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PNLEM – 2009 Biologia José Mariano Amabis Gilberto Rodrigues Martho Protocolo para extração de DNA
PNLEM – 2009
Biologia
José Mariano Amabis
Gilberto Rodrigues Martho
Protocolo para extração de DNA da banana
Professor: usando este método de extração de DNA , o aluno não corre o risco de se queimar, pois esse método não
usa o banho-maria.
Essa técnica é simples e pode ser feita em sala de aula, podendo portanto ser utilizada em
escolas que não possuem laboratório.
Objetivo: conhecer os princípios básicos da extração de material genético a partir de tecidos
vegetais e animais.
Introdução:
Para análise do DNA de células eucarióticas, a primeira etapa importante é o seu isolamento.
Os procedimentos que seguem são utilizados para extrair grande quantidade de DNA de fontes
vegetais (banana).
A extração de DNA de células eucarióticas consta fundamentalmente de três etapas:
1. Ruptura (física ou química) das membranas celulares para liberação do material genético;
2. Desmembramento dos cromossomos em seus componentes básicos: DNA e PROTEÍNAS;
3. Separação do DNA dos demais componentes celulares.
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Materiais • 200 mL de álcool Etílico gelado (etanol – álcool 90ºg.l.) • 1 banana
Materiais
• 200 mL de álcool Etílico gelado (etanol – álcool 90ºg.l.)
• 1 banana prata madura
• Gelo picado
• Bastão de vidro
• Peneira
• 2 béqueres de 500 mL
• 12,5 g de NaCl
• 2 colheres de sopa de detergente incolor
• 450 mL de água filtrada
• Liquidificador ou saquinho de plástico para amassar a banana
• Isopor para colocar o gelo
Procedimentos
Preparar a solução de lise: em um béquer, misturar 450 mL de água com 12,5 g de NaCl e as
duas colheres de sopa de detergente incolor e deixar no gelo. Faça essa preparação uns dez
minutos antes de começar o experimento para que esteja gelada.
Descascar as bananas e bater no liquidificador (ou colocar a banana no saco plástico e esmagar
por 2 minutos).
Retirar a banana batida e colocar em um béquer.
Acrescentar 250 mL de solução de lise (GELADA).
Coloque o béquer com a mistura no gelo e agite por 10 min com o bastão com movimentos
delicados. (DENTRO DO GELO)
Filtrar a mistura em um béquer (preencher até 150 mL do béquer);
Acrescentar ao filtrado 150 mL de etanol (GELADO) vagarosamente pelas bordas do béquer;
Esperar formar uma superfície de separação nítida entre o etanol (superior) e a água (inferior).
Formam-se fios esbranquiçados, que são aglomerados de moléculas de DNA.
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Questões 1. Por que devemos macerar bem a banana? 2. Por que é usado o
Questões
1. Por que devemos macerar bem a banana?
2. Por que é usado o detergente?
3. Qual a função do NaCl?
4. Qual a função da adição do álcool etílico ?
Respostas:
1. A maceração rompe a parede celular das células da banana.
2. O detergente dissolve a bicamada lipídica, desintegrando assim os núcleos e liberando o
DNA.
3. O NaCl ajuda a manter as proteínas dissolvidas no líquido, impedindo que elas se
precipitem junto com o DNA
4. O álcool etílico gelado faz o DNA se aglutinar, formando uma massa filamentosa e
esbranquiçada.
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