Estructura y replicación del

material genético
Mediante la técnica de difracción de rayos X
 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS
ácidos desoxirribonucleicos (ADN) es la 2-desoxi-D-ribosa
ácidos ribonucleicos (ARN) es la D-ribosa.

Ácido fosfórico.
Las bases nitrogenadas que forman parte de los ácidos nucleicos son de dos tipos

Las bases púricas derivadas de la purina

(fusión de un anillo pirimidínico y uno de imidazol)
son la Adenina (6-aminopurina) y la Guanina (2-amino-6-hidroxipurina).

Otras bases Puricas son:

Hipoxantina, Xantina, 2-metiladenina, 6-metil-aminopurina.
Las bases pirimidínicas (derivadas de la pirimidina) son:

La Timina (2,6-dihidroxi-5-metilpirimidina o también llamada 5-metiluracilo)

La Citosina (2-hidroxi-6-aminopirimidina)

Uracilo (2,6-dihidroxipirimidina).

Otras bases son:

La Ribotimidina, Dihidrouridina, Seudouridina e Inosina (I)
La unión de la base nitrogenada a la pentosa recibe el nombre de nucleósido

La unión del nucleósido con el ácido fosfórico se realiza a través de un enlace de tipo éster entre
el grupo OH del carbono 5’ de la pentosa y el ácido fosfórico, originando un nucleótido.
La unión se realiza a través del carbono 1’ de la pentosa y los nitrógenos de las
posiciones 3 (pirimidinas) o 9 (purinas) de las bases nitrogenadas
mediante un enlace de tipo N-glucosídico.

9
3
Los nucleótidos se unen entre si para formar largas cadenas de polinucleótidos, esta unión
entre nucleótidos se realiza mediante enlaces
fosfodiéster entre los carbonos
de las posiciones 3’ de un OH de una pentosa y 5’ de la siguiente
azucar.

3’

5’
Las dos hélices se mantienen unidas mediante
puentes o enlaces de hidrogeno producidos
entre las bases nitrogenadas de cada hélice.
Siguiendo la regla de Chargaff
Las bases púricas y pirimidínicas se encuentran unas sobre otras, apiladas a lo largo del eje del
polinucleótido a una distancia de 3,4 Amstrongs. Las bases son estructuras planas
orientadas de forma perpendicular al eje (Astbury, 1947).

El diámetro del polinucleótido es de 20 Amst. y está enrollado

helicoidalmente alrededor de su eje.
Cada 34 A se produce una vuelta completa de la hélice.
Basándose en estos dos datos Watson y Crick propusieron su Modelo de estructura
para el ADN conocido con el nombre de Modelo de la Doble Hélice.
El ADN es una doble hélice enrollada helicoidalmente “a derechas” (sentido dextrorso). Algo
parecido a dos muelles entrelazados.

Las bases nitrogenadas están

apiladas unas sobre otras a
una distancia de 3,4 A. Cada
10 bases, cada 34 A se
produce una vuelta completa
de la doble hélice (360º).

El diámetro de la doble hélice es de 20 A.

 ALTERNATIVAS AL MODELO DE LA DOBLE HÉLICE
El modelo de la Doble Hélice propuesto por Watson y Crick está basado en estudios del ADN en
disolución (hidratado).

La denominada forma B ó ADN-B es la que presenta el ADN en interacción con las proteínas
nucleares.
ADN-A: ADN con 75% de humedad, requiere Na, K o Cs como contraiones, presenta 11 pares de
bases por giro completo y 23 A de diámetro.

ADN-Z: doble hélice sinistrorsa (enrollamiento a izquierdas), 12 pares de bases por giro
completo, 18 A de diámetro.
ADN-B: ADN en disolución, 92% de humedad relativa, se encuentra en soluciones con baja
fuerza iónica la Doble Hélice.
 PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS

Densidad: existe una relación lineal entre el contenido en G+C y la densidad del ADN
determinada en un gradiente de densidad.

A mayor contenido en G+C mayor densidad posee el ADN.

