INMUNOLOGIA-PRACTICA

FAGOCITOSIS IN VIVO
I. INTRODUCCIÓN
En 1984 el biólogo ruso Lliá Mechnikov desarrolló la teoría de la fagocitosis.
Mechnikov describió como ciertas células blancas de la sangre o leucocitos, a
las que llamaba fagocitos, eran capaces de destruir bacterias y otros elementos
extraños al organismo.
Denominamos fagocitosis a la unión de un microorganismo (o, en general, un
agente particulado, insoluble) invasor o extraño, