PRACTICA N° 5

TÉCNICAS DE CULTIVO DE MICROORGANISMOS

I. Objetivo

- Identificar las diferentes formas de medios de cultivos de uso general, diferenciales

y selectivos para los cultivos de diferentes especies bacterianas.
- Conocer las diferentes técnicas de aislamiento en medios de cultivos sólidos para
la obtención de cultivos puros de bacterias.

II. Fundamento

Para iniciar un cultivo de microorganismos es necesario que un número de células (inóculo) sea
transferido (inoculado) a un medio fresco estéril. Si se quiere cultivar una especie en particular
a partir de una mezcla de microorganismos, deben emplearse técnicas de aislamiento que
permitan obtenerla en forma pura. Esto involucra un proceso seriado de varias transferencias y
la utilización de medios tanto comunes como especiales, mayormente sólidos, seleccionados
de acuerdo a la naturaleza del microorganismo. Las técnicas de cultivo por aislamiento pueden
ser realizadas por:

a) Por estrías, que consiste en diseminar los microorganismos en la superficie de un medio

sólido dispuesto en placa Petri; si el inóculo inicial se encuentra sólido o en polvo, es
recomendable llevarlo a suspensión.

b) Por diluciones sucesivas, que consiste en hacer diluciones seriada de la muestra o del
inóculo inicial y disponer alícuotas de ellas en placas Petri con medio.

Las colonias de varios microorganismos difieren en forma, tamaño, color, consistencia, por lo
tanto, su apariencia en cultivo es importante para propósitos de identificación. Por otro lado, si
se tiene ya aislado un microorganismo, que se asume puro, desde un medio agotado en
nutrientes hacia un medio fresco. Las técnicas de trasplante se realizan por lo general en tubos
de ensayo con medios líquidos o sólidos, siendo la práctica más común de conservación de
cepas (de forma aeróbicas y anaeróbicas facultativas), el realizar estrías en tubos de agar
inclinado.

En todo procedimiento de inoculación la aguja o asa de Kölle debe ser calentada “al rojo vivo”
por flameo antes y después de la transferencia. El flameo destruye las formas vivas en la
superficie del filamento previniendo la contaminación.

Durante la transferencia se debe sostener el tubo de trabajo en la mano izquierda en posición

casi horizontal y retirar el tapón sosteniéndolo con los dedos anular y meñique de la mano
derecha (asumir la posición inversa en individuos no diestros). La boca del tubo de trabajo
(tanto del que se va tomar el microorganismo como del que se va a recibirlo) debe ser
flameada antes y después de la transferencia. Aparte de destruir los microorganismos en los
bordes del tubo, el flameo crea corrientes convectivas que disminuyen las probabilidades de
contaminación.

Las técnicas de cultivo de aislamiento y trasplante nos permitirán obtener los microorganismos
en forma pura y en estado activo, así como el estudio de sus características de crecimiento, el
primer registro de datos en la identificación de todo microorganismo.
III. Materiales y Métodos

Materiales

- Asa de kolle.

- Mechero.

- Tubos con agar nutritivo

inclinado.

- Tubos con agar nutritivo vertical.

- Tubos con caldo nutritivo.

- Placas Petri con medios de cultivo sólidos.

- Muestras

Procedimiento

1. Esterilice el asa de kolle por flameo a la llama.

2. Tome el tubo con la muestra, retire el tapón, flamee la boca del tubo al mechero y obtenga
una pequeña porción del cultivo con ayuda del asa de kolle. Flamee la boca del tubo antes de
volver a taparlo.

3. Repita el procedimiento 1 para obtener más inóculo, pero usando esta vez aguja de kolle.

4. Tome el tubo con agar inclinado y realice la siembra depositando el inóculo a lo largo de una
sola línea descrita desde la base de la inclinación hasta el extremo.

5. Repita el procedimiento 1 para obtener inóculo, usando nuevamente aguja de kolle.

6. Tome el tubo con agar vertical y realice la siembra por picadura profunda del medio. Realice
siembras mediante estrías, agotamiento o por cuadrantes en Placas Petri, siguiendo los mismos
cuidados con el asa de siembra.

7. Rotule los tubos sembrados y póngalos a incubar a 37° C por 24 horas.

8. Cumplido el tiempo de incubación, evalué el crecimiento y anote sus resultados en la hoja

adjunta, según lo siguiente:

IV. RESULTADOS

1. Esquematice los resultados de sus observaciones de las primeras 48 horas tras la

siembra.
2. Reporte los resultados anotando las características macroscópicas de los crecimientos
Microbianos.
3. Reporte los resultados anotando las características microscópicas de los crecimientos
Microbianos.
V. DISCUSIONES

VI. CONCLUSIONES

VII. CUESTIONARIO

1. ¿Por qué algunos microorganismos desarrollan en caldo un característico crecimiento tipo

película? ¿Qué factores ambientales podrían alterar la formación de una película superficial?

2. ¿Cuándo utiliza tubos de agar inclinado para el estudio de las características de crecimiento?
¿Es preferible inocular con aguja de kolle y no con asa? ¿Por qué?

3. ¿Qué factores influyen en la abundancia del crecimiento en caldo, agar? inclinado y agar
vertical.