Microbiología

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8. Técnicas y tipos de sembrado en

placa y tubo
 
Siembra.
 
Sembrar o inocular es introducir arti cialmente una porción de
muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el n de iniciar
un cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación.
Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una
temperatura adecuada para el crecimiento.
 
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
 
 
 
 
 
1. Que se efectúen asépticamente
2. Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
3. Que se realicen solo los manipuleos indispensables
4. Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un mechero o bien Flujo laminar.

Tipos de siembra (placa)

 
Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo
previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios.
 
Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez solidi cado el medio se vierte una
cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.
 
Siembra en super cie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidi car y se coloca sobre la
super cie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción  total por el medio de
cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.
 
Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja solidi car.
 
Siembra volumétrica: Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser
predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con
pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin
embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla
respectivamente el volumen que será sembrado.
 
Siembra masiva: Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de Driglaski. En este caso la gota
de muestra liquida se esparce con la espátula por toda la super cie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento
en espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo liquido, procediendo
a su deslizamiento sobre toda la super cie de una placa de agar.
 
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Técnicas de cultivo en placa:
 
Técnica de siembra por estría en placa
 Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de siembra se toma una muestra
de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la super cie de un medio sólido preparado en una placa Petri
(a las placas Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa,
cada vez se van depositando en la super cie del medio menos microorganismos. A continuación, se amea el asa, se toca en
la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la super cie de medio
sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células individuales. A continuación, las placas se
incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las células aisladas experimenten un número su ciente de divisiones para
formar colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula, no podemos
asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Por tanto, para
asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien
aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda seguridad, cultivos axénicos.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Técnica de extensión en placa:
 
Las muestras diluidas se siembran directamente en la super cie de la placa de agar, extendiéndolas con avuda de un asa de
Diralsky de cristal estéril. La suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas sobre la super cie. En ambas
técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Como en el método de siembra por estría, no existe la
seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión o en el agar solidi cado sembrado por el
método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso. Las dos técnicas de siembra por dilución
presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias aisladas que el método de siembra por estría,
por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
                                                              
 
 
Tipos de siembra (Tubo)
 
Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se
siembra en el  tubo con el uso del asa cargada con el  material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.
 
Siembra por estrías en super cie: Se siembra el material  en la super cie de el agar inclinado en un tubo de ensayo,  allí se
extiende por toda la super cie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar,
haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la super cie inclinada 
y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo.
 
Siembra por punción
Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo sólido, generalmente, en
tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el
asa. La particularidad que tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio
de cultivo.
 
 
Técnicas de siembra (tubo)
 
Siembra por inoculación o agitación:
Con un asa bacteriológica, esterilizada, se toma cantidad de inoculo, se intorduce en el centro del medio liquido, agitándose,
no tocando la pared del tubo.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Siembra por estría ( en tubos de agar inclinado):
Muestra de material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por super cie mas profunda.
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Siembra por picadura:
Asa recta, tomar la muestra, sembrar en agar semisólido, en el tubo de ensayo hasta que la muestra quede bien impregnada
al agar.
 
Siembra por vertido en placa:
Diluciones en varios tubos, pipeta 1cc de muestra o dilución, agregar tubo de ensayo estéril, se agrega medio licuado,
mantener a 55°C, movimientos rotatorios, solidi car.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

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10 comentarios
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Osvaldo Acosta 3-G · hace 2 años · Responder

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Ivanna · hace 2 años · Responder

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Eduardo · hace 2 años · Responder

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Eduardo · hace 2 años · Responder

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Karina Lopez Juarez -3G Equipo #4

Karina Lopez · hace 2 años · Responder

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Vanessa De Jonas · hace 2 años · Responder

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Itza Fernanda Salais Beltrán - 3°G.
Itza Salais · hace 2 años · Responder
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Claudia Bustamante, equipo #1 3G

Cecilia Chablé · hace 2 años · Responder

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Alejandra · hace 2 años

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