Você está na página 1de 7

25/08/2018

Replicação do DNA

Características básicas da
replicação do DNA in vivo

Dra Marina Mortati Dias Barbero


https://br.pinterest.com/pin/424112489880030039/
barbero.mmd@gmail.com

Qual a função da replicação do DNA? Quando acontece a replicação do DNA?

• Na Fase S da Interfase

Reproduzir e transmitir sua informação genética


de uma célula para sua progênie

Mitose ou Meiose

https://www.sobiologia.com.br/conteudos/Citologia2/nucleo11.php

Teoria sobre a replicação celular Experimento de Meselson-Stahl


• 1958: Mattew Meselson e Franklin Stahl Provou que a
replicação do DNA
é semi-conservativa

Centrifugação em
gradiente de
cloreto de césio

Watson et al. 2015 https://www.khanacademy.org/science/biology/dna-as-the-genetic-material/dna-replication/a/mode-of-dna-replication-meselson-stahl-experiment

1
25/08/2018

A replicação começa em uma origem e segue bidirecionalmente


Replicação semi-conservativa
OriC: 245pb e contém duas
Durante a replicação do DNA sequências repetidas conservadas
Forquilhas de replicação: onde o DNA parental está sendo
as duas fitas velhas ou mães desenrolado e as fitas separadas rapidamente replicadas.
(13pb e 9pb)
Fita velha servem de molde para cada • Regiões ricas em A=T

fita nova ou filha que está


sendo sintetizada.

O mecanismo de replicação está


baseado no pareamento das bases
(complementares) da dupla hélice
Fita nova
do DNA.
A G
C T Material Didático Profa. A.K.F.M. Costa Snutad et al, 2013

A replicação ocorre no sentido 5’ 3’ A replicação ocorre no sentido 5’ 3’


Alongamento do DNA

Fita molde: 3’ 5’

http://ead.hemocentro.fmrp.usp.br/joomla/index.php/publicacoes/folhetins/469-dna-o-sentido-da-vida Watson et al., 2015

Se a síntese sempre segue na direção 5’ 3’, como podem


ambas as fitas serem sintetizadas simultaneamente?

• Se ambas as fitas fossem sintetizadas continuamente enquanto a


forquilha de replicação se movia, uma fita deveria passar por uma
síntese de 3’ 5’.

• Esse problema foi resolvido por Reiji Okazaki e colaboradores na


década de 1960.
• Descobriram que uma das novas fitas de DNA é sintetizada em pedaços
pequenos, denominados de fragmentos de Okazaki.
• Esse trabalho levou à conclusão final de que uma fita é sintetizada
continuamente (fita líder ou continua) e a outra descontinuamente (fita
descontinua, tardia ou retardada)

Watson et al. 2015

2
25/08/2018

Principais elementos envolvidos na


replicação do DNA
Replissomo • DNA Polimerase
• Helicases
• Topoisomerases (DNA girase)
• Primases
Replicação em Procariotos • Ligase
• SSB
• Telomerase
Snutad et al, 2013

14

O DNA é sintetizado por DNA-polimerases O DNA é sintetizado por DNA-polimerases


Síntese
Reparo
Em E. coli:
1. DNA polimerase I – Atividade de polimerase 5’ 3’
Atividade de exonuclease 5’ 3’
• Essa enzima adiciona desoxirribonucleotídios à ponta 3' de uma Atividade de exonuclease 3’ 5’
cadeia de nucleotídios em crescimento, usando como molde um
único filamento de DNA que foi exposto pela deselicoidização 2. DNA polimerase II – Reparo do DNA (polimerase 5’ 3’)
localizada da dupla hélice Atividade de exonuclease 3’ 5’

3. DNA polimerase III - Atividade de polimerase 5’ 3’


Atividade de exonuclease 3’ 5’
Principal enzima da síntese

Associação entre a pol


e o substrato (DNA)
Enzimas envolvidas no processo de replicação

• Grampos deslizantes de DNA:


circunda o DNA, mantendo a DNA
polimerase III ligada ao DNA e
Sítio de catálise
aumento a processividade da DNA
pol
Velocidade de incorporação:
1.000 nucleotídeos/s

Watson et al. 2015 Watson et al. 2015

3
25/08/2018

Enzimas envolvidas no processo de replicação


• Helicases: constituem uma classe de enzimas que podem se mover
ao longo da fita dupla de DNA utilizando a energia da hidrólise de ATP
para separar as duas fitas da molécula.

