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IMFORME DE INVESTIGACION
Efecto de la Conservación de semen ovino con los
dilutores
NOMBRE DE INVESTIGADOR:
IV. RESULTADOS
V. DISCUSIÓN
CONCLUCIONES
RECOMENDACIONES
BIBLIOGRAFÍA
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INTRODUCCIÓN
La finalidad de diluir el semen es aumentar el volumen del eyaculado y facilitar la
preservación de la viabilidad del espermatozoide por un tiempo mayor. Un diluyente
eficiente mantiene o mejora el medio que rodea al esperma suministrándole energía y
protección contra productos del metabolismo y variaciones de temperatura (Gordon,
1997).
Con el fin de evitar el daño durante el proceso de congelamiento, se han desarrollado
numerosos diluyentes en base a amortiguadores de pH (tris, ácido cítrico), azúcares de
bajo peso molecular (fructuosa, glucosa) que pasan a través de la membrana celular
sirviendo como fuente de energía para el esperma, agentes protectores de membrana
(yema de huevo, leche descremada) que contienen macromoléculas que proveen
protección contra el shock por frío, y crioprotectores (glicerol y otros polialcoholes,
aminoácidos) que reducen la formación intracelular de cristales de hielo durante el
proceso de congelado-descongelado (Molinia et al., 1994; Salamon y Maxwell, 1995).
El problema de nos lleva a realizar la investigación es por la escaza información
existente sobre la conservación de la cobertura vegetal en lomo-largo y se eligió este
tema por la importancia que conlleva su investigación que está directamente relacionada
con la infiltración de agua en el suelo.
El interés del estudio es netamente académico por tratarse de estudiantes que tienen
como objetivo aprender los temas que respecta el conocimiento científico.
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I. PLANTEAMIENTO DE LA INVESTIGACIÓN
PROBLEMA GENERAL
¿Cuál es el efecto de la conservación de semen con los dilutores?
PROBLEMAS ESPECIFICOS
1.4. JUSTIFICACIÓN
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II. MARCO TEÓRICO
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2.3.2 CARACTERISTICAS DEL SEMEN DEL CARNERO
El semen está conformado por una fracción líquida o plasma seminal y una fracción
celular que la conforman los espermatozoides (Garner y Háfez, 2000). A partir de
diversos reportes (ver Cuadro 1), se tiene que en promedio el carnero tiende a eyacular
una cantidad de semen que oscila entre 0.75 a 2 mL., conteniendo una alta
concentración de espermatozoides, los cuales son altamente viables.
El plasma seminal ovino está compuesto por las secreciones provenientes de la próstata
y de las glándulas vesiculares y bulbouretrales. Durante la eyaculación, dichas
secreciones son vertidas hacia la uretra generándose así una mezcla con la suspensión
de espermatozoides y las secreciones ampulares del conducto deferente (Garner y
Hafez, 2000).
La importancia funcional del plasma seminal es cuestionable, dado que es posible
inducir la preñez por inseminación empleando espermatozoides colectados del
epidídimo. Sin embargo, el plasma seminal sí muestra ser un componente esencial en
el apareamiento natural porque actúa como portador y protector de los espermatozoides
(Garner y Hafez, 2000), situación que es más importante en el apareamiento de la oveja
y la vaca, en las cuales el eyaculado es depositado en la vagina.
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La célula espermática del carnero está cubierta en su totalidad por la membrana
plasmática (Garner y Hafez, 2000), cuya composición lipídica es notablemente diferente
a la de las demás células somáticas. Los lípidos vienen a ser las sustancias que
confieren la característica de permeabilidad de la membrana espermática (Martínez y
Morros, 1996). A su vez juegan un rol importante en los procesos de maduración y de
capacitación espermática.
Morfológicamente el espermatozoide está conformado por una cabeza, en la cual se
encuentra el acrosoma y por un flagelo o cola. La cabeza está conformada por el núcleo,
el cual es aplanado y de apariencia oval y que a su vez contiene una cromatina dispuesta
de manera muy compacta (Garner y Hafez, 2000). El acrosoma es la parte anterior que
recubre al núcleo espermático, es un delgado saco membranoso de doble capa
estrechamente adherido al núcleo. En el acrosoma están contenidas varias enzimas
hidrolíticas que participan en el proceso de la fecundación, como la proacrosina,
hialuronidasa, esterasas y ácidohidrolasas (Mann y Lutwak-Mann, 1981).
