CONTROL MICROBIANO

ACCION DE LOS AGENTES FISICOS:

Procedimiento:

En cada tubo provisto con Caldo Nutritivo se siembra una Cepa bacteriana, luego se
incuba a diferentes temperaturas por 18 a 24 horas. Transcurrido ese tiempo se realiza la
lectura.

Se incuba 18 a 24 Hrs

---------------------------

CN CN CN CN CN CN

4°C 37°C 60°C No crece Crece No crece

Resultados:

4°C  Por efectos de bajas temperaturas, los procesos metabólicos se inactivan, por lo
que no hay crecimiento bacteriano. Efecto bacteriostático. Inhibe crecimiento bacteriano.

37°C  Microorganismo mesófilos desarrollan adecuadamente.

60° C  Por efectos de las altas temperaturas las proteínas bacterianas se

desnaturalizan, por lo que se la muerte bacteriana. Efecto bactericida.

ACCION DE LOS AGENTES QUIMICOS:

Procedimiento:

En una placa petri provisto de Agar Miuller Hinton se inocula en toda la superficie de
siembra una cepa bacteriana; se deja reposar por 5 minutos; luego se embebe un disco
de papel de filtro con la sustancia química a probar y se coloca el disco sobre la superficie
ya sembrada con bacterias, y así sucesivamente se va embebiendo diferentes sustancias
químicas en los discos de papel de filtro y colocándolos de manera equidistantes en la
placa inoculada.

Luego se incuba a 37°C por 18 a 24 horas, para terminar realizando la lectura.

Incubar 18 a 24 hrs.

---------------------

37°C
Resultados:

Se observa si existen alrededor de cada agente químico: zonas de inhibición bacteriana, a

manera de áreas sin desarrollo bacteriano.

La lectura de resultados es arbitraria, así tenemos:

- NEGATIVO  Zona sin halo de inhibición ----------------- INEFICAZ

- ( +)  Zona con pequeño halo de inhibición ----- POCO EFICAZ
- (++)  Zona con mediano halo de inhibición ------ EFICAZ
- (+++)  Zona con gran halo de inhibición ----------- MUY EFICAZ

Cuestionario:

1.- En la experimentación con agentes químicos, señalar:

 Cuáles fueron los diferentes agentes químicos utilizados

 Cuáles de los agente se consideran desinfectantes y antisépticos
 Cuál de los agentes químicos (desinfectantes o antisépticos) se considera el de
mayor eficacia (indicando si la bacteria es gram positivos o gram negativos).
 Determinar el efecto biológico y el mecanismo de acción de los diferentes agentes
químicos utilizados, siempre considerando si tiene mayor acción de control sobre
gram positivos o gram negativos.

2.- En la experimentación con los diferentes jabones líquidos, señalar:

 Cuáles fueron los diferentes jabones utilizados

 Cuál de los jabon/jabones se considera el de mayor eficacia (indicando si la
bacteria es gram positivos o gram negativos).
 Determinar el efecto biológico y el mecanismo de acción de los jabones utilizados,
siempre considerando si tiene mayor acción de control sobre gram positivos o
gram negativos.
 Según los ingredientes de los diferentes jabones ¿Cuál cree que es el ingrediente
activo que cumple con la función de inhibir o matar a las bacterias, explique por
qué?
 En el lavado de manos, ¿considera que la acción espumante de los jabones
cumple algún rol en la eliminación de las bacterias?. Explique:

CONTROL MICROBIANO:

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD IN VITRO ANTIBIOGRAMA

El aislamiento de un agente infeccioso a partir de un paciente con frecuencia no

es suficiente para establecer la terapia adecuada. Muchas bacterias y algunos
hongos presentan resistencia a los agentes antimicrobianos y algunos virus han
desarrollado resistencia a los agentes antivirales más nuevos. Los patrones de
resistencia cambian en forma constante. No importa cuán rápidamente se
introducen los nuevos agentes terapéuticos, los microorganismos parecen estar
dispuesto a sobrepasarles.
Cuando no se conoce o no se puede predecir la susceptibilidad de las bacterias,
hongos y virus a los agentes antimicrobianos, es necesario estudiar la
sensibilidad individual de cada agente a estas drogas, pudiendo elegir entonces
el agente adecuado (el más activo contra el patógeno, el menos toxico para el
huésped, con la características farmacológico apropiadas el más económico y
que se encuentre en el mercado), que proporciona mayores posibilidades de una
evolución favorable. El clínico toma la decisión final, contando co n los resultados
obtenidos in vitro enfermedad subyacente, condición clínica del paciente, la
administración de otros agentes terapéuticos, experiencia clínica y otros factores.

Para realizar las pruebas de sensibilidad in vitro, es necesario emplear un i nóculo

estándar que contenga 10 6 a 10 8 microorganismo por ml; un medio de cultivo
que no interfiere con la eficacia de los antibióticos ni con el crecimiento del
microorganismo, en cantidad conocida y un pH regulado como el Miuller Hinton
en caldo o Agar medio suplementado con los cationes magnesio y calcio.

Método de dilución en caldo

Método que sirve para evaluar cuantitativamente la actividad de un antibiótico. Se
colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano, generalmente
diluciones al medio (1:2), en tubos con caldo de cultivo Miuller Hinton que
sostendrá el desarrollo del microorganismo, luego se inocula el microorganismo.
Un tubo de caldo se mantiene sin el antibiótico y es conocido como el control,
luego se llevan a incubar todos los tubos y al día siguiente se observa la turbidez
que indicara desarrollo bacteriano. El microorganismo crecerá en el tubo control y
en todos los otros que no contengan suficiente agente antimicrobiano como para
inhibir el desarrollo. La concentración mas baja que impide el crecimiento
bacteriano se considera concentración inhibitoria mínima (CIM) del fármaco y
esta es detectada por falta de turbidez.

