UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZAN

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL Código : L-AI

ANÁLISIS POR INSTRUMENTACIÓN Pág. : 02
Atachagua Huerto, Ángela; Falcón Sobrado, Dina; García Lastra,
Fecha : 07/06/17 (G2)
Jhonatan; Rojas Ambrosio, Liz; Vilca Aguirre; Rosemary.
PRACTICA N° 06
CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ASCÓRBICO POR
ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR

I. Introducción

El ácido ascórbico (AA) es un nutrimento esencial para los humanos. Una baja ingesta causa una
enfermedad, por deficiencia, conocida como escorbuto. Este ácido está presente en forma natural en
muchas frutas y verduras, además, estos alimentos son ricos en vitaminas antioxidantes, compuestos
fenólicos y carotenos [1, 2].

La Food and Drug Administration (FDA, Dirección de Alimentos y Medicamentos), clasifica el ácido
ascórbico sintético como un aditivo alimenticio "generalmente reconocido como seguro". Se adiciona
a una amplia variedad de alimentos, tanto por razones nutricionales como técnicas.

Estudios realizados en U.S.A. por el científico americano Linnus Pauling en 1989 recomiendan el
consumo de altas cantidades de vitamina C diariamente para evitar el 80% de las enfermedades,
incluyendo el cáncer.

Vitamina C: contiene niveles altos de ácido ascórbico, es muy estable como productos como jugos y
se degrada con el almacenamiento. Los grandes cambios, especialmente en color y sabor, que tiene
lugar durante el almacenamiento de las frutas y hortalizas corren paralelos con la disminución
progresiva del ácido ascórbico que posee (Braverman, 1967).

La vitamina C o ácido ascórbico se encuentra en las frutas cítricas en mayor porcentaje y vegetales
como las hortalizas y legumbres (Duran, M.H. 2000).

Para la determinación del ácido ascórbico se utiliza método conocida como el método de Mohr, el
cual consiste en un proceso de las precipitaciones donde se presenta la formación de un primer
sólido, que es la especie a cuantificar y alcanzado el punto estequiometrico se forma otro
precipitado que corresponde a la especie que señala el punto final de la valoración, este es un
método espectrofotómetro, es decir que se basa en la absorción de radiación ultravioleta y visible
por el analito, como consecuencia de lo cual se origina un estado activo que posteriormente elimina
su exceso de energía en forma de calor.

Objetivo:
Determinación cuantitativa del ácido ascórbico, por el método de espectrofotometría.
Aprender a manejar el espectrofotómetro.
.  Balanza analítica.
 Agitador magnético
 Vasos de precipitación.
II. MATERIALES Y MÉTODOS  Fiolas, micropipetas
 Tips (1000 y 200 µL).
2.1. Equipos e instrumentos:  Tubos de ensayo.
 Gradilla.
 Cubetas para espectrofotómetro.
 Curva patrón para la cuantificación de ácido
2.2. Reactivos: ascórbico.
Ac. Replica: Replica: Replica:
 Acido oxálico al 0,4%. Absorbancia
Ascórbico 1 2 3
 Solución madre de ácido ascórbico 0.1% 50 2.248 2.221 2.231 2.233
en solución ácido oxálico:
75 2.173 2.190 2.203 2.189
 Solución de 2,6 Dicloroindofenol:
(solución coloreada). 100 2.125 2.125 2.110 2.120
125 2.117 2.113 2.073 2.101
2.3. Equipos: 150 2.074 2.073 2.073 2.073
175 2.055 2.056 2.029 2.047
 Espectrofotómetro Uv – Visible.
 Centrifuga. 200 1.753 1.749 1.779 1.760
Preparación de muestras
2.4. MÉTODOS
Extraer 200 ml de jugo de la muestra
Curva de calibración problema por el método de estrujado y
Se realizó por el método reportado por Hung y clarificar con la centrifuga a 4000 rpm por
Yen (2002). Empleando el método modificado 15 minutos, luego someter a un filtrado al
por Villanueva et al. vacío con papel de filtro.
(2010), se hará reaccionar 100 μL de solución
de trabajo (25 hasta 200µg/mL), con 900 μL Proceder como se señaló en el ítem anterior,
de 2,6 diclorofenolindofenol, registrándose la pero en lugar de estándar de trabajo se usa
absorbancia a 515 nm, obteniéndose las la muestra problema (si fuera necesario
cantidades de ácido ascórbico con la siguiente hacer una dilución que permita tener
ecuación: medidas dentro del rango de medida de la
curva estándar).

Donde la Absorbancia control fue obtenida por

la reacción de 100 μL de ácido oxálico al 0,4%, III. RESULTADOS Y DISCUSIONES
con 900 μL de 2,6 diclorofenolindofenol.