• Topoisomerases: responsáveis por aliviar a torção na parte da fita


que não está sendo replicada (DNA girase).

• Primase: RNA polimerase que sintetiza pequenas moléculas de RNA


utilizadas como iniciadores (primer ou primossomo), RNA contendo 8
– 12 nucleotídeos, durante o processo de replicação do DNA.

Watson et al. 2015

Primase = RNA polimerase Enzimas envolvidas no processo de replicação


• Enzima • Ligase: une os fragmentos de Okazaki, catalisando a formação de
• Sintetiza RNA primer ligações fosfodiéster.
• Helicase + Primase = complexo Primossomo
• SSB (“single-strand-binding”): ligam-se a cada uma das fitas
impedindo que as fitas se ligue, enquanto o processo estiver
• RNA primer = iniciador ocorrendo.
• Fornece extremidade 3’OH

• Telomerase: adicionar sequências específicas e repetitivas de DNA à


extremidade 3' dos cromossomos, onde se encontra o telômero

http://www.nature.com/emboj/journal/v17/n5/fig_tab/7590869a_F8.html

Replicação do DNA
Etapas da Replicação
1. Iniciação : quando ocorre reconhecimento de sequência específica
no DNA;

2. Alongamento : quando os nucleotídeos são sucessivamente


incorporados;

3. Terminação : quando seqüências no DNA são reconhecidas e a


síntese é interrompida.

Clark et al., 2012

4
25/08/2018

Início Início

• DNA primase sintetiza um iniciador de


• Reconhecimento da oriC
RNA (primer) a partir de sítio específico
• Formação da bolha de replicação no DNA
• Interação de proteínas pré-iniciadoras com a oriC
• O Primer possui:
• 10 a 60 pb de comprimento
4 proteínas DnaA e • extremidade 3’-OH livre
1 complexo de proteína DnaB e DnaC

Snutad et al, 2013 Snutad et al, 2013

Alongamento
Alongamento
Os eixos de rotação necessários
• Desenrolamento durante a replicação das
• DNA helicase moléculas circulares de DNA são
garantidos por enzimas
chamadas DNA topoisomerases.
• Manutenção do filamento As topoisomerases catalisam
desenrolado quebras transitórias das
• SSB moléculas de DNA, mas usam
ligações covalentes entre si para
se fixarem nas moléculas
clivadas.

Snutad et al, 2013 Snutad et al, 2013

Alongamento Alongamento
• A DNA pol III termina um
fragamento de Okazaki quando
• A DNA pol III catalisa o acréscimo de colide com o iniciador de RNA
desoxirribonucleotídeos aos iniciadores anterior.
de RNA (primers), seja de maneira
contínua (fita líder) ou descontínua • DNA pol I: excisa os iniciadores
(fragmentos de Okazaki na fita tardia). de RNA e os substitui por
cadeias de DNA
Usa o fragmento de Okazaki
adjacente com seu grupo 3’-OH
como iniciador
http://en.wikibooks.org/wiki/Medical_Physiology/Cellular_Physiology/DNA_and_Reproduction http://en.wikibooks.org/wiki/Medical_Physiology/Cellular_Physiology/DNA_and_Reproduction

5
25/08/2018

https://www.youtube.com/watch?v=gSebRSfo23Y

Alongamento
• DNA ligase: catalisa a
formação de uma
ligação fosfodiéster
entre os fragmentos de
Okazaki.

http://coral.ufsm.br/blg220/hide/replic6.htm

https://www.youtube.com/watch?v=4jtmOZaIvS0
Revisão de leitura no DNA recém-sintetizado
• Exonulceases (degradam DNA a
partir de uma extremidade) e
• Reconhecimento de nucleotídeo
mal-pareado

Watson et al. 2015

Múltiplos replicons
(bolha de replicação)
Replicação em Eucariotos

Snutad et al, 2013

6
25/08/2018

Maior complexidade do
replissomo

Snutad et al, 2013 Snutad et al, 2013

Replicação Das
Terminações Do Cromossomo

Snutad et al, 2013

Telomerase

Muito Obrigada pela Atenção!!

Snutad et al, 2013