CUESTIONARIO MICROBIOLOGIA

1.- CITE LOS GÉNEROS Y ESPECIES QUE SON GRAM(+) Y GRAM (-) QUE DAN CATALASA (+)
O CATALASA (-) Y CUALES SON COAGULASA (+) O (-). REALIZAR UN CUADRO DE
PREFERENCIA.
2.- FUNDAMENTO DE LA PRUEBA DE CATALASA.

El peróxido de hidrógeno es el producto final del metabolismo oxidativo de carbohidratos, a esta vía
metabólica recibe el nombre de metabolismo aerobio-oxidativo.

La acumulación del peróxido es muy toxico por lo que la mayoría de las bacterias aerobias y
anaerobias facultativas exceptuando a Streptococcus sp. producen una enzima llamada catalasa que
degrada el peróxido de hidrógeno obteniendo agua y oxigeno gas.

Técnica e interpretación de la prueba.

1.- El reactivo utilizado en la prueba es el peróxido de hidrogeno al 30%, Con el asa 1 micro litro de
siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio
de vidrio. Agregar con gotero una gota de peróxido, si se observa el burbujeo generalmente intenso
significa que hay producción de oxígeno por lo tanto se entiende que hay presencia de la enzima
catalasa, hay bacterias que dan una reacción positiva debil aunque son las menos.

Reacción de la catalsa.

Control positivo: Stahylococcus aureus

Control negativo: Streptococcus pyogenes

Burbujeo catalasa positivo, carencia de burbujeo catalasa negativo.

Si se invierte el orden del método (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse
falsos positivos.

2.- Método del tubo de ensayo:

•Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en slant densamenteinoculado.1

•Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).

En la imagen se puede observar la liberación de oxígeno como consecuencia de la actuacióndel
enzima catalasa, a partir de un tubo con agua oxigenada que ha sido inoculado con H. pylori.

Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener la
precaución de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio
contienen catalasa y su presencia dará un falso resultado positivo.

3.- FUNDAMENTO DE LA PRUEBA DE PLASMA COAGULASA

La coagulasa es una proteína producida por varios microorganismos que permite la conversión del
fibrinógeno en fibrina. En el laboratorio, se usa para distinguir entre diferentes tipos de
Staphylococcus. Un resultado de coagulasa positivo indica que la muestra contiene Staphylococcus
aureus. Esta proteína también es producida por Yersinia pestis.

La coagulasa reacciona con la protrombina en la sangre. El complejo resultante se llama

estafilotrombina, y permite que la enzima proteasa convierta el fibrinógeno en fibrina. Esto hace que
se coagule la sangre. La coagulasa está estrechamente relacionada con la superficie de la bacteria S.
aureus y puede revestir su superficie con fibrina al entrar en contacto con la sangre. Se cree que esta
cubierta de fibrina del estafilococo es capaz de resistir la fagocitosis haciendo esta bacteria tenga un
factor de virulencia mayor. La coagulasa Bound es parte de una familia más grande de MSCRAMM.

4.- EXPLICAR LOS TIPOS DE PRUEBAS DE LA COAGULASA

Pruebas de la coagulasa

La prueba de la coagulasa se usa para diferenciar el Staphylococcus aureus del coagulase-negative

staphylococci. S.aureus produce 2 formas de coagulasa (por ejemplo, coagulasa ligada y coagulasa
libre). La coagulasa ligada también conocida como "factor de Clumping " se puede detectar mediante
la realización de una prueba de portaobjetos y la coagulasa libre con una prueba de coagulasa de
tubo.

5.- CITE EL PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PRUEBA DE LA COAGULASA EN TUBO

Prueba del tubo de ensayo

Coágulos formados por la reacción de la coagulasa en un tubo de ensayo

La prueba se utiliza plasma que ha sido inoculado con una colonia de staphylococcal (por ejemplo,
con un coco gram positivo catalasa positivo). Luego el tubo se incuba a 37 grados Celsius en 1½
horas. Si es negativo entonces continuamos la incubación por unas 18 horas.

Si sale positivo (por ejemplo, la colonia problema es S. aureus), el suero coagulará, dando como
resultado un coágulo (a veces el coágulo esta tan desarrollado que el líquido se solidifica
completamente).

Si sale negativo, el plasma permanece líquido. Un resultado negativo podría indicar que se podría
tratar de S. epidermidis pero solo con unas pruebas más precisas se puede confirmar este hecho,
como por ejemplo el API o métodos de BBL CRYSTAL.

Lista de staphylococci coagulasa positivo : Staphylococcus aureus subsp. anaerobius, Staphylococcus

aureus subsp. aureus, Staphylococcus delphini, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus intermedius,
Staphylococcus lutrae, Staphylococcus schleiferi subsp. coagulans.

Lista de''staphylococci coagulasa negativo de relevancia clínica: S.saprophyticus, S.cohnii subsp.

cohnii, S.cohnii subsp. urealyticum, S.captitus subsp. captitus, S.warneri, S.hominis, S.epidermidis,
S.caprae.

