Técnicas espectrofotométricas de absorción

ultravioleta-visible

Introducción Métodos Instrumentales de Análisis: Métodos ópticos. Clasificación Radiación

electromagnética Espectro electromagnético Absorción de radiación electromagnética
Fundamentos de la espectrofotometría de absorción UV-Vis Teoría de la absorción de radiación
UV-Vis Espectro de absorción Especies absorbentes. Tipos de transiciones electrónicas Bases
del color 4. Leyes de la absorción de la radiación: Ley de Lambert – Beer Limitaciones y
Desviaciones de la Ley de Beer Instrumentación 6. Aplicaciones analíticas Características
analíticas del método Análisis cuantitativo. Detalles del procedimiento experimental
Aplicaciones al análisis de alimentos 1 CONTENIDOS
1. Introducción Están basados en la medida de propiedades químicas y físicas de los analitos
con fines cualitativos y cuantitativos. La medida se realiza en un instrumento apropiado.
Métodos Instrumentales de Análisis 2
Métodos que miden alguna propiedad de la radiación electromagnética emitida por
la materia o que interacciona con ella Clasificación Métodos espectroscópicos: Existe
intercambio de energía entre la radiación electromagnética y la materia Métodos de absorción:
Miden la disminución de la potencia de la radiación electromagnética debida a la absorción que
se produce en su interacción con el analito Métodos de emisión: Miden la radiación
electromagnética emitida cuando el analito es excitado por energía térmica, eléctrica o radiante
Métodos no espectroscópicos: Se producen cambios en la dirección o en las propiedades físicas
de la radiación electromagnética: Dispersión Refracción Difracción Rotación óptica Métodos
ópticos de análisis 3 1. Introducción
La radiación electromagnética es una forma de energía que se transmite por el espacio a
gran velocidad sin soporte de materia. La radiación electromagnética puede describirse según:
la teoría ondulatoria: formada por ondas sinusoidales la teoría corpuscular: flujo de partículas
o corpúsculos de energía llamados fotones La radiación electromagnética 4 1. Introducción
1. Introducción La radiación electromagnética (REM) se representa como ondas consistentes
en campos eléctricos y magnéticos que están en fase y que oscilan sinusoidalmente de manera
perpendicular entre sí y respecto a la dirección de propagación Dirección x Campo eléctrico y
Campo magnético z Teoría ondulatoria . Parámetros ondulatorios (Gp:) Longitud de onda ?
(Gp:) Amplitud A La potencia P: es la energía del haz que llega a un área dada por segundo
Parámetros ondulatorios 5
La radiación electromagnética es considerada como paquetes discretos de energía llamados
fotones o cuantos. Dualidad onda-partícula: Un fotón es una partícula de radiación
electromagnética con masa cero y energía E proporcional a la frecuencia de la radiación ? La
energía de un fotón: E = h ? E = energía del cuanto de radiación: Cal mol-1 ? = frecuencia de la
radiación : hertzio (Hz) = ciclos s-1 h = constante de Planck = 6,624 • 10-27 erg s Velocidad de
la luz : v = ? ? Velocidad de la luz en el vacío: c = 3,00 • 1010 cm s-1 Energía de un fotón :E = h
? = h c /? Cuando ? aumenta, disminuye la energía y frecuencia del fotón Teoría corpuscular.
Propiedades corpusculares de la radiación electromagnética ? µm = 10-6 m nm = 10-9 m Å =
10-10 m 6 1. Introducción
Abarca un intervalo muy amplio de longitudes de onda o energías. Según su ? recibe diferentes
nombres. La luz visible, que es la única perceptible por el ojo humano, representa solamente
una pequeña parte del espectro, desde 350-380 a 750-780 nm. Espectro electromagnético 7 1.
Introducción
2. Absorción de radiación electromagnética Absorción: proceso por el cual una especie, en un
medio transparente, capta selectivamente ciertas frecuencias de la radiación electromagnética.
El fotón absorbido hace pasar a la especie de su estado fundamental a un estado excitado de
energía M*: M + h ? ? M* Tras un corto período de tiempo, aproximadamente 10-8 a 10-9 s, se
pierde la energía de excitación, generalmente en forma de calor, y la especie M vuelve a su
estado fundamental: M* ? M + calor Los métodos de absorción tienen la ventaja de producir
poca o ninguna alteración en el sistema estudiado. 8
Para que la radiación electromagnética sea absorbida por la materia deben cumplirse dos
condiciones generales: 1) debe haber una interacción entre el campo eléctrico de la radiación y
alguna carga eléctrica de la sustancia 2) La energía de la radiación incidente debe ser
exactamente igual a la energía cuantizada que requiere la sustancia. Ecuación de Bohr ?E = Ef
– Ei = h ? h ?: energía del fotón absorbido Ei: energía total de la materia en el
estadofundamental Ef: energía total de un estado permitido de energía superior o estado
excitado. Requisitos 9 2. Absorción de radiación electromagnética
3. Fundamento de la Espectrofotometría de Absorción UV-visible Método instrumental óptico
basado en la medida directa de la absorción de radiación electromagnética UV-Visible, por las
moléculas del analito contenido en la muestra. La región ultravioleta comprende entre 10 y 400
nm y la región visible comprende entre 350 y 750 nm. Las radiaciones UV y visible tienen en
común el hecho de que la absorción de ambas regiones por moléculas, provoca la excitación de
e- de enlace a niveles de E superiores. Los picos de absorción pueden correlacionarse con los
tipos de enlaces de la especie absorbente, base de su aplicación cualitativa 10
Un analito molecular tiene la capacidad de absorber ciertas longitudes de onda características
de la radiación electromagnética UV-Visible. En este proceso, la radiación es transferida
temporalmente a la molécula y, como consecuencia, disminuye la intensidad de la radiación.
Dicha disminución, debida a la absorción experimentada por el analito, puede ser cuantificada
utilizando diversas magnitudes, siendo la Absorbancia, A, la más comúnmente utilizada en la
espectrofotometría de UV-Vis. La aplicación cuantitativa de la espectroscopía de absorción UV-
Vis se basa en la medida, a una ? fija, de la A de una disolución del analito contenida en una
cubeta transparente de camino óptico b cm. 11 3. Fundamento de la Espectrofotometría de
Absorción UV-visible
(Gp:) E0 (Gp:) E1 (Gp:) E2 (Gp:) ?E1 = E1-E0=hd1 = hc/?1 (Gp:) ?E2 = E2-E1=hd2= hc/?2
Espectro de absorción (Gp:) Cubeta (Gp:) Radiación incidente P0 (Gp:) b (Gp:) Radiación
transmitida P (Gp:) Disolución de analito de concentración c Transmitancia = T = P/P0
Absorbancia = A = - log T = log P0 /P Atenuación de un haz de radiación por una especie
absorbente contenida en la cubeta Transiciones energéticas en la molécula del analito (Gp:)
Absorbancia A (Gp:) ?, nm 12 3. Fundamento de la Espectrofotometría de Absorción UV-
visible