Desnaturalización del DNA

•Separación de las dos hebras por calor

•Una mayor proporción G-C tiene una mayor
temperatura de desnaturalización (‘fusión’)

100
Porcentaje G + C

80

60

40

20

70 80 90 100 110
Temperatura de fusión (desnaturalización) 18
Absorbancia a 2.600 A (260 nm): El estado físico de los ácidos nucleicos está relacionado con su
capacidad de absorción de la luz ultravioleta (UV) a 2.600 A.

El menor grado de absorción se produce en estado de doble hélice, la absorción aumenta

cuando se produce la desnaturalización pasando a estado de hélice sencilla (efecto
hipercrómico, aumento de la absorbancia) y, por último, si degradamos este ADN de hélice
sencilla a nivel de nucleótidos libres, de nuevo aumenta la absorbancia.
Posibles modelos de replicación
Una hélice lleva la secuencia 5’P → 3’OH ,
mientras que la hélice complementaria sigue la secuencia de átomos
3’OH → 5’P.
El modelo de replicación propuesto suponía que el ADN doble hélice separa sus dos
hebras y cada una sirve de molde para sintetizar una nueva hebra siguiendo las reglas
de complementariedad de las bases nitrogenadas.

Dicho modelo recibió el nombre de Semiconservativo, ya que las dos dobles hélices
recién sintetizadas poseen una hebra vieja (una mitad vieja) y otra hebra nueva (mitad
nueva).
Cairns en 1963
Demostro que la replicación el ADN de la bacteria E. coli se ajustaba al
modelo Semiconservativo propuesto por Watson y Crick .
 ORIGENES DE REPLICACION
En las bacterias existe un solo origen de replicación, denominado Ori C y, a partir de
este único punto de origen, la replicación progresa en dos direcciones, de manera que existen
dos puntos de crecimiento (PC) u horquillas de replicación.
El cromosoma bacteriano ser una unidad de replicación se le denomina replicón.

Burbuja

Cuando las moléculas de ADN circular se replican se observan lo que

se denominan "ojos o burbujas" de replicación. La forma que
adoptan los intermediarios de la replicación se parece a de la letra
griega θ. Forma θ
En los eucariontes en cada cromosoma existen muchos orígenes de replicación, y
como consecuencia, muchos replicones (unidades de replicación).

En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orígenes de replicación (~500 en

levaduras y 60000 en mamíferos).
La replicación es bidireccional
DIRECCIÓN DE SÍNTESIS 5' - 3', BIDIRECCIONAL
Las ADN polimerasas (las enzimas encargadas de sintetizar ADN)
solamente saben sintetizar ADN en la dirección 5' - 3'.

Es decir, solamente son capaces de añadir nucleótidos al extremo 3' OH

de otro nucleótido trifosfato.

Las ADN polimerasas necesitan un extremo 3' OH al que añadir nucleótidos trifosfato para
comenzar la síntesis de ADN.
 El replisoma
Complejo enzimático de la replicación que coordina la síntesis de
las dos cadenas, maquinaria molecular
•Dímero de la DNA polimerasa III
•DNA Polimerasa I
Primosoma: formado por enzimas
•Primasa o ARN pol
•Helicasa
•Proteínas de unión a cadena sencilla, ssbp (Unión y, estabiliza el
DNA de cadena sencilla)

•Topoisomerasas tipo I

• TopoisomerasasTipo II

•DNA ligasa
La ADN Pol III y la ADN Pol I son las enzimas que intervienen
directamente en la replicación del ADN de E. coli.

En la bacteria E. coli Arthur Kornberg encontró tres ADN polimerasas diferentes

Por sus estudios sobre la replicación del ADN y las polimerasas
(Premio Nobel en 1959).
ADN Pol I ADN Pol II ADN Pol III
Estructura PM (dalton) 109.000 90.000 900.000
Constitución Monómero Monómero Multímero asimétrico
Nº Polimerasas/célula 400 Desconocido 10-20
Actividad/Función Polimeras 5'-3'
SI SI SI
/Elongación
SI SI SI
Exonucleasa 3'-5'/Correctora
SI NO NO
Exonucleasa 5'-3'/Reparación

retira los cebadores con su actividad

La ADN Pol I tiene un papel reparador,
exonucleasa 5'- 3' y rellena el hueco con su actividad polimerasa 5'- 3'.
 LAS ADN POLIMERASAS EUCARIÓTICAS
Se utilizan dos polimerasas diferentes una para sintetizar la hélice conductora y otra
para producir la hélice retardada.