6.- CITE EL PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR LA PRUEBA DE COAGULASA EN PLACA

Prueba de portaobjetos

Prueba del portaobjetos se hace conjuntamente con un control negativo para descartar auto
aglutinación. Se ponen 2 gotas de solución salina en un portaobjetos rotulado con el número de
muestra, Test (T) y control (C). Las 2 gotas son emulsionadas con el organismo de prueba mediante el
uso de un cable de lazo, cable recto, o un aplicador de madera. Se pone una gota de plasma (plasma
de conejo con anticoagulante (EDTA) en la gota de solución salina inoculada correspondiente a la
prueba y se mezcla bien con un aplicador de madera. Agitar el portaobjeto con cuidado unos 10
segundos.
Si es positivo: Se podrá observar aglutinación macroscópica en el plasma en los 10 segundos,
mientras que no se observará aglutinación en la gota de solución salina.

Si es negativo: No se observara aglutinación.

NOTA: Si la prueba de la coagulasa de portaobjetos fuera negativa, deberìa hacerse una prueba de
tubo como confirmación. El aglutinamiento en las dos gotas es un indicativo de auto aglutinación y por
lo tanto debemos descartar la prueba de tubo.

7.- CITE EL PROCEDIENDO DE LA PRUEBA DEL MANITOL Y CITE EJEMPLOS

El agar sal manitol en una fórmula diseñada por Chapman para la diferenciación de
estafilococos positivos a la coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus) de los estafilococos
negativos a la coagulasa1. Este agar se utiliza para el aislamiento de estafilococos a partir de
muestras clínicas2, de cosméticos3 y de pruebas de límite microbiano4, 5.
El agar sal manitol contiene peptonas y extractos de carne bovina, que suministran los
nutrientes esenciales. Una concentración de cloruro sódico de 7,5% tiene como resultado una
inhibición parcial o completa de los organismos bacterianos diferentes de los estafilococos. La
fermentación de manitol, indicada por el cambio del indicador de rojo fenol, facilita la
diferenciación de la especie de estafilococos. Los estafilococos positivos a la coagulasa (por
ejemplo, Staphylococcus aureus) producen colonias de color amarillo y un medio circundante
de color amarillo, mientras que los estafilococos negativos a la coagulasa producen colonias
de color rojo y no producen cambio de color en el indicador de rojo fenol.
REACTIVOS
BD Mannitol Salt Agar
Fórmula* por litro de agua purificada
Extracto de carne bovina 1,0 g
Digerido pancreático de caseína 5,0
Digerido péptico de tejido animal 5,0
Cloruro sódico 75,0
D-manitol 10,0
Rojo fenol 0,025
Agar 15,0
pH 7,4 ± 0,2
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Mannitol Salt Agar (placas Stacker de 90 mm). Controladas microbiológicamente.
Material no suministrado
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Procedimiento de análisis
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La
placa de extensión se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras que
contienen flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una
torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de
esta área inoculada. También debe inocularse un medio no selectivo tal como el agar
Columbia con sangre de carnero al 5% para proporcionar una indicación de otros organismos
presentes en la muestra.
Incubar las placas a 24 – 48 h a 35 ± 2 °C en una atmósfera aerobia.

Resultados
Después de la incubación, las placas se examinan para detectar la presencia de colonias de
estafilococos La morfología característica de las colonias en BD Mannitol Salt Agar es la
siguiente:

Organismos Resultados del crecimiento

Staphylococcus aureus Colonias amarillas de tamaño medio, amarillo

medio.

Staphylococcus epidermidis
Colonias blancas de tamaño pequeño a medio,
rojo medio.

Estafilococos diferentes de S. aureus yS. Colonias de tamaño pequeño a grande, con

epidermidis zonas de color rojo o amarillo, según la especie.

Micrococos Grandes, color blanco a anaranjado

Enterococcus, Streptococcus Sin crecimiento a crecimiento muy débil

Bacterias gram negativas Sin crecimiento a crecimiento débil

Las colonias que muestran una apariencia de estafilococos deben ser sometidas a otras
pruebas de diferenciación para confirmar su identidad2.
8.- CITE EL PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA DE LA NOVOBIOCINA Y ENTRE QUE ESPECIES
GRAM (+) REALIZA LA DIFERENCIACIÓN.

Principio

Los estafilococos coagulasa negativos pueden dividirse en especies sensibles y resistentes a la

novobiocina. Entre las especies resistentes S. saprophyticus es el único que suele aislarse en
muestras humanas como causante de infecciones urinarias. Por lo tanto, la evaluación de los
estafilococos coagulasa negativos a traves de esta prueba proporciona una identificación presuntiva
de esta especie.

Procedimiento

1. Prepare una suspensión en solución salina del microorganismo por identificar, la suspensión
debe tener una turbidez equivalente a 0.5 McFarland.

2. Con un hisopo estéril, distribuya parte de la suspensión sobre el agar Mueller Hinton.

3. Deje secar y coloque un disco de novobiocina sobre la zona sembrada.

4. Incube aerobicamente durante 18 a 24 horas a 35ºC.

Interpretacion

• S. saprophyticus es resistente a la novobiocina y presenta halos de inhibición de 6 mm

(ausencia de halo) a 12 mm.

• Otros estafilococos coagulasa negativos y S. aureus son sensibles a la novobiocina y presentan

halos de 16 mm o mayores

www.joseacortes.comhttp://www.helicobacterspain.com/imagenes/catalasaM.htm

http://cienciasbiologicas.uniandes.edu.co/lema/nodo.php?id=40

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