La cola espermática está conformada por un cuello y tres segmentos subsiguientes, el
medio, el principal y el caudal. El segmento medio está comprendido entre el cuello y el
anillo citoplásmico y está conformado por el axonema, las fibras densas y numerosas
mitocondrias dispuestas en un patrón helicoidal. El segmento principal continúa en
sentido posterior al anillo citoplásmico y está conformado por el axonema y las fibras
densas asociadas. Finalmente, el segmento caudal está conformado únicamente por el
axonema y la membrana plasmática (Garner y Hafez, 2000).
Se utiliza una hembra para estimular la libido y la monta. El operador, situado al lado
derecho de la hembra, coloca la vagina artificial en dicho flanco y la sujeta con la mano
derecha, de tal forma que el extremo abierto quede mirando hacia el macho. La válvula
de la vagina debe dirigirse hacia abajo con una inclinación de aproximadamente 45°,
evitando el contacto con el carnero macho. En el momento del salto, se dirige con la
mano izquierda el pene hacia el interior de la vagina 15 artificial, procurando hacerlo
siempre del prepucio para evitar la retracción del mismo. Cuando el pene entra en
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contacto con la superficie caliente de la vagina artificial, el semental da el característico
¨golpe de riñón¨ y eyacula dentro tubo colector (Evans y Maxwell, 1990).
Estos parámetros pueden ser de carácter macroscópico (color, aspecto, volumen, pH)
ya que pueden ser evaluados a simple vista de la muestra seminal; y microscópicos
(motilidad masal, motilidad individual, concentración espermática, anormalidades,
integridad de membrana, vitalidad) que deben ser evaluados utilizando un microscopio
(Aisen, 2004).
2.5.1 Color
En este sentido puede admitirse una relación directa entre la intensidad del color y la
riqueza espermática (Pérez y Pérez, 1985). Un color rojizo indica la presencia de sangre,
así como los colores grises o marrones indican contaminación o infección, debiéndose
en estos casos, desechar el eyaculado y proceder a la revisión del carnero (Gibbons et
al., 2004).
2.5.2 Aspecto
2.5.3 Volumen
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sus rangos van de 0.5 a 2.0 ml con una media de 0.8 ml. Se sabe, además, que las
cópulas reiteradas a intervalos demasiado cortos disminuyen el volumen recolectado y,
por el contrario, la excitación acentuada aumenta (Pérez y Pérez, 1985).
2.5.4 pH
Es una de las pruebas que se utiliza con mayor frecuencia para evaluar la calidad de
semen diluido. En algunas especies, parece estar correlacionada con la capacidad
fertilizante del espermatozoide. Si existe menos del 40% de espermatozoides con
movimiento lineal progresivo, es menos probable que haya 18 fertilidad. Debido a la
influencia que tienen las variaciones de temperatura sobre la motilidad espermática, las
muestras deben ser evaluadas tan pronto sea posible (WHO, 1992). La técnica consiste
en la observación microscópica a 400 aumentos (400x) de una muestra de semen
diluido en una lámina portaobjetos temperada. Se consideran espermatozoides mótiles
aquellos que aparecen activos y con movimiento progresivo. La motilidad individual es
el porcentaje de espermatozoides mótiles con respecto al total de espermatozoides
visualizados (Sorensen, 1991; Arthur, 1991).
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Los diferentes métodos utilizados para su cálculo varían en función de la rapidez y
exactitud (Evans y Maxwell, 1990). Son varios los métodos que permiten determinar la
concentración espermática. Entre ellos, figuran el recuento de la cámara de Neubauer
y el 19 método del fotocolorímetro. Ambos métodos son precisos y, si bien el
fotocolorímetro permite un recuento más rápido, su costo es más elevado que la cámara
de Neubauer (Gibbons, 2004). Debido a que se quiere aprovechar al máximo una
muestra de semen de buena calidad, se procura dosificarlo (tener la cantidad óptima de
espermatozoides en un volumen determinado) y así manejar varias muestras para
inseminación. Por tanto, es necesario conocer el número de espermatozoides por
mililitro de eyaculado ya que nos permitirá saber cuántas dosis se pueden preparar; en
pocas palabras, cuántas veces puedo diluirlo (factor de dilución) (Evans y Maxwell,
1990). Guillén (2001), evaluó las características seminales de carneros de la raza
Blackbelly del INIA, obteniendo concentraciones de 3.14x109 espermatozoides/ml. Así
mismo, Huamán (2003), reportó concentraciones de 3.63, 3.316, 2.78 y 2.67 x 109
esp/ml.
