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¿ Qué cultivos puedo procesar

en mi laboratorio ?

Bases para el procesamiento e


interpretación de urocultivos,
exudados faríngeos, flujos
vaginales y coprocultivos
¿Qué necesito para microbiología?
9 Mechero bunsen, o bien,
9 Campana de bioseguridad
¿Qué necesito para microbiología?
9 Ansas calibradas
9 Hilo o ansa de punta
¿Qué necesito para microbiología?
9 Estufa de cultivo con control de temperatura
9 Estufa de esterilización
¿Qué necesito para microbiología?
9 Olla a presión para esterilizar medios de cultivo, o bien,
9 Autoclave
¿Qué necesito para microbiología?
9 Placas descartables
9 Medios de cultivo en polvo, o bien,
9 Medios de cultivo preparados comerciales
¿Qué necesito para microbiología?
9 Hisopos estériles
9 Bajalenguas
9 Espéculos descartables estériles
¿Qué cultivos puedo procesar
en mi laboratorio?

Módulo I

Bases para el procesamiento e


interpretación de urocultivos
UROCULTIVO

Es uno de los métodos más empleados


como apoyo para el diagnóstico de
infección urinaria ya que permite la
identificación de número y tipo de
bacterias presentes en orina.
Toma de muestra
Tipos de muestras

Métodos invasores Métodos no invasores

Punción supra Cateterización Orina chorro Sonda


púbica vesical medio permanente

Orina por
colector externo
Toma de muestra
Punción supra púbica

9 Ventaja: sin contaminación uretral.


9 Desventaja: método invasivo.
9 No se realiza recuento de colonias.
9 Se utiliza para diagnóstico en niños pequeños.
9 Método de confirmación diagnóstica frente a
resultados contradictorios(reiterados recuentos bajos
por chorro medio)
Toma de muestra
Cateterización vesical

9 No se aconseja por el riesgo de introducir bacterias en la


vejiga ( 1%-5%).
9 El porcentaje se incrementa en diabéticos, ancianos
,inmunosuprimidos (hasta 20%).
9 Indicado en pacientes con vejiga neurogénica.
Toma de muestra
Orina de chorro medio

9 Se recomienda retención mínima de 3 horas o primera


orina de la mañana.
9 Limitar la ingesta excesiva de líquido y suprimir la
medicación diurética.
9 Suprimir los antibióticos 72 hs. antes salvo que sea
control de tratamiento.
9 No ingesta de aspirina ni ácido ascórbico.
9 Se debe eliminar el chorro inicial y recolectar en frasco
estéril el chorro medio .
9 Técnica recomendada. Instrucción del paciente.
Toma de muestra
Orina por colector externo

9 Se usan en neonatos y personas con


incontinencia urinaria.
9 Desventaja: no se mantienen estériles
por contacto con piel y uretra.
9 Falsos positivos.

NO UTILIZAR COLECTORES EXTERNOS


PARA UROCULTIVOS
Toma de muestra
Sonda vesical permanente

9 No tomar muestra de extremo distal de la sonda ni de la


bolsa de recolección.
9 Debe tomarse por punción con jeringa y aguja de sonda
recién colocada.
9 A las 48hs las sondas tienen colonización bacteriana

9 Falsos positivos.
Toma de muestra
9 Evitar contaminación con flora habitual de:

• uretra anterior.
• prepucio.
• zona vulvo vaginal.
• fecal (en lactantes).

9 Evitar contaminación de origen infeccioso:

• vulvovaginitis.
• uretritis.
Toma de muestra
Orina de chorro medio

Indicaciones al paciente

Adultos o niños varones que controlan esfínteres:


9Limpiar la zona prepucial y del glande con un jabón
nuevo.
9Enjuagar con abundante agua para eliminar restos de
jabón.
9Emitir un chorro prolongado de orina inicial que se
deshecha y recolectar en frasco estéril la segunda parte de
la micción sin interrumpirla.
Toma de muestra
Orina de chorro medio

Indicaciones al paciente

Adultas o niñas que controlan esfínteres:


9Limpiar de adelante hacia atrás la zona vulvo-vaginal y del
introito uretral con jabón nuevo. Enjuagar.
9En los casos que sea posible colocar tapón vaginal.