3.1. RESULTADOS:
Figura 1.
Curva patrón para la cuantificación de ácido a. Realización de la curva estándar:
ascórbico.
Definir los puntos de la curva
(concentraciones a leer)
3.000 y = 0.014x
2.500 R² = -38.38
Abs.(515)

2.000
1.500
1.000
0.500
Medir las alícuotas.
0.000
0 50 100 150 200 250

Ac. Ascorbico µg/mL)

Añadir los reactivos
 0.050 y = 3E-05x
Realizar las lecturas 0.040
0.030 R² = -0.013
0.020 L1-L2

L1-L2
0.010
0.000
-0.010 0 100 200 300 Linear
-0.020
-0.030 (L1-L2)
Efectuar el análisis estadístico -0.040
CONCENTRACIONES

3.2. Discusiones
Aceptar o rechazar la curva
Se utilizó la espectrofotometría de UV-VIS
ya que esta es una técnica que nos
permite realizar el análisis de un solo
componente, por lo que nos es útil para
Aceptar o rechazar la curva
poder analizar las bebidas de cola y así
poder determinar la concentración de
fósforo en ellas
La vitamina C se encuentra en dos formas,
b. Preparación de la curva estándar. como ácido ascórbico y ácido
deshidroascorbico, se utiliza el método de la
Estánda concent L1 L2 L1-L2 transformación del ácido ascórbico, este
r Trab. ración método se utiliza colorante 2,6
75 50 2.215 2.219 -0.004 dicloroindofenol, y es este la que muestra un
100 75 2.190 2.203 -0.013 máximo de absorción a 540nm. La técnica de
125 100 2.125 2.110 0.015 análisis, espectrofotometría es aceptable., nos
150 125 2.113 2.073 0.040 permite determinar un grado de exactitud de
175 150 2.073 2.073 0.000 las absorbancias en las muestras, trabajar con
200 175 2.056 2.029 0.027 curvas de calibración para calcular
concentraciones de la naranja y otros.
Cuadro 1: lecturas de absorbancia a
La curva obtenida por el grupo, se debió a
un 520nm
distintas factores: una mala manipulación al
c. Determinación de la curva estándar de la
monto de realizar las diluciones ya que no se
vitamina C por el método colorimétrico.
tubo cuidado al momento de las
Para determinar la curva estándar del ácido
concentraciones.
ascórbico, se llevó a cabo el método de
espectrofotómetro (UV-Visible
En el grafico podemos observar que sigue un
spectropho)
comportamiento poco lineal, 𝑟 2 se encuentra
por debajo del rango, no es un valor cercano a
uno, no es tan confiable el ácido ascórbico.

Es importante que al momento de preparar las

disoluciones, se revise que el material con el
que estamos trabajando se encuentre
perfectamente limpio, para evitar datos
erróneos, en caso de nuestro grupo fue uno de
los errores que cometimos.
 [2] JHON, Z. y YUDKIN, R. En: The
IV. CONCLUSIONES Lancet, 359; (2002) 1969-1974.

Para la Control de la Linealidad fotométrica. http//física:UDA.edu.com_labgicm/Lab

El estudio de la linealidad fotométrica permite
establecer el rango de absorbancia en el que el
instrumento tiene respuestas proporcionales a
los cambios de concentración. Para ello se
determina la respuesta de espectrofotómetro a
diferentes concentraciones de una sustancia
que cumpla con la ley de Lambert-Beer.
oratorio%202_2011/2011.
http//inta.gob.ar/documentos/guía-para-
la-verificacion-de-espectofotros-Uv-
visible- utilizados-en-elanalisi.
Skoog D.A.,Holler F.J.,Crouch S. R.,

Por comparación de una solución conocida: si principios de análisis instrumental, sexta

tenemos dos soluciones, un problema P y una edición, editorial cengage Learning,
estándar S, podemos establecer la siguiente
relación matemática entre ellas. A través de México, D.F. 2008, pp. 158,159
una curva de calibración: la curva de
calibración es la representación gráfica en eje [3] Villanueva T. J., Condezo-Hoyos L.,
de coordenadas de la absorbancia (eje de las Eduardo Ramirez Asquieri E. (2010).
ordenadas) frente a la concentración (eje de las 5Antocianinas, ácido ascórbico,
abscisas). Se ensayan varias soluciones de polifenoles totales y actividad antioxidante,
concentración conocida y se determinar sus A, en la cáscara de camu-camu (Myrciaria
construyéndose la curva de calibrado, que es dubia (H.B.K) McVaugh). Ciênc. Tecnol.
un recta. Una vez ensayada las soluciones Aliment., Campinas,
problema, su concentración se averigua por 30(Supl.1): 151-160. doi:
interpolación de la A de las soluciones 10.1590/S010120612010000500023
problemas en la curva de calibración.

De la gráfica obtenida en el laboratorio su

linealidad no es lo apropiado. Esto se dio por
la mala manipulación del grupo.

Según los resultados obtenidos, las muestras

de naranja, no llegan a ser semejantes a la
bibliografía encontrada, la razón es que la
muestra tomada no fue trascendente y se
extrajeron de frutos verdes, es decir no
maduros.

Como futuros agroindustriales para obtener

una buena calidad nutritiva de un producto
debemos evitar la degradación de la vitamina
C; es muy importante para nuestro organismo.

V. REFERENCIA

[1] BLOCK, N. y HUDES, M. En:

American Journal of Epidemiology, 154
(2001) 1113-1118.