2.5.9 Vitalidad
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La membrana celular de los espermatozoides representa una barrera al paso de
tinciones al medio intracelular. Los espermatozoides vivos no dejan pasar ningún tipo
de colorante a su medio intracelular, mientras que los muertos, los absorben. Este
fenómeno biofísico permitió el desarrollo de técnicas orientadas a la diferenciación de
espermatozoides vivos de muertos (Fernández et al., 1998). Actualmente, existe toda
una serie de técnicas destinadas a identificar espermatozoides vivos y muertos. Se han
descritos numerosas tinciones basadas en la permeabilidad selectiva de la membrana
plasmática como por ejemplo la eosina-nigrosina (Colas, 1975) y azul de Tripán
(Suttiyotin y Thwaites, 1992) de tal manera que si el espermatozoide está vivo, la
membrana celular actúa como 21 barrera impermeable impidiendo el paso del colorante
a través de ella, permaneciendo la célula sin teñirse. Ozturkler et al. (2000), trabajando
con 6 caneros de la raza Kivircik y utilizando una tinción a base de eosina y nigrosina,
reportaron 77.45% de espermatozoides vivos en semen fresco.
2.6 Diluyente
A) Definición:
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Los diluyentes son compuestos químicos, o conjunto de sustancias que preservan la
viabilidad y fertilidad del semen, a la vez que posibilitan el procesamiento de un número
previamente establecido de espermatozoos, acondicionados en envases adecuados, de
un tamaño conveniente para la inseminación.
C) Funciones de un Diluyente.
1) Agua Destilada. Actúa como solvente para los componentes semanales y del
diluyente.
Debe ser destilada (o mejor bidestilada) para eliminar la presencia de metales
pesados en solución, que son dañinos para el espermatozoo.
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3) Materiales orgánicos.
4) Agentes crioprotectores.
5) Azúcares.
Los monosacáridos (Glucosa y Fructosa) son azúcares de los cuales el espermatozoo
puede obtener energía para sus procesos vitales. También actuaran como sustitutos
de electrolitos, manteniendo el balance osmótico del diluyente.
Di y Trisacáridos, los cuales no pueden ser metabolizados por el espermatozoo,
proporcionan algo de acción crioprotectora, principalmente como moléculas
relativamente grandes que contribuyen a mantener un balance osmótico, actuando
como sustitutos de electrolitos. No son capaces de penetrar la membrana espermática
y probablemente disminuyen los efectos de la concentración de solutos durante la
congelación y la descongelación. Proporcionan mejores resultados cuando se agregan
al semen en la fracción glicerolada antes de la congelación y no están presentes en la
primera fracción del diluyente. Para el congelado de pellets (pastillas), donde la tasa de
congelado es rápida, estos azúcares reemplazan efectivamente las sales bufferado de
los diluyentes.
6) Aditivos. Tales como algunas enzimas, pueden mejorar la fertilidad.
7) Antibióticos. Para controlar el crecimiento de microorganismos. Los más utilizados
son Penicilina y Estreptomicina.
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espermatozoide una protección limitada contra los cambios bruscos de temperatura, el
uso de diluyentes que contienen agentes protectores de la membrana celular durante el
enfriamiento a 5°C (generalmente yema de huevo) y/o el congelamiento (generalmente
glicerol) es de vital importancia.
Los diluyentes seminales deben cubrir una serie de requisitos tales como pH, capacidad
tampón, osmolaridad y fuerza iónica. Deben también contener una fuente que sirva de
reserva para darle energía al espermatozoide, no deben deteriorarse durante el
almacenamiento previo a su uso y, sobre todo, proporcionar a la célula espermática
protección frente a efectos de baja temperatura (Cortés Gallego, 1997).
El uso de Tris en diluyentes para semen ovino fue descrito en algunas investigaciones
a principio de los años setenta. Sus características principales son poseer una buena
capacidad tampón, actividad diurética y osmótica, además de baja toxicidad en altas
concentraciones.
Existe una amplia gama de diluyentes desarrollados a través del tiempo, los cuales
presentan diferentes composiciones y cualidades. De todos éstos, el diluyente Tris-
glucosa-yema de huevo desarrollado por Salomon y Maxwell (2000), es hasta hoy el
más recomendado para semen refrigerado y congelado de carnero. Hay diluyentes que
se utilizan para refrigerar, los cuales son soluciones acuosas tamponadas a las que se
les añade una fuente de energía (glucosa, fructosa) y un crio protector no penetrante,
que es opcional dependiendo de la temperatura y tiempo de refrigeración (leche
descremada, yema de huevo).
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2.6.2. Composición de diluyentes para congelar semen
a) Tris:
La materia grasa está constituida fundamentalmente por triglicéridos muy distintos que
forman una mezcla compleja; la leche también contiene pequeñas cantidades de otros
lípidos, como fosfolipidos, colesterol, ácidos grasos libres y digliceridos.
