CLASE 2 HISTOLOGÍA 02/10

Estábamos viendo las propiedades de los microscopios y lo que fundamentalmente vamos a

utilizar es el microscopio óptico. Hay más de 50 microscopios distintos pero estos tres son los de
mayor uso:

 Microscopio óptico: su capacidad de aumento permite 2000x. Recordar de poder de

resolución con poder de aumento, porque están relacionado
 Microscopio electrónico de barrido: 50.000x. tiene mucho más que el óptico y menos que
el de transmisión
 Microscopio electrónico de transmisión: 200.000-2.000.000x. no solo muestra organelos o
células sino también muestra moléculas

La microscopia óptica tiene una pequeña limitante y es porque vemos imágenes bidimensionales

La microscopia de transmisión también vemos imágenes bidimensionales, pero con mayor

capacidad de aumento

La microscopio de barrido permite ver imágenes tridimensionales, formas, volúmenes y

estructuras asociadas.

La microscopia nos permite ver las muestras, tejido asociados pero no es suficiente tener la
muestra en fresco y el microscopio para poder observarlo, hay que procesarlo porque la mayoría
de los tejidos no se puede observar in vivo, el microscopio aunque sea el mejor y si yo tomo una
muestra de hígado o de páncreas solo voy a ver una muestra oscurecida sin ver detalle porque la
mayoría de las muestras no se pueden observar directamente in vivo y para ello hay que
procesarlo con las TECNICAS HISTOLOGICAS

Técnicas histologías son técnicas para procesar tejidos y la técnica histología es: conjunto de
procedimientos técnicos en laboratorio el cual se someten células y tejidos para poder ser
observados al microscopio.

Si no los proceso voy a tener dificultades para ver su componente. Puedo suponer que aquí hay
organelos o células pero si yo no tengo la técnica histológica no puedo saber que son, por lo tanto
me permite reconocer nucleos, organelos, estructuras que están entre medio, etc. ME PERMITE
VISUALIZAR A LO QUE IN VIVO NO PUEDO HACER.

ETAPAS:

0-obtencion de la muestra: es etapa 0 porque si yo no tengo la muestra no lo puedo hacer.

Hay que recordar que la apoptosis es una muerte celular programada, pero la necrosis es una
muestre de tipo accidental que ocurre por un trauma, u daño a la célula. Porque si yo golpeo a la
célula se inflama, se infecta, etc. Ese tejido esta muriendo no en forma fisiológica, sino se esta
pudriendo. Si yo saco un tejido a los días se comienza a infectar porque comienza a ser degradado,
se rompe todo, etc.. Si tengo una muestra de animal de laboratorio y yo sacrifico al animal puedo
tomar la muestra fresca, por lo tanto, comienzo a fijar y a hacer todo, estoy inhibiendo la
posibilidad de la necrosis, pero una muestra de autopsia no sirve porque un cadáver no se puede
tomar para procesarlo automáticamente porque eso es en el marco legar de cada país. En chile,
por ejemplo, una muestra de cadáver humano no se puede tocar a lo menos 2 semanas cuando no
es reclamado, normalmente son 2 meses cuando no es reclamado. En histológica no sirve
mantenerlo con formalina porque se observa la necrosis, entonces las autopsias no sirven. Pero si
tenemos nuestro animalito, lo sacrificamos y lo observamos altiro, no vamos a tener problema, el
problema es el marco legal. La ley en chile no permite tocar el cadáver mínimo 2 semanas, pero en
histología no nos sirve ese tiempo porque comienza la necrosis, a los 3 días comienzan los olores,
etc. Imagínense 2 semanas, ya no sirve, entonces el marco legal no permite tener muestras de
cadáver humano de forma inmediata.

Cuando hay sospecha de que algún tejido esta dañado o normalmente asociado a tumores, se
hace por técnica histológica y se hace lo mismo. Se toma la muestra, se fija, se corta, se tiñe, etc.
Se hace el mismo proceso y el diagnostico en chile y gran parte de Latinoamérica y el mundo hay
dos profesionales que pueden hacerlo: médicos patólogos y los cirujanos dentistas.

 FIJACION: se pueden hacer por sustancias química/físicas que so fijadores. Mantienen los
tejidos lo mas cercano que cuando estaban in vivo. Fijar es una paradoja, porque mata la
muestra pero lo mantiene morfológicamente muy similar que cuando estaban en vivo. Lo
que hacen los fijadores detienen la necrosis, es decir, la pudrición de los tejidos, por lo
tanto lo mantiene lo mas cercano en vivo evitando efecto post-morter.

