POTENSI SENYAWA GOLONGAN FLAVONOID EKSTRAK TANAMAN BAWANG

PUTIH (Allium sativum) SEBAGAI PENANGKAL RADIKAL BEBAS

PROPOSAL SKRIPSI

DISUSUN OLEH :
UMI ZAHROTUN NI’MAH
162210101086

BAGIAN LABORATORIUM BIOLOGI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS JEMBER
2018

1
 PENDAHULUAN
Radikal bebas merupakan suatu
molekul yang memiliki muatan elektron
bebas (tidak berpasangan) pada orbital
kulit terluar sehingga menyebabkan
molekul tersebut bersifat reaktif dan tidak
stabil. Dalam kehidupan sehari-hari
oksigen yang masuk ke tubuh manusia
95%-98% yang termetabolisme secara
aerobik, 2%-5% sisanya akan berubah
menjadi senyawa radikal bebas endogen.
[ CITATION Sim12 \l 1057 ] Antioksidan
merupakan senyawa yang dapat berfungsi
sebagai proteksi tubuh terhadap kerusakan
sel oksidatif. Antioksidan dapat mencegah,
mengurangi, dan memperlambat proses
oksidasi sel.
Flavonoid merupakan golongan
senyawa metabolit sekunder yang dapat
berfungsi sebagai antioksidan dalam tubuh.
Flavonoid merupakan golongan senyawa
besar yang terdiri dari antosianidin,
biflavon, flavon, flavanon, katekenin, dan
flavonolol. Salah satu senyawa golongan
flavonolol yaitu kuersetin. Kuersetin
merupakan senyawa yang dipercayai
Digunakan bahan sampel 500 gram
bawang putih yang sudah dihaluskan,
Pelarut metanol, Serbuk magnesium,
PROSEDUR KERJA
Preparasi Sampel
Sampel diperoleh dari pembelian
dan pemilihan yang ketat. Bawang putih
sejumlah 500 gram dikupas dan dipilih
2
memiliki aktivitas antioksidan tinggi
dengan perbandingan apabila vitamin C
memiliki kandungan antioksidan 1 maka
kuersetin memiliki aktivitas atioksidan
4,7Sejauh ini banyak peneliti meneliti
kandungan kuersetin pada bawang merah
(Allium sativum), bisa dikatakan belum ada
peneliti yang meneliti kandungan kuersetin
pada bawang putih. Hal ini melandasi
peneliti untuk meneliti kandungan senyawa
golongan flavonoid khususnya flavonolol
(kuersetin) pada bawang putih (Allium
sativum) sebagai antioksidan yang lebih
poten daripada vitamin C dan vitamin E.
Maka dari itu penelitian ini harus
dilakukan untuk mencapai inovasi dari
antioksidan yang lebih poten daripada
vitamin C da vitamin E.
METODOLOGI PENELITIAN
Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di
laboratorium biologi fakultas
farmasi Universitas Negri Jember
pada bulan november 2018 hingga
Desember 2019
Alat dan Bahan Penelitian
Digunakan alat Blender, Rotatory
evaporator, Kertas saring, Corong
buchner, Tabung reaksi, Seperangkat
alat KLT, Spektrofotometer UV-Vis,
penampak noda UV-Vis.
HCl pekat, n-heksana, Etil asetat,
Vitamin C, Serium (IV) Sulfat, H2SO4
pekat,dan Aquade
yang bagus (tidak ada bopeng) kemudian
dicuci dengan air yang mengalir hingga
bersih. Kemudian bawang putih tersebut
dihaluskan dengan mesin penghancur
(blender).
ektraksi sampel
Metode yang digunakan dalam
proses ekstraksi ini adalah metode
maserasi. 500 gram bawang putih yang
telah dihaluskan direndam dengan 4L
pelarut metanol di wadah yang cukup
selama 24 jam kemudian hasil rendaman
disaring menggunakan kertas saring.
Residu dari penyaringan di remaserasi,
ditambahkan 2L pelarut metanol setiap
harinya selama 7 hari kemudian setiap
filtrat disaring menggunakan kertas saring.
Filtrat pada hari ke-7 dipekatkan
menggunakan vacum rotatory evaporator
pada suhu 700 C dengan kecepatan 40 rpm
selama uap dari pelarut sudah tidak
menetes lagi dan diperoleh sampel yang
pekat.
partisis dengan n-heksana
Ekstrak pekat kulit bawang putih
ditambahkan dengan aquades sebanyak
100 mL, kemudian dipartisi dengan n-
heksana dan etil asetat secara berturut-turut
sebanyak 100 mL dan dipisahkan dengan
menggunakan corong buchner.
Uji Wilstatter
Sebanyak 1 mL ekstrak dimasukkan ke
dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan
serbuk magnesium dan 2-4 tetes HCl pekat.
Kemudian campuran dikocok. Terbentuknya
warna jingga menunjukkan adanya flavonoid
golongan flavonol dan flavanon.
Uji Bate-Smith dan Metcalf
Sebanyak 1 mL ekstrak dimasukkan ke
dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan
dengan HCl pekat beberapa tetes. Kemudian
campuran dipanaskan selama 15 menit di
atas penangas. Terbentuknya warna merah
menunjukkan adanya flavonoid golongan
antosianidin.
3
Identifikasi Flavonoid
Pemisahan senyawa flavonoid bawang putih
dilakukan dengan metode kromatografi lapis
tipis (KLT). KLT yang digunakan terbuat
dari silika gel dengan ukuran 10 cm x 10 cm
F254, sedangkan eluen yang digunakan adalah
campuran n-heksana : etil asetat dengan
perbandingan 6 : 4. Plat KLT yang akan
digunakan diaktifasi terlebih dahulu dengan
cara dioven pada suhu 100°C selama 1 jam
untuk menghilangkan kandungan air yang
terdapat pada plat KLT. Ekstrak yang
menunjukkan positif flavonoid kemudian
ditotolkan sepanjang plat pada jarak 1 cm
dari garis bawah dan 1 cm dari garis atas.
Selanjutnya dielusi dengan menggunakan
eluen.
Pengujian Aktivitas Antioksidan
Larutan ekstrak kulit bawang putih dibuat
berbagai konsentrasi yaitu 0,25, 0,5 dan 1
ppm. Antioksidan alami Vitamin C
digunakan sebagai pembanding dan kontrol
positif, dibuat dengan cara dilarutkan dalam
pelarut metanol dengan konsentrasi sama
dengan konsentrasi larutan sampel. Larutan
Serium (IV) Sulfat 0,002 M dibuat dengan
melarutkan serbuk Serium(IV) Sulfat
sebanyak 0,0809 gram dan dilarutkan dengan
25 mL aquades. Setelah itu, larutan
ditambahkan dengan 17 mL H2SO4 98% dan
kemudian larutan tersebut ditetapkan
volumenya dengan aquades sampai 100 mL.
Larutan ekstrak dan larutan Vitamin C
masing-masing diambil sebanyak 2 mL
kemudian dimasukkan ke dalam tabung
reaksi dan ditambahkan 2 mL larutan
Serium(IV) Sulfat dan ditetapkan volumenya
sampai 10 mL dengan aquades. Masing-
masing campuran diinkubasi pada suhu 37°C
selama 30 menit, lalu diukur serapannya
dengan menggunakan spektrofotometer UV-
Vis dengan aquades sebagai blanko.
Kemudian diukur absorbansinya untuk
melakukan perhitungan Kapasitas Reduksi.
Dengan perhitungan inilah aktivitas
antioksidan dapat dihitung, formulasinya
adalah sebagai berikut,
|.|kontrol−|.|sampel
Kapasitas reduksi =
|.|kontrol
x 100%

