Universidad Nacional de Trujillo Biología de los Microorganismos

E.A.P. Microbiología y Parasitología

Acción de microorganismos sobre carbohidratos

I. INTRODUCCIÓN
Muchas clases de microorganismos pueden hidrolizar polisacáridos estructurales, tales como
las pectinas y la celulosa, mediante enzimas extracelulares. Particular importancia posee al
respecto el deterioro por parte de los hongos, de las frutas y hortalizas sin procesar.

Recientemente, se ha intentado emplear la actividad celulolítica de los hongos en el

tratamiento de residuos sólidos. La idea consiste en desarrollar un método conveniente para la
rápida descomposición de los residuos urbanos e industriales ricos en celulosa (papel,
residuos agrícolas), y producir simultáneamente una masa micelar que pueda ser aprovechada
como fuente de proteínas para alimento animal.

La hidrólisis microbiana de los disacáridos se convierte en algunas ocasiones en un problema

serio para la industria azucarera. Las levaduras y hongos osmofílicos son capaces de invertir
la sacarosa en soluciones concentradas, impidiendo así el proceso de cristalización.

I. DEGRADACION DE CARBOHIDRATOS Las pruebas de hidrólisis y fermentación de

carbohidratos son muy importantes para la identificación de las bacterias. Los medios, para
estudiar la degradación de estos compuestos, se preparan por lo general añadiendo 0.5% del
carbohidrato a un medio básico sin carbohidrato. Algunas bacterias son capaces de usar
moléculas complejas como fuentes de carbono, utilizan hidrolasas, que fragmentan sus
moléculas y liberan otras más pequeñas, que pueden ser transportadas al interior de la célula
bacteriana. En términos generales, las hidrolasas son enzimas inducidas. Po lo tanto para
estudiar la capacidad hidrolitica de determinada bacteria, es deseable cultivarla previamente
en un medio cuya fuente de carbono sea únicamente la sustancia cuya hidrolasa se desea
detectar, para que la bacteria induzca su síntesis.
a) HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN El almidón es un homopolisacarido de la glucosa, cuyos
componentes son la amilosa lineal y la amilopectina ramificada. Para utilizarlo, algunas
bacterias sintetizan una exoenzima llamada amilasa que hidroliza los enlaces glucosidicos
alfa1-4, liberan maltosa y isomaltosa, que ingresan a la célula y pueden metabolizarse. Para
evidenciar la presencia de amilasa, se recurre a que el almidón, forma un complejo de color
azul intenso con el yodo. Las bacterias de la amilopectina dan solo un color café rojizo y el
almidón hidrolizado no dan ninguna coloración. Por lo tanto, la ausencia de color azul indica
que el almidón ha sido hidrolizado. La producción de amilasa es útil para diferenciar especies
de bacillus, de streptococcus, y de lactobacillus. De igual forma se aplica a esquemas de
diferenciación de algunas bacterias aerobias y anaerobias como Actinomyces bacteroides,
clostridium y fusobacterium.
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II. MATERIAL Y MÉTODOS

2.1 Materiales

 Cultivo bacteriano

- Basillus subtilis

- Eschericchia coli

- Proteus vulgaris

- Pseudomonas fluorescens

- Staphylococcus aereus

 Placas petri con agar almidón

 Tubos de ensayo con caldo glucosa rojo de fenol incluida una campana de Durharm

 Tubos de ensayo con agar gelatina

 Tubos de ensayo con caldo de urea

 Placas petri con agar tributirina

 As bacteriológica

 Mechero de alcohol

Métodos
DEGRADACIÓN DE CARBOHIDRATOS HIDROLISIS DE ALMIDOn
- Dividir una placa de agar almidon en tres sectores con el asa bacteriológica en

punta previamente esterilizada por flameado coger la muestra del cultivo puro

bacteriano.

- Sembrar en el centro de uno de los sectores por puntura.

- Sembrar los cultivos bacterianos 2 y 3 en los demás sectores de manera respectiva.

- Rotular e incubar a 37°C por 24 horas.