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Alrededor de las cuatro quintas partes de las proteínas de la leche son caseínas que a
su vez, están constituidas por una mezcla de aproximadamente 10 proteínas diferentes.
El resto corresponde esencialmente a las llamadas proteínas del suero y además hay
algunas otras proteínas minoritarias, como las enzimas. Los minerales no equivalen
exactamente al contenido de sales.
Los principales son K, Na, Mg, Cl y fosfato. La leche contiene muchos otros elementos
en cantidades traza (Walstra et al, 2001).
C) Yema de Huevo:
Su acción consiste en proteger a los espermatozoides contra el choque térmico por frío,
además la fracción lipídica de la yema de huevo (lecitina y cefalina) tiene una acción
protectora, y la fracción lipoproteica, un efecto conservador. (Daza, 1994).
b) Una fracción de mayor densidad que sedimenta una forma de gránulos. Supone el
23% de la materia seca total. Contiene la totalidad de la fosfovitina asi como las
lipovitelinas de alta densidad (lipoproteínas). Estas últimas contienen un 18% de lípidos
repartidos, casi por igual, entre triglicéridos y fosfolipidos.
PRINCIPIOS DE PRESERVACION
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reacciones químicas y prolongar la vida de las células (los espermatozoos consumen
42 veces más oxígeno a 37 grados que a 5 grados).
Al mismo tiempo que la temperatura disminuye, ocurren cambios en el ambiente interno
y externo del espermatozoo. La solubilidad de los gases en el ambiente externo
aumenta: la del 02 se duplica y la del C02 se triplica. Esto permite que una mayor
proporción de la actividad metabólica total sea realizada a través de un metabolismo
oxidativo.
Los espermatozoos son eyaculados a temperatura corporal. Pueden ser mantenidos
por un corto período a esa temperatura, en un medio adecuado, pero mueren
rápidamente cuando ésta excede los 46 grados C.
Los espermatozoos pueden ser enfriados por debajo de la temperatura corporal, con la
mencionada disminución de la actividad metabólica y sin que sufran daños
detestables. Sin embargo, si son enfriados a 5 grados C sin un medio protector, sufren
un shock de frío (ver más adelante).
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5) Inhibición del Crecimiento de Microorganismos: La yema de huevo, así como otros
medios, proporcionan un buen ambiente para el desarrollo de microorganismos, los que
a su vez producen productos que pueden ser dañinos para los espermatozoos y que
pueden infectar las hembras. Algunos organismos se encuentran en el semen de toros
sanos aún en condiciones asépticas de colección y procesamiento. Es, por lo tanto, una
práctica común y adecuada, incluir antibióticos tales como penicilina y estreptomicina
en los diluyentes.
III. METODOLOGÍA
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El método de investigación es investigación
3.3. VARIABLES
VARIABLES DEPENDIENTE
VARIABLES INDEPENDIENTES
IV. RESULTADOS
Existe una amplia gama de diluyentes desarrollados a través del tiempo, los cuales
presentan diferentes composiciones y cualidades. De todos éstos, el diluyente Tris-
glucosa-yema de huevo desarrollado por Salomon y Maxwell (2000), es hasta hoy el
más recomendado para semen refrigerado y congelado de carnero. Hay diluyentes que
se utilizan para refrigerar, los cuales son soluciones acuosas tamponadas a las que se
les añade una fuente de energía (glucosa, fructosa) y un crio protector no penetrante,
que es opcional dependiendo de la temperatura y tiempo de refrigeración (leche
descremada, yema de huevo
CONCLUCION
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La adición de yema de huevo al dilutor tiene un efecto benéfico sobre el porcentaje
de motilidad, especialmente después de un rápido enfriamiento del semen a 10 y 5
ºC, ya que las lipoproteínas de baja intensidad actúan como crioprotectores,
contribuyendo a la protección contra el shock de frío (factor de resistencia) y
manteniendo la viabilidad del espermatozoide (factor de conservación) (Fiser y
Fairfull, 1986).
Bibliografía
.E, HAFEZ. (2000). PESERVACION Y CRIOPRESERVACION DE GAMETOS Y EMBRIONES.
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Aisen, E.; Álvarez, H.; Venturino, A. y Larreguy, D. (1995) Efecto comparativo
de los diluyoconservadores de diferente composición y tonicidad sobre la
criopreservación de semen ovino. Investigación Agraria: Producción y Sanidad
Animal. 10, 223-231.
• Garner, D.L. y Háfez, E.S.E (2000). Spermatozoa and Seminal Plasma. En:
Háfez, E.S.E. and Háfez. B (eds)., Reproduction in farm animals, 7 th edition.
Lippincott Williams & Wilkins Company, Philadelphia, pp 96-109.
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