UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MÉDICA

ESPECIALIDAD TERAPIA FISICA Y REHABILITACION

ESPECIALIDAD LABORATORIO Y ANATOMIA
PATOLOGICA

FISIOLOGIA

III CICLO
2018
 BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE FISIOLOGIA

Definición de Bioseguridad:


Es el conjunto de normas preventivas para proteger la salud y brindar seguridad al
 
personal que trabaja en salud frente a los diferentes riesgos producidos por
agentes: biológicos, físicos, químicos y mecánicos.

Agentes de riesgo o causantes de daño: agentes biológicos trasmitidos por ingesta,
 inhalación, inoculación, y por contacto directo a través de piel y mucosas.

 Agentes físicos y mecánicos: Temperaturas extremas,  radiaciones ionizantes, contacto y
conexiones eléctricas, defectuosas, vidrios rotos.
  Agentes químicos: corrosivos, tóxicos, carcinogénicos, inflamables, explosivos. 

La Bioseguridad implica una acción de conjunto: Todos debencumplir las normas de
 Bioseguridad: "El descuido de una persona es el riesgo de todos"

Riesgo Biológico: es la probabilidad de infectarse con un agente patógeno (agente

patógeno se llama a toda  aquella noxa que es capaz de producir una enfermedad
en la actividad laboral.

Exposición: Es un contacto que implica riesgo
con un patógeno capaz de trasmitirse por la
vía donde se está produciendo la exposición.

Propósito de la Bioseguridad:


Promover la salud de los trabajadores de salud mediante la vigilancia de las
actividades de cada área de trabajo en salud para prevenir las exposiciones a
fluidos con riesgo biológico y vigilancia del cumplimiento de las normas de
  políticas que apoyen la
bioseguridad. Además promover, sugerir y establecer
educación continua de los trabajadores de salud.

Debe tenerse un suministro oportuno y continuo de insumos necesarios para la
 protección. La disponibilidad de agua potable es primordial. 

Disponibilidad de lavamanos cerca del área de atención de pacientes ó
Laboratorio de trabajo. 

Prácticas de seguridad

Todo el personal que trabaja en el laboratorio fisiológico o ingresa a él debe seguir

reglas de seguridad. Las normas de seguridad son obligatorias y son esenciales no
solamente para la acreditación académica, sino porque consisten en prácticas que
otorgan seguridad y protección al personal, alumnos e investigadores que trabajan en
los laboratorios bioquímicos, fisiológicos, bacteriológicos, biológicos, químicos, etc.
Muy especialmente en el campo médico donde trabajamos con muestras ó material
biológico que es considerado potencialmente patógeno ó patógeno. La máxima
seguridad y protección es necesaria en estos casos

Practicas generales


Se prohíbe fumar, comer y aplicarse cosméticos, para evitar la diseminación de
agentes infecciosos o productos químicos tóxicos de las mallas hacia la boca. Con
el fin de evitar el contacto con agentes infecciosos o diseminarlos, debe

2
 utilizarse alguna prenda protectora sobre la ropa, como el guardapolvo, mandil,
ó la bata de laboratorio. Estas prendas de protección externa no deben usarse
fuera del laboratorio. Los zapatos han de ser de punta y talón cerrado. No es
conveniente que las personas que trabajan en el laboratorio usen lentes de
contacto debido al desprendimiento de vapores y a las salpicaduras que
pueden producirse. Los lentes de contacto inhiben el lagrimeo y permiten que
las sustancias permanezcan más tiempo en la córnea.

Se recomienda el uso de lentes de protección o protectores para la cara a las
personas que usan lentes de contacto, en particular si hay alto riesgo de
vapores, aerosoles o salpicaduras. La joyería de tipo colgante, el cabello largo y
barba son riesgosos, ya que es posible que entren en contacto con muestras u
otras superficies, o se enreden o queden atrapados en instrumentos con
movimiento, como máquinas rotatorias o centrifugas. Se prohíbe estrictamente
pipetear con la boca todo tipo de muestra, reactivo, agua o cualquier otra
sustancia biológica deberán usarse pipetas manuales automáticas.

Derrames . .


Es necesario desarrollar y tener políticas escritas y procedimientos para instruir
a los alumnos y a los empleados acerca de la manera de manejar derrames
químicos y biológicos. Existen en el comercio estuches con insumos para ambos
tipos de derrames. Si no existen tales normas en la institución  el laboratorio
debe desarrollarlas con el fin de asegurar el ambiente de trabajo.

Lavado de manos


El lavado de manos es una de las principales maneras de evitar la diseminación
de agentes infecciosos. Aunque se utilicen guantes, el lavado de manos es
necesario. Porque es posible que éstos tengan huecos microscópicos. Al tratar
con pacientes, es necesario 
lavarse las manos tras atender a cada uno de ellos
aunque se utilicen guantes.

Limpieza


No debe permitirse que la basura, los desperdicios biológicos, infecciosos. y el
material de vidrio sucio se acumulen en grandes cantidades en el laboratorio.
Los recipientes con muestras de desecho y agentes etiológicos deben taparse
cuando no se estén empleando. Es necesario limpiar con frecuencia las
superficies de trabajo con algún desinfectante al comenzar y terminar cada
turno. El personal de laboratorio fisiológico es responsable de mantener el área
de trabajo limpia y sanitaria,
 aunque haya servicio de limpieza adicional por
parte de la institución.

Etiquetas y señales


Todos los recipientes que contienen productos químicos deben etiquetarse con
claridad, indicando el nombre del producto y cualquier precaución para su
manejo. Las áreas en que se almacenan productos inflamables, peligrosos o
tóxicos y carcinógenos, o en las cuales se utilizan deben estar marcadas
claramente. Las áreas en que se almacenan o analizan sangre o líquidos 
corporales deben estar marcadas claramente con el signo de riesgo biológico.
3
Desecho de desperdicios


Existen normas de la OSHA con respecto al desecho de productos biológicos. El
desecho de materiales biológicos, como desperdicios infecciosos, se examina  y
regula en la actualidad por leyes específicas del Ministerio de Salud Pública.

Agujas y objetos puntiagudos


Las agujas y otros objetos puntiagudos constituyen un riesgo físico de infección
potencial para el personal de laboratorio fisiológico. Todas las agujas
desechables y demás objetos punzantes deben colocarse en un reclpl9nte
 
resistente a la perforación y a prueba de fugas, marcado con el símbolo de
riesgo biológico.

Estos recipientes se descartan, siguiendo las políticas de la institución, cuando
están llenos hasta la mitad o las tres cuartas partes. La mayoría de las
instituciones incineran los recipientes que contienen objetos punzantes.
Inmediatamente después de usada una aguja deberá incinerarse y para ello
existen en la actualidad equipos especiales incineradores de agujas llamados
destructores de agujas. Nunca, deberá refundarse ó volverse a colocar la
cubierta de las agujas a menos que se utilice algún dispositivo como pinzas
diseñadas para este fin, para evitar la punción cutánea accidental. Las agujas
nunca deben cortarse, ya que esto puede provocar salpicaduras de sangre o de
otros líquidos al medio.

SEGURIDAD CONTRA INCENDIOS

Tipos de Incendio


En el laboratorio Fisiológico u otros laboratorios biológicos se requieren
líquidos inflamables y combustibles para ciertos procedimientos, y en ellos
también existe el riesgo potencial de incendios eléctricos y de basura. El
científico del laboratorio debe comprender estos peligros y la manera de
 afrontarlos en caso de urgencia. Los incendios se clasifican de la clase A a la D.

Los incendios de clase A ocurren con combustibles ordinarios, como madera o
papel; los de la clase B ocurren con líquidos inflamables; en los de la clase C
participan circuitos eléctricos energetizados, sin importar el combustible; y los
de la clase D, son producidos por metales combustibles como el sodio. Para
cada tipo de incendio se requiere un extinguidor diferente y adecuado con  el
fin de controlar de manera eficiente el fuego y evitar que se éste se extienda.

Extintores ó Extinguidores para incendios. Clases.


Los extintores contra incendios contienen diferentes sustancias y están
marcados según el tipo de incendio para el que deben emplearse. Los
extintores clase A están llenos de agua y nunca deben utilizarse para incendios
de tipo eléctrico. ya que el agua puede conducir la electricidad de regreso a la
persona que tiene el extintor en las manos. Los extintores clase B contienen
productos químicos secos, espuma acuosa que forma una capa (AFFF) o dióxido
de carbono. Los extintores clase C están llenos de dióxido de carbono o Halon;
los de la clase D de un polvo seco especial que contiene un  enlazante
termoplástico que permite que el agente forme una corteza sólida al
4
 calentarse. Hay extintores que pueden emplearse para Incendios de clases A ,B
y C. Contienen un polvo seco y pueden utilizarse con eficacia y seguridad para
las tres clases de incendios. Generalmente este tipo de extintores es el que se
compra para uso en el hogar o en las oficinas. Sin embargo, si se emplea para
incendios de equipo eléctrico en el laboratorio, es probable que sea difícil o
imposible eliminar posteriormente dicho polvo de los instrumentos. Por tanto,
se recomiendan los extintores de dióxido de carbono para incendios de equipo
eléctrico.

Causas de incendio y su Prevención

Las causas fundamentales de incendios en el laboratorio son descuido, falta de

conocimiento acerca de los productos químicos que se utilizan, permitir que se
efectúen procedimientos sin la vigilancia adecuada, sobrecarga de circuitos eléctricos,
llamas de gas abiertas. Es necesario impartir periódicamente conferencias para
instrucción sobre seguridad en el trabajo, con el fin de recordar a los empleados la
manera segura de proceder para evitar incendios y otros tipos de accidentes.

En caso de que se produzca un incendio es necesario ponerse en contacto con el

departamento de bomberos y solicitar ayuda antes de intentar extinguirlo, Se pierde
tiempo importante cuando se trata de apagar el incendio primero, y después se solicita
ayuda. Los pasos que deben seguirse en caso de incendio son:

1. Rescatar a cualquier persona que se encuentre en peligro.

2. Aislar el incendio cerrando alguna puerta.

3. Solicitar ayuda.

4. Intentar extinguido.

5. Evacuar las instalaciones en caso de que no se pueda apagar el fuego

Por supuesto, cuando hay varias personas presentes, estos pasos pueden llevarse a
cabo de manera simultánea y rápida en un esfuerzo conjunto. Es necesario adiestrar al
personal de laboratorio en el uso de los extintores contra incendios. En general, el
departamento de incendios de la localidad o el comité de seguridad de la institución
proporciona este entrenamiento.

SEGURIDAD BIOLOGICA

Protección Personal


La dispersión epidémica del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha
revivido la preocupación acerca de las enfermedades que se transmiten por la
sangre entre las personas que trabajan en el laboratorio. Se sabe que las
personas que laboran en los laboratorios médicos en general, fisiológicos,
bacteriólogos, biólogos y otros relacionados con la salud en general, conforman
un grupo de alto riesgo para infecciones por virus de hepatitis B relacionadas
con el trabajo y virus de inmunodeficiencia humana (HIV). En 1987 el Centro de
Enfermedades Transmisibles USA (CDC) y la OSHA publicaron recomendaciones 
para proteger a las personas que trabajan al cuidado de la salud y a otras de
5
 adquirir la infección por HIV y se actualizaron nuevamente en 1988. Entre las
recomendaciones se aconseja que "se tomen precauciones congruentes al
manejar sangre y líquidos corporales de todos los pacientes y las muestras que
se obtengan".

Esto se conoce como precauciones universales. Las recomendaciones incluyen
el uso de equipo para protección personal, como guardapolvos, mandiles,
batas, guantes descartables y protectores para los ojos al manipular sangre y
líquidos corporales en el laboratorio. La revisión de los CDC en 1988
recomendó usar equipo de protección personal para manejar todas las
sustancias biológicas y animales. Deben tratarse todas las secreciones y
excreciones corporales como potencialmente infecciosas, ya que hay otras
enfermedades además de HBV y HIV que se transmiten
 a través de diversos
 líquidos del organismo humano y de los animales.

En 1991 la OSHA publicó una regulación final la Occupational Exposure to
Bloudborne Pathogens (Exposición ocupacional a patógenos que se transmiten
por la sangre). Esta regla indica que el patrón debe proporcionar equipo de
protección personal que no permita que los materiales potencialmente
infecciosos entren en contacto con la ropa. la piel, los ojos y la boca del
trabajador en condiciones normales de uso. La regla también indica la manera
correcta de disponer de objetos punzantes y otros desperdicios con riesgo
biológico y señala la necesidad de administrar la vacuna de HBV y el
tratamiento
 tras alguna exposición a todos los empleados que corran este
 riesgo.

Además de describir equipo de protección personal, dicha norma incluye
instrucciones para el lavado de manos, transporte de muestras, uso de pipetas,
forma derecoger derrames, desechos de desperdicios y descontaminación del
equipo.

Derrames


Es necesario que las personas que limpian algún derrame biológico utilicen
guantes descartables y bata de laboratorio. Se colocan toallas desechables
sobre el derrame y se vacía desinfectante sobre ellas. Tras dejarlo reposar
algunos minutos. se recoge la sustancia y el desinfectante con material
absorbente (los cojinetes absorbentes son útiles para derrames grandes) A
continuación se coloca el material contaminado en un recipiente para riesgos
biológicos: bolsas plástico
 grueso color rojo en el Perú y bolsa de color negro
 para basura doméstica.

Después de absorber la mayor parte de material, el área se limpia con un
desinfect8nte de fuerza intermedia o alta, por ejemplo, dilución de Lejía 1:10.
La solución desinfectante se absorbe con material desechable. El área se
enjuaga con agua y se seca para evitar que quede resbalosa. Es conveniente
preparar un conjunto de utensilios para limpiar derrames con riesgo biológico
que contenga todos los materiales necesarios para efectuar la limpieza de este
tipo y tenerlo a la mano en el laboratorio en que se manejan dichas muestras.

6
SEGURIDAD QUIMICA

Hoja De Datos Sobre Seguridad De Materiales

En Agosto de .1987.)a OSHA enmendó la norma Federal Hazard Communication

Standard 29CFR 1919: 1200 (Rigllt to Kriow/HCS Standard), haciéndola extensiva a
todas las industrias, incluyendo las instalaciones para el cuidado de la salud. Esta
norma establece que los responsables de cada área determinen si se utilizan
productos químicos peligrosos en el trabajo y proporcionen a los empleados hojas
con datos de seguridad en el uso del material riesgoso y marquen adecuadamente
los recipientes que contienen el producto, indicando el riesgo, y se mantendrá una
lista de productos químicos peligrosos, es decir, un inventario de productos
químicos, y proporcionen al empleado información y entrenamiento, y desarrollen
un programa de comunicación de riesgos por escrito.

Información que contiene la hoja de datos de seguridad para cada material ó grupo de
sustancias relacionadas, de uso en Laboratorio fisiológico y otros Laboratorios
biológicos.

1. Identificación del producto químico (nombre químico, y sinónimo y/o

nombre vulgar.)

2. Ingredientes peligrosos

3. Datos físicos

4. Datos de incendios y explosiones

5. Información de riesgos para la salud

6. Datos de reactividad

7. Procedimientos para derrames, fugas y desecho

8. Información de protección personal.

9. Precauciones especiales y comentarios

7
 OBTENCION DE MUESTRAS BIOLOGICAS PARA EXPERIMENTACION EN
ANIMALES Y SERES HUMANOS MANEJO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACION

Manejo de Animales


La mejor manera para aprender a manejar correctamente los animales de
 
laboratorio es la instrucción práctica directa. Pueden enunciarse aquí algunos
principios generales.

El personal de laboratorio puede recibir de casi todos los animales (conejos.
cobayas. ratones)., pequeños arañazos cuando el animal trata de escapar; pero
raras veces intenta éste lesionar al operador. En el caso de las ratas, las cosas
cambian; pueden realizar muchos esfuerzos para escapar. y producir
mordeduras peligrosas, También los monos deben manejarse con cuidado. En
cualquier caso, es indispensable que aun los pequeños arañazos de animales se
traten en forma adecuada; si el animal ha sido inyectado con material
patológico la naturaleza de dicho material puede obligar a tomar ciertas
medidas para proteger al personal contra las consecuencias de la mordedura.
Por lo tanto, debe reportarse de inmediato, y tratarse médicamente cualquier
lesión, por pequeña que sea.

Toma de Muestras de Sangre


La muestra de sangre para las pruebas de laboratorio pueden tomarse en
diferentes sitios: capilar o periférica, venosa y ocasionalmente arterial. Esta
muestra se utiliza para la valoración de diversos parámetros del medio interno
que puede llevarse a cabo en sangre completa o una fracción de la misma. sea
plasma o suero. Si la muestra sanguínea no se recoge con una técnica adecuada
puede ocurrir que los exámenes proporcionen información inexacta o
incorrecta ó bien que la muestra se rechace y sea necesario repetir la punción.
Deben tomarse precauciones en todos los casos por lo que la obtención y
manipulación de las muestras se harán con guantes quirúrgicos descartables.

Sangre Capilar o Periférica


La sangre que suele llamarse capilares, al menos parte arteriolar se obtienen
por o general de: a). La yema del dedo; b). el borde del lóbulo de la oreja; y c).
el talón en los niños pequeños En cualquier de estos sitios el área debe de estar
tibia (ni fría ni congestionada) ya que de otra manera la composición de la
sangre varia por la éxtasis o la dilución. Sin embargo debe recordarse que aun
ejecutando una buena toma, los valores de los parámetros difieren  entre la
sangre capilar y la venosa. Usar alcohol y lancetas descartables.

TECNICA

1. Limpie la piel con una torunda de algodón con alcohol de 70º o con otro
desinfectante adecuado y deje secar.
2. Haga una punción profunda (2- 3 mm con una lanceta o aguja estéril
desechable. La punción debe efectuarse de un golpe y rápidamente para
que resulte casi indolora (sobre todo el borde del lóbulo de la oreja).
8
 3. La primera gota de sangre se elimina porque contiene desechos tisulares. La
sangre no debe exprimirse o se obtendrá una muestra diluida; peso sí
puede hacerse presión a distancia del sitio de la punción. Tras concluir la
toma de la muestra se entrega al paciente una torunda limpia que debe
presionar sobre el sitio de lesión.

SANGRE VENOSA


Por lo general se utiliza una de las venas de las fosas ante cubitales, pero con
frecuencia también se puncionan las venas de las manos las muñecas o
cualquier vena visible de buen calibre (en los pacientes prematuros es posible
punzar las venas del cuero cabelludo ó la yugular externa o la femoral) Las
venas deben examinarse cuidadosamente; si son profundas y no se palpan con 
facilidad se descartan. Para facilitar el examen se usa un torniquete de jebe.

Equipo


Las muestras se toman previa desinfección con alcohol y con jeringas
desechables con aguja de calibre 19 ó 20 x1 (cuanto más bajo es el número mas
es el grosor de la aguja, las de menor grosor pueden hemolizar la muestra y las

de mayor grosor se reservan para la obtención de sangre para transfusiones).