9Emitir un chorro prolongado de orina inicial que se deshecha


y recolectar en frasco estéril la segunda parte de la micción sin
interrumpirla.
Toma de muestra
Orina de chorro medio
Indicaciones al paciente

Lactantes y niños que no controlan esfínteres:


9Lavar la zona anal y perineal con jabón nuevo.
9Enjuagar con abundante agua.
9Disponer de un frasco estéril de boca ancha y quedar al
acecho esperando que el niño orine tratando de recolectar la
parte media de la micción.
9Guardar en la heladera hasta su procesamiento.
Toma de muestra
No se aceptan muestras:

9Obtenidas en orinales.
9Puntas de catéteres urinarios.
9Orinas transportadas en caldos de cultivo.
9Orinas muy diluidas o muy hemorrágicas.
9Sedimentos urinarios
9Congeladas.
9Sin rotular.
Transporte y conservación
9 La orina debe conservarse refrigerada hasta su
procesamiento.

9 A la temperatura de 4°C a 8°C se mantiene estable la


población de patógenos urinarios hasta 24 hs.

9 Excepción los Enterococcus spp. crecen a 4°C-8°C.

9 Luego de 24 hs los recuentos bacterianos son menos


estables y la refrigeración altera los leucocitos.

9 Si el traslado al laboratorio demora más de 15 minutos


debe transportarse en un recipiente con hielo.
Procesamiento
Primer día:
•Directo.
•Coloración de Gram.
•Siembra.
Segundo día:
•Recuento de colonias
•Largar Pruebas Bioquímicas
•Largar Antibiograma
Tercer día:
•Lectura de Pruebas Bioquímicas
•Lectura de Antibiograma.
•Informe de Resultados
Procesamiento : Primer día
Examen directo
1) Características físico químicas:

aspecto
color
ph
densidad
proteínas
Procesamiento : Primer día
Examen directo
Ph:
9Si es bajo limita la reproducción bacteriana.
9Si es alto da indicio de infección por bacterias ureasa
positivas (Proteus spp.,Klebsiella spp.,Ureaplasma spp.).

Densidad:
9Si es baja, menor de 1010, puede no tener suficientes
nutrientes para la multiplicación vesical. Da falsos negativos.
9Si es muy alta ( no por glucosuria) es bactericida.
Procesamiento : Primer día
Examen directo
2) Sedimento:

9Falsos positivos por contaminación con flujo vaginal.


9Falsos negativos en pacientes inmunosuprimidos o bacteriuria
asintomática.
9Cilindros indican infección urinaria alta.
9En prostatitis aparecen cuerpos ovales prostáticos.
9Siempre debemos realizarlo aunque no se lo solicite
expresamente.
Procesamiento : Primer día.
Coloración de Gram
9 Es un método rápido, económico ,sensible y específico para
detectar bacteriuria.

9 Sensibilidad 80%-100% y especificidad 70%-97%.

9 La presencia de una bacteria por campo de inmersión se


correlaciona con cultivos mayores a 100.000 UFcol/ml en el
85% de los casos.

9 Permite detectar probables contaminantes (vaginales o


fecales).
Procesamiento : Primer día.
Coloración de Gram
Es útil en:

9pacientes de alto riesgo para instaurar terapia


antimicrobiana empírica.
9pacientes en tratamiento antibiótico.
9pacientes con sedimento patológico y cultivo negativo
sin tratamiento antibiótico.
9pacientes con sepsis a punto de partida urinario.
Procesamiento : Primer día.
Coloración de Gram
Procesamiento : Primer día.
Coloración de Gram
Procesamiento : Primer día.
Siembra

9 Debe realizarse de la orina bien homogeneizada sin


centrifugar.

9 Se usa ansa calibrada de platino de 0,005 ml esterilizada a la


llama y enfriada, o bien, ansas estériles descartables.

9 La elección del medio de cultivo debe permitir la


recuperación de la mayoría de los patógenos.
Procesamiento : Primer día.
Siembra
Para la elección del medio de cultivo debemos tener en cuenta
que:

•70% - 80% de muestras derivadas para urocultivo son negativas.


•85% - 90% de las Infecciones Urinarias (IU) son producidas
por enterobacterias.
•De los gérmenes gram positivos los más frecuentes son
Staphylococcus spp. y Enterococcus spp.
Procesamiento : Primer día.
Siembra

9 El medio CLDE permite el crecimiento de la casi totalidad de


especies comprometidas en IU e inhibe el desarrollo invasivo
de Proteus spp.