Los tipos de fijadores de mayor uso son

 Físico: calor, radiación, microonda, frio, etc. No son tan buenos porque si bien evitan el
efecto post-morter afectan la morfología. Ejemplo, el refrigerador (se congela y se fija
mediante la temperatura) al cocer comida l que hago es evitar la necrosis al hervirlo con
los vegetales, huevos, etc. Pero me cambian la morfología, estos fijadores actúan en casos
extremos pero afectan la morfología. Entonces lo mejor son los fijadores químicos dentro
de los cuales son:
 Químicos: formalina, formaldehido, formol. La formalina es la mas usual es bástate bueno,
fácil acceso, es barato y buena calidad. Glutaraldehido funciona muy bien, no tiene
muchos efectos nocivos. El inconveniente es que es caro y vienen en ampollas de 10 ml.
Alcohol etílico ( los alcoholes e general son bastante buenos). Los ÁCIDOS también son
buenos fijadores, los metales, etc.

por lo general para poder fomentar los beneficios de un fijadores y disminuir las desventajas
se utilizan como mezclas. Por ejemplo en microscopia electrónica se utiliza el glutaraldehido
mediante una sal de omnio que es de mejor calidad y se utilizan en conjunto.

 INCLUSION: a pesar que tengo la muestra fijada, el volumen o el tamaño no es el más

adecuado, por lo que tengo que cortar. Pero para poder cortarlo tengo que darle un
soporte estructural a la muestra biológica y eso me lo da la inclusión.
la inclusión es incluir la eterna muestra en un soporte que me da resistencia mecánica.
Existen varios métodos de inclusión, uno de ellos es la parafina solida (es lo mismo de las
velas, las vela utilizan parafina solida de mala calidad, las que son de buena calidad se van
a las técnicas histológicas, aquí la parafina solida a temperatura ambiente es solida pero si
yo le aplico calor se vuelve liquida y puedo incluir a la muestra y esta queda incluida en la
 muestra, la gelatina industrial, celoidina, resina sintética. Se pone un molde mecánico,
podemos la parafina liquida en un molde y luego se pone la muestra adentro y se deja
enfriar. Esos son los bloques, tacos, moldes.
La resina es para microscopio electrónico y el bloque es para microscopio óptico.
 CORTE: ¿por que tengo que cortar la muestra? Yo necesito que la muestra sea delgada
para que se forme la imagen mediante los rayos de luz. Tengo el lente, foco objeto, foco
imagen, si no pasan los rayos de luz yo no tengo imagen en el otro lado. Necesito que
pasen los rayos de luz para poder formar la imagen, por mas que yo corte, adelgace no
pasan los rayos de luz no se va a formar imagen. Hay que tener cortes y que tenga un
grosor adecuado.
Microscopia óptica: 5-10 micrómetros
Microscopio electrónico: 60-200 nm

Se utiliza mediante un micrótomo y que esta calibrado y permite cortar del grosor
adecuado y que son adecuados y me permite ver la muestra correctamente.

En microscopia óptica la muestra se recoge en un porta objeto y en microscopia

electrónica sobre gradillas metálicas, de cobre porque el vidrio no permite que pasen los
electrones por lo tanto tengo que utilizar un buen conductor de electrones que es el
metal.

CUCHILLAS:
Microscopia electrónica: de cristal o de diamante porque me permite un corte mucho mas
delgado de lo que me permite los cuchillos de acero o navajas.
Microscopio óptico: mediante navajas de acero

Microscopia óptica: cuchillas o navajas

PLANOS DE CORTES:
 Transversal
 Oblicuo
 Longitudinal

Si tengo un intestino o tráquea, el tubo tiene una pared y un lumen, pero si hago un corte
transversal va a parecer una rosca, pero si hago un corte longitudinal voy a tener una
pequeña porción o una porción mas gruesa según l corte. Puedo hacer un corte oblicuo,
etc. El operador me lo va a definir, el objetivo de lo que quiero, por eso se le dice corte
longitudinal, corte transversal, etc.
Si tengo una célula aquí e le hizo un corte de tipo longitudinal l que voy a ver en la célula
es un núcleo en el centro, si hago un corte transversal justo en la zona del núcleo voy a ver
a la célula mas cuadradita y un núcleo redondo en el centro pero si hago un corte
transversal en la parte apical de la célula voy a ver solamente el citoplasma. Por eso es
importante saber donde estoy cortando. Siempre hay que analizar la orientación principal
que tenga la muestra.
 TINCION: puedo ocupar colorantes o tinturas. Se puede ver detalles de la muestra. Si
quiero constatar o reconocer. Recuerden que las muestras sin incoloras naturalmente,
pero si yo quiero ver organelos, partes del tejido yo tengo que ocupar colorantes para
identificarlo y observarlo en forma distinta. Tiene que tener afinidad para algún
componente del tejido y por ello utilizamos colorantes para una mejor observación. Estos
colorantes son transparentes y estos reconocen por afinidad las partes o bien puede ser
por diferencia de cargas, por organelos, etc.
Los colorantes son elementos químicos que presentan afinidad celular por algún
componente y para finalmente se reconocido.