Técnica

1. El paciente debe estar acostado o sentado cómodamente y con el brazo

apoyado en una mesa o soporte. Algunas pacientes – en especiales los jóvenes
– pueden sufrir malestar o incluso desmayarse. Por tanto manténgase alerta
ante señales como palidez o piel fría.
2. Coloque el torniquete con un medio lazo para poder retirarlo fácilmente. No
efectué demasiada presión ya que puede detener la circulación arterial.
3. Pida al paciente que abra y cierre el puño un par veces para obtener mayor
distensión de las venas. Algunas veces las venas no se ven con claridad pero se
palpan.
4. Una vez elegido el sitio de punción se procede a limpiar con alcohol y se deje
secar. Enseguida se fija la vena sosteniendo el brazo del paciente con la mano
mientras se estiran y comprimen con el pulgar y los tejidos blandos situados
justo debajo del escogido para punzar. La jeringa se sujeta entre el pulgar y los
tres últimos dedos de la otra mano y sus dorsos se apoyan con el brazo del
paciente. El dedo índice se coloca sobre el casquillo de la aguja y sirve como
guía. El bisel de la aguja debe quedar hacia arriba.
5. Cuando la vena es prominente se punza en forma directa con la aguja colocada
horizontal y dirigida en paralelo a la vena. Al perforar la pared se percibe una
sensación de crujido. Cuando el acceso a la vena no es tan perceptible, la
punción se efectúa en dos tiempos: primero se punza la piel y luego la vena.
Para que la sangre entre a la jeringa se hace una tracción ligera sobre el embolo
evite realizar una tracción excesiva porque la vena puede contraerse e impedir
el paso de la sangre hacia la jeringa. Algunas veces al puncionar se traspasa la
vena; entonces debe retirarse ligeramente la aguja al verificar la entrada de la
sangre. Esta operación puede producir hematomas; si se advierte señales de
9
 extravasación de sangre a los tejidos, retire la aguja de inmediato y aplique
presión local.
6. Antes de retirar la aguja, quite el torniquete y pida al paciente que abra el
puño. En cuanto se adquiera la destreza necesaria, esta última operación se
efectúa cuando la sangre termina de entrar a la jeringa. El paciente debe
mantener la presión con una torunda en el sitio de la punción y el brazo
flexionado durante unos minutos para evitar hematomas.
7. Tras la obtención de la sangre, se retira la aguja de la jeringa con una pinza de
metal y con un movimiento de torsión y con la ayuda de otra pinza se coloca el
extremo del embolo sobre la pared interna del tubo. Nunca realizar el
reenfundamiento de la aguja sin pinzas. La sangre se vacía suavemente para
evitar que se forme espuma y produzca hemólisis. Si la determinación que se va
efectuar exige sangre completa o plasma la muestra se coloca con un tubo con
anticoagulante y se invierte con suavidad varias veces para mezclar. Si en
cambio se desea obtener suero, la sangre se coloca en tubo, de preferencia de
37 ª C para que el coágulo se forme más rápido. La retracción del coágulo
puede acelerarse separando de la pared del tubo con un aplicador de madera.
Es imperativo usar destructores de agujas en todos los casos.

USO DE VACUTAINER


En muchos laboratorios se utilizan actualmente los tubos Vacutainer para
obtener las muestras de sangre venosa, en lugar de las jeringas. Los tubos
están sellados con un tapón de goma y extraen un volumen de sangre
predeterminado. La aguja desechable se enrosca en el tubo de manera que el
tapón de goma alcancé justo la línea guía. La aguja más corta se mete dentro
del tapón de goma, pero no penetra y por lo tanto no rompe el vació. Una vez
que se tiene la certeza de que la aguja ha abordado la vena, se empuja el tubo
hasta el fondo del sujetador lo que rompe el vacío y la sangre entra al tubo.
Cuando el flujo cesa, el tubo se retira y si se desea puede sustituirse por el otro
para obtener otra muestra. No debe usarse el Vacutainer para dosaje de gases
arteriales.

SANGRE ARTERIAL


Para la determinación de gases se requiere punción arterial. En esos casos la
arteria se ubica localizado el latido por palpación muy cuidadosa. La punción es
necesariamente más profunda y se requiere  mayor cautela para impedir
hematomas. Debe practicarla el médico.

Anticoagulantes


Los cuatro anticoagulantes más usados son una mezcla de oxalato amoniaco y
potasio, citrato trisodico, Sequestrene (EDTA) y heparina. Los tres primeros
impiden la coagulación al sustraer el calcio del plasma sanguíneo por
precipitación o fijación en forma no ionizada, e inhibe la activación de los
 factores de la coagulación.

El citrato trisodico se utiliza para impedir la coagulación de la sangre destinada
a transfusiones. El Sequestrene y la heparina pueden servir para el mismo fin, 
10
 pero no la mezcla de oxalatos porque es toxica. La mezcla de oxalato de
amonio y (6partes) y oxalato potasio (4partes) en la cantidad de 2 mg/ml de
sangre no afecta el volumen globular medio y puede usarse para hemoglobina,
hematocrito y recuentos globulares. En frotis de sangre su utilidad esta limitada
a los primeros minutos por que se desarrollan con rapidez formas dentadas en
los hematíes, vacuolización en el citoplasma de los granulocitos y artefactos en
los núcleos de linfocitos y monocitos y otras deformidades. Asimismo, la sangre
tomada con esta mezcla de anticoagulantes no puede emplearse para
determinados químicas de nitrógeno ni potasio.

El citrato trisódico en solución acuosa al 3.8%, se mezcla a razón de 1/9 con
sangre para investigaciones de coagulación. El Sequestrene (EDTA) se emplea
en una concentración de 1 a 2 mg/ml de sangre. La sal di sódica o di potásica de
Etilendiaminotetracetato es tal vez el anticoagulante que mas se emplea para
el recuento de las células sanguíneas. Hay que mezclarlo minuciosamente con
la sangre. Para el estudio del hematocrito es equiparable al oxalato y para
estudios morfológicos lo supera, ya que impide la deformación y artefactos
incluso después de un reposo prolongado. Se consiguen frotis aceptables aun
cuando hayan pasado 2 o 3 hs y hasta 24 hs si la sangre se refrigera. También
 es posible realizar el recuento de plaquetas aun después de unas pocas horas. 

La heparina, a razón de 0.1 a 0,2 mg/ml de sangre, no afecta el tamaño
corpuscular ni el hematocrito. Es el mejor anticoagulante para prevenir la
hemólisis y para las pruebas de fragilidad osmótica. No resulta satisfactoria
para recuentos de leucocitos o cuando han de prepararse frotis (o extensiones
de sangre por que en este segundo caso produce  un fondo azul en las
preparaciones teñidas con el colorante de Wright.

11
 CUIDADO, INOCULACIÓN Y SANGRIA DE LOS ANIMALES y DIAGNOSTICO DE SUS
ENFERMEDADES

Fundamentos

1. Para determinadas investigaciones de laboratorio fisiológico es indispensable

disponer de los animales apropiados.
2. Los animales habrán de ser sanos y seleccionados con cuidado y estar
instalados con limpieza y comodidad, así como adecuada y suficientemente
alimentados.
3. Pocos métodos de inyección y sangría producen mayor dolor que los similares
empleados en los seres humanos, y todos los métodos operatorios de
importancia habrán de efectuarse con el animal anestesiado. Por otra parte
estos animales habrán de ser tratados con la solicitud que merecen por los
servicios que prestan a la humanidad.

Alojamiento de los animales


Las jaulas para los animales pequeños, como conejos, cobayos, ratones y ratas
deben construirse y disponerse de modo que los animales se conserven sanos
y cómodos. Se evitara atestar las jaulas con lotes demasiados numerosos.

Convendrá disponer de jaulas separadas para los animales normales que no se
utilicen.

Los animales recién llegados al laboratorio deberán ser examinados
cuidadosamente, a fin de comprobar que no están enfermos, antes de
 
colocarlos en las jaulas de los normales. Si se dispone de suficiente espacio
será conveniente guardarlos en aislamiento durante una semana a diez días.

Las jaulas se construirán de modo que permitan la limpieza y desinfección mas
 
completas y posean suficiente luz y ventilación, deben construirse expresamente
para fines experimentales fisiológicos.

Debe disponerse de compartimientos, y jaulas de aislamiento para los animales

inoculados y deberán estar solos, en jaulas aparte,  para protegerlos de las
molestias o herida que entre ellos pudieren infligirse.

Los compartimientos de animales deben estar bien  iluminados y ventilados .Se procurara
conservar a una temperatura uniforme, día y noche.

Identificación de los animales


Es conveniente adoptar un sistema seguro para la identificación de los
animales. La práctica de rotular las jaulas sirve para la distinción de los lotes
numerosos de animales aun cuando para conseguir un registro completo
conviene numera a cada animal y anotar los detalles relativos al sexo,
descripción, etc.

Chapas


Para los conejos y cobayos pueden emplearse unas pequeñas chapas de
aluminio que se fijan a una oreja de animal por medio de una grapa o un hilo
metálicoque perfore estos órganos y atraviese también los orificios de las
chapas.
12
 
Para los animales de mayor tamaño pueden adquirirse identificadores
especiales. Pueden obtenerse en las casas de artículos veterinarios. 
Descripción.

Cuando se use únicamente este método de identificación y haya que alojar
juntos en una misma jaula varios animales, deben seleccionarse los que 
presenten señales o colores diferentes. Para facilitar el registro debe
disponerse de sellos de goma con dibujos de ratón, cobayo o conejo. Este
método se utiliza junto con el de la chapa metálica a fin de asegurar la
identificación si la chapa se perdiera. Asimismo, debe anotarse
cuidadosamente cualquier deformidad o seña particular. El sexo debe
registrarse en la descripción (macho y hembra).

 Señales o marcas para identificación de animales 

Los animales pequeños, como ratones y ratas, pueden marcarse en el cuerpo o
en la cola pintándose la piel y el pelo con colorantes (soluciones alcohólicas
saturadas de fucsina o ácido pícrico).Las jaulas habrán de rotularse. 

PREVENCION Y TRATAMIENTO DE LOS ACCIDENTES EN LOS LABORATORIOS


Las personas que trabajan en los laboratorios fisiológicos se hallan rodeadas de
múltiples peligros, de modo especial a causa de las infecciones que pueden
contraer durante el manejo de los animales de experimentación, ó durante el
trabajo mismo con ellos como actos quirúrgicos, exposición de órganos, u otros
trabajos que así lo demanden los experimentos fisiológicos, ó al manipular
productos sépticos durante las investigaciones o sufrir quemaduras o la
deglución accidental productos biológicos ó producirse a heridas consecutivas
rotura de cristales ,etc. A estos peligros están principalmente expuestos los
investigadores poco experimentados que los ignoran o se entretienen o
distraen mientras trabajan con animales  de experimentación ó con productos
infecciosos. ó con ácidos, álcalis, etc.

PREVENCION DE LOS ACCIDENTES


Deben emplearse siempre guantes de goma descartables en los experimentos,
el investigador ha de tener especial cuidado en no herirse los dedos con las
agujas y evitar cortarse con los instrumentos afiliados, como bisturís, sierras,
  automáticas manuales de volúmenes regulables con
etc. Deben usarse pipetas
punteras descartables.

Las pipetas de vidrio, en caso de ser usadas, aunque no es recomendable
hacerlo, habrán de tener la parte bucal tapada con algodón de modo
obligatorio y tendrán bulbos de goma para aspiración, y nunca aspirar con la
 boca. Pueden utilizarse asimismo diversas jeringas. De igual modo, al aspirar
ácidos, álcalis y otras soluciones peligrosas por medio de pipetas, deben usarse
pipetas con bulbos de goma de aspiración y nunca hacerlo con la boca. Vale la
redundancia, el alumno deberá tomar todas estas preocupaciones con el

13
 máximo cuidado. Es de suma importancia preocuparse del trabajo sin
conversar ni distraerse.

Las manos del operador habrán de estar libres de cortes y escoriaciones,
particulares en la proximidad de las uñas, debiendo lavarse cuidadosamente
 después de haber manipulado productos infecciosos y antes de las comidas. 
con jabón y agua y luego sumergirlas en una solución desinfectante antes y


Una vez terminado el experimento deberá lavarse la superficie de las mesas
con una solución desinfectante; algunas veces es recomendable trabajar sobre
 tricresol al 2 por 100. 
una toalla humedecida en una de estas soluciones, como por ejemplo lisol o


Las pipetas, tubos de ensayo y demás instrumentos empleados en la
experimentación fisiológica también se desinfectarán con una solución lisol o
 20 minutos o autoclave que es lo ideal. 
tricresol al 2 por 100, o se esterilizarán inmediatamente por ebullición durante


Los recipientes, láminas portaobjetos u otro material contaminado con orina ò
heces ò secreciones biológicas de los animales, ò contaminados con productos
biológicos humanos, no se volverán a tocar por ningún concepto, sino que se
 líneas más arriba 
someterán a un proceso de desinfección inmediata, como hemos indicado


Los calentadores y demás aparatos eléctricos se comprobarán con frecuencia
para verificar la exactitud de su funcionamiento, reparando sin pérdida de
 Bunsen no debe utilizarse nunca en la proximidad de materias inflamables. 
tiempo sus averías a fin de evitar cortos circuitos incendios. El mechero de

Siempre se verificara que la llave de mechero quede bien cerrada antes de

retirarse del Laboratorio, igualmente se asegurará de cerrar la llave del balón
contenedor del gas ó la llave general del gas del Laboratorio de ser el caso. El
éter, el alcohol y similares deben mantenerse alejados de todo posible contacto
eléctrico. Es obligación del servicio demantenimiento realizar revisiones
periódicas de mantenimiento preventivo.

14
 PRACTICA DE LABORATORIO Nº 1

FISIOLOGIA DE LA MEMBRANA SEMIPERMEABLE

FRAGILIDAD OSMÓTICA

A. Introducción

Todas las células del organismo están rodeadas de una membrana limitante, a través
de la cual obtienen sus alimentos y el oxígeno y excretan sus productos de deshecho y
el C02 resultante de su metabolismo. La membrana celular tiene propiedades bien
establecidas: Solo deja entrar las sustancias que se necesitan y solo deja salir las
secreciones, los productos de desecho y las sustancias no indispensables, en otras
palabras, es semipermeable. Estas funciones las realiza a través de diversos
mecanismos, que hemos revisado con detalle en las clases teóricas. En la presente
práctica trataremos de una de ellas que es la Osmosis. En general la osmosis significa el
paso de líquidos a través de una membrana semipermeable. Cuando dos soluciones de
diferentes concentraciones están separadas por una membrana semipermeable, el
solvente y los solutos atraviesan la membrana siguiendo las leyes que rigen el
fenómeno de la ósmosis.

El agua es transportada a través de la membrana celular por una fuerza hidrostática

llamada presión osmótica, dicho de otro modo, la presión osmótica es la fuerza de
atracción que ejercen las partículas sobre el agua atrayéndola. La osmolaridad
depende del número de partículas que se encuentran es solución. La Unidades de
Osmolaridad son el Osmol /Kg H2O, en medicina usamos el sub múltiplo mili Osmol
/Kg H20

Un Osmol por Kg es la fuerza para atraer agua que ejerce un MOL de partículas que se
encuentran en 1 Litro ó Kg de solución. Cada partícula (átomo) ejerce una presión
osmótica independientemente; por ejemplo un mol de glucosa disuelto en un Kg (litro)
de agua ejerce una presión osmótica de 1 Osmol /kg agua; en cambio un mol de ClNa
disuelto en un litro de agua ejercerá una presión Osmótica de dos Osmoles debido a
las dos partículas en que se disocia, una de sodio y otra de cloro. (Na+ y Cl- )

La capacidad de una partícula para producir un flujo de agua a través de la membrana

celular se llama tonicidad.

Una solución extracelular que permite que el agua fluya hacia dentro de la célula
haciendo que ésta se hinche se llama hipotónica (Hipo osmolar)

Una solución que permite que el agua fluya hacia fuera de la célula se llama
hipertónica. (Hiper osmolar)

La membrana del glóbulo rojo nos servirá en la presente práctica para demostrar este
fenómeno y asimismo demostrar que la membrana tiene ciertos límites de resistencia
normales a variaciones de la tonicidad en el medio interno.

15
Aplicación clínica.

Existen algunas enfermedades en las cuales se producen alteraciones en la membrana

que generan hemólisis por mayor fragilidad de la membrana, son defectos genéticos
heterogéneos que afectan a las proteínas constitutivas de la membrana del eritrocito.
La Enfermedad Esferocitosis es una de ellas, en la en la cual se ha demostrado una
disminución de la proteína membranal Espectrina del hematíe, y el grado de déficit de
la proteína Espectrina parece asociarse con la gravedad clínica de esta enfermedad,
pues los hematíes son muy frágiles y se hemolizan produciendo anemia intensa.

B. Fundamento

Se llama resistencia globular osmótica a la que presentan los hematíes suspendidos en

soluciones salinas hipotónicas. Si empleamos soluciones salinas de 0.76 a 0.9 % y
suspendemos dentro de ellas los hematíes veremos que éstos se conservan sin
alteración durante varias horas, y que una vez sedimentados (espontáneamente ó por
centrifugan), el líquido que sobrenada es claro y transparente como la misma solución
salina. Pero si efectuamos suspensiones de hematíes en soluciones de cloruro sódico a
concentraciones progresivamente decrecientes observaremos que al llegar a una
determinada concentración empiezan a destruirse, liberándose la Hb, lo que confiere
al líquido una ligera coloración rojiza que no desaparece por centrifugación. Esto se le
llama hemólisis inicial o resistencia mínima, que normalmente se presenta entre las
concentraciones de 0.46 y 0.42 %.Esta hemólisis de los hematíes va aumentando en
cantidad a medida que la solución de cloruro sódico va siendo más hipotónica hasta
presentarse una hemólisis total. Esta hemólisis total se observa entre las
concentraciones de 0.34 a 0.30 %

Esta práctica sirve para determinar la resistencia de la membrana de los glóbulos rojos
a la hemólisis en presencia de diferentes concentraciones de soluciones salinas
hipotónicas a temperatura ambiente y veremos en cuál de ellas se presenta hemólisis
inicial y total.

C. Reactivos y Equipos Necesarios

1. Solución salina al 0.9 %

2.-Pipetas graduadas:

- 1 ml al 0.01
- 10 ml al 0.1
- 5 ml al 0.1

3.- Micropipetas de 0.1 ml

4.- Fiola de 100 ml

6.- Muestra de sangre venosa desfibrinada ó hematíes lavados.

