UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MANABÍ

FACULTAD DE CIENCIAS MATEMÁTICAS, FÍSICAS Y

QUÍMICAS
CARRERA DE INGENIERÍA INDUSTRIAL

INFORME # 5

TEMA:

Tinción de Gram

INTEGRANTES:
● CUAYAL CUASPUD LEIDY MARISOL
● FERNÁNDEZ MACÍAS MARÍA VICTORIA
● MALDONADO ALFARO EVELYN YAMILETH
● ORTIZ ESCOBAR KEVIN PAÚL
● SÁNCHEZ RESABALA GÉNESIS PAMELA

CURSO Y PARALELO:
QUINTO NIVEL “B”

DOCENTE:
ING. CARLOS ALBERTO JADAN PIEDRA

PERIODO ACADÉMICO:
SEPTIEMBRE 2018 – FEBRERO 2019

PORTOVIEJO – MANABÍ - ECUADOR

1. TEMA:
TINCIÓN DE GRAM

2. RESUMEN
La práctica de Tinción de Gram, realizada en el laboratorio de microbiología de la UTM
por los estudiantes de 5 nivel, tuvo como entrada una explicación breve por parte del
docente sobre el tema, que en sí, consiste en la visualización de las bacterias, como
desenlace, se realizó todos los pasos con su debida explicación en la cual todos los
estudiantes participaron y por último se visualizaron las muestras de las cuales se sacó
los respectivos resultados.
3. INTRODUCCIÓN
Esta práctica se la realizó con el objetivo de realizar tinciones bacterianas para su
posterior observación al microscopio óptico. Dentro del objetivo está el identificar
forma y agrupación de las bacterias utilizando esta técnica de tinción de Gram, así como
identificar si las bacterias son Gram positivas o Gram negativas. Las tinciones en
microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio para el
diagnóstico de las enfermedades infecciosas. La tinción de Gram se considera básica en
la valoración inicial de muestras para análisis bacteriológico, tienen una utilidad
fundamental para el diagnóstico y tratamiento oportuno de múltiples patologías de
etiología infecciosa. (López, 2014).

Tinción: es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el contraste en la

imagen vista al microscopio. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para
aumentar la definición y examinar grandes cortes de tejido, poblaciones celulares o
incluso para resaltar organelas dentro de células individuales.
TIPO DE TINCION DIFERENCIAL
Tinción GRAM debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la
técnica en 1884. La coloración Gram y la Ziehl Nielseen, cumple la función de la
tinción simple y además, permite la diferenciación de las bacterias porque usan
diferentes colorantes que se comportan distinto según el microorganismo en cuestión.
La coloración Gram es la más usada en bacteriología. Son diferenciales, ya que se
dividen en Gram positivas y gran negativas. Las primeras se tiñen de color azul violeta
y las segundas adquieren un color rosado o rojo.
Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tiñen de forma distinta debido a
las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.
La pared de la célula Gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas
de Peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared
de la célula Gram-positiva es Peptidoglicano.
La pared de la célula Gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más
delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior
compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas.
Sólo 10% - 20% de la pared de la célula Gram-negativa es peptidoglicano.
(Tortora, 2007).
Las bacterias son microorganismos unicelulares, no poseen un núcleo bien definido
tampoco presentan organelas membranosos internos. Generalmente están provistos
de una pared celular compuesta por peptidoglicanos, en ocasiones se encuentran
dotados de flagelos u otros sistemas de desplazamiento ya que son móviles. Una de
sus características más importantes es que poseen los mecanismos necesarios para
producir el material genético y la energía requerida para lograr su desarrollo y
evolución, además de ser responsables de diversas patologías que el ser humano
padece.
MORFOLOGÍA BACTERIANA
La morfología de las bacterias estará determinada según la rigidez que posea su
pared celular, por tanto se distinguen los siguientes grupos:
● Los cocos que presentan una forma esférica u ovalada.
● Los bacilos que tendrán una forma cilíndrica o de bastones.
● Los espirilos que poseen forma de espiral o hélice.
● Los vibrios en los que se evidencia una forma de coma.
Las bacterias tipo coco o esféricas pueden dividirse según la forma de agrupación
que presentan, cuando se hallan en forma singular son denominadas micrococos
aunque también pueden encontrarse en colonias llamadas “cocci”, si se encuentran
en pares son designadas como diplococos, los estreptococos son aquellos que se
encuentran en cadena, los estafilococos cuando se evidencia una forma de racimo,
tétradas cuando se encuentran en grupos de cuatro, y sarcinas donde se puede
observar una forma de paquete o cubo en un número de ocho.