9 Si en la coloración de Gram se vieron cocos gram positivos


sembrar además una placa de agar sangre.
Procesamiento : Primer día.
Siembra
9 Se siembra haciendo tres descargas consecutivas sin volver a
cargar el ansa.
1

2 3
Procesamiento : Primer día.
Incubación

9Atmósfera: se incuban a atmósfera ambiental. No se necesita


atmósfera enriquecida con CO2.

9Temperatura: la incubación debe realizarse a 37°C. Puede


oscilar entre 35°C y 37°C.

9Tiempo: se deben incubar por 48 hs.


Procesamiento : Segundo día.
Recuento de colonias

9Si a las 24 hs. no hay crecimiento se incuba un día más.

9Si a las 48 hs. no hay crecimiento se informa negativo.

9Contar las colonias desarrolladas.

9Estimar el recuento total de Unidades Formadoras de Colonias


(UFC) teniendo en cuenta el volumen sembrado.

9Para ansa calibrada de 0,005 ml se multiplica por 200 el


recuento para llevar a UFC/ml.
Procesamiento : Segundo día.
Recuento de colonias
El punto de corte admitido en el recuento de colonias es el
siguiente:

•Punción supra púbica: cualquier recuento es significativo.

•Punción de sonda vesical: 103 UFC/ml.

•Chorro medio: 104 UFC/ml.


Procesamiento : Segundo día.
Recuento de colonias

9 En caso de infecciones mixtas debe indicarse el recuento de


colonias de cada especie (no más de dos) luego de confirmar
infección polimicrobiana.

9 El hallazgo de cultivos polimicrobianos en recuentos


menores a 104 UFC/ml de cada germen indicaría una
probable contaminación.
Procesamiento : Segundo día.
Recuento de colonias
9Si una orina correctamente refrigerada presenta más de
100.000 UFC/ml conjuntamente con leucocituria la posibilidad
que se trate de una IU es mayor a 98%.Si no tiene leucocituria
es probable que sea una bacteriuria asintomática.

9Si una orina correctamente recogida y refrigerada,


monomicrobiana presenta 10.000 UFC/ml y además
leucocituria significativa la posibilidad que sea una IU es mayor
a 98%.
> a 100.000 UFC/ml
100.000 UFC/ml

10.000 UFC/ml
Procesamiento : Segundo día.
9 De las colonias desarrolladas en el tercio de la última
descarga tomar colonias aisladas para coloración de Gram e
identificación del germen.

9 La identificación del germen puede realizarse por:


• pruebas bioquímicas convencionales.
• equipos comerciales de identificación.
• equipos automatizados de identificación.

9 De las colonias desarrolladas en el tercio de la última


descarga tomar una colonia aislada para antibiograma
Procesamiento : Antibiograma
¿Qué discos probar ?
BGN en IU no complicadas:

1)AMN: ampicilina
2)CEF: cefalotina
3)AMS: ampicilina + sulbactama
4)TMS: trimetoprima + sulfametoxazol
5)CIP: ciprofloxacina
6)NIT: nitrofurantoína

En pediatría y en embarazadas en lugar de ciprofloxacina probar


cefixima (CFM)
Procesamiento : Antibiograma
¿Qué discos probar ?

Si todos los antibióticos probados en la placa anterior son


resistentes probar una segunda placa con los siguientes:

1)GEN: gentamicina
2)PTZ: piperacilina + tazobactam
3)ERT: ertapenem
4)CAZ: ceftazidima
5)CTX: cefotaxima
6)AMC: amoxicilina + ácido clavulánico
Procesamiento : Antibiograma
¿Qué discos probar ?
CGP catalasa positiva en IU no complicadas:

1)OXA: oxacilina
2)FOX: cefoxitina
3)NIT: nitrofurantoína
4)TMS: trimetoprima + sulfametoxazol
5)CIP: ciprofloxacina
6)GEN: gentamicina

Los resultados de oxacilina se extrapolan a ampicilina +


sulbactama y cefalotina.
Procesamiento : Antibiograma
¿Qué discos probar ?
CGP catalasa negativa,Enterococos,en IU no
complicadas:

1)AMN: ampicilina
2)CIP: ciprofloxacina
3)NIT: nitrofurantoína

CGP catalasa negativa,Streptococcus agalactiae,en IU no


complicadas:

No se conoce hasta el momento resistencia a penicilina


Procesamiento : Tercer día.