7.- Agua destilada

8.- Tubos de vidrio 13x 100 mm sin reborde

16
 D. Método

1.- Preparar soluciones seriadas, en tubos de prueba marcados del 1 al 12,

según la tabla adjunta, haciendo las diluciones con agua destilada según lo
indicado:

Marcar 19 tubos de prueba y repartir así:

Agua
Solución El alumno calculará la
Mezclar
N° NaCl Destilada % NaCl de Osmolaridad
la sol. correspondiente a cada uno de
Tubo 1% Por
Ml inversión resultante los tubos ( expresaren
Ml unidades mOsm/Kg H20)

1 3.0 7.0 Si 0.30 %

2 3.5 6.5 Si 0.35 %

3 3.75 6.25 Si 0.375 %

4 4.0 6.0 Si 0.40 %

5 4.25 5.75 Si 0.425 %

6 4.50 5.5 Si 0.45 %

7 4.75 5.25 Si 0.475 %

8 5.0 5.0 Si 0.50 %

9 5.5 4.5 Si 0.55 %

10 6.0 4.0 Si 0.60 %

11 8.5 1.5 Si 0.85 %

12 ------ 10.0 --- 0 %

Control de hemolisis total para
comparación visual.
NOTA: EL NUMERO 12 ES CONTROL DE HEMOLISIS TOTAL (100% HEMOLISIS)

17
 2.- Una vez hecha la distribución anterior, mezclar bien, por inversión cada uno
de los tubos. NO OLVIDAR ESTE PASÓ.

3.- Recién ahora, después de haber mezclado, añadir 0.1 ml de sangre venosa
desfibrinada cada uno de los tubos.

4.- Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversión suave.

5.- Dejar en reposo 10 minutos a temperatura ambiente y luego volver a

mezclar por inversión suave.

6.- Centrifugar a 2000 rpm. Durante 10 minutos.

Examinar por simple inspección visual en cual de los tubos se inicia la hemólisis
(hemólisis leve), generalmente a partir del tubo Nº 5, de 0.425 % NaCl (lo que
se manifiesta por el color ligeramente rojizo del líquido) y luego examinar en
qué otro tubo la hemólisis es intensa (aproximadamente en 0.36 % NaCl).

En el Tubo Nº 12 se producirá hemólisis total y corresponde al 100% de

Hemólisis. (Destrucción total de los hematíes y no deja nada de sedimento).

Valores Normales:

1. Hemólisis inicial (leve) (empieza Hemólisis): 0.44 % + -- 0.02

2. Hemólisis Total (Hemólisis completa): 0.32 % + -- 0.02

a) Causas de aumento de la fragilidad osmótica globular:

Los hematíes son más frágiles que lo normal, tienen poca resistencia ante
ligeras hipotonías, y se hemolizan muy fácilmente.

- Anemia Hereditaria Esferocítica, en la Enfermedad Hemolítica del recién

nacido por incompatibilidad ABO
- Después de alguna injuria térmica (quemaduras)
- Anemias Hemolíticas sintomáticas en algunos casos de Linfoma Maligno,
Leucemias, Cáncer, Cirrosis, etc.

b) Causas de disminución de la fragilidad osmótica

Los hematíes son más resistentes que lo normal a la hipotonía:

- En la primera Infancia, tempranamente en la infancia.
- En algunas Anemias por deficiencia de Hierro
- Talasemia mayor ( ó anemia de Cooley, ó anemia del Mediterráneo )
- Anemia Drepanocitica ( Hoz, Sickle cell anemia)
- Anemia Megaloblástica Nutricional
- Post Esplenectomía y algunas hepatopatías con ictericia

18
 solamente es NORMAL, PERO la fragilidad globular realizada en MEDIO
ÁCIDO (pH ácido) SÍ ESTA AUMENTADA .

d) La fragilidad mecánica

- Está aumentada en la Ovalocitosis hereditaria (ó Eliptocitosis), en los casos

que evolucionan con anemia hemolítica.

19
 PRACTICA DE LABORATORIO Nº 2

ESTIMULACIÓN MUSCULAR

A. Introducción

Los tejidos neural y muscular tienen la propiedad de excitabilidad y responden a

estímulos, es decir variaciones del medio químicas o físicas, tales como alteraciones de
la temperatura, deformación mecánica, etc.

En los fenómenos estímulo respuesta, la respuesta depende de las características del

estímulo y de las condiciones del tejido estudiado. La descripción correcta de la
relación entre estímulo y respuesta requiere el control de la duración , intensidad y
frecuencia del estímulo.

Las relaciones estimulo-respuesta se desarrollan en función al tiempo y al espacio.

B. Material
- 10 Sapos grandes
- 10 Tabla de fijación para batracios
- Estimulador eléctrico
- 10 Alambre de zinc
- Equipo de disección
- 10 Alambre de cobre

C. Método

Experimento N° 1

Se anestesia al sapo por destrucción del cerebro y la médula espinal.

Con unas tijeras se hace un ojal en la piel de la región anterior homóloga al tronco.
Se continúa la incisión de la piel en cinturón. Una vez completado el cinturón, se
desprende la piel de un tirón hacia abajo. En la región dorsal se debe tener
cuidado por la adherencia de la piel al urostilo.

Se levanta el urostilo con la pinza de disección y se seccionan los elementos

paravertebralmente y en dirección cefálica, fracturando el proceso del iliaco
paralelo al urostilo que se articula con el proceso transverso de la novena
vértebra. Inmediatamente se observan dos formaciones blancas que se introducen
por tres raíces más arriba en la columna vertebral. Estas estructuras son los
nervios ciáticos. Por debajo se observa la aorta dorsal con sus bifurcaciones.

Con las tijeras se secciona transversalmente el urostilo, evitando traccionar o

lesionar los dos nervios ciáticos.

Se pasa un hilo por debajo de cada uno de los nervios ciáticos y se realiza una
ligadura lo más proximal posible a la columna vertebral. En este momento se
observa una reacción muscular.

20
Se secciona el nervio proximalmente a la médula, entre la columna vertebral y la
ligadura. Con la ayuda del hilo se puede efectuar la disección del nervio ciático, no
siendo necesario manipularlo con ningún instrumento.

Para poder liberar el nervio, es necesario cortar el músculo piriforme, después se

lo aísla por disección roma entre el semimembranoso por dentro y el bíceps por
fuera. A todo lo largo del nervio se irá seccionando sus colaterales y se lo aislará
hasta la rodilla, comprobando que exista conexión funcional entre el nervio y el
músculo gastrocnemio. Una vez que el nervio ha sido aislado, se debe evitar que
se seque humedeciéndolo constantemente en solución fisiológica.

Experimento N° 2: Experimento de Galvani

Se fabrica un asa con alambre de cobre y alambre de zinc. Con el alambre de cobre
se toca la piel del animal y con el zinc el nervio.

Experimento N° 3

Se toma la pata del animal y se pasa un hilo por debajo de la aponeurosis plantar,
amarrándola fuertemente. La ligadura queda ubicada proximalmente y se realiza
la disección de la aponeurosis, que en el sapo se continúa hacia la pierna por el
tendón de Aquiles que tiene un sesamoideo.

Se libera el tendón de Aquiles por disección roma y se separa el gastronemio hasta

llegar a su inserción superior. Con un golpe de tijera se secciona la tibia por debajo
de la rodilla y el fémur un poco por encima de esta. Se libera el fragmento de
fémur del exceso del tejido muscular y se le hace una fuerte ligadura.

Con cuidado se coloca el electrodo sobre el nervio y se procede a estimular la

preparación neuromuscular.

Con el estimulador eléctrico se realiza el estímulo de menor intensidad y se

incrementa gradualmente hasta obtener una contracción muscular este es el nivel
de umbral que genera la respuesta de contracción. Con el estímulo eléctrico de
esta misma intensidad se continuara la estimulación durante todo el experimento
(estimulo superior al umbral).

Humedecer constantemente la preparación con un gotero.

Experimento N° 4: fenómeno de la escalera

Se realizan descargas simples para buscar el umbral de estimulación y después se

disminuye el voltaje para obtener el estímulo subliminal.

Luego de repetir la estimulación por un tiempo se observará que las contracciones

son cada vez más amplias, de mayor intensidad hasta alcanzar un valor máximo.
Este incremento progresivo de la amplitud es lo que se denomina el fenómeno de
la escalera.

Experimento N° 5: tetania

21
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Se realizaran estimulaciones intensas, muy rápidas y/o continuas y se obtendrá
una serie de contracciones sucesivas de modo que las estimulaciones no permitan
que termine la sacudida anterior y continuaremos así hasta obtener una
contracción sostenida, permanente, intensa y que es lo que denominamos tetania.

22
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

PRACTICA DE LABORATORIO Nº 3

SHOCK ESPINAL, REFLEJOS OSTEOTENDINOSOS

SHOCK ESPINAL

Leyes Pfluger, Turck, Sumacion Espacial, Sumacion Temporal y efecto de la ablación

medular.-

A. Material
- 10 Sapos
- Beakers, estilete de acero,
- Carrete de Runckford
- Acido sulfúrico diluído 0.1 %; 0.2%; 0.3 %; 0.4%; 0.5 %; 1% sol. acuosas.
- Suero fisiológico
- Equipo de disección, guantes látex descartables
- Sol. Ringer para batracio.

B. Método

Experimento N° 1: PREPARACIÓN DEL SAPO ESPINAL

Observar la postura, los movimientos espontáneos y respuesta a los diversos

estímulos, movimientos respiratorios, reflejos del salto, respuesta a la rotación
y posición de espalda del sapo normal.

Se fija al animal con la mono izquierda y se determina las siguientes líneas: una
línea transversal a nivel del límite posterior de la membrana timpánica ( A-B),
Una segunda línea entre el ojo y la membrana timpánica (X-Z). Se toma una
tijera y se introduce uno de sus extremos en la boca del animal y se lo decapita
con un solo golpe, procurando que en este momento el sapo se encuentre con
el dorso hacia abajo, a lo largo de la línea X-Z Realizar hemostasia por
compresión y realizar las mismas observaciones que en el sapo normal. Este es
el sapo descerebrado. En este caso, el sapo puede realizar movimientos
complejos tales como saltar y si se coloca de espalda puede regresar a la
posición normal.
En otro sapo hacer las observaciones del tono y la respuesta a la estimulación
eléctrica y luego realice el corte a lo largo de la línea A-B. Inmediatamente se
observa el tono y la actitud postural del animal y se efectúa el pinzamiento de
uno de sus dedos. Se objetivará la depresión motora que constituye uno de los
componentes del shock espinal, además no se encuentra los resultados del
sapo descerebrado.
Se espera unos minutos y se observa nuevamente el tono y la actitud postural
del animal y se efectúa el pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivará las
respuestas motoras.
23
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Experimento N° 2: leyes de Pfluger
Se pasa un hilo a través de un orificio hecho en el piso de la boca y se cuelga al sapo
espinal de un estativo.

A continuación se efectúa una secuencia de estímulos graduados, los que producen

respuestas determinadas:

a) Ley de UNILATERALIDAD.- Se pellizca suavemente un dedo y se produce

contracción de la misma pata solamente.
b) Ley de SIMETRÍA.- Se pellizca con mayor intensidad el dedo y se produce
contracción de la misma pata y de la pata opuesta.
c) Ley de IRRADIACIÓN.- Se pellizca fuertemente un dedo y se produce
contracción de la misma pata, de la pata opuesta y finalmente de las
extremidades anteriores.
d) Ley de GENERALIZACIÓN.- Se pellizca muy fuertemente un dedo y el animal se
contrae y se mueve enérgicamente.

Experimento N° 3: experiencia de Turck

Se emplea la preparación de sapo espinal. Se la cuelga de un estativo y se espera que
esté en reposo.

Se prepara varios beakers con concentraciones crecientes de ÁCIDO SULFÚRICO desde

0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 y 1%. Se sumerge la pata del animal en cada una de las distintas
soluciones, empezando por la de menor concentración; se espera y se registra el
tiempo necesario para la respuesta. Una vez que se haya producido la respuesta, se
lava la pata del animal en suero fisiológico antes de pasar a la solución siguiente.

Se observa y se registra las características y tipo de respuesta en cada caso.

Experimento N° 4: sumación temporal

Se sumerge la pata del animal en una solución de ácido sulfúrico al 0.1% varias veces.
Se observa el incremento progresivo de la respuesta.

Experimento N° 5: sumación espacial

Se sumerge en una solución de ácido sulfúrico al 0.1% primero la punta del dedo, luego
el dedo completo, la pata y la rodilla. Se observa la mayor intensidad de las respuestas.

24
 REFLEJOS OSTEOTENDINOSOS EN EL HOMBRE

A. Introducción

Los mecanismos reflejos están constituidos por un órgano receptor, un órgano

efector y una red de comunicaciones entre ambos. La acción refleja se inicia por un
estímulo de entrada y tiene como resultado una respuesta de salida. La acción
refleja abarca el reflejo axónico sencillo hasta los reflejos complejos en los que
existe intervención cerebral.

El sistema nervioso comprende un gran número de arcos reflejos. Cualquier

estímulo produce una respuesta. El estímulo puede originarse en los órganos
internos y afectar la parte visceral del sistema nervioso. El sistema puede
originarse en el exterior y afectar la parte somática del sistema nervioso. Un mismo
arco reflejo puede afectar tanto partes viscerales como somáticas.

Los reflejos viscerales no suelen alcanzar la conciencia, mientras que los reflejos
somáticos pueden ser percibidos conscientemente. Muchos reflejos pueden
considerarse como parte de un programa, puesto que la respuesta adecuada
parece estar prevista dentro del sistema nervioso.

Los reflejos espinales, que requieren transmisión del estímulo desde la periferia
hasta la médula y de allí regresar al órgano efector, son de este tipo. Los reflejos
espinales no requieren de intervención del sistema nervioso central y funcionan
igualmente bien en un animal cuya médula se ha seccionado por encima de la
localización de las neuronas de los nervios correspondientes.

Las inserciones tendinosas de los músculos poseen receptores sensitivos especiales

que responden a ala distensión y envían la información al sistema nervioso central
sobre la posición de un músculo o de un miembro. Cuando estos receptores
tendinosos son estimulados por una distensión rápida y brusca, mandan impulsos a
la médula espinal y, a través de una sinapsis a la motoneurona anterior que inerva
el músculo. Esta neurona manda impulsos al músculo y produce una sacudida
rápida.

La respuesta de los reflejos espinales puede incrementarse elevando el nivel de

excitación de la médula espinal. Esta facilitación puede conseguirse haciendo que
el sujeto enganche sus manos y tire con fuerza.

B. Material

- 15 Sujetos de prueba
- 15 Martillos de reflejos

C. Método

Experimento N° 1: reflejo rotuliano

Se sienta al sujeto en una posición cómoda y cruza las piernas. La pierna superior
debe estar relajada. Por palpación, se localiza el tendón rotuliano y se da un golpe

25
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
seco con el martillo de reflejos. La respuesta adecuada es la contracción del
cuádriceps, lo que produce extensión de la pierna.

Experimento N° 2: reflejo aquiliano

El sujeto se pone de rodillas sobre una silla y deja colgar fuera los pies sin
contracción de los músculos de las pantorrillas. Se busca el tendón de Aquiles y se
estimula. La respuesta apropiada es la contracción de los músculos gemelos y del
sóleo, lo que produce extensión del pie.

Experimento N° 3: reflejo bicipital

El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el

antebrazo. Se busca el tendón del bíceps con el pulgar de la mano que sostiene el
antebrazo, se deja el pulgar sobre el tendón y se da un golpe sobre el pulgar. la
respuesta apropiada es la contracción del bíceps, lo que produce flexión del
antebrazo.

Experimento N° 4: reflejo tricipital

El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el

antebrazo. Se palpa el tendón del tríceps, inmediatamente por encima de su
inserción en el codo, y se golpea el tendón con el martillo. La respuesta apropiada
es la contracción del tríceps, lo que produce extensión del pie.

Experimento N° 5: reflejos radial y cubital

Se golpea los tendones insertados sobre los extremos inferiores de ambos huesos,
por encima de la muñeca. El examinador sostiene el brazo del sujeto. La respuesta
adecuada para el reflejo cubital es la pronación de la mano y para el reflejo radial
la flexión del antebrazo.

26
 PRACTICA DE LABORATORIO N°4

EVALUACIÓN DE LA PERCEPCIÓN SENSORIAL Y SENSACIONES NOCICEPTIVAS:

EVALUACION DEL UMBRAL DEL DOLOR

A. Introducción

La estimulación de un receptor táctil de la piel es transmitida por la vía del asta

posterior (sensitiva) hasta la corteza somestésica. En esta la excitación del receptor
activa un determinado número de neuronas que constituye su campo cortical. Sin
embargo, no todas las neuronas de este campo se estimulan en la misma
magnitud, sino que las que corresponden al centro del campo descargan de forma
máxima y las de la periferia en menor magnitud. Este contraste es el que permite
localizar el punto exacto de estimulación.

Las capacidades táctiles se determinan en muchas ocasiones por la posibilidad de

discriminar dos puntos de estimulación sobre la piel.

Las diferencias en las capacidades de discriminación en las diferentes zonas del

cuerpo se deben al número de receptores que exista en esa zona y a la
representación cortical que éstos poseen. Los dedos están profusamente poblados
de receptores y el área de corteza a que llega la información proveniente de ellos
es amplia, de ahí su mayor posibilidad de discriminación. Otras zonas del cuerpo
tienen menor densidad de receptores siendo éste uno de los factores que conlleva
a que la información que llega al área de la corteza sea reducida y, por lo tanto, sea
menor su posibilidad de discriminación.

Cuando se estimulan dos puntos cercanos de la piel, cada uno excitará de forma
máxima al centro de su campo cortical; pero como los campos se superponen
parcialmente, la resultante será una excitación mayor, aunque se mantienen los
máximos de excitación separados.

El ser humano puede percibir diferentes grados de calor y frío, que pasan del frío
glacial, al frío, al fresco, a la temperatura indiferente, a lo tibio, caliente y
quemante.

B. Objetivos

1. Discriminar procesos y modalidades de percepción sensorial en el ser

humano de tal manera que pueda sistematizarlos.
2. Comprobar la distribución anatómica de los receptores cutáneos y la
importancia fisiológica de dicha distribución.
3. Comprobar la influencia de las bajas temperaturas en la sensibilidad.
4. Comprender los mecanismos que explican dichas funciones, estas
observaciones deberán ser correlacionadas con sus conocimientos
neuroanatómicos y neurofisiológicos.

27
EXPERIMENTO 1: IDENTIFICACIÓN DE CAMPO RECEPTIVO SENSORIAL

a) Materiales

 1 Sello especial 

 1 Hoja de papel 

 15 Pelos de cerda (pelo de Von Frey) 

 Sujeto experimental (alumno 1) 


Sujeto experimentador (alumno 2) 


b) Procedimiento

1. Por medio de un sello especial marcar un área en la piel de un compañero:

cara, dorso del cuello, antebrazo, dorso de la mano.

2. Sellar en una hoja de papel un área similar y proporcional

3. Luego el sujeto experimental deberá cerrar los ojos y se le aplica por medio
de un instrumento sensibilizador llamado pelo de Von Frey, una ligera
presión en cada uno de los cuadrantes del área delimitada por el sello.