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- Leer la hidróliss del almidón cubriendo la superficie de la placa con solución de

lugol.

FERMENTACIÓN DE LA GLUCOSA

- Sembrar por suspensión el cultivo puro bacteriano 1 en un tubo con caldo

glucosado.

- Sembrar de la misma forma anteriormente descrita los cultivos puros 2 y 3.

- Incubar a 37°C por 24 horas. Observa los tubos en cuando a cambio de color y

formación de gas.

III. RESULTADOS

Hidrolisis De Almidon

Cultivo

Bacillus subtilis (cultivo)

Eschericchia coli (cultivo)

Proteus vulgaris (cultivo)

Se observaron zonas claras no coloreadas después de agregar unas cuantas gotas de lugol,

este caso fue del Bacillus subtilis, donde se observaron resultados instantáneos, y también de

Proteus vulgaris, pero después de cierto tiempo de espera. Pero, en el caso de Eschericchia

coli, no se observaron zonas claras. Las formaciones de las zonas claras nos indican que el

microorganismo, en este caso las bacterias, hidrolizan el almidón, es decir nos indican que el

microorganismo es alfa-amilasa (+).

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Fermentación De La Glucosa

Cultivo

Bacillus (cultivo)

Eschericchia coli (cultivo)

Proteus vulgaris

La solución tornó de un color rojo a amarillo, pero en la campana de Durharn enía un color

anaranjado claro. No hubo formación de gas (CO2). Bacillus subtilis negativo. La solución

tornó al igual que la anterios de color rojo a amarillo, y si se formó un gas dentro de la

campana de Durmharn. Eschericchia coli positivo. Al igual que los resultados anteriores, la

solución final fue de color amarilla, y se observaron pequeñas burbujas de gas. Proteus

vulgaris positivo.

IV. DISCUSION
Mediante diferentes pruebas bioquímicas se puede ver que no todo los microorganismos reacción
igual en cada una de las pruebas, algunos no presentaran cambios en el medio mientras que otros
sí. Otros necesitan de otros aditivos para poder ver como actúa con el medio como es el caso de la
prueba del rojo de metilo y otras pruebas ,mientras que otras solo basta el tiempo de incubación
para poder ver como se han comportado con el medio donde se encuentran.
El medio es igual para ambas pruebas, la diferencia está en los reveladores. Si se añade a la
prueba rojo de metilo como revelador, la prueba mide la capacidad de las bacterias para utilizar
la glucosa por la vía acído mixta, es decir, es la prueba de rojo de metilo (RM). Se lee como
positiva si al añadir el revelador el medio se torna rojo, y negativo si el medio se torna amarillo.
Como en el caso Eschericchia coli, podemos decir que presenta un RM positivo.
Si en lugar de rojo de metilo se le agrega al medio KOH al 40% y alfa-naftol, la prueba evalúa la
capacidad de las bacterias de utiliza la glucosa por la vía del butilenglicol, se llama Vogues
Prokauer y se interpreta como positiva si, al añadir los dos reactivos reveladores el medio se torna
rojo, negativa si se torna amarillo. Como es el caso de la Enterobacter, podemos decir que posee
VP positivo. Es decir, que, en ambos casos la positividad viene dada por la formación de color
rojo.

V. CONCLUSIÓN

Se evidenció el desarrollo de diferentes microorganismos en Carbohidratos.

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Los microorganismos pueden degradar a casi todo tipo de sustancias orgánicas o

inorgánicas.

Se llegó a entender cómo actúan los mecanismos de estos microorganismos que se

valen de enzimas para degradar el sustrato presente en el exterior para así poder

absorberlos y realizar sus distintas vías metabólicas necesarias para su supervivencia.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

 Brooks, G. F., Karen C. Carroll , Janet S. Butel, Stephen A. Morse, & Timothy A.

Mietzner. (2013). Jawet, Melnick y Adelberg Microbiología médica.25 edición.

México. McGraw Hill Lange.

 Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. Brock. (2003). Biología de los

Microorganismos. 10ª edición. Madrid. Prentice-Hall