Material.

 Cultivo bacteriano que contenga 10 6 - 10 8 microorganismo por ml.

 Solución de antibiótico que contenga 1000 unidades
 Tubos 13x 100 ml. Estériles
 Pipetas estériles
 Caldo Miuller Hinton
Procedimiento.

 Colocar 10 tubos 13x100 ml estériles enumerados del 1al 10.

 Diluir el antibiótico que contenga 1000 U. en proporción 1:5 en caldo,
obteniendo una concentración 200 u. por ml.
 Con una pipeta estéril colocar 0.5 ml del caldo en los tubos marcados del 2
al 10.
 Agregar 0.5 ml del antibiótico a los tubos 1 y 2, mezcle el contenido del
segundo tubo y trasvase 0.5 ml al tubo 3, continuando de igual forma ha sta
el 9no tubo. Retirar 0.5 ml del 9no tubo y descartar; el 10mo no recibe
antibiótico y sirve como control.
 Agregue 0.5 ml de la cepa bacteriana a todos los tubos
Incubar a 35-37°C por 24 horas

Resultado.

 Realice la lectura e interprete los resultados obtenidos.

 Determine la CIM del fármaco estudiado.
 Determine si el microorganismo probado es sensible o resistente al
fármaco probado haciendo uso de la tabla.
 Interprete correctamente el resultado obtenido

Método de difusión de Agar.

Conforme se dispuso de mayor número de agentes antimicrobianos para el
tratamiento de una gran variedad de bacterias, se hicieron aparentes las
limitaciones del macro método de dilución en caldo. Por este método se prueba
simultáneamente un germen aislado de un paciente frente a más de un agente
antimicrobiana, y esto se consigue inoculando la superficie de la placa de agar
Miuller Hinton con el microorganismo en estudio, transcurrido 5 minutos se
procede a colocar los discos de antibióticos (con una conce ntración conocida)
equidistante uno de otro, los antibióticos difunden en el medio en forma radial
alrededor del disco e inhibe el desarrollo microbiano en la zona donde su
concentración es suficientemente alta (halo de inhibición), trascurrido la
incubación a 35-37°C por 24 hrs. Este método también es conocido como disco -
difusión y es una técnica cualitativa. En 1966 después del estudio Kirby -Bauer y
otros se uniformizaron criterios y se estandarizó la prueba tomando en cuenta los
conceptos de concentración mínima inhibitoria (CIM ) y la concentración promedio
en sangre de las drogas frecuentemente usadas.

Material.

 Placas con agar Miuller Hinton

  Disco de antibióticos
 Torundas estériles
 Pinzas estériles
 Cepa bacteriana en caldo con una concentración de 10 6 – 10 8
microorganismo por ml

Procedimiento.

 Introduzca la torunda en la cepa bacteriana, escurrir oprimiendo contra las

paredes del tubo y extender uniformemente en la superficie de la placa de
Agar Miuller Hinton.
 Dejar reposar 5 minutos y colocar con la ayuda de la pinza los discos de
diferente antibióticos en la superficie del Agar y presionarlos suavemente.
Los discos utilizados en los diferentes antibiogramas fueron los que se
muestran:

MULTIDISCO UROCULTIVO.
Nitrofurantoina 300 mcg Nf
Gentamicina 10 mcg Ge
Sulfatrimetoprim 23.75 mcg + 1.25 mcg Sx
Cefaclor 30 mcg Cec
Cefuroxima 30 mcg Cxm
Ac. Nalidíxico 30 mcg Na
Cefalotina 30 mcg Cf
Amikacina 30 mcg Ak
Norfloxacina 10 mcg Nor
Imipenem 10 mcg Ipm
Ceftazidima 30 mcg Caz
Ceftriaxona 30 mcg Ctr
Ciprofloxacina 5 mcg Cip
Levofloxacino

MULTIDISCO GRAM POSITIVO.

Sulfatrimetoprim 23.75 mcg + 1.25 mcg Sx
Amoxycilina + Ac. Clavulinico 20 mcg + 10 mcg Amc
Gentamicina 10 mcg Ge
Vancomicina 30 mcg Va
Clindamicina 2 mcg Cc
Cefazolina 30 mcg Cez
Ampicilina 10 mcg A
Ceftriaxona 30 mcg Ctr
Cefalotina 30 mcg Cf
Cefotaxima 30 mcg Ctx
Ceftazidima 30 mcg Caz
Eritromicina 15 mcg E
Penicilina 6 mcg / 10 IU P
  Los discos deben estar equidistantes unos de otros, incube a 35°C 24 hrs.
Resultados

 Para realizar la lectura, mida el halo de cada disco de antibiótico en mm,

conocidos los diámetros utilice la tabla para categorizar si el
microorganismo es sensible, moderadamente sensible o resistente a los
diferentes antibióticos.

 Finalmente concluya los resultados según el microorganismo probado en la

práctica
Ejm: Escherichia coli es sensible a ……
Escherichia coli es moderadamente sensible a: ……….
Escherichia coli es resistente a: ……………
CUESTIONARIO:

1. ¿Qué es limite crítico de un agente antimicrobiano para este tipo de prueba?

2. ¿La CIM y CBM (concentración bactericida mínima) de un agente
antimicrobiano son iguales? Explique.
3.- Según los diferentes antibióticos usados, explique su mecanismo de acción, por la cual
pueden inhibir o matar a las bacterias:

ESPINO YA CUMPLI CONTIGO.