4. El sujeto experimental deberá reportar las modalidades de sensaciones que

percibe en la piel de cada cuadrante (tacto, dolor, temperatura, otros).

5. Marcar con notación diferente, en un esquema, los puntos correspondientes.

6. Anotar cuantos puntos diferentes hay para cada una de las sensaciones
investigadas.

c) Resultados

28
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

EXPERIMENTO 2: DISCRIMINACIÓN DE DOS PUNTOS

a) Materiales

 Compás de doble punto. 

 Regla. 

 Sujeto experimental (alumno 1). 


Sujeto experimentador (alumno 2). 


b) Procedimientos

Para la realización de estos experimentos los estudiantes se dividirán por parejas,

actuando cada uno como sujeto experimental y como experimentador.

1. Indique a su compañero que cierre los ojos y se concentre en las

sensaciones que va a percibir.
2. Aplique los dos extremos del compás de forma tal que lleguen
simultáneamente al área de piel estimulada. Se deberá estimular las
siguientes zonas: Yema de los dedos, antebrazo, cara y nuca.
3. En cada paso la separación de las puntas del compás se aplicarán de forma
tal que la diferencia entre ellas sea diferente y, alternante, manteniéndose
constante para cada zona corporal esto es 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 y 3 cm.
4. Durante la aplicación de las agujas, pregunte al compañero cuantos puntos
discrimina y anote su respuesta.
5. Analice el comportamiento de los receptores.

c) Resultados

Distancia de separación de las puntas del compás

Área de la Piel
( cm )
Estimulada
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0

Yema de los dedos

Antebrazo

Cara

Dorso del Cuello

29
SENSACIONES NOCICEPTIVAS: EVALUACIÓN DEL UMBRAL DEL DOLOR

A. Introducción

El dolor es un mecanismo de protección y por tanto puede definirse como una respuesta
de defensa corporal, el cual aparece siempre que un tejido está siendo lesionado y
obliga al individuo a reaccionar para suprimir el estímulo nocivo.
Si colocamos inadvertidamente el brazo sobre una plancha caliente sentimos dolor e
inmediatamente retiramos el brazo para evitar un mayor daño tisular.
La respuesta al dolor puede expresarse en términos conductuales, tales como el retiro
de la fuente del estímulo o la fuga; puede haber una respuesta verbal, como el quejido y
la expresión del dolor; y puede haber una respuesta fisiológica como cambios en la
presión sanguínea, sudoración y taquicardia.
El dolor es una respuesta sensorial medible, su magnitud varía con la intensidad del
estímulo. Todo ser viviente presenta una tolerancia al dolor hasta determinado nivel,
denominado umbral, en que el dolor es insoportable. El dolor puede también ser
socialmente determinado, se dice que hay grupos étnicos más sensibles al dolor que otro, y
el sexo femenino es más resistente al dolor que el sexo masculino.

El dolor se ha clasificado en dos tipos fundamentales: 1) Dolor Rápido, que aparece en

menos de una décima de segundo, no se percibe en los tejidos más profundos del
cuerpo, se transmite a través de fibras de tipo A y la señal dolorosa llega al sistema
nervioso central vía el haz neoespinotalámico. 2) Dolor Lento, aparece después de un
segundo o más y aumenta lentamente en el curso de varios segundos o minutos, suele ir
acompañado de destrucción tisular, se percibe en la piel como en cualquier órgano o
tejido profundo, se transmite a través de fibras tipo C y las señales dolorosas llegan al
sistema nervioso central vía el haz palioespinotalámico.
El dolor como todo tipo de sensibilidad tiene receptores y vías neurales específicas.
Los receptores para el dolor son terminaciones libres y se diferencian por el tipo de
estímulo al cual responden y básicamente son de tres clases:
1) Los mecanociceptores responden a estímulos mecánicos muy intensos de la piel
como apretar, pellizcar, pinchar, etc. También pueden responder a estímulos
térmicos repetitivos, entre 45° y 55°C.
2) Los termociceptores responden a bajas temperaturas, menos de 10°C, y altas
temperaturas, por encima de 42-45°C, y asimismo responden a estímulos
mecánicos intensos.
3) Los nociceptores polimodales responden a estímulos dolorosos mecánicos,
térmicos y químicos.

El estímulo doloroso (E) actúa sobre un terminal nervioso que lleva su axón hacia la
neurona sensorial primaria (1) en las astas posteriores de la médula espinal. El
mediador excitatorio de esta información dolorosa es la sustancia P, aunque
también pueden participar otras sustancias como el ácido glutámico, la
somatostatina y el polipéptido intestinal vasoactivo (VIP).

30
Los axones de las segundas neuronas del sistema de transmisión del dolor (2)
ascienden en dos tractos diferenciables tanto anatómica como funcionalmente; el tracto
Páleo-espino-talámico con proyecciones amplias y difusas; y el tracto Neo-espino-
talámico con proyecciones menores y circunscritas. La vía neuronal del neo-espino-
talámico es responsable de la localización certera en la superficie corporal de los dolores
agudos, siendo pequeño el número de las fibras que la componen. Los axones del Páleo-
espino-talámico se enlazan sinápticamente con neuronas del tronco encefálico en
especial con la información reticular tegmental y los cuadrigéminos (Tracto espino-
tectal), mientras que otras de sus fibras alcanzan directamente a los núcleos talámicos
intramamilares. Hasta este nivel no hay participación de la corteza cerebral en las
sensaciones del dolor.

En el tálamo existen neuronas que vienen a denominarse de tercer orden (3)

que provienen de los núcleos intramamilares del tálamo y que se proyectan
enviando sus axones al frontal superior de la corteza cerebral. Igualmente
existen neuronas de tercer orden en el núcleo ventro-basal y grupo posterior
del tálamo que proyectan sus axones al parietal posterior en la corteza
cerebral. Es aquí, donde ocurre la modulación del dolor, y donde
socioculturalmente puede variar la expresión del dolor

EXPERIMENTO N° 1: SENSACIONES TÉRMICAS Y UMBRAL DEL DOLOR

a) Materiales:
- Hervidor eléctrico con agua
- Termómetro y gotero.
b) Procedimiento

1. Introducir el termómetro en el hervidor eléctrico y registrar la temperatura

del agua.
2. Aumentar la temperatura del agua, conectando el hervidor en el suministro
eléctrico.
3. Cada minuto registrar la temperatura del agua y cargar el gotero y dejar
caer unas dos o tres gotas en el dorso de la mano hasta que el sujeto de
experimentación perciba un cambio en la temperatura del agua en relacion
a la temperatura inicial del primer minuto.
4. Continuar con el paso tres hasta el momento en que al dejar caer una gota
en la palma de la mano sienta dolor. 5.- Construir una curva tiempo vs.
Temperatura y determine el umbral del dolor.

c) Resultados

TIEMPO (MIN) TEMPERATURA °C DOLOR

31
EXPERIMENTO N° 2: ISQUEMIA LOCAL Y DOLOR

a) Materiales

- 03 Tensiómetro.
- 03 Cronómetro.
- Sujeto Experimental (alumno 1).
- Sujeto Experimentador (alumno 2).

b) Procedimiento

1. El sujeto de experimentación deberá sentarse cómodamente, colocando el

brazo sobre la mesa de modo que quede a nivel del corazón.
2. Coloque el manguito del esfigmomanómetro, completamente desinflado,
alrededor del brazo de manera que su borde inferior quede 2-4 cm sobre el
pliegue del codo.
3. Aumentar la presión del sistema, con la pera insufladora, hasta alcanzar una
presión de 200 mm Hg.
4. Solicitar al sujeto de experimentación que abra y cierre rítmicamente ambas
manos.
5. Registrar el tiempo en que el sujeto empieza a reportar que siente dolor y el
momento en que el dolor se torna insoportable.
6. Disminuir rápidamente la presión del sistema, abriendo la válvula de la pera
insufladora.
7. Monitorear el tiempo en que desaparece el dolor.
8. Realizar el experimento tanto en la mano derecha como en la mano izquierda.

c) Resultados

BRAZO

Derecho Izquierdo

Inicia el dolor

Dolor insoportable

32
Desaparece el dolor

33
 PRACTICA DE LABORATORIO Nº 5

FISIOLOGÍA CARDIOVASCULAR

CORAZÓN “IN SITU”: PROPIEDADES DEL CORAZÓN

A. Fundamento

El miocardio tiene propiedades tales como: automatismo, excitabilidad,

conductibilidad y contractilidad que le permite al corazón trabajar como bomba, de
una manera adecuada a las necesidades del organismo. Tiene inervación autónoma
y sistema de conducción eléctrica organizada.

La actividad eléctrica que genera puede ser captada por electrodos colocados en la
superficie corporal y graficarse en ondas por medio del Electrocardiógrafo. Existe
una correlación entre la actividad eléctrica y el ciclo cardiaco.

B. Objetivos

a. Reconocer la anatomía del corazón y vasos

b. Reconocer las fases del ciclo cardiaco-características del músculo cardiaco
c. Detectar la actividad eléctrica del corazón.
d. Relacionar la actividad eléctrica y el ciclo cardiaco
e. Demostrar los efectos de estímulos físicos y químicos (adrenérgicos y
colinérgicos) sobre el corazón

C. Materiales

- Animal para experimentar- 10 sapos

- Tablilla de fijación
- Tubos de ensayo (03)
- Agua caliente (80°), fría (40°)
- Sol. Ringer.
- Adrenalina 1/2000
- Equipo de disección y 2 pares de guantes)
- Acetilcolina 1/5000
- Sol. CIK 1%
- Sol. C12Ca 1%

34
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
D. Experimentos

N° 1: Exposición del corazón-anatomía- ciclo cardiaco

- Anestesiar al sapo por destrucción del cerebro y médula espinal

- Colocar al sapo en la tablilla en decúbito dorsal-fijarlo con alfileres
- Cortar la piel del tórax (tijera) y ampliar el corte desde el piso de la boca
hasta la porción media del abdomen
- Humedecer permanentemente las vísceras y tejidos con Sol. Ringer
- Reconocer la punta del esternón y cortar por su lado izquierdo
- Con tijera cortar el esternón en su línea media
- Exponer al corazón e identificar el pericardio, cortarlo y observar las
partes del corazón y vasos- reconocer las fases del ciclo cardiaco
- Tomar un basal; relacionarlo con el ciclo cardiaco .

N° 2. Experimento de Gaskel- Estímulo físico (temperatura) al corazón

- Colocar la tablilla con el sapo en forma vertical, (la cabeza hacia abajo);
identificar la pared posterior del corazón.

- Observar los latidos por minutos (Seno Venoso, Aurículas y Ventrículo)

- Con tubo de ensayo (agua fría) tocar el Seno venoso y observar los
latidos
- Esperar que regrese al basal y proceder de igual manera con el tubo de
ensayo con agua caliente; observar latidos
- Interpretar los eventos que acontecen

Fase B: Proceder a los siguientes experimentos:

a) Efecto de la Acetilcolina y Adrenalina

- Instilar una gota de acetilcolina 1/5000; observar efectos. Lavar

c/Sol. Ringer
- Instilar una gota de adrenalina 1/2000; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol CIK 1%; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol C12Ca 1%; observar efectos. Lavar

b) Ligadura de Stannius- Conducción eléctrica – automatismo

- En el surco en el Seno venoso y las aurículas colocar un hilo

humedecido con sol. Ringer y ligar. Observar efectos en el ECG.
Analizar

- Una segunda ligadura entre las aurículas y el ventrículo; ligar y

observar ECG
- Observar la frecuencia de contracción de aurícula y el ventrículo
(Bloqueo aurículo- ventricular)

35
PRESIÓN SANGUÍNEA EN EL HOMBRE ADULTO

A. FUNDAMENTO

El volumen sistólico produce en la circulación periférica cambios en el flujo y

presiones intravasculares; presión arterial, presión venosa. Estas presiones están
relacionadas con la longitud y radio del vaso y con la viscosidad de la sangre;
factores que producen resistencia al flujo. La presión arterial tiene un pico mayor
denominado presión sistólica y un nivel inferior denominado presión diastólica. La
presión promedio se denomina presión arterial media. La presión arterial puede
determinarse en forma indirecta por medios de un aparato Esfigmomanómetro de
mercurio o aneroide.

B. OBJETIVOS

a. Determinar la presión arterial sistólica, diastólica, en forma indirecta

b. Determinar los cambios de la presión arterial cuando se expone factores, físicos
(temperatura), cambios de posición y de actividad física
c. Calcular la presión arterial media-El alumno tendrá competencia para saber:

- ¿Cuáles son los factores mecánicos y humorales que determinan la presión

arterial?
- Relacionar presión hidrostática y oncótica con la PA
- Mencionar tres sustancias que sean vasoconstrictoras y tres que sean
vasodilatoras.

¿Cómo actúan? ¿Cómo se regulan?

- Relacione los cambios de PA y FC en relación con el ejercicio y la postura

corporal
- ¿Qué importancia tiene la PAM? ¿Cómo la determina?
- Relacionar gasto cardiaco, resistencia vascular, vol. Sistólico, frecuencia
cardiaca, Inotropismo, precarga, volumen sanguíneo, capacidad venosa,
presión venosa central, regulación de agua y sodio por el riñón

C. MATERIAL
- Sujeto de prueba: alumnos
- Tensiometro de mercurio o anaeroide
- Estetoscopio
- Beakers
- Agua fría (5° C)

D. EXPERIMENTO

a. Experimento 1: Determinar la presión arterial

- Sujeto de prueba en posición sentada, brazo descubierto a la altura del

corazón
- Esperar 5 minutos
- Colocar el brazalete por encima del pliegue del codo
37
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
- Colocar la campana del estetoscopio sobre la arterial humeral
- Inflar el manguito hasta que desaparezca el pulso arterial
- Desinflar el manguito lentamente y
- Registrar la presión sistólica con el primer ruido de Korotkoff
- Registrar la presión diastólica con el quinto ruido de Korotkoff
- Recordar: 1mmHg = 0.13 Kpa = 13.6 cm. H2O

b. Experimento 2: Efecto del ejercicio físico sobre la presión arterial

- Realizar un ejercicio físico intenso ( 20 abdominales o 20 cuclillas)

- Tomar la presión inmediatamente, a los dos y cinco minutos
- Registrar la frecuencia cardiaca en el basal y post ejercicio
- Interpretar los cambios

c. Experimento 3: Efecto de la posición del cuerpo sobre la presión arterial

- Registrar la presión arterial y frecuencia cardiaca en la posición de

decúbito dorsal, sentado y de pie; previo descanso entre cada posición
- Interpretar los resultados

d. Experimento 4: Efectos del frió sobre la presión arterial

- Sumergir la mano en agua fría (5° C) por 30 a 60 segundos, hasta cubrir

la muñeca
- Determinar la PA
- La prueba se considera positiva si la PAS sube más de 20mmHg y la PAD
más de 15 mmHg.

38
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

47
 PRACTICA DE LABORATORIO Nº 6

FISIOLOGIA DE LA SANGRE I

HEMATOCRITO

Es la relación porcentual entre la cantidad de glóbulos rojos y el plasma sanguíneo en

relación a la sangre total. Esta determinación es muy útil para del diagnóstico
diferencial de anemias porque ayuda a determinar su intensidad y tipo.

A. Reactivos , Material de Vidrio y Equipos

Anticoagulante de Wintrobe: Oxalato de potasio 0.8 gm y oxalato de amonio 1.2

gm y agua dest. csp. 100 ml.) Colocar 0.5 ml en cada frasquito de vidrio y
desecarlos en estufa a 56 ºC. Cada frasco así preparado servirá para anticoagular 5
ml de sangre.

- Sangre venosa anticoagulada .

- Pipetas Pasteur y Tubo de Wintrobe
- Tubos capilares para microhematocrito con y sin heparina.
- Jeringas y agujas descartables.
- Desinfectante para piel..
- Guantes descartables
- Centrífuga Clínica
- Centrífuga para Microhematocrito
- Existen 2 métodos: Macro y Micrométodo para determinar el Hematocrito.

B. Procedimiento:
Macrométodo de Wintrobe.
- Usando la pipeta Pasteur llenar con sangre el tubo de Wintrobe hasta la marca
100.
- Evitar formación de burbujas.
- Centrifugar el tubo (contrapesado), a 3000 rpm. durante 30 minutos.
- Lectura en la escala ascendente en el límite del paquete globular, excluyendo
los glóbulos blancos y plaquetas.
- Expresar el Hematocrito en valor porcentual.

Valores Normales:

Hematocrito Valores

Referenciales %

Recién Nacidos 60

Infantes 35 a 44

Varones Adultos 41 a 52

Mujeres Adultos 38 a 46

50
Método MICROHEMATOCRITO.

- Llenar el tubo capilar con la muestra de sangre. Sellar el extremo inferior con
plastilina.
- Centrifugar a 12,000 rpm en la centrífuga para microhematocrito, durante 10
min. Lectura en la tabla Ad-hoc para este efecto. Expresar el valor porcentual.

HEMOGLOBINA

Es una molécula de estructura cuaternaria, tetramérica proteica, es el pigmento rojo

portador del Oxígeno de los hematíes. Está formada por un núcleo Hem y una proteína
llamada Globina.

MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:

A. Materiales:
- Jeringa y agujas descartables.
- Desinfectante.
- Algodón.
- Ligadura.
- Alcohol.
- Anticoagulante de Wintrobe.
- Pipeta de Sahlí de 0.02 ml
- Tubos de prueba.
- Solución de HCl 0.1 N
- Espectrofotómetro.

B. Procedimiento
- Obtener 3 ml sangre venosa con anticoagulante. Medir 0.02 ml sangre con la
pipeta de Sahlí (0.02 ml). Limpiar la parte externa de la punta de la pipeta para
eliminar la sangre adherida al exterior de la pipeta. Vaciar en contenido de la
pipeta en un tubo conteniendo 5.0 ml de la Sol. de HCl 0.1 N
- Mezclar, por inversión, suavemente, sin agitar. Reposo 10 min. Lectura en el
Espectrofotómetro, en Long. Onda de 540 nm. Colocar el espectrofotómetro en
0.00 Abs. ; leer luego la muestra problema. Anotar la lectura de Absorbancia.

CALCULOS:

Absorbancia del Problema X Factor de Calibración = gm Hb %

51
Valores Referenciales:

Hemoglobina Valores

Referenciales

gm %

Recién Nacidos 17 a 25

Infantes 10 a 15

Hombre Adulto l4a17

Mujer Adulto 12 a 16

Hombre de Altura 16.4 a 18.8

Índices Hematológicos o Constantes Corpusculares

Los índices hematológicos, son elementos de juicio muy importantes para clasificar las
anemias, en relación a su contenido de hemoglobina, volumen globular y valor
porcentual de la concentración de hemoglobina en cada uno de los glóbulos en
promedio.