Espectro electromagnético
Se denomina espectro electromagnético a la distribución energética del conjunto de
las ondas electromagnéticas. Referido a un objeto se denomina espectro electromagnético o
simplemente espectro a la radiación electromagnética que emite (espectro de emisión) o
absorbe (espectro de absorción) una sustancia. Dicha radiación sirve para identificar la
sustancia de manera análoga a digital. Los espectros se pueden observar
mediante espectroscopios que, además de permitir ver el espectro, permiten realizar medidas
sobre el mismo, como son la longitud de onda, la frecuencia y la intensidad de la radiación.
Ley de Beer y Lambert.
Diagrama del espectro electromagnético, mostrando el tipo, longitud de ondacon ejemplos, frecuencia y
temperatura de emisión de cuerpo negro.

El espectro electromagnético se extiende desde la radiación de menor longitud de onda, como

los rayos gamma y los rayos X, pasando por la radiación ultravioleta, la luz visible y
la radiación infrarroja, hasta las ondas electromagnéticas de mayor longitud de onda, como
son las ondas de radio. Si bien el límite para la longitud de onda más pequeña posible no sería
la longitud de Planck (porque el tiempo característico de cada modalidad de interacción es
unas 1020 veces mayor al instante de Planck y, en la presente etapa cosmológica, ninguna de
ellas podría oscilar con la frecuencia necesaria para alcanzar aquella longitud de onda), se
cree que el límite máximo sería el tamaño del Universo (véase Cosmología física) aunque
formalmente el espectro electromagnético es infinito y continuo.