La ADN polimerasa α sintetiza la hélice retardada mientras que la ADN polimerasa δ

sintetiza la hélice conductora.

En la siguiente tabla se resumen las polimerasas de mamíferos:

ENZIMA FUNCIÓN

Síntesis Hélice retardada. Síntesis del cebador: 10 bases de ADN y 25 de

ADN Pol α
ARN.
ADN Pol δ Síntesis de la Hélice conductora.
ADN Pol ε Polimerización de las Piezas de Okazaki.
ADN Pol β Unión de los fragmentos de Okazaki ( de aproximadamente 250 pb).
ADN Pol γ Síntesis ADN mitocondrial.
 EL PRIMOSOMA
La Primasa: Es una ARN polimerasa que utiliza como molde ADN.
Para que puedan iniciar la síntesis de ADN necesitan un extremo 3' OH al que ir
añadiendo nucleótidos, y ese extremo 3' OH lo suministra un ARN de pequeño
tamaño alrededor de 25 a 30 ribonucleótidos que se denomina ARN cebador o
"primer".
HELICASA
Topoisomerasas
Topoisomerasas:
Pueden producir o eliminar
nudos o enlaces en una
hélice.

Las proteína SSBP: se une

al ADN de hélice sencilla y
lo estabiliza retrasando la
regeneración de la doble
hélice.
 Replicación del DNA
Síntesis de los desoxirribonucleótidos monofosfato (dNMPs):

dAMP, dTMP, dGMP y dCMP.

Fosforilación mediante Quinasas de los dNMP, para convertirlos en

desoxirribonucleótidostrifosfato

dNTPs: dATP, dTTP, dGTP y dCTP.

Polimerización o síntesis del ADN: selección de los dNTPs

complementarios a las de la cadena molde

Una hélice lleva la secuencia 5’P → 3’OH

mientras que la hélice complementaria sigue la secuencia de átomos

3’OH → 5’P, ¿?
horquillas de replicación = 2 Puntos de Crecimiento (PC).

Una de las hélices se sintetiza de forma continua, la hélice conductora

(también llamada hélice líder), mientras que la otra hélice se sintetiza de
manera discontinua, llamada hélice retardada (también llamada hélice
retrasada),
 SINTESIS SEMIDISCONTINUA, (FRAGMENTOS DE OKAZAKI)
Debido a las hélices antiparalelas del ADN y que las ADN polimerasas solamente saben
sintetizar ADN en la dirección 5'P - 3'OH, la síntesis de una de las hebras se puede
realizar de forma continua, mientras que la otra hélice solo mediante pequeños
fragmentos (fragmentos o piezas de Okazaki).
Replicación es Semidiscontinua.
 RESUMEN
Un extremo 3' OH que lo suministra un ARN de
pequeño tamaño alrededor de 25 a 30
ribonucleótidos que se denomina ARN cebador o
"primer". La Primasa es una ARN polimerasa que
utiliza como molde ADN.

Posteriormente, la Holoenzima de ADN

polimerasa III lleva a cabo la síntesis del
fragmento de ADN correspondiente hasta llegar
al siguiente cebador.

La ADN polimerasa I sustituye a la Holoenzima de ADN

polimerasa III.
La ADN polimerasa I se encarga de retirar el ARN
cebador mediante su actividad exonueótídica 5'P - 3'
OH y al mismo tiempo rellena el hueco sintetizando
ADN.

Por último, es necesario enlazar el extremo 3'OH de

un fragmento con el 5'P del siguiente fragmento.
Dicha labor de sellado y unión de los sucesivos
fragmentos la realiza la Ligasa.
 Pol I elimina
Fragmento de cebador
Cebador
Okazaki por 3’ -> 5’ y llena Ligación (DNA
(pequeño RNA
DNA pol III huecos (gap) ligasa, enlace
2-60
(1500 bp en fosfodiéster)
nucleótidos
procariotas y
añadido por
150 en
enzima
eucariotas)
primasa o
RNA pol que
provee 3’ OH.