VOLUMEN GLOBULAR MEDIO

Volumen Globular Medio = Hcrito x 10 = micras cúbicas

GR
Valores Normales:

o Al nacer: 105 micras cúbicas

o Infancia: 83 a 87 micras cúbicas
o Adulto: 83 a 95 micras cúbicas

HEMOGLOBINA MEDIA GLOBULAR

Hemoglobina media globular = Hb x 10 = Micro microgramos

GR
Valores Normales: 27 a 32 Micro microgramos

CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA GLOBULAR MEDIA

C Hb Glob Media = Hb gr% X 100

Hto

Valores Normales: 32 a 36%

52
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR

La Velocidad de Sedimentación globular consiste en determinar la rapidez de caída ó

sedimentación de los glóbulos rojos de la sangre cuando está anticoagulada, esto se
realiza en un tubo de caracteristicas especiales llamado tubo de Wintrobe.

A. Materiales:
- Tubo de Wintrobe
- Algodón, alcohol, ligadura, agujas y jeringas descartables. Anticoagulante
de Wintrobe.
- Pipetas Pasteur.
- Guantes de látex descartables.
- Gradilla tipo soporte vertical para el tubo Wintrobe, perpendicular a la
mesa (plomada).

B. Procedimiento

Llenar el tubo con sangre venosa anticoagulada hasta la marca 0 de lectura de la

Velocidad., empleando la pipeta Pasteur. Luego dejar en reposo vertical,
perpendicular, durante 60 min. Lectura en la escala de valores descendentes para
Velocidad de Sedimentación.

Los Valores Referenciales de Velocidad de Sedimentación, según el método

Wintrobe son:

- Hombres: 0 a 6.5 mm a la hora

- Mujeres: 0 a 15 mm a la hora

Gráfica de Wintrobe y Landeberg para “corregir” la Velocidad de Sedimentación

cuando existe Anemia ó Policitemia. La V. S. tiende a ser más rapida en la anemia
intensa, y disminuir en la Policitemia. En presencia de una de estas anomalias debe
hacerse la “corrección” de los resultados obtenidos con la gráfica diseñada por el
mismo Wintrobe. Se corrgirá la VS. en función del Hematocrito del paciente.

Valores Referenciales de Glóbulos Rojos:

- Recién Nacidos: 6 000.000 pmm3

- Niños: 4 000.000 a 5 500.000 pmm3
- Hombres adultos: 4 500.000 a 6 000.000 pmm3
- Mujeres adultas: 5 200.000 a 5 400.000 pmm3

53
 PRACTICA DE LABORATORIO Nº 7

FISIOLOGIA DE LA SANGRE II

HEMOSTASIA Y COAGULACIÓN DE LA SANGRE

HEMOSTASIA: significa prevención de la pérdida de sangre. Cuando se lesiona o rompe

un vaso la hemostasia se consigue mediante:

A. ESPASMO o CONSTRICCION VASCULAR

B. FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO
C. COAGULACION SANGUINEA: FORMACION DE UN COAGULO DE FIBRINA
DEBIDO A LA COAGULACION DE LA SANGRE
D. PROLIFERACIÓN FINAL DE TEJIDO FIBROSO DENTRO DEL COÁGULO
SANGUÍNEO PARA CERRAR DE FORMA DEFINITIVA EL AGUJERO DEL VASO.

A) ESPASMO O CONSTRICCION VASCULAR: Ante un corte o lesión de un vaso

inmediatamente se produce el espasmo vascular que es el resultado de un reflejo
miógeno local y factores humorales locales de los tejidos traumatizados y de las
plaquetas. Los reflejos nerviosos se inician por impulsos dolorosos o de otro tipo
originados en el vaso traumatizado o en los tejidos vecinos. La lesión directa de la
pared vascular genera la contracción miógena refleja de la pared vascular además la
adrenalina ejerce acción vasoconstrictora.

En los vasos de menor calibre las plaquetas se acupan de la mayor parte de la

vasoconstricción al liberar el vasoconstrictor Tromboxano A2.

Cuanto mayor es el vaso sanguíneo mayor es el grado de espasmo, que en algunos

casos puede impedir una pérdida mortal de sangre.

B) FORMACION DE UN TAPON PLAQUETARIO: Ante un vaso dañado las plaquetas se

hinchan, emiten pseudópodos y hacen pegajosas y se adhieren fuertemente al tejido
colágeno expuesto y se unen al Factor von Villebrandt, aumenta el ADP y se forma
Tromboxano A2.

ADP Y Tromboxano activan las plaquetas y aumentan su "Adherencia" y se van

"Agregando" en el sitio lesionado y se forma el "Tapón plaquetario".

C) COAGULACION SANGUINEA: Formación del coágulo de fibrina debido a la

coagulación de la sangre:
Teoría básica:

En la sangre hay sustancias que favorecen la coagulación:

PROCOAGULANTES y sustancias que la inhiben: ANTICOAGULANTES.

La coagulación de la sangre depende del equilibrio entre estos dos grupos de

sustancias.

En el torrente sanguíneo normalmente predominan los anticoagulantes de forma que

la sangre no se coagula mientras esté circulando en los vasos. Sin embargo cuando se
54
rompe un vaso, se "activan" los Procoagulantes del área de la lesión tisular y anulan a
los anticoagulantes, con lo que se forma el coágulo.

MECANISMO GENERAL DE LA COAGULACION Ó CASCADA de la Coagulación.

La Coagulación se realiza en TRES ETAPAS:

1.- Formación del Complejo Activador de la Protrombina

2.- Conversión de la Protrombina en Trombina (conversión catalizada por el

Activador de la Protrombina).

3.- Conversión del Fibrinógeno en Fibrina (conversión catalizada por la

Protrombina).

Los mecanismos de la coagulación se ponen en funcionamiento por:

1.- Traumatismo pared vascular o tejidos adyacentes (endotelio)

2.- Traumatismo de la sangre

3.- Contacto de la sangre con las células endoteliales dañadas ó con colágeno y
otros elementos titulares en el exterior del vaso sanguíneo.

En todos los casos LO PRIMERO QUE SE FORMA ES EL "ACTIVADOR DE LA

PROTROMBINA" que transforma la Protrombina en Trombina e inicia los pasos
posteriores de la Coagulación (Vía final común).

Se considera que el "Activador de la Protrombina" se forma por las dos Vías, aunque
en realidad las dos vías interactúan constantemente:


LA VÍA EXTRÍNSECA: Comienza con el traumatismo de la pared vascular y de los
tejidos subyacentes (lesión tisular) o un tejido extravascular sufre un
traumatismo y entra en contacto con la sangre circulante. La célula endotelial
vascular dañada libera un Factor Tisular llamado Tromboplastina Tisular III,
fosfolípidos y un complejo lipoproteico y se desata así la vía Extrínseca. Así
pues, el tejido lesionado ha liberado esta serie de sustancias o complejo de
factores (FACTOR TISULAR O TROMBOPLASTINA III TISULAR) que trabaja como
una verdadera enzima activando al Factor VII ----- VIIa. y éste en presencia del
Ca++ activan al Factor X ---- Xa, éste a su vez activa al V ----- Va el cual genera el
COMPLEJO ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA. (Observar las
retroalimentaciones enzimáticas en el cuadro de la cascada). Luego
Fribrinógeno ---- Fribrina coágulo.


VÍA INTRÍNSECA: Comienza con el traumatismo de la propia sangre o con la
exposición de la sangre al propio tejido colágeno expuesto por el traumatismo
del vaso sanguíneo lesionado, hay contacto de la sangre con epitelios distintos
del vascular normal: Se Activa el Factor XII --- XIIa y se liberan fosfolípidos 
plaquetarios que contiene el Factor Plaquetario 3. Luego se activa el XI --- XIa

55
 en presencia de Cininógeno. Se activa luego el IX…..IXa, y el IXa junto con el
VIII…..VIIIa activan al X ----- Xa.

El Xa junto con el V y factores tisulares generan el COMPLEJO ACTIVADOR DE
LA PROTROMBINA. Y sigue luego la vía final común de conversión de la

Protrombina en Trombina y Fibrinógeno en Fibrina y el coágulo es consolidado
 por el factor XIII.

Nota: El Calcio acelera todas las reacciones de la coagulación excepto en

los primeros pasos de la vía intrínseca. Por lo tanto en AUSENCIAde iones
de calcio la sangre no se coagulará por ninguna de las dos vías.

EVALUACION DE LA HEMOSTASIA Y LA COAGULACION DE LA SANGRE

TIEMPO DE COAGULACIÓN

Se denomina así al tiempo que transcurre desde que la sangre es extraída hasta que
pasa al estado de gel. Esta prueba mide el tiempo tomado por la sangre para coagular
en ausencia de factores provenientes de los tejidos (factor tisular). El trauma que
significa la obtención de sangre venosa marca el inicio, y el intervalo de tiempo entre
la obtención de la muestra y su coagulación es lo que se denomina Tiempo de
Coagulación. Esta es en términos generales una prueba grosera de la coagulación. Sirve
para detectar groseramente alteraciones de la coagulación que puedan alargarla. La
prolongación del Tiempo de Coagulación puede deberse a varias causas;:

1.- Disminución de la Tromboplastina,

2.- Disminución de la Protrombina,

3.- Disminución del Fibriógeno ó

4.- A la presencia en la sangre de algún anticoagulante.

METODO DE LEE – WHITE

A. Reactivos y Aparatos:
- Tubos de prueba de 8 mm diámetro, limpios y secos
- Agujas y jeringas para uso endovenosos descartables, estériles.
- Baño maría 37 °C
- Reloj cronómetro

B. Procedimiento:
- Obtener 3 ml de sangre venosa, anotando la hora exactamente (Para controlar
el tiempo de inicio)
- Inmediatamente transferir 1.5 ml de sangre a cada uno de los tubos y
colocarlos en Baño María a 37°C. Luego de tres min. de reposo ir sacando cada
uno de los tubos e ir inclinándolos suavemente en 90° cada minuto, hasta que
no se observe desplazamiento de sangre y pueda ser completamente invertido
el tubo sin caerse la sangre. Anotar el tiempo.

56
Valores referenciales:

Con este método de Lee White los valores normales para hombres y mujeres varía
entre: 5 a 8 min.

Los valores referenciales dependen del diámetro del tubo empleado:

- Usando tubos de diámetro interno de 11 mm: 9 a 15 min.

- Usando tubos de diámetro interno de 8 mm: 6 a 10 min.

Existen otros métodos para determinar el tiempo de Coagulación por ejemplo el

método del portaobjetos: Valor normal de 2 a 8 minutos.

MÉTODO DEL TUBO CAPILAR: Valor referencial de 3 a 7 min.

TIEMPO DE SANGRÍA

El tiempo de sangría depende de la elasticidad de la pared vasos sanguíneos y de la

cantidad y capacidad funcional de las plaquetas.

El tiempo de sangría es el tiempo transcurrido desde el momento en que se hace una

punción standard profunda en la oreja o en el pulpejo del dedo y aquél en que la
sangre deja de brotar de la herida.

METODO DE DUKE

A. Reactivos y Aparatos:
- Cronómetro, lancetas descartables, desinfectante de piel, papel de filtro.

B. Procedimiento:

Desinfectar la yema de un dedo (anular) ó el lóbulo de una oreja y punzar con la

lanceta descartable standard de manera que la sangre fluya libremente, gota a
gota, sin necesidad de exprimir la piel. Anotar el tiempo de aparición de la primera
gota y, luego con el papel de filtro ir secando cada gota, cada 30 segundos sin tocar
la piel, hasta que deje de sangrar. Anotar el tiempo transcurrido.

Valores Referenciales: 1 a 3 MINUTOS.

57
58
59
 62

XI

IX

VIII

XIII

63
GRUPOS SANGUÍNEOS Y FACTOR RH

A. Introducción

En 1900, Landsteiner descubrió que el suero de algunas personas aglutinaba los

glóbulos rojos de otras y que éste fenómeno podría ser usado para clasificar a las
personas en diferentes fenotipos de grupos sanguíneos. Se reconocen 4 fenotipos
cimunes: O, A, B, y AB. También se han identificado antígenos de los subgrupos del
tipo A y B.

Cada tipo de glóbulo rojo transporta un Antígeno determinado, específico, que le

es característico. El plasma de las personas tiene Aglutininas Naturales ó
Anticuerpos diferentes al de su propio grupo, así por ejemplo las personas del
Grupo A tienen aglutininas Anti B. El plasma de las personas del Grupo B tiene
Aglutininas (Anticuerpos naturales) Anti A. El plasma de las personas del Grupo O
tiene un título bajo de Aglutininas Anti A y Anti B. (Es muy importante saber que
algunas personas del Grupo O pueden tener un título elevado de aglutinininas Anti
A y Anti B y ser donantes peligrosos).

Es absolutamente necesario y obligatorio hacer siempre una prueba compatibilidad

mayor y menor entre el Donante y el Receptor antes de realizar una transfusión de
sangre cualquier sea el tipo de sangre y/o Rh.

El fenotipo ABO de una persona es determinado mediante reacciones de

aglutinación de los hematíes con antisueros monoclonales Anti A, Anti B, Anti AB y
antisueros de los Subgrupos correspondientes.

Determinación del Grupo Sanguíneo:

Este procedimiento se basa en la aglutinación de los glóbulos rojos (que transportan

un Antígeno específico), que se produce cuando está en presencia de su
correspondiente anticuerpo específico.

Los reactivos usados para la tipificación de los grupos del Sistema ABO contienen
anticuerpos monoclonales IgM. Estos reactivos producirán aglutinación directa de los
glóbulos rojos que transporten el antígeno específico correspondiente. La
determinación del grupo sanguíneo puede hacerse por el método del tubo de ensayo ó
por el método en lámina portaobjeto.

MÉTODO EN LÁMINA PORTAOBJETO:

B. Materiales y Reactivos:
- Suero monoclonal Anti A
- Suero monoclonal Anti B
- Suero monoclonal Anti AB
- Lámina excavada o lámina portaobjetos
- Lancetas descartables
- Muestra de sangre
- Algodón y desinfectante

64
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
C. Procedimiento para Determinar el Grupo Sanguíneo

1.- Dividir una lámina portaobjetos en 3 secciones: izquierda, central y derecha

con lápiz de cera marcador.

La muestra de sangre puede obtenerse de la yema del dedo o por venipuntura.

Colocar una gota suero Anti A en el lado izquierdo y una gota del suero Anti B
en el centro y una gota del suero Anti – AB en la derecha de una lámina de
vidrio plana.

Colocar una gota de sangre al lado de cada una de las gotas del antisuero
correspondiente sin tocar los reactivos !!, para evitar contaminación cruzada, y
luego mezclar bien usando aplicadores o baguetas distintas.

2.- Hacer girar el porta objetos con la mano y observar si existe aglutinación
macroscópica. La aglutinación se producirá en unos pocos segundos. La lectura
deberá hacerse antes de que se seque la mezcla. El tiempo máximo habitual es
de tres minutos.

INTERPRETACION DE LAS PRUEBAS CON ERITROCITOS

EN LA DETERMINACION DEL GRUPO SANGUÍNEO

Grupo Suero Suero Suero

Sanguineo Anti - A Anti - B Anti - AB

O - - -

A + - +

B - + +

AB + + +

+: Indica aglutinación macroscópica

- : Indica que no hay aglutinación

FACTOR RHO (D)

Aparte de los Antígenos del sistema ABO, existe otro que es el sistema de Antigenos
del Rh que son de gran importancia fisiológica y clínica.

El Factor Rh (Aglutinógeno o Antígeno) llamado así por que fue estudiado por primera
vez en los monos del género Rhesius, es en realidad, un sistema compuesto por mucho
Antígenos: Ver Tabla

65
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Fisher-Race Wiener

Dce Rho

DCe Rh1

DcE Rh2

Dce rh (hr’)

dCe rh’

dcE rh”

dCE Rhy

DCE Rhz

El factor D, es con mucho, el más antigénico y el término “Rh Positivo”, como

generalmente se usa, significa que el individuo tiene Aglutinógeno D.

El individuo Rh Negativo no tiene antígeno D y solo forma la aglutinina Anti D cuando

se le inyectan células D positivas. El suero que se emplea rutinariamente para tipificar
el Rh es un suero Anti D.

El 85% de los caucásicos son Rh Positivos y el 15% restante Rh Negativos. Las personas
Rh negativas (D Negativas) que reciben una transfusión de sangre Rh Positiva (aún
muchos años antes) forman Anticuerpos Anti Rh y tienen títulos Anti D apreciables y
dan reacciones transfusionales graves cuando reciben una transfusión de sangre Rh (D)
Positiva.

Igualmente sucede cuando una madre Rh (D) Negativa concibe un hijo D positivo,
porque pequeñas cantidades de sangre del feto se filtran a la circulación materna en el
momento del parto y desarrollan títulos elevados de aglutininas Anti Rh durante el
post parto. Durante el embarazo siguiente las aglutininas desarrolladas contra el
antígeno RH cruzan la placenta y llegan al feto que ha heredado el antígeno Rh positivo
del padre y se produce la reacción Antígeno-anticuerpo que produce hemólisis y la
Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido (Eristroblastosis Fetal).

DETERMINACIÓN DEL FACTOR Rh.

A. Materiales y Reactivos:
- Reactivo Antisuero Monoclonado Anti - Rho (Anti D)
- Lámina portaobjeto
- Varillas de vidrio ó aplicadores
- Lancetas descartables
- Desinfectante y Algodón
- Lápiz de cera marcador.

66
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
B. Procedimiento:
- En una lámina portaobjetos se colocan 2 gotas de la sangre problema.
- Al costado de las gotas de sangre colocar una gota del Reactivo Suero Anti Rh.
Mezclar bien. Observar inmediatamente para ver si existe o no aglutinación.

C. Interpretación:

Sangre total paciente + Suero Anti- Rh (D) RESULTADO

AGLUTINACIÓN Rh (D) POSITIVO

NO AGLUTINACIÓN Rh (D) NEGATIVO

 PRACTICA DE LABORATORIO Nº 8

FISIOLOGIA RESPIRATORIA

ESPIROMETRÍA: VOLÚMENES Y CAPACIDADES PULMONARES

TESTS DE FUNCIÓN VENTILATORIA.

A. Introducción

La medición de los volúmenes pulmonares se realiza por medio de la Espirometría.

Este procedimiento permite determinar todos lo volúmenes pulmonares, excepto
el volumen residual, cuya medición se realiza por métodos indirectos.
Emplearemos el Espirómetro Pneumotacómetro Fleich Datospir 120
En esta práctica el alumno adquirirá competencia para entender:

1. Cantidad de Aire inspirado y expirado normalmente: Volumen Tidal

2. Volúmenes pulmonares: V. espiratorio forzado(VEF); V. Inspiratorio
Forzado(VIF) ; Volumen residual (VR)
3. Capacidades Pulmonares (relación de dos ó más volúmenes): Capacidad Vital
(CV); Capacidad funcional residual (CFR); Capacidad pulmonar Total (CPT)
4. Espacio Muerto (EM): relación con el VT
5. Espacio Muerto fisiológico (EMF): ejemplos
6. Volumen alveolar (VA) - Relación entre VA, EM y VT
7. Ventilación: (volumen de aire por minuto): tipos
8. Ventilación alveolar: FR x VA
9. Ventilación Pulmonar: FR x VT
10. Volumen Espiratorio Forzado al primer segundo (VEF1) (80% de la CV)
11. Diferencias procesos Obstructivos de Restrictivos pulmonares.