LOS MÁS RECONOCIDOS:

-hematoxilina & eosina: hematoxilina es un colorante tipo azul burdeo/violeta y la eosina
es de color rojo. La hematoxilina reconoce los ácidos porque es un colorante básico es
catiónico y se une por diferencias de cargas con los ácidos de las células, tejidos y lo acido
que tenemos es el ADN que esta en el núcleo, por lo tato la hematoxilina tiñe azul/violeta
al núcleo. Lo mas acido es el ADN por lo tanto directamente tiñe al núcleo, todos los
ácidos son en la célula pero lo más notorio es el núcleo que esta en el ADN. La eosina es
un colorante acido y tiene carga aniónica y se une al citoplasma porque el citoplasma tiene
leves componentes de color básico, suficiente para ser reconocido por la eosiona
mediante color rosado/rojo. Nos permite discriminar el núcleo como base de un color azul
y el citoplasma de color rojo/rosado.
Además de estos colorantes hay más.
-verde jannus.
-sales de plata.
-azul de metileno.
etc.
Muchos de ellos son por diferencias de carga. Lo ideal es que al núcleo lo tiña con un color
diferente a lo que es el citoplasma. Por mas que me guste el azul no voy a teñir azul el
núcleo y el citoplasma, no se va a ver nada.
-reacción de pass: es una mezcla e cual permite teñir carbohidratos neutros que no
expresan carga por lo tanto no lo puedo teñir con hematoxilina y eosina y tiñe con un rojo
brillante/fucsia
-colorante Arteta. Tiñe colágeno se ve en color azul/celeste
-técnica de plata: tiñe neuronas.

 MONTAJE: tengo que preservar la muestra histológica, necesito ponerlo con un

cubre objeto sobre la muestra pero no puedo poner lo directo, debo hacerlo por
medio de un pegamento, un adhesivo transparente. Entonces el montaje es para
que la muestra se mantenga mediante un cubre objeto u un adhesivo
transparente. No puedo ponerlo de colores porque si no, no voy a ver nada

 medio adhesivo: solución semilíquida que se endurece al evaporarse su solvente. Este

puede ser el xilol, toluol, etc.
  Rotular.
 OBSERVACION: puede ser de tipo docente, investigación y diagnostico. Y muchas
veces puedo mezclarlo.

CLASIFICACION DE LOS TEJIDOS: Existen tres criterios para clasificar los tejidos. Recordar que
estamos orientados con tejidos mamíferos y con especialidad humanos.

 ORIGEN EMBRIOLOGICO: fertilización, etc. Formación de órganos es importante una

etapa que se llama gastrulación y este se forma un embrión trilaminar por el endodermo,
mesodermo y ectodermo. Son importantes estas tres capas porque la mayoría de los
tejidos mamíferos se forman, epitelio, conectivo, etc
Por ejemplo, el ectodermo que es la parte más externa se forma tejido nervioso,
epidermis (parte más externa de la piel) glándulas mamarias, etc.
En el mesodermo se forma lo que es de tejido mecánico, como el conectivo, muscular y
otros más es la capa media. En el endodermo se forman epitelios. Gran parte de los tejidos
se organizan en distintas capas. Entonces en el desarrollo hay alguna alteración de estas
capas se va a ver afectado.

DIFERENCIACION CELULAR(ciclo celular):

 Células perennes o estáticas: están en diferenciación están en etapa D. Glándulas en
general.
 células estables: reposo momentáneo, es decir, g0 (riñones, cuando pierdo uno y este
crece un poco más es un crecimiento compensatorio, los riñones no crecen
permanentemente. Este esta en g0 pero debido a que no tengo uno, sale de g0 y este
entra en proliferación (mitosis) mediante un estímulo ) cartílagos, huesos.
 células renovables: hacen mitosis de forma permanente, división celular.
Permanentemente hay división.

Gran parte de la célula pasa en interfase y eso pasa en fase M, meiosis y mitosis. Hay células que
hacen permanente el ciclo, hay células que descansan momentáneamente que es el g0 y estag02 y
g02 pero tienen la capacidad de volver al ciclo, es decir, volver a dividirse, pero hay otras que se
diferencian y nunca hacen mitosis. Por lo tanto tengo tres tipos. Aquellos que hacen mitosis
permanentemente, aquellos que están en g0 y se retiran momentáneamente, pero pueden volver
a dividirse y aquellos que se retiraron permanentemente del ciclo y se diferenciaron.

MORFO-FUNCIONAL(forma y función y se utiliza en biología y ciencias histológicas): son

tejidos básicos como epiteliales, conectivo, muscular y nervioso.