Los bacilos se pueden dividir según la forma de agrupación. Pueden aparecer: aislados,
por parejas y formando cadenas.
Bacilo cuando se haya en forma singular, empalizada cuando se forman uno seguido de
otro, estreptobacilo son aquellos que se encuentran en cadena y diplobacilo cuando se
encuentran en pares. (Ortiz & Larrea, 2014)
MATERIALES Y MÉTODOS
1. Se comienza limpiando el área donde se va a trabajar con alcohol y una toalla
desechable, ya estando limpio se coloca el papel y se enciende el mechero de
Bunsen para esterilizar dicha área.

2. De la muestra que se tiene sacar una colonia con la ayuda del aza redonda la cual
fue esterilizada ( colocar en contacto directo con el mechero hasta que quede
roja, dejar enfriar y utilizar), y la colocamos en el portaobjeto.

3. Se agrega una gota de agua destilada y mezclamos con el az hasta que la colonia
se extienda, ya terminado se vuelve a esterilizar el az.
4. Con una pinza se sujeta el portaobjetos para secar, con el objetivo de fijar. Se
puede realizar a temperatura ambiente o junto al mechero (no directo).

5. Agregar varias gotas azul violeta (1min), esto provoca que las bacterias se tiñan
de este color.
6. Sin lavarla aplicar lugol (1min), cumple la función de fijar el colorante, después
lavar con agua y volver a secar junto al mechero.
7. Agregar alcohol por 30 seg, esto permite la decoloración de las Gram negativas
ya que las Gram positivas quedan fijadas. Seguidamente se lava con agua.
“La delgada capa de Peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal
violeta-yodo y la célula se decolora.

Las células Gram positivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen
más Peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste
deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre
las moléculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede
atrapado dentro de la pared celular”(Tortora, 2007).
8. Agregar fucsina por 3 min, deja un color rojo en las Gram negativas. Lavar con
agua y secar junto al mechero o al aire libre.

9. Observar en el microscopio comenzando con 4, 10, 100 X. Según sea la

preferencia.
4. RESULTADOS

De las colonias que pasaron por el procedimiento de tinción de Gram se obtuvo lo

siguiente:
Una de ellas fue positiva y la otra fue negativa, de cocos y estreptococo
respectivamente.

5. DISCUSIÓN

Con los resultados que se obtuvo sacados de la muestra de queso que pasaron por el
procedimiento de tinción de Gram podemos decir que en ese alimento están presentes
bacterias que causan enfermedades alimentarías en el consumidor.
Este método no es 100% seguro lo que quiere decir que dicha colonia pudo ser de otra
morfología y clasificarse en otro tipo de bacteria, que presente síntomas distintos en el
huésped y sea diferente el tratamiento para combatirlas.
CONCLUSIÓN

Se reconoció y se distinguió las morfologías bacterianas de dicha práctica, de igual

modo, con el buen empleo y utilización del microscopio se pudo diferenciar entre
bacterias Gram positivas y Gram negativas ya que los conceptos se los tenía muy claros.

6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

● López, A.E & Colín, C.A. (2014).Las tinciones básicas en el laboratorio de

microbiología. Investigación en discapacidad, volumen (3), 10-18.
● Tortora, G. J. (2007).Introducción a la microbiología. Buenos aires, Argentina:
Médica panamericana.
● Ortiz, S.D & Larrea, A.P. (2014).Morfología de diplococos, tétradas y sarcinas.
Actualización clínica, volumen (49), 2-3.