B. Equipo

- Pinza Nasal
- Dispositivo bucal descartable para espirar e inspirar
- Equipo espirómetro.

C. Método

a) Obtención del Espirograma

Sentar al sujeto de prueba, colocarle la pinza nasal y la pieza bucal unida al

neumotacómetro. Constatar que no haya fugas de aire por la boca, borde de
los labios, ni nariz.

Permitir que el sujeto de prueba respire un momento con la pieza bucal, para
que se acostumbre a ella. Una vez que la frecuencia respiratoria se ha vuelto
constante y la profundidad de la respiración uniforme, conectar al espirómetro
para obtener un trazado Usualmente se consigue en unos minutos). A
continuación solicitar al sujeto que realice las siguientes maniobras según
39
 instrucciones del profesor de Prácticas:

- Al final de una inspiración normal (FIN) realizar una espiración máxima y luego
respirar normalmente. .
- Al final de una espiración normal (FEN) realizar una inspiración máxima y luego
respirar normalmente.
- Al final de una inspiración normal (FIN) realizar una espiración máxima seguida
de una inspiración máxima, luego respirar normalmente.

b) Mediciones de la capacidad ventilatoria.


 
CAPACIDAD VITAL FORZADA (CVF)
Es la máxima
 espiración forzada y rápida realizada después de una inspiración
 profunda.

 
VOLUMEN ESPIRATORIO FORZADO DEL PRIMER SEGUNDO (VEF1)
Es el volumen de aire espirado durante el primer segundo de la espiración de
una CVF. Los valores normales son: 83% para el primer segundo, 94% para el
 segundo segundo y 97% para el tercer segundo.

 
FLUJO ESPIRATORIO FORZADO DE 25% AL 75% (FEF 25-75%)
Es la medición del flujo espiratorio considerando el 50% del medio de la CVF.
De esta medición se obtiene el flujo espiratoriamáximo medio, cuyo valor
normal para un sujeto joven es de 150L/minuto.


MÁXIMA VENTILACIÓN VOLUNTARIA (MVV) o máxima capacidad ventilatoria
 o máxima capacidad respiratoria 
Es el máximo volumen de aire que pueden movilizar voluntariamente los
pulmones en un minuto. 


Velocidad del flujo medio respiratorio máximo (MMEFR) o velocidad del flujo
 espiratorio forzado (FEF 25-75%) 
Es la relación del medio de la CVF y el TEM. Es el test más sensible para el
 diagnóstico de la enfermedad obstructiva. 
Se discutirán los trazados obtenidos con los respectivos profesores de Prácticas
en cada mesa. 

40
 PULSOXIMETRIA: SATURACION ARTERIAL DE OXIGENO

A. Introducción

En los seres humanos como en todos los mamíferos, la hemoglobina, constituye el

principal componente del eritrocito y normalmente es responsable del transporte del
99.2% de oxigeno presente en la sangre. También juega un papel importante en el
transporte de di6xido de carbono (C02) y del ion hidr6geno (H+).

La hemoglobina es una proteína conjugada con un peso molecular de 68000.

Está formada por cuatro subunidades de peso molecular cercano a 17000. Cada
subunidad está constituida por un grupo “heme” y una cadena polipeptídica. La
molécula de hemoglobina, por lo tanto, está integrada por cuatro grupos "heme" y
cuatro cadenas polipeptídicas, que en su conjunto constituye la globina.

La globina constituye el 96% de la molécula de hemoglobina y está compuesta por

cuatro cadenas polipeptídicas que aparecen como dos pares no idénticos. La
hemoglobina A, la principal hemoglobina en los adultos, consta de dos cadenas α y dos
cadenas β siendo su estructura α2 y β2 , y representa el 90% del total de la
hemoglobina. Una segunda especie de hemoglobina es la HbA2, y representa el 2.5%
del total, y contiene dos cadenas alfa y dos cadenas delta (α2 y δ2 ) Además de estas
dos hemoglobinas, otras seis formas adicionales se encuentran en pequeñas
cantidades y cuyo significado fisiológico aun falta precisar.

Además de la heterogeneidad presente a nivel individual, se observa una

heterogeneidad de la hemoglobina durante el ciclo vital. Durante la vida embrionaria
aparece la hemoglobina embrionaria ( HbE ), en la cual las 2 cadenas a están
combinadas con las 2 cadenas epsilon (a2E"z); rnientras que durante la vida fetal, la
principal proteína transportadora es la hemoglobina Fetal (HbF) donde las cadenas
alfa están combinadas con cadenas gamma (α2 γ2)

Un tercer tipo de heterogeneidad de la hemoglobina, resulta de mutaciones de genes

que controlan la secuencia de aminoacidos en las cadenas alfa y beta, dando lugar a la
aparición de hemoglobinas anormales.

El grupo "heme" constituye el 4% de la molécula de hemoglobina; y es una

rnetaloporfirina que resulta de la combinación de un metal, el hierro, con una
porfirina. EI hierro puede estar en el estado de oxidación ferroso (+2) o en el ferrico
(+3), y las formas correspondientes de hernoglobina se denominan ferrohemoglobina
y ferrihemoglobina o metahemglobina, respectivamente; y solamente la
ferrohemoglobina puede captar oxigeno.

La hemoglobjna presenta las siguientes características:

1) Cada atomo de, hierro de los grupos "hemo" reacciona directamente con el oxigeno
molecular (Oz) y logra fijar una molécula de oxigeno por cada átomo de hierro, de lo
que podemos deducir que una molecula de hemoglobina puede transportar cuatro
41
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
moleculas de oxigeno.

Para que esta reacción ocurra, el hierro debe encontrarse en la forma divalente (Fe 2+o
ferroso). Este estado no se modifica cuando el hierro reacciona con la hemoglobina:
existe oxigenación y no oxidación de la hemoglobina. Cuando el átomo de hierro es
oxidado a su forma trivalente (férrico), como ocurre en la metahemoglobina, no
reacciona con el oxigeno, perdiendo la hemoglobina la capacidad de transportarlo. En
condiciones normales in vivo, el sistema metahemoglobina reductasa del eritrocito
mantiene al hierro de la molécula en estado ferroso.

2) La hemoglobina también se combina con el monóxido de Carbono (CO2), unión

que se realiza, al igual que con el oxígeno, con el hierro. Cada átomo de hierro puede
fijar una molécula de monóxido. EI producto resultante recibe el nombre de
"carboxihemoglobina".

Cada átomo de hierro puede fijar una molécula de monóxido de carbono, compuesto
producido por la combustión incompleta del carbono (braseros, estufas, gas de
alumbrado, motores a explosión). El monóxido de carbono se combina más fácilmente
con la hemoglobina, unas 200 a 300 veces, que el oxigeno. El peligro de la intoxicación
con monóxido de carbono radica en el hecho de que la carboxihemoglobina no
tranporta oxigeno. Si un 30% del total de la hemoglobina circulante esta ocupada con
monóxido de carbono aparecen las cefaleas y vómitos; si lo esta un 50 %, la vida
peligra; si lo está un 60-70 %, se produce la muerte por asfixia.

3) El hierro de la hemoglobina sufre constantemente procesos de oxidación,

formándose la metahemoglobina. Ocurre en un 3% del total de la hemoglobina por
día. La conversión de una fracción de hemoglobina en metahemoglobina tiene un
efecto similar al de la carboxihemoglobina, es decir, pierde la capacidad de
transportar oxigeno. En condiciones normales "in vivo" la metahemoglobina es
reducida a hemoglobina por acción de la diaforasa del eritrocito, enzima que permite
acoplar la NADH2 generada por la gliceraldehido-fosfato-deshidrogenasa en la
reacción de Embden-Meyerhoff

Entre los factores que ocasionan una acumulación excesiva de metahemoglobina se

encuentra: a) La metahemoglobinemia hereditaria, por disminución de la actividad de
la diaforasa o bien por síntesis de hemoglobinas anormales, y b) La
metahemog!obinemia adquirida., que ocurre como resultado de lai ingesta de
fármacos oxidantes (nitritos, nitratos, derivados de la anilina) y desaparece cuando se
suspende la administración de las drogas.

4) La hemoglobina se combina con el dióxido de carbono, produciéndose la

carboxihemoglobina. Esta combinación se efectúa con la globina de la molécula,
mediante la formación de compuestos carbamínicos, reacción que aumenta
considerablemente cuando desciende la saturación con oxígeno.

5) La combinación de la deoxihemoglobina (Hb) con el oxígeno da lugar a la formación

de oxihemoglobina (HbO2). Esta combinación es reversible y la proporción de
desoxihemoglobina que se transforma en oxihemoglobina al ponerla en contacto con
el oxigeno depende de la presión parcial de oxigeno (PO2) del medio que rodea a la
42
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
molécula. Cuando toda la hemoglobina está como oxihemoglobina, se dice que el
contenido de oxigeno de la hemoglobina ha alcanzado la "capacidad de oxigeno" del
compuesto, pero cuando el contenido de oxigeno de la sangre es menor que la
capacidad de oxigeno, el contenido de oxígeno se expresa en términos de porcentaje
de saturación (SO2).

La saturación arterial de oxígeno (SaO2), es la cantidad de oxígeno unida a las

moléculas de hemoglobina en relación a la cantidad total de moléculas presente en la
sangre arterial. Contenido/ capacidad x 100

La medición de la saturación arterial de oxígeno requería de métodos invasivos,

punción vascular arterial, que hacían difícil su utilización en estudios dinámicos y en
estudios poblacionales. Esta limitación se ha superado en la actualidad gracias al
advenimiento de métodos no invasivos, como la oxirnetría de pulso.

La oximetría permite medir la cantidad de hemoglobina que es capaz de unirse

reversiblemente al oxígeno [hemoglobina funcional u oxihemoglobina (HbO2)], en
relación a la totalidad de hemoglobina presente en sangre (oxihemoglobina,
deoxihemoglobina, carboxihemoglobina y metahemoglobina). En la mayoría de
circunstancias clínicas la carboxihemoglobina y la metahemoglobina, formas
disfuncionales de la hemoglobina, constituyen tan sólo una fracción insignificante de
la hemoglobina total. De tal forma que la medición de la saturación arterial de oxígeno
puede ser representada por la siguiente fórmula:

[HbO2 ]
Saturación (%) = ---------------------------- x 100
[HbO2] + [ Hb ]

La oximetría de pulso mide la fracción de luz transmitida a través de los tejidos. La

oxihemogobina absorbe más luz cerca del infra-rojo (vg. 900 nm); mientras que la
deoxihemoglobina absorbe más luz roja (vg. 660 nm). Por lo tanto, la absorción de luz
por la oxihemoglobina y la deaxihemoglobina es diferente en estas dos longuitudes de
ondas.

Los oxímetros de pulso (figura 1) basicamente están constituidos por dos diodos que
emiten luz en forma intermitente, y una célula fotosensitiva, capaz de medir por
separado y en forma secuencial la luz transmitida a través de la piel, en el orden de mil
veces por segundo. Primero se ilumina el diodo que emite luz roja y luego el diodo que
emite luz cerca del infra-rojo y la luz transmitida por los tejidos, en ambas longitudes
de onda, son cuantificadas y cornparadas por la célula fotosensitiva para determinar el
porcentaje de la saturación arterial de oxígeno.

La saturación arterial de oxígeno normalmente varía entre 95 a 100% en sujetos de

nivel del mar y entre 84 a 92% en sujetos adultos, nativos-residentes en las grandes
alturas. En recién nacidos varía entre 85 a 90%. Valores que se modifican con el
ejercicio físico y la altitud de residencia.

43
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Experimento N° 1:

MEDIDA DE LA SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO

a) Materiales:

- 10 Oxímetros de pulso
- Sensores de Oxígeno (Fig. 2)
- Algodón
- Alcohol

b) Procedimiento:

1. Encender el oxímetro de pulso.

2. Limpiar y secar el dedo índice, con algodón y alcohol.
3. Colocar el sensor de oxígeno en el dedo índice.
4. Leer y registrar la saturación arterial de oxígeno y la frecuencia cardiaca, tres
veces.

c) Resultados:

Saturación (%) Fr. Cardiaca

1ra. Medición

2da. Medición

3ra. Medición

Promedio

5. Determinar si la saturación arterial de oxígeno varía en los diferentes dedos de

la mano derecha e izquierda
Saturación (%) Fr. Cardiaca

Derecha Izquierda Derecha Izquierda

Dedo Pulgar

Dedo Índice

Dedo Cardinal

Dedo Anular

Dedo Meñique

44
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
6. Determinar si la postura modifica la saturación arterial de oxígeno.
Saturación (%) Fr. Cardiaca

Posición Decúbito

Posición Sentado

Posición de Pie

Experimento N° 2: EFECTO DEL EJERCICIO FISICO SOBRE LA SATURACIÓN ARTERIAL

DE OXIGENO

a) Materiales:

- Oxímetro de pulso
- Sensor de oxígeno
- Algodón
- Alcohol
- Sujeto experimental (alumno 1)
- Sujeto experimentador (alumno 2)

b) Procedimiento:

1. Con el sujeto experimental cómodamente sentado, monitorizar registrar la

saturación arterial de oxígeno y la frecuencia cardiaca, hasta lograr valores
constantes con un + 5% de variación (Medición Pre-Ejercicio).
2. Desconectar el oxímetro y solicitar al sujeto experimental que abra y cierre
rítmicamente ambas manos durante 10 minutos.
3. Al final del ejercicio motorizar la saturación arterial de oxígeno y la frecuencia
cardiaca (Medición Post-Ejercicio)
4. Cada dos minutos monitorizar la saturación arterial y la frecuencia cardiaca
hasta obtener valores similares a las condiciones basales (Pre-Ejercicio) (1ra.-
5ta. Medición).

45
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
c) Resultados:

Tiempo (min.) Saturación (%) Fr. Cardiaca

Pre-Ejercicio

Post-Ejercicio

1ra. Medición

2da. Medición

3ra. Medición

4ta. Medición

5ta. Medición

Experimento N° 3: ISQUEMIA Y SATURACIÓN ARTERIAL DE OXIGENO

a) Materiales:

- Tensiómetro
- Cronómetro.
- Oxímetro de pulso.
- Sensor de oxígeno.

b) Procedimiento:

1. El sujeto experimental deberá sentarse cómodamente, colocando los brazos

sobre la mesa de modo que quede a nivel del corazón, medir la saturación
arterial de oxigeno en el dedo índice de ambas manos (1ra. Medición).
2. Coloque el manguito del tensiómetro, completamente desinflado, alrededor
del brazo derecho, de manera que su borde inferior quede de 2-4 cm. sobre el
pliegue del codo.
3. Aumentar la presión del sistema, con la pera insuflora, hasta alcanzar una
presión de 200 mmHg.
4. Solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rítmicamente la mano derecha
hasta que el sujeto empiece a reportar dolor e inmediatamente medir la
saturación arterial en el dedo índice de la mano derecha y luego en el dedo
índice de la mano izquierda (2da. Medición).

46
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
5. Solicitar al sujeto experimental que siga abriendo y cerrando rítmicamente la mano
derecha hasta el momento en que el dolor sea insoportable y medir nuevamente la
saturación arterial en ambas manos (3ra. Medición).
6. Disminuir rápidamente la presión del sistema abriendo la válvula de la pera isuflora
y retirar el tensiómetro.
7. Medir y registrar la saturación arterial y la frecuencia cardiaca, cada dos minutos
durante 10 min. hasta obtener valores similares al de las condiciones basales. (4ta.-
6ta. Medición).

c) Resultados:

Saturación (%) Frecuencia Cardiaca

Índice Índice Índice Índice

Derecho Izquierdo Derecho Izquierdo

1ra. Medición

2da. Medición

3ra. Medición

4ta. Medición

5ta. Medición

6ta. Medición
 PRACTICA DE LABORATORIO Nº 9

FISIOLOGIA RENAL

FUNCIÓN GLOMERULAR, DEPURACIÓN DE CREATININA ENDOGENA.

Es una medida muy aproximada de la función glomerular.

La filtración glomerular es un proceso mecánico que se produce como resultado de un

juego de presiones:

1. La presión hidrostática dentro del glomérulo es + 60 mmHg (70% de la presión

aórtica)

2. Se oponen a la filtración:

a. La presión oncótica proteica 32 mmHg -

b. La Presión Inters. caps. Bowman 18 mm Hg

Presión Neta de Filtración

- 50 mm Hg
- +10 mmHg

El riñón trata, dentro de ciertos límites, de mantener una presión de filtración eficiente
mediante mecanismos de aumento del tono de la arteriola eferente.

En 24 horas se filtran 180 litros de líquido por los glomérulos pero se excretan
solamente 1 a 1.5 litros de orina en 24 horas, lo que quiere decir que los tubulis
reabsorben 178.5 a 179 litros en 24 horas.

No solamente hay reabsorción de agua a nivel tubular sino también de muchas otras
sustancias del filtrado glomerular y que son útiles al organismo como glucosa,
aminoácidos, sodio, potasio, cloro, etc.

El filtrado glomerular tiene todos los constituyentes y en la misma proporción que en

el plasma sanguíneo exceptuando las proteínas.

La densidad del filtrado glomerular es 1010 y su pH es 7.40.

Si este filtrado glomerular no fuese sometido a la acción tubular el organismo perdería

grandes cantidades de agua, sales, elementos útiles como glucosa, aminoácidos, etc.
Junto con los productos finales del metabolismo de las proteínas como la urea,
creatinina, ácido úrico, y otros.

Concepto de Clearance:

El concepto de CLEARANCE fue introducido por Van Slyke, la palabra clearance significa
depuración o limpieza y se entiende por Clearance o Depuración renal de una
sustancia al número de centímetros cúbicos de plasma que son liberados de dicha
sustancia en la unidad de tiempo (minuto), por el riñón. Si una sustancia es
únicamente filtrada por el glomérulo, y no reabsorbida, ni secretada por el túbuli, su
71
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
depuración medirá el número de ml que los glomérulos filtran en un minuto. Es el caso
de la Inulina, el manitol, thiosulfato, etc., que solo se filtran por el glomérulo, pero no
se reabsorben ni secretan por los túbulis renales.

La depuración de una sustancia se obtiene dividiendo la cantidad de dicha sustancia

excretada en la orina en la unidad de tiempo entre la cantidad que existe de dicha
sustancia en un ml de plasma.

