GLFC-No.

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GUÍA DE LABORATORIO
Farmacognosia
Extracción y caracterización de
Departamento heterósidos cardiotónicos en
de Ciencias Farmacéuticas Prof. Marisela Valdés González
drogas vegetales
Universidad Católica del Norte A. Ayud. Salange Carvajal

ACTIVIDAD PRÁCTICA No. 2

OBJETIVOS

 Obtener un extracto vegetal conteniendo glicósidos cardiotónicos que permita

realizar ensayos de caracterización de éstos.
 Usar y manejar métodos sencillos para el reconocimiento de los heterósidos
cardiotónicos.
 Desarrollar destrezas en la manipulación de c.c.f.

REQUERIMIENTOS E INSTRUCCIONES

1. Se realizará una prueba de ingreso al laboratorio, que constará de una o dos

preguntas relativas a la teoría o guía práctica correspondiente al laboratorio.
2. Debe contar con un cuaderno exclusivo para usar en el laboratorio (no compartido
con otras asignaturas), en donde debe registrarse el progreso de sus actividades,
sus resultados y otros datos que se indiquen. Al terminar la actividad práctica
será evaluado el cuaderno.
3. Debe contar con la guía de trabajo práctico impresa.
4. Debe traer los materiales que se soliciten (delantal, regla graduada, un par de
guantes, lápiz grafito).
5. Para alcanzar a cumplir con los objetivos previstos para cada etapa del laboratorio
se requiere del estudio previo de:
 GLFC-No. 2 - 2018, Marco teórico de la Guía de Laboratorio Farmacognosia:
Heterósidos cardiotónicos.
 Capítulo 12 Triterpenos y esteroides del libro de texto de Farmacología General de
Ángel Villar del Fresno (Biblioteca UCN).

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MATERIALES Y REACTIVOS

 Balanza  Mortero c/pistilo

 Embudo separador  Pipetas
 Erlenmeyer  Espátula
 Plancha de calentamiento  Pinza
 Papel de filtro  Acetato de etilo
 Embudo  Acetato de plomo
 Tubos de ensayo  Ácido pícrico
 Gradilla  Ácido Acético glacial
 Agitador de vidrio  Anhídrido acético
 Papel de pH  Cloroformo
 Vaso de precipitado  Etanol
 Vidrio reloj  Hidróxido de sodio
 Placas cromatográficas  FeCl3
 Micropipetas  Metanol

PROCEDIMIENTO

Parte No. 1: Obtención de extracto vegetal con glicósidos cardiotónicos

Para obtener el extracto vegetal conteniendo los glicósidos cardiotónicos cada equipo
trabajará con adelfa o laurel de jardín (Nerium oleander) con la metodología siguiente:

a) Poner en un erlenmeyer 20 g de hojas cortadas de adelfa, adicionar 100 – 200 mL de

etanol al 50 % (v/v) y calentar por 15 min.
b) Filtrar y al filtrado se le añade una suspensión de acetato de plomo (5 g de acetato de
plomo en 20 mL de agua).
c) Añadir agitando NaOH en solución hasta pH alcalino. Se mezcla y se filtra. Al
filtrado se le añaden 2 g de sulfato de sodio y se lava en embudo separador 2 x 15
mL de acetato de etilo o de cloroformo.
d) Poner la fase orgánica en un vaso de precipitado y concentrarla a sequedad en baño
de agua.
e) Añadir 8 mL de etanol al concentrado de adelfa y usar la solución para el
reconocimiento de drogas digitales.

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ATENCIÓN: Debido a los efectos tóxicos de los glicósidos cardiotónicos se sugiere:

 Manejar con cuidado la droga vegetal.
 No llevarse las manos a la boca.
 En caso de contacto con el material vegetal lavar con abundante agua.

Parte No. 2: Reconocimiento de las drogas digitálicas

Estas reacciones se pueden dividir en dos grupos:

1. Reacciones debidas a la glicona (azúcar)
2. Reacciones debidas a la aglicona (genina)

2.1.- Reacción debida a la desoxiazúcar (digitoxosa)

Reacción de Keller Kiliani:

a) Tomar una cantidad de tabletas pulverizadas equivalentes a 0,25 mg de digoxina,

agregar 1 mL de ácido acético glacial que contenga 0,05% p/v de FeCl3.
b) Agitar unos minutos y filtrar con filtro plegado.
c) Agregar unas gotas de H2SO4 concentrado, por las paredes del tubo de ensayo,
para formar una capa inferior. Se forma un anillo café y el ácido acético pasa a
color índigo.
d) Realizar esta reacción, también, con una muestra de los extractos obtenidos en
la parte No. 1.