Nilai konsentrasi dan persen kapasitas
reduksi ekstrak ataupun antioksidan Vitamin
C diplot masing-masing pada sumbu x dan y
pada persamaan regresi linear.
PREDIKSI HASIL
Hipotesis Ekstraksi Sampel
Pada preparasi sampel diharapkan
hasil dari penghalusan sampel 500 gram
umbi bawang putih. Kemudian sampel
diekstraksi dengan metode maserasi
diharapkan hasil dari maserasi ini tidak
kurang dari 10 L. Kemudian ekstrak dari
maserasi dipekatkan dengan cara
menguapkan pelarut sampel dengan alat
vacum rotatory evaporator diharapkan
sampel pekat yang didapatkan tidak kurang
dari 40 gram.
Hipotesis partisi dengan n-heksana
Pada prosedur partisi n-heksana
diharapkan 3 fraksi kental yang terbentuk
tidak kurang 5 ml.
Hipotesis pengujian fitokimia
Pada prosedur pengujian fitokimia
flavonoid akan terkandung di dalam fraksi
kental dari air dan etil asetat.
Hipotesis KLT ekstrak
Pada prosedur KLT akan terbentuk
noda berwarna pada masing-masing
sampel fraksi (Air dan etil asetat).
Hipotesis Spektrofotometer UV-Vis
Hasil dari absorbansi
spektrofotometer terdapat pita yang
terbentuk dari fraksi air dan etil asetat pada
panjang gelombang 250—280 nm dan
panjang gelombang 350-385 nm.