Llamemos V’ el Vol. Minuto de orina; (Vol. recolectado/tiempo de recolección en

minutos (cc/min.))
U a la concertación de una sustancia “x” en orina mg/ml y

P a la concentración de la sustancia x en 1 ml de plasma mg/ml

SI MULTIPLICAMOS U x V´ , NOS DARA LA CANTIDAD DE SUSTANCIA X EXCRETADA EN 1

min. Y LA FORMULA DE LA DEPURACIÓN SERÁ: C = U x V
P
Generalmente se recolecta orina durante 12 o 24 horas.

Se escoge la CREATININA para medir la filtración glomerular porque el manejo renal de

este metabolito es muy parecido al de la Inulina y Manitol, por eso su Depuración es
una medida muy aproximada de la filtración glomerular, y se usa como índice de
función glomerular.

EJEMPLO UN SUJETO TIENE 55 Kg. DE PESO Y MIDE 1.65 m, EL DOSAJE DE CREATININA

EN LA SANGRE ES 0.9 mg/dl EN SUERO.

Es decir 0.009 mg/ml entonces P = 0.009 mg/ml

El volumen urinario fue de 1500 cc en 24 horas: 1500/1440 – 1.04 ml/min., es decir V =

1.04 ml/min.

La concentración de creatinina en la orina fue de 100 mg %, es decir 1.5 mg/ml.

La depuración será:

C = 1.0x1.04 = 115 ml/min.

0.009

Quiere decir que 115 cc de plasma a su paso por el glomérulo han sido liberados de
toda su creatinina en 1 minuto. PARA NUESTRO PACIENTE DE PESO: 55 Kg. Y TALLA:
1.65 m. le corresponde una ASC. de 1.60 m2 de acuerdo al Nomograma según la
fórmula de Du Bois.

Depuración corregida = depuración sin corregir x 1.73 / ASC = ml/min./1.73 m2 de ASC

ASC

115 mlmin 1.60 m2

X 1.73 m2

72
 X= 115 x 1.73 = 124 ml/min./1.73 m2 ASC (DEPURACIÓN CORREGIDA)

1.60

Nota: No se olvide de usar siempre las mismas unidades de medida para los cálculos

Por ejemplo:

U = CrO en mg/ml

V = Vol. Min ml/min

P = Crs mg/ml

Valores Referenciales

- Depuración de Creatinina endógena:

Hombres: De 97 hasta 137 ml / min. / 1.73 m2 ASC
 Promedio 120 ml / min. / 1.73 m2 ASC (+/- 25) 
Mujeres: De 88 hasta 128 ml / min. / 1.73 m2 ASC
 Promedio 85 ml / min. / 1.73 m2 ASC 
- Creatinina Sérica Adultos Varones: 0.8 a 1.2 mg / dl
- Creatinina en Orina: 1.0 a 1.6 gm en 24 hs (15 a 25 mg/Kg. peso Corporal/24 hs)
- Depuración de Creatinina Aumentada: Gestación, Ejercicio físico.
- Depuración de Creatinina Disminuida:
- Insuficiencia renal glomerular ó Insuficiencia Cardiaca.
- Edad avanzada: Disminuye aprox. 1 ml / min. / Año después de los 40 años.
- Medicamentos nefrotóxicos
- Mala recolección urinaria

FUNCIONES DE CONCENTRACIÓN Y DILUCIÓN

A. Fundamento
El riñón tiene una remarcable capacidad para regular el volumen urinario diario
concentrado y diluyendo la orina. Esta característica fisiológica es una de las más
importantes del riñón normal, y se conoce desde hace más de 50 años. Se realiza
según un mecanismo de flujo a contracorriente multiplicador.

Adaptando el principio fisicoquímico del flujo térmico a contracorriente, a la

presión osmótica diremos que en el asa de Henle ocurre un fenómeno similar, lo
mismo que a nivel de la Vasa Recta, pero con electrolitos y que estudiamos con
detalle en nuestras clases teóricas. Este mecanismo impide que se disipe la
gradiente de Osmolaridad llegando a tener así el intersticio medular y papila hasta
1200 mOsm/Kg. agua. (El Plasma tiene 280 a 290 mOsm/Kg. agua). El trasporte
activo de Cloro en el Asa de Henle es también responsable del sostenimiento de
esta alta osmolaridad en el interticio medular renal.
75
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Esta práctica tiene por objeto aprender a medir estas capacidades de concentración y
dilución de la orina por el riñón a través de los parámetros fisiológicos siguientes:

Densidad Urinaria, relación Uosm/Posm, Cosm, TcH2O sometiendo a una persona sana
a una dieta hidropónica primero y luego a una sobrecarga acuosa.

Definiciones previas.-
- Posm: Es la concentración osmolar plasmática, normalmente puede variar
desde 280 a 290 mOsm/Kg agua, es la concentración de solutos en el plasma.
- Uosm: Es la concentración Osmolar urinaria ó concentración de solutos en la
Orina u osmolaridad Urinaria. Generalmente la orina es tres veces más
concentrada que el plasma. El riñón reabsorbe agua hasta concentrar el filtrado
glomerular unas tres veces más que osmolaridad plasmática. Los valores
normales pueden variar desde 50 hasta casi 1200 mOsm/Kg. agua.
- Uosm x V: Es la excreción de solutos por minuto, es la cantidad de solutos
osmóticos activos excretados por minuto.
- Cosm: Depuración Osmolar: Uosm x V / Posm

Es el volumen de plasma que es depurado de sus solutos en la unidad de tiempo.

Representa la tasa a la cual las sustancias osmóticas activas son aclaradas ó depuradas
del plasma. La depuración basal ó endógena en el hombre tiene un rango del 1 al 3 %
del filtrado glomerular.

CH2O: Es depuración de agua libre de solutos que se elimina por la orina por minuto.

Es igual al Volumen minuto menos la Dep Osmolar:

CH2O = V – Cosm

La depuración de agua libre es ese núcleo de agua en la orina en exceso de su

depuración osmolar. Durante la diuresis de agua caracterizada por la excreción de
gran volumen de orina diluida debido a la gran ingesta de agua, la diuresis se debe a la
inhibición de la hormona antidiurética de la neurohipófisis.

Durante la diuresis de agua pura, de cualquier duración ó magnitud, la orina consiste

de una mezcla de agua osmoticamente obligada que se excreta disolviendo los solutos
que es igual a la depuración osmolar, mas un vol. de agua osmóticamente libre, es
agua libre de solutos, literalmente es agua químicamente pura, representada por
CH2O. El flujo urinario total en este caso es la suma de estos dos términos:

V = Cosm + CH2O, de donde tenemos que: CH2O = V – Cosm

Tc H2O: Durante la concentración urinaria (Antidiuresis) la orina se concentra por

encima de la Osmolaridad Plasmática por sustracción dependiendo de la de agua libre
de solutos del filtrado glomerular, es agua que el organismo se reinfunde. En este caso
el Vol. min. es menor que la dep. Osmolar.

TcH2O = Cosm – V representa el volumen de agua reabsorbido a nivel tubular, esto

concentra la orina tubular.

76
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

77
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

B. Procedimiento

Para esta práctica se seleccionó a una persona a quien el día anterior se le hizo un
dosaje de Osmolaridad Plasmática y luego al día siguiente se le sometió a una
prueba de hidropenia, es decir dieta seca, supresión total de líquidos pero con una
dieta normal en proteínas, hasta conseguir en lo posible una disminución del 3%
del peso corporal.

A las 6 de la tarde miccionó (vejiga vacía), y se descartó esta orina y se anotó la

hora exacta. Luego empezó a recolectar toda la orina emitida, en un mismo frasco
hasta las 6 am del día siguiente.

Dos horas mas tarde, 8 am, se obtuvo una segunda muestra de orina en recipiente
a parte. En este momento se obtuvo una muestra para determinar Osmolaridad
Plasmática. Aquí termina el test de Concentración.

Inmediatamente se inició la Prueba de Dilución, para ello se le dio a beber 20 ml de

agua x cada Kg. de peso corporal, con el objeto de probar su capacidad para diluir
la orina. Se recolectaron las muestras emitidas, cada una en frascos separados,
cada 20 ó 30 minutos, según el protocolo del cuadro adjunto, numerándose todas
las muestras emitidas durante casi tres horas.

Al intermedio y al final de las recolecciones se obtuvieron muestras de sangre para

determinar las Osmolaridades plasmáticas, en el osmómetro. Para la práctica, a
partir de estas muestras calcularemos las Osmolaridades Urinarias a partir de las
densidades y con los datos obtenidos de Volúmenes urinarios, tiempos de
recolección, Uosm, y Posm se determinarán, para cada muestra, los valores de U/P,
78
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Cosm, TcH2O, y CH2O.

A continuación graficar en papel milimetrado:

Volumen Urinario (ordenada) vs Densidades
(abscisa)
Cosm ((Ordenada) vs Vol. minuto (Abscisa), y determinar TcH20 y C H2O Interpretar
los resultados de cada prueba.
 PRACTICA DE LABORATORIO N°10

REGULACION RENAL DEL EQUILBRIO ACIDO I BASICO

Acidificación y/o alcalinización urinaria.

A. Introducción: Bases Fisiológicas:

Existen tres grandes procesos de regulaci6n del pH en los líquidos del organismo: el
mecanismo de intercambio i6nico (entre las células y los líquidos), el mecanismo
respiratorio y el mecanismo renal.
Los riñones son los reguladores mas eficientes del equilibrio ácido básico, en vista de
que realizan la EXCRECION de los llamados ácidos fijos ó propiamente dichos, los
HIDROGENIONES H+; mientras los H+ se excretan, circulan en la sangre en equilibrio
con los aniones correspondientes como el HC03- , con lo cual impiden cambios
importantes en el pH. La cantidad de Hidrogeniones producidos en el curso del
metabolismo es de hasta 100 mEq. diarios ( 4.1 mEq/hora), dependiendo de la dieta. El
Riñón se encarga de excretarlos, al mismo tiempo que recobra el HC03- .La orina de un
sujeto sano, con una dieta normal mixta, es ácida y su pH habitual es de 6.0; el filtrado
glomerular tiene un pH de 7.40. Esta disminución en el pH urinario, se debe a que
están siendo eliminados los Hidrogeniones por el riñón. La magnitud de esta
eliminación es variable de acuerdo con las exigencias fisiológicas del momento y se
refleja en el pH de la orina que puede variar de 4,0 hasta 8.0, según las necesidades del
organismo. Cómo se logra excretar una orina ácida ? Se logra por la adición de H+
secretados por las células de los túbulis renales hacia la luz tubular lo cual permite la
modificación de algunos ácidos que están disociados en el plasma, pero que se
convierten en formas no disociadas, al aumentar la acidez del medio. Por ejemplo las
relaciones entre el Na2HPO4 y el NaH2PO4 es de 4 a 1 en el plasma y en el filtrado
glomerular donde el pH es 7.40. Si se baja el pH por la adición de H+ esta relación
disminuye hasta 4/100 (predominancia del Fosfato ácido), y el pH urinario baja a 5.4.
Si la relación bajase hasta 1/99 (mayor predominancia aún del fosfato ácido) el pH
llegará hasta 4.8.

El resultado neto de la producción de una orina ácida es la ganancia de un Na+ y SE

RECUPERA EL HCO3- La eliminación del H+ a cambio de un Na+ permite así retener el
HC03- y tener reserva de HC03- para situaciones de emergencia. Puede así entonces el
riñón eliminar constantemente H+ sin vaciar el Na+ extracelular ni perder su
bicarbonato en condiciones normales.
En el caso opuesto cuando hay alcalinidad aumentada se produce en el riñón el
fenómeno inverso: Disminuye la excreción tubular de H+, se reabsorbe menos
bicarbonato, se excretará fosfato en la forma Na2HPO4 y se pierden 2 Na+ y el efecto
neto será la perdida de 2 Na+ (base), disminución del HC03- del plasma y los ácidos
orgánicos serán eliminados a un pH más alto en equilibrio con más Na+ que se pierden.
En resumen, pueden Ustedes pues darse cuenta que las diferentes funciones del
mecanismo renal responden a requerimientos específicos: en el caso de la acidosis,
hay un incremento de la excreción de ácidos y una conservación de base; en la
alcalosis, hay un incremento de la excreción de base y conservación de ácidos y el pH
de la orina cambiará correspondientemente y puede variar como les acabo de señalar
en muestras de orina random desde pH 4.5 hasta 8.2. Esta capacidad de excretar
cantidades variables de ácido es de una gran importancia fisiológica porque convierte
al riñón en el mecanismo de defensa final contra cualquier cambia del pH corporal o de
la composición anión-catión.
80
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

En la producción de orina ácida: Resultado neto: Ganancia de un sodio a cambio de

excreción de de un H+. Se recupera el NaHCO3. Eliminación constante de H+ sin vaciar
el Na+ del LEC.-

EI otro mecanismo para regular del pH que opera en el riñón es la EXCRECION DEL H+
EN LA FORMA DE ION AMONIO NH4+ O AMONIOGÉNESIS, a partir del NH3 de la
glutamina o los aminoácidos. El NH3 por lo general no se encuentra en el filtrado
glomerular y por lo tanto proviene de las células del túbuli renal. Sin embargo su
excreción no es rápida sino tardía y solo empieza a funcionar después de un lapso
prolongado de acidosis .. En la figura podemos ver como se conserva el sodio por
medio de la excreción del NH4+. El Na+ ingresa a favor de la salida de un H+, el cual
con el NH3 proveniente de la desaminación de aminoácidos o de la glutamina, se
excreta como NH4+.

AMONIOGÉNESIS:

El NH3 liberado por la Glutaminasa sirve para neutralizar las sustancias ácidas: NH3 + H+ NH4

Se conserva sodio por medio de la excreción de NH4, el sodio ingresa en favor de la

salida de H+
EI NH3 neutraliza el H+ formando NH4; y el H+ con el NH3 se excretan como NH4.
(ClNH4)
81
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRUEBA DE ACIDIFICACIÓN URINARIA MODIFICADA. (Durante de 6 horas).

Después de un desayuno normal se recogen 2 muestras de orina con una diferencia de

una hora, luego se le administra al paciente cloruro amónico a la dosis de 0.1 gm / Kg.
Peso corporal por la vía oral. Se dará en cápsulas de gelatina de 0.50 gm. De
preferencia con tostadas y mermelada, recogiendo la orina durante las 6 horas
siguientes. Se extraen muestras de sangre antes y tres horas después de la
administración del Cloruro amónico. Con la carga administrada el pH urinario deberá
descender por debajo de 5.4

En nuestra práctica solamente haremos una prueba de corta duración (2 horas) del
siguiente modo:

A. Equipos, Materiales y Reactivos

- pH Meter para determinación de pH sanguíneo
- Potenciómetro para determinar pH en soluciones.
- Cinta para determinación universal de pH
- 06 Cilindros graduados de vidrio o plástico de 500 ml
- 08 beakers de 50 ml
82
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
- 02 Pipetas de 5 ml graduadas al 0.1
- 02 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100
- 03 Buretas para titulación química
- 03 Ehrlemeyers de 500 ml con agua destilada
- Fenolsulfotaleína indicador (PSP) sol alcohólica 1 % o Rojo fenol.
- Sol. NaOH 0.1 Normal titulada, Formol 40 % 50ml.

B. Procedimiento

Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por micción espontánea
(con deseos de orinar) y será la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH
sanguíneo al inicio de esta prueba.

Administraremos luego 400 ml de una solución de Cloruro de amonio al 0.5% en 15

minutos.

Iniciar la recolección de orina cada 20 min., por micción espontánea, en muestras

separadas durante dos horas.

Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.

Determinaremos el pH sanguíneo basal y al final del test. Titularemos la acidez

Fosfática y Amoniacal urinaria con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulación de la
acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado:

Colocar en beakers : 5 ml orina + 1 gota Roja fenol. Titular con NaOH 0.1N hasta
rosado.

Anotar gasto.

Corresponde a la acidez del Fosfato ácido. Cada ml NaOH gastado 0.1 mEq H+

Luego añadir 0.5 ml formol para extraer los H+ del Amonio y titular de nuevo la acidez
amoniacal.

Hacer la sumatoria de acidez fosfática + amoniacal, acidez total y luego calcular la (H+)
urinaria en mMol / litro. Calcular la Depuración de Hidrogeniones.

Emplearemos una persona normal como CONTROL a la cual le haremos la misma

prueba anterior sustituyendo el cloruro de amonio por una dosis de 25 ml de agua
hervida y fría por kilo de peso corporal así:

Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por micción espontánea
(con deseos de orinar) y será la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH
sanguíneo al inicio de esta prueba.

Administraremos luego 25 ml de agua x Kg peso corporal en 15 minutos.

Iniciar la recolección de orina cada 20 min., por micción espontánea, en muestras

separadas durante 2 horas.

Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.

83
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Determinaremos el pH sanguíneo basal y al final del test. Titularemos la acidez
Fosfática y Amoniacal urinaria exactamente igual como el caso anterior con sol.
valorada NaOH 0.1 Normal y retitulación de la acidez amoniacal previo tratamiento
con formol taponado, todos los cálculos también se harán exactamente iguales al caso
anterior.

EXAMEN QUIMICO DE ORINA

INVESTIGACIÓN DE ALBÚMINA:

Excreción normal: Menos de 75 mg en 24hs. No detectable por los métodos habituales

rutinarios.

Por métodos especiales se detectan cantidades menores y se llama microalbuminuria.

Para detectar presencia de albúmina se emplea el método del Ácido Sulfosalicílico al

3% así:

Filtrar la orina a través de papel de filtro.

Colocar 1 ml de orina filtrada en un tubo de ensayo

Añadir 1 ml de ácido sulfosalicílico. Reposar 5 minutos.

Si no se produce enturbiamiento no hay albúmina: Negativo

Si aparece enturbiamiento indica presencia albúmina.

El grado de turbiedad está en relación con la cantidad e

albúmina presente.
84
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
Hacer un control negativo sustituyendo el ácido sulfosalicílico
con 1 ml de agua destilada y proceder exactamente igual.
Comparar grados de turbidez.

Entre los métodos rutinarios cualitativos, el más simple: test de calor y acidificación:

Filtrar la orina a través de papel de filtro.

En tubo de ensayo hervir 3 ml orina filtrada, en mechero alcohol o Bunsen ó Baño

María hirviente. Un precipitado blanco ó floculante al hervir indica:

a). Proteína ó fosfatos.

b). Para diferenciar: Fosfatos: si al añadir ácido acético 5% desaparece la turbidez:
Fosfatos (Los fosfatos son solubles en medio ácido). Si hay efervescencia: carbonatos
presentes.
Proteínas: si al añadir ácido acético 5% la turbidez aumenta.

INVESTIGACIÓN DE GLUCOSA

- Reacción de Benedict Cualitativa: Por reducción del cobre el solución alcalina y

calor.
- Colocar 3 ml de Benedict Cualitativo en tubo de ensayo. Añadir 0.3 ml orina
- Hervir por 3 minutos en BM hirviente. Enfriar por reposo de 5 min.
- Positivo: Precipitado rojo ladrillo al fondo del tubo
- Negativo: Permanece azul o color verdoso sin precipitado.
- Dan resultado positivo: Glucosa, lactosa, levulosa, pentosas.