9 Lectura de Pruebas Bioquímicas.

9 Lectura de Antibiograma.

9 Informe de Resultados.
Procesamiento :
Medios cromogénicos

Permiten realizar simultáneamente el recuento, aislamiento e


identificación de las principales bacterias productoras de
Infecciones del Tracto Urinario ya que están compuestos por
una mezcla de sustratos cromogénicos de modo que tras un
período de incubación y según el sustrato que sea metabolizado
las colonias adquieren un color característico.
Procesamiento :
Medios cromogénicos

El uso de la identificación presuntiva de los principales


uropatógenos de interés clínico en estos medios proporciona una
respuesta diagnóstica rápida, reduce los costos al evitar pruebas
adicionales en la mayoría de los aislamientos y puede ser
considerada una técnica fiable en laboratorios asistenciales con
un pequeño número de urocultivos diarios.
Ph orina Sedimento
Aspecto centrifugar Gram
Color
Densidad
Proteínas

Cultivo en agar
CLDE
Sangre ( si son CGP)

colonias

Gram Recuento de colonias identificación antibiograma

Informe de resultado
Ver videos adjuntos
Gérmenes prevalentes
Gérmen Escherichia coli Proteus  Klebsiella Enterobacte Pseudomonas S. grupo  Enterococcus
mirabilis pneumoniae r.  cloacae aeruginosa saprophyticus faecalis

Morfologia BGN BGN BGN BGN BGN CGP CGP

Aislado en Cualquier grupo  Niños (tan  Diabéticos Sondados Sondados Mujeres  Varones >60


etareo  frecuente  Ancianos con  Inmunodep. Inmunodep. jóvenes  Internados
(principal‐ como E.coli) IU recurrentes Transplantes Transplantes sexual‐mente  Con patologías 
mente mujeres) Varón adulto Insuf.  Renal Catéteres activas de base

propiedades Predomina en  Formar  Adherencia al  Bacteria 


cualquier  cálculos. uroepitelio. asociada a 
circunstancia Swarming   Causa IU por vía  material 
(coloniza  hematógena o  contaminado 
catéteres) ascendente con MF

% 80 % 6% ‐ 11% 3% ‐ 20% 4% ‐ 25% 4% ‐ 25% 7% ‐ 16% 3% ‐ 16%
Interpretación de resultados.
Datos necesarios
Del paciente:

•Edad
•Sexo
•Síntomas
•Factores predisponentes
•Antecedentes de IU
•Medicación actual o previa
Interpretación de resultados.
Datos necesarios

De la muestra:

1) Tipo

•Chorro medio
•Punción suprapúbica
•Sonda

2) Conservación
Interpretación de resultados.
Datos necesarios
1) Del sedimento:

• Reacción inflamatoria
• Hematuria
• Cilindros

2) De la coloración de Gram:

• Presencia de gérmenes
• Tipo de gérmenes
Interpretación de resultados.
Datos necesarios
Del cultivo:

1) Monomicrobiano:
• Recuento de colonias.
• Relación con leucocituria y síntomas.

2) Polimicrobiano:
• Mezcla de 2 o más gérmenes en recuento mayor a
105 UFC/ml.
• Confirmar con segunda muestra.
Interpretación de resultados
Causas de falsos positivos:

9Mala higiene, jabón o desinfectantes contaminados.

9Falta de tampón vaginal.

9Recolección con urobebé (colector externo).

9Mala conservación de la muestra ( temperatura).

9Errores técnicos.
Interpretación de resultados
Causas de falsos negativos:

9Uso de sustancias bactericidas (vitamina C, aspirina,


desinfectantes, digitálicos).

9Densidad alta o baja, ph bajo.

9Escaso tiempo de retención.

9Obstrucción total debajo del sitio de infección.

9Infección por gérmenes anaerobios, Clamidias o


Micoplasma.
Interpretación de resultados
Gram Sedimento Cultivo Qué hacer?
- - - Negativo

+ + > 105 Pruebas y ATB

- + > 105 Pruebas y ATB

+ - > 105 Pruebas y ATB

- - 103 - 104 Pruebas y ATB

- - > 105 Resembrar

+ + - Sembrar AS

+ - - Sembrar AS

- + - Negativo

+ + Múltiples colonias Nueva muestra

+ + Múltiples colonias En PSP procesar


Interpretación de resultados

Positivos
Interpretación de resultados
Contaminados
Interpretación de resultados
Negativo
Informe de urocultivo
Debe incluir:

9Ph
9Densidad
9Sedimento
9Gram del sedimento
9Recuento de colonias
9Género y especie microbiana
9Prueba de sensibilidad antimicrobiana
Muchas Gracias 

Los espero en el módulo 2.

No olviden completar la autoevaluación.