénesis en C.albicans ACTIVACIÓN Regulación de la Morfogénesis en C.albicans REPRESIÓN

 Nutrientes L-Pro - N-Ac Glc

Mating Suero – Matriz
37°
37°C pH alcalino -neutro Genes específicos Hifa

polarisoma
Cascada Spitzenkorper?
Spitzenkorper?
RAS
MAP quinasa L - H PsH
Cdc42 AMPc
Rim101 Nrg1 Rfg1 Rbf1
Represores
Cph1 Proteín quinasa de
PKA transcripción Tup1 Tup1

Hst7
Tec1 Efg1
fosfatos / alcanos ↑ Efg1

Regulación (-
(-)
L  H ↓ Tup1, Nrg1 y Rfg1
+ L  Ps H L  Ps H

L Genes específicos Hifa H PsH

 Regulación de la Morfogénesis en C.albicans REPRESIÓN Células blancas “o” Células opacas

Agar leche /Agar

/Agar Harina Maíz Heterocigotas Homocigotas
MTL MTL
Candida
↑ MAP quinasa + Efg1 albicans

L  Clamidoconidios Células blancas Células opacas

C.albicans y C.dubliniensis
Expresión ≠ de
Genomas ~ genes

expresado Efg1  Expresado

C.dubliniensis

MAP quinasa
Agar Semillas Girasol / Staib Agar
Reprimido Reprimido
Permite ≠ Tup1
C.albicans
Nrg1 + cél
cél..

C.albicans + condic
condic.. + condic.amb.
amb..
amb Polaridad
opuesta + hormonas
Hongos DMF
 C.dubliniensis
PSEUDOHIFAS Mating sólo
L  Clamidoconidios PROYECCIÓN DE
x 1 morfotipo MATING