85
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
LABORATORIO DE PRACTICA Nº 11

FISIOLOGIA GASTROINTESTINAL
ROL FISIOLÓGICO DE LA PTIALINA (DIGESTIÓN DEL ALMIDÓN)

A. Fundamento Fisiológico

El alimento en la boca se mezcla con la saliva lo cual se favorece por la masticación

que fragmenta las partículas grandes de alimentos y mezcla a éste con las
secreciones de las glándulas salivales. En las glándulas salivales los gránulos
secretorios (cimógeno) que contienen las enzimas salivales se descargan en los
conductos a partir de las células acinosas. Diariamente se secretan 1500 ml. de
saliva y el pH es ligeramente menor de 7.0, pero se aproxima a 8.0 durante la
secreción activa. La saliva contiene dos enzimas digestivas: la lipasa lingual,
secretada por la glándula de la lengua, y la alfa amilasa salival (ptialina) secretada
por las glándulas salivales. La saliva también contiene mucinas, que son
glucoproteínas lubricantes del alimento y protectoras de la mucosa oral. Además
contiene IgA, inmunoglobulina que viene a ser la primera defensa inmunitaria
contra bacterias y virus. La alfa amilasa salival ataca al almidón. Sin embargo, el pH
óptimo para esta enzima es de 6,7 y su acción es inhibida por el jugo gástrico ácido
en el momento del ingreso del alimento al estómago. El activador de la amilasa
salival es el cloro; siendo su substrato el almidón hidroliza los enlaces alfa 1 - 4
para producir dextrinas, alfa-limitantes, maltotriosas y maltosa, siendo esta
función hidrolítica la acción catalítica que estudiaremos en la presente práctica. El
almidón, polímero de la glucosa da color azul con la solución de yodo. El almidón
está constituido por un 15% - 20% de amilosa y un 80% - 85% de amilopectinas.

B. Objetivo

Estudiar la acción de la amilasa sobre el almidón y determinar los substratos y

productos de la actividad alfa-amilásica salival y el efecto del pH y activador
enzimático sobre esta reacción enzimática ó digestión hidrolítica.

C. Procedimiento

Digestión del substrato por la alfa-milasa salival:

Tubo No. 1 2 3 4

Sol. almidón 1 % ml. 2,0 2,0 2,0 2,0

Tampón fosfato pH 6,8 ml. 1,0 1,0 1,0 ----

HCI 0,3 N ml. ---- ---- ---- 3,4

CIN a 0,9% ml. 3,0 2,4 ---- ----

Agua destil. ml. ---- ---- 2,4 ---

Baño María 37 °C x 5'(Pre- si si si si

incubación,no añadir saliva
86
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
todavía

Después de los 5 minutos,recién añadir: ----

Sol. amilasa salival ( diluída 1/20) ml. 0,6 0,6 0,6

Baño María 37°C x 20' si si si si

Luego se determinarán los substratos remanentes y los productos de degradación

intermedia del almidón en cada digerido:1.2.3 y 4, por separado, empleando
soluciones de Lugol y Benedict cualitativo.

A. DETERMINACION DEL SUSTRATO

TUBOS N° 5 6 7 8

DIGERIDO DEL TUBO 1:ml 0.5 - - -

DIGERIDO DEL TUBO 2:ml - 0.5 - -

DIGERIDO DEL TUBO 3:ml - - 0.5 -

DIGERIDO DEL TUBO 4:ml - - - 0.5

HCl 0.05 N : Mi 5 5 5 5

Sol. De Lugol: mI 0.5 0.5 0.5 0.5

Mezclar, reposar 15': Observar los resultados

B. DETERMINACION DEL PRODUCTO

TUBOS N° 9 10 11 12 13

DIGERIDO DEL TUBO l:ml 0.5 - - - -

DIGERIDO DEL TUBO 2:ml - 0.5 - - -

DIGERIDO DEL TUBO 3:ml - - 0.5 - -

DIGERIDO DEL TUBO 4:ml - - - 0.5 -

SOLUCION DE BENEDICT: mI 2 2 2 2 2

SOLUCION DE GLUCOSA 1 %: ml - - - - 0.5

Baño hirviente: 100° X 5'

- Enfriar en agua helada y observar los resultados.

- Conclusiones:
87
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
- Influencia del pH salival y gástrico en la digestión del almidón.
- Influencia del Cloro sobre la actividad de la amilasa salival.

- Verificar la ubicación de los puntos de hidrólisis del almidón por acción de la

alfa amilasa salival

FUNCIÓN DE LAS CÉLULAS PARIETALES DEL ESTÓMAGO. ACIDEZ GÁSTRICA TOTAL

ESTIMULADA Y DÉBITO ACIDO/HORA.

El Gastroenterólogo A. W. Kay describió un método con el objeto de lograr una

estimulación máxima de las células parietales del estómago.

En el contexto de la fisiología gástrica, se considera condición basal aquella en la cual

el paciente está en completo ayuno después de haber dormido unas 6 horas
tranquilamente, sin estar expuesto a ningún estímulo visual, ni olfativo, ni auditivo.

Bajo control fluoroscópico debe insertarse una sonda naso-gástrica de modo que la
punta de la sonda se encuentre en la parte más baja del cuerpo del estómago. En
seguida el paciente se coloca en decúbito lateral izquierdo y escupe toda saliva que
tenga durante toda la prueba. En estas condiciones la sonda se conecta a una bomba
de succión continua eléctrica y el contenido del estómago es aspirado continuamente
a presión negativa de 30 a 50 mmHg, se aspira primero todo el contenido gástrico de la
noche anterior y se mide el volumen y pH u otro estudio para luego descartarlo. Se
recolecta luego J.G. cada 15 minutos durante una hora y se mide el volumen de cada
muestra, estas cuatro primeras muestras son llamadas basales que servirán para
titularlas independientemente. El flujo Gástrico debe ser chequeado a menudo lo
mismo que la succión. Luego debe inyectarse un antihistamínico como Clorotrimetón
20 mg Intramuscular (para disminuir en lo posible los efectos colaterales de una fuerte
dosis de Histamina que recibirá luego). Se usa como estimulante de la célula parietal.

Fosfato de Histamina a una dosis de 0.04 mg x Kg. de peso, vía subcutánea, ó mejor
Pentagastrina: 6 microgramos x Kg. peso.

Después de haber estimulado se continua recolectando las muestras cada 15 minutos

para titularlas y las llamaremos Estimulado 15´, Estimulado 30´, estimulado 45´,
estimulado 60´.

Se medirá la acidez de titulación en cada una de las muestras empleando NaOH 0.1
Normal, hasta la neutralización, empleando indicador de Fenoltaleína solución
alcohólica al 1%.

A. Procedimiento
- Luego se titularán cada una de las muestras obtenidas por separado usando 10
ml de J.G. cada vez y empleando Solución de NaOH 0.1 Normal, gota a gota,
agitando suavemente después de la adición de cada gota de NaOH, hasta la
aparición de un color rosado muy tenue y persistente, color que indica la
completa neutralización del ácido del Jugo Gástrico.

88
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
CALCULOS:

Ejemplo muestra basal de los primeros 15 min.: volumen obtenido 20 ml. Volumen
usado en la titulación 10 ml. Se gastó 2.40 ml en la titulación de esta muestra.
Calcularemos el debito acido basal de estos primeros 15 minutos:

Raciocinio y cálculos:

Cada 1 ml de NaOH 0.1 N que se gaste en la titulación indica – 0.1 mEq. H+

2.40 ml de NaOH 0.1 N gastados indicarán ------------ X mEq. H+

2.4 x 0.1 = 0.24 mEq.H+

0.24…………………. 10 ml de Jugo Gástrico usado x ............................. 20 cc de jugo

gástrico obtenido

0.24 x 20 = 0.48 mEqH+ en esta muestra de 20 cc. de Jugo Gástrico

10

Respuesta: El débito ácido gástrico basal fue de 0.48 mEqH+/15 min.

En igual forma procederemos con cada una de las demás muestras basales y
estimuladas para hacer las sumatorias parciales y comparar los resultados con los
valores referenciales normales.

Valores Referenciales

Residuo Gástrico Después de 12 hrs de ayuno: 20 a 100 ml (generalmente menos de 50

ml)

PH: 1.5 a 3.5

Acidez sin Estímulo: 1 a 4 mEq H+ / litro

Acidez post estímulo (Kay) ó Pentagastrina: 10 a 120 mEqH+ / litro

Débito Ácido Basal/hora: Normal Hombres: 1 a 10.5 mEq/hora

Mujeres: 1 a 5.6 mEq/hora

Débito Ácido Máximo/hora: Normal Hombres: 12 a 60 mEq/hora

Mujeres: 8 a 40 mEq/hora

89
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
PRACTICA DE LABORATORIO Nº 12

MOTILIDAD GASTRO-INTESTINAL

A. Objetivo

El objeto de esta práctica es estudiar los movimientos peristálticos rítmicos del

aparato gastrointestinal y el control que el Sistema Nervioso Autonómico tanto
Simpático como Parasimpático ejercen sobre la motilidad gástrica e intestinal;
además demostraremos la influencia de los neurotransmisores acetilcolina y
adrenalina sobre las funciones de contracción y relajación de la musculatura lisa
gastrointestinal.

B. Introducción

La actividad motora del estómago está gobernada fundamentalmente por dos

tipos de inervación ó redes de fibras nerviosas: una intrínseca a la vía
gastrointestinal y otra extrínseca.

a.-La inervación intrínseca del estómago comprende dos plexos interconectados el

plexo Mientérico de Auerbach y el plexo submucoso de Meissner dentro de la
pared estomacal, como lo hacen a través de toda la vía intestinal. Estos plexos son
directamente responsables de la peristalsis y otras contracciones. Como este
sistema es continuo entre el estómago y el duodeno, la peristalsis del antro
influencia la peristalsis del bulbo duodenal.

b.- La inervación extrínseca es autonómica dual y proviene del Sistema Nervioso

Autónomo: la Simpática de actividad noradrenérgica inhibidora, vía plexo celíaco; y
la Parasimpática de actividad colinérgica excitatoria, vía del Nervio Vago.

La inervación simpática inhibe la motilidad lisa, pero contrae los esfínteres; y la

parasimpática estimula la contracción de la fibra m. lisa pero relaja los esfínteres.
Estos dos sistemas juntos modifican la actividad motora coordinada que se origina
independientemente en el sistema intrínseco.

Existe además un marcapaso controlador en la curvatura mayor del cuerpo del

estómago dentro de la capa muscular longitudinal. Este marcapaso es responsable
del ritmo y frecuencia de las contracciones gástricas y genera una onda excitatoria
que tiene un ritmo eléctrico basal (REB) de una frecuencia de 3/min. y una
velocidad de 1 cm./seg. Cuando pasa por el cuerpo del estómago, y aumenta hasta
3-4 cm./seg. Cuando pasa por el antro.

El sistema nervioso entérico se conecta con el SNC mediante fibras simpáticas y

parasimpáticas, pero es capaz de funcionar de manera autónoma sin estas
conexiones. El plexo mientérico inerva las capas de músculo liso circular y
longitudinal y tiene a su cargo principalmente el control motor; en cambio el plexo
submucoso inerva el epitelio glandular, las células intestinales endocrinas y los
vasos sanguíneos de la submucosa y además está involucrado sobre todo en el
control de la secreción intestinal. Los neurotransmisores en el sistema nervioso
entérico incluyen la acetilcolina, noradrenalina, serotonina, Gaba, ATP, Oxido
nítrico, CO y numerosos péptidos, CCK, endotelina 2, SustanciaP, Neuropéptido Y,
VIP, etc.
90
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

El PERISTALTISMO es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared del intestino
se elonga por el contenido en el lumen y se presenta en todas las partes de la vía
gastrointestinal desde el esófago hasta el recto. Esta elongación inicia una onda de
contracción circular detrás del estímulo y una de relajación en el frente de éste. Esta
onda de contracción se mueve en dirección oral-caudal para impulsar hacia adelante
los contenidos del lumen a una velocidad variable entre 2 a 25 cm. /seg.

Aunque la actividad peristáltica puede aumentarse o disminuirse mediante la actividad

autónoma del intestino, su presencia es independiente de la inervación extrínseca.

El estiramiento local libera serotonina que activa las neuronas sensitivas que a su vez
activan el plexo mientérico. Las neuronas colinérgicas que pasan en dirección
retrógrada en este plexo mientérico activan a las neuronas liberadoras de la sustancia
P, así como de acetilcolina y dan lugar a la contracción del músculo liso. Al mismo
tiempo, las neuronas que pasan en dirección anterógrada activan a las neuronas
secretoras de NO, VIP, Y ATP para producir la relajación que precede al estímulo.

El REB del músculo liso gastrointestinal trabaja a un potencial de membrana entre -65
y - 45 mV. Este REB se inicia en las células intersticiales de Cajal, que son células
mesenquimatosas estrelladas similares al músculo liso y actúan como marcapasos,
estas células de Cajal envían múltiples prolongaciones hacia el músculo liso intestinal.
.El REB por sí solo rara vez produce contracción muscular, pero los potenciales de
espiga sobrepuestos a la mayor parte de las porciones despolarizadas de la ondas del
REB incrementan la tensión (contracción) muscular. Las despolarizaciones se deben al
ingreso del Calcio y las repolarizaciones a la salida del K. Muchos polipéptidos y
neurotransmisores afectan esta onda de ritmo eléctrico basal por ejemplo la
acetilcolina incrementa la cantidad de espigas y la tensión (contracción de la F m lisa)
en tanto que la adrenalina disminuye la cantidad de espigas y la tensión. En el
estómago la frecuencia del REB es de 4/min., en el duodeno 12/min., colon, 9/min.,
ciego 16/min. Por lo tanto el rol fisiológico del REB es coordinar la actividad peristáltica
y otras actividades motoras gastrointestinales. Las contracciones se producen
solamente durante la parte despolarizante de las ondas. Si hacemos una vagotomía el
peristaltismo estomacal de hace irregular ó a veces caótico. La motilidad
gastrointestinal y la secreción es regulada también por polipéptidos biológicamente
activos que son segregados por las células nerviosas y las células glandulares de la
mucosa, algunas son paracrinas y otras endocrinas y se les llama hormonas
gastrointestinales, aunque sus efectos fisiológicos son discretos, sin embargo sus
alteraciones pueden producir enfermedades del tránsito intestinal (ejemplo algunas
diarreas motoras).

Se agrupan en familias, y entre algunas ellas tenemos:

- Familia de la Gastrina: Gastrina y CCK (ó CCK-PZ: Colecistoquinina-

pancreocimina)
- Familia de la Secretinas: GIP, Secretina, VIP, enterogastrona.
- Otros grupos: Motilina, Sustancia P, Serotonina.

91
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION

C. Materiales, equipos, animales de experimentación y reactivos.- Para cada

mesa de trabajos prácticos:

Materiales: Reactivos:

01 sapo vivo Solución de Ringer para anfibio fresca a

30 °C
Tabla de corcho para soporte y fijación
anfibio Col. Azul de metileno

Alfileres para sujeción extremidades Sol. Acetilcolina 1%

01 par guantes descantables Sol. Adrenalina 1%

Equipo de disección quirúrgico Sol. Atropina 1%

Estilete para sección medular y tijera,

algodón

04 jeringas descartables de 3 ml

01 Aguja descartable de 18 G x 1 ½

01 Aguja descart. doblada en 90°

3 hilos blancos de 15 cm. largo N° 50 para

las ligaduras

Cánula de vidrio 2mm diám. ad-hoc

D. Procedimiento

l.- El alumno realizará la preparación de sapo espinal según lo aprendido para

producir el shock espinal en el sapo (Ver práctica de reflejos en animal espinal)
y realizará la hemostasia con algodón por compresión.

2.- Disección: Sujetar luego el animal en posición decúbito dorsal en la tabla de

fijación con los alfileres y realizar un corte en toda la línea medio abdominal y
seguir disecando por planos hasta llegar al peritoneo.

3.-Abrir la cavidad abdominal en la misma forma y localizar el estómago

cardias, estómago, píloro e intestinos. Observar de inmediato y muy
cuidadosamente los movimientos peristálticos espontáneos del estómago e
intestinos. Anote estas observaciones basales . Si estuviesen ausentes
estimularlos mecánicamente.

4.- Con un algodón mojado en Ringer-Batracio a 30° mantener en todo

momento la preparación bien húmeda con instilaciones abundantes de la sol.
Ringer.

5.- Aplicar sobre el estómago e intestino (en cada uno) 6 gotas de cada una de
92
 EPTM TERAPIA FISICA
Y REHABILITACION
las siguientes soluciones en el orden: a, b, c, d, e siguiente:

a.- Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer

b.- Adrenalina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
c.- Atropina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer

d.- Al final, nuevamente Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y

lavar con Ringer.

Graduar las observaciones visuales de relajación o contracción con cruces, comparando

con los movimientos peristálticos espontáneos del inicio del experimento.

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 FISIOLOGÍA ENDOCRINA

TOLERANCIA A LA GLUCOSA

A. Introducción
La glicemia en condiciones basales, varía entre 70 y 110 mg/dl, ( 0 3.8 a 5.6 mmol/L.
)En la diabetes mellitus se presenta elevación de la glicemia en ayunas
En la práctica vamos a estudiar la respuesta del organismo a una carga de glucosa es el
llamado test de Tolerancia a la glucosa..

B. Material
- Sujeto de prueba en ayunas.
- Glucosa 75 gr. Anhidra disuelta en 300 ml de agua más zumo de tres limones.
- Glucómetro "Glucotrend" con las cintas reactivas.
- Balanza.
- Tallímetro.
- Tubos de prueba. Pipetas.
- Fiola de 100 ml. Matraz de 1000 ml.
- Reactivos para análisis de glucosa en orina:
- Sulfato de cobre (puro cristalizado) 17.3g
- Citrato de sodio o potasio (cristalizado)
173.0 g Carbonato de sodio
(cristalizado) 200.0 g
- Agua destilada, c.s.p. 1000.0 ml

Peso previo:
- Colocar el chip del glucómetro.
- Encender y ver el número de cinta reactiva que reconoce para su
uso.
- Colocar la tira reactiva en el glucómetro para su reconocimiento.

C. Método

Experimento N° 1
Pesar y tallar al alumno en estado de ayuno de 12 horas.
Hacer una determinación de glicemia en ayunas y después administrar una solución de
75 gr de glucosa. Obtener muestras de sangre cada 30 minutos por 2 horas y
determinar la glicemia. Simultánea buscar presencia de glucosa en orina. Construir el
gráfico correspondiente.

Experimento N° 2: Test de Benedict

EI test de Benedict puede detectar concentraciones tan pequeñas como 0.15 a 0.2 por
ciento de glucosa. La solución de Benedict no es reducida por el ácido úrico, la
creatinina, c1oroformo ó aldehídos.

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