Práctica de Laboratorio N°01

“Efecto del pH y la temperatura en la catalasa”

Objetivo: observar cómo afectan la temperatura, pH y concentración de enzima en la actividad

enzimática.

Criterios: Análisis, Evaluación y Comunicación

Para este trabajo práctico, debe escribir un informe completo que incluya introducción,
resultados y evaluación. Use la información adicional para escribir la introducción.

Las células llevan a cabo simultáneamente una gran cantidad de reacciones químicas
necesarias para la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan
inmediatamente, y si no fuera por la participación de las enzimas, algunas reacciones no se
producirían tan rápido. Las enzimas, en su mayoría proteínas o RNA (riboenzimas), son
catalizadores químicos que agilizan una reacción que envuelve la formación o rompimiento de
enlaces químicos.

Las enzimas no se consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razón por lo cual no se
necesitan en grandes cantidades. Las enzimas actúan sobre los sustratos formando un
complejo sustrato-enzima; esto ocurre en un lugar en específico conocido como el sitio activo
de la enzima.

Muchos organismos pueden descomponer el peróxido de hidrógeno (H2O2) por la acción de

las enzimas, pues es tóxico para la mayoría de los organismos. El H2O2 se convierte en
oxígeno y agua según la siguiente reacción:

2 H2O2  2 H2O + O2

Aunque esta reacción ocurre espontáneamente, las enzimas incrementan la velocidad de

reacción de forma considerable. La catalasa, presente en animales, cataliza esta reacción. La
rapidez de una reacción puede estudiarse de muy diversas formas, como:

 Midiendo la presión de los productos que aparecen.

 Midiendo la velocidad de desaparición del substrato (H2O2).
 Midiendo la velocidad de aparición del producto (O2, desprendido como gas).

En esta experiencia se medirá la rapidez de la actividad enzimática bajo 3 condiciones:

concentración de la enzima, pH, y temperatura. El indicador de medición será la concentración
de oxígeno gaseoso (O2) formado por la ruptura del H2O2.

I. MATERIAL

 Hígado
 agua destilada
 ácido clorhídrico 3M
 hidróxido de sodio 3M
 peróxido de hidrógeno
 gasa
 mortero y pilón
 gotero
 cápsula de porcelana
  tubos de ensayo
 gradilla
 cronómetro
 hielo
 trípode y rejilla
 spark + sensor de O2 + sensor de pH + sensor de temperatura
 probeta 10 ml
 vaso de precipitado 150 ml
 H2O2
 vaso de precipitado 250 ml
 balanza

II. MÉTODO

Paso inicial. Preparación del homogenado – obtención de la enzima

1. Para preparar los homogenados, corte en pedazos por separado 10g de hígado.
2. Usando un mortero, muela el material con un poco de agua hasta diluir parte de la muestra;
no muela excesivamente para que no queden pedazos muy pequeños del material.
3. De ser necesario, filtre el macerado con una gasa.

Experiencia 1. Efecto de la concentración de enzima

1. Rotule 4 tubos de ensayo con los números 1, 2, 3 y 4.
2. Agregue 3 ml de agua y 3 ml de H2O2 a cada tubo.
3. Agregue 1 gota del homogenado (enzima) al tubo #1 (asegúrese que la enzima no caiga
por las paredes del tubo).
4. Coloque el sensor de O2 en el tubo y registre su concentración por 3 minutos.
5. Repita los pasos 3 y 4 con los tubos #2, #3 y #4, agregando 2, 3, y 4 gotas de enzima a
cada tubo, respectivamente.
6. Asegúrese de que el registro de las 4 mediciones se realice en una misma gráfica.

Experiencia 2. Efecto de la temperatura

1. Rotule 4 tubos de ensayo: T° 0-5, T° 20-25, T° 30-35, T° 50-55
2. Agregue 3 ml de agua y 3 ml de H2O2 a cada tubo.
3. Prepare un baño de agua a la temperatura de 0-5°C, empleando hielo.
4. Registre con el sensor de T° constantemente para asegurar que se mantenga a dicha T°
5. Coloque el tubo T° 0-5 en el beaker con hielo.
6. Agregar 10 gotas de la enzima al tubo e inmediatamente colocar el sensor de O 2 en la boca
del tubo.
7. Registrar la concentración de O2 durante 3 minutos.
8. Repetir los pasos 4, 5, 6, y 7 con los siguientes tubos, en su respectiva temperatura. Para
ello poner agua a hervir para crear los baños de agua a la temperatura respectiva.
9. Asegúrese de que el registro de las 4 mediciones se realice en una misma gráfica.
 Experiencia 3. Efecto del pH
1. Rotule 3 tubos de ensayo: pH4, pH7, pH10
2. Agregue 3 ml de la solución amortiguadora y 3 ml de H2O2 a cada tubo.
 pH 4  HCl 3M
 pH7  agua destilada
 pH10  buffer
3. Medir el pH de cada tubo asegurándose que sea el adecuado. De lo contrario agregar la
solución opuesta hasta alcanzar el pH deseado.
4. Agregar 10 gotas de la enzima al tubo e inmediatamente colocar el sensor de O 2 en la boca
del tubo. Registrar durante 3 minutos.
5. Asegúrese de que el registro de las 3 mediciones se realice en una misma gráfica.

III. PROCESAMIENTO DE DATOS

Se deberán elaborar 3 gráficas que relacionen la concentración de O2 con cada variable:

concentración de enzima, temperatura, y pH.

Más adelante se debe emplear este material para elaborar la gráfica de la velocidad de la
actividad enzimática vs cada una de las variables.

IV. PREGUNTAS

Efecto de la concentración de la enzima

1. ¿Qué efecto hace el cambio en la concentración de la enzima en la velocidad de
descomposición del H2O2?
2. ¿Qué cree usted que pasará con la velocidad de reacción si la concentración de enzima se
aumenta a 5 gotas? Prediga cuál debería ser la velocidad de reacción para 5 gotas.

Efecto de la temperatura
3. ¿A qué temperatura es máxima la velocidad de la actividad enzimática? ¿Mínima? Explique.
4. ¿Cómo afecta el cambio de temperatura a la velocidad de la actividad enzimática?
¿Concuerda esto con el patrón que usted anticipó?
5. ¿Por qué la actividad enzimática disminuye a temperaturas elevadas?
 Efecto del pH
6. ¿A qué valor de pH es máxima la velocidad de la actividad enzimática? ¿Mínima?
7. ¿Cómo afectan los cambios de pH a la velocidad de la actividad enzimática? ¿Concuerda
esto con el patrón que usted anticipó?

V. EXTENSIÓN

1. Diferentes organismos a menudo viven en hábitats muy diferentes. Diseñe una serie de
experimentos para investigar cómo los diferentes tipos de organismos pueden afectar a la
velocidad de la actividad enzimática. Considere ensayos con planta, animal y protista.
2. Presumiblemente a mayores concentraciones de H2O2, debe aumentar la probabilidad que
una molécula de enzima pueda colisionar con H2O2. Si fuera así, la concentración de H2O2
pudiera alterar la velocidad de producción de oxígeno. Diseñe un conjunto de experimentos
para investigar cómo diferentes concentraciones del substrato peróxido de hidrógeno
pudieran afectar la velocidad de la actividad enzimática.
3. Diseñe un experimento para determinar el efecto de hervir la catalasa sobre la velocidad de
la reacción.
4. Explique cómo los factores ambientales afectan la velocidad de las reacciones catalizadas
por enzimas.

VI. REFERENCIAS

 Manual Vernier. Acción Enzimática: Actividad de la Catalasa