2.2.- Reacción debida a las genina

Reacción del anillo lactónico no saturado: Estas reacciones se atribuyen a la

presencia de un hidrógeno activo unido al doble enlace, en posición α al carbonilo del
anillo butenolídico. Estas reacciones consisten en agregar a la solución del heterósido, un
reactivo nitrado en medio alcalino.

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Reacción de Baljet:

a) Tomar una tableta pulverizada de digoxina, depositarla en un tubo de ensayo

con 2 mL de etanol y agregarle 0,5 mL de ácido pícrico al 1% y 0,5 mL de
NaOH al 5%.
b) Observar el desarrollo de una coloración anaranjada bastante estable. Esta
coloración sirve además para valorar la muestra por fotocolorimetría.

2.3.- Cromatografía

Para la identificación de principios activos, y en especial cuando se dispone de patrones,

se puede recurrir a la cromatografía en capa fina.

Para el estudio de los principios cardiotónicos las condiciones son las siguientes:

• Adsorbente: Silica gel G F254

• Solvente: Acetato de etilo : metanol : agua (81 : 11 : 8)
Cloroformo : metanol (92 : 8)
• Patrones: Digoxina, gitoxina, lanatósido A, digitalina
• Reveladores: Reactivo de vainillina 1%; reactivo de Kedde y reactivo de Liebermann-
Burchard, visualizar bajo lámpara de luz UV/Vis.

2.3.1. Preparación de reveladores

2.3.1.1. Reactivo de vainillina 1% en ácido ortofosfórico al 10%

Vainillina 1% (Solución A): Pesar 1 g de vainillina y disolverlo en 100 mL de etanol

absoluto.

Ácido ortofosfórico 10% (Solución B): Medir 8 mL de ácido ortofosfórico y aforar en

balón de 100 mL con etanol. Nota: No se debe usar agua para eliminar este químico,
puesto que esta produce su activación. Se neutraliza con amoniaco.

Reactivo vainillina 1%: El reactivo se prepara mezclando igual cantidad de las

soluciones A y B, de manera tal que queda una solución etanólica de 5 % de H3PO4 y
0,5% de vainillina. Se prepara en el momento en que se va usar.

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Resultados positivos: Después de rociar el cromatograma con el revelador, se le seca

en estufa a 105° C de 1 a 5 minutos. Las manchas de los cardiotónicos dan colores
azulosas y rojizas.

Almacenamiento: Este revelador es sensible a la luz y la oxidación, por lo que se

oscurecerá gradualmente. Debe mantenerse en un frasco ambar o cubierto con papel
de aluminio mientras está en uso. Se debe almacenar en refrigeración y en la
oscuridad. Una vez que el revelador se vuelve negro, se debe desechar y volver a
preparar una solución fresca. Su tiempo de vida útil es media.

2.3.1.2. Reactivo de Kedde (modificación de Bus y Taylor):

Solución A: Ácido 3,5-dinitrobenzoico al 2 % en metanol.

Solución B: KOH al 5,7 % en agua.

Reactivo de Kedde: Se mezclan cantidades iguales de las soluciones A y B, 5 mL

de cada solución. Evaluar al visible.

2.3.1.3. Reactivo de Liebermann-Burchard: 1 mL de ácido sulfúrico concentrado se

mezclan con 20 mL de anhídrido acético y 50 mL de cloroformo. Se emplea para
diferenciar las estructuras esteroidales de los triterpenoides, las primeras producen
coloraciones azul o azul verdoso, mientras que para las segundas se observa
rojo, rosado o púrpura. Estas coloraciones pueden variar por interferencias
producidas por carotenos, xantofilas y esteroides saturados que puedan estar
presentes.

Se analizarán comprimidos de digoxina y una muestra del extracto obtenido en la parte

No. 1
Para la realización de la c.c.f seguir las instrucciones que aparecen en la parte teórica de
esta práctica.

Los resultados de todos los ensayos realizados en la actividad experimental deben ser
registrados en el cuaderno de trabajo.

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3. Preparación de soluciones y reactivos

S. R. de acetato de plomo c(PbAc2 /z*)0,5 mol/L: 6,5 g de cristales transparentes de

acetato de plomo se disuelven en suficiente agua recién hervida para obtener 100 mL.
Se preserva en frascos ámbar bien cerrados.

Reactivo de Baljet, se prepara de la forma siguiente:

 Solución A:1 g de ácido pícrico (2,4,5-Trinitrofenol) en 100 mL de etanol.
 Solución B: 10 g de NaOH en 100 mL de agua.

Reactivo de Kedde, se prepara de la forma siguiente:

 Solución 1: Ácido 3.5 dinitrobenzóico al 2 % en metanol.
 Solución 2: Hidróxido de potasio al 5.7 % en agua.

Las soluciones se tienen preparadas de forma independiente y se mezcla igual

cantidad en volumen de cada una de ellas justo en el momento de realizar el ensayo.
Dicha mezcla es la que se adiciona a la alícuota a evaluar.

S. R de Liebermann: 1 mL de ác. sulfúrico concentrado se mezclan con 20 mL de

anhídrido acético y 50 mL de cloroformo.

3.1. Cálculo de cantidades necesarias de sustancias para preparar las

soluciones de trabajo en el laboratorio

1. Para preparar 25 mL de etanol al 50 %, ¿qué proporciones de agua y etanol

se requiere si se parte de un etanol al 95%?

2. ¿En qué porcentaje se encuentra la suspensión de acetato de plomo que se

usa en el proceso de extracción de la droga?

3. ¿Cuántos mg de FeCl3 se requiere para preparar la solución 2.1 a?

4. ¿Cuántos mg de ácido pícrico e hidróxido de sodio se requieren para preparar

las soluciones 2.2 a?

5. Para preparar 25 ml de los solventes que se usarán en la cámara

cromatografía ¿cuál es la proporción que deben tener sus componentes?

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4. Interrogantes a resolver

1. ¿Cuál es el tipo de solvente adecuado para realizar una extracción de

heterósidos cardiotónicos en una muestra fresca o seca de material vegetal?
¿Por qué?

2. ¿Para qué se basifica el extracto del material vegetal?

3. ¿Cuál es la función de la suspensión de acetato de plomo durante el proceso de

extracción de los heterósidos cardiótonicos?

4. ¿Por qué se emplea cloroformo o acetato de etilo para lavar el extracto del
material vegetal?

5. ¿Qué tipo de solvente es el adecuado como eluyente en una c.c.f para

muestras que contengan heterósidos cardiotónicos? ¿Por qué?

6. Explique qué ocurriría con la elución de muestras que contengan heterósidos

cardiotónicos en una c.c.f. si se emplea como eluyentes los siguientes:
a) Acetato de etilo : metanol : agua (81 : 11 : 8)
b) Cloroformo
c) Cloroformo : Metanol (20:80)
d) Cloroformo : Metanol (92:8)
e) Metanol

5. Estaciones de trabajo en el laboratorio

Estación 1: Preparación de la muestra de adelfa

1. Lavar y secar 10 hojas de adelfa.
2. Pesar 20 gramos de hojas y cortarlas en pedacitos con una tijera.
3. Poner en un elermeyer las trocitos de hojas.
4. Añadir 150 mL de etanol al 50% y tapar con papel de aluminio.

Estación 2: Extracción de los heterósidos cardiotónicos

1. Encender la plancha de calentamiento, programarla a temperatura de 100oC.
2. Poner en baño maría por 15 minutos el elermeyer conteniendo la muestra en
alcohol.

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Estación 3: Puesto de trabajo del equipo en el mesón

1. Realizar las operaciones de los incisos b ´al e, de la parte 1 de la guía de
laboratorio No 2, según convenga.
2. Realizar las operaciones descritas en la parte 2 de la guía de laboratorio No 2,
según convenga.

Estación 4: Campana de evaporación

1. Poner en baño maría el vaso de precipitado conteniendo la fase orgánica del
lavado del extracto vegetal.
2. Evaporar hasta sequedad el extracto (15-20 minutos).
3. Preparar el solvente para la cámara cromatográfica.
4. Aplicar revelador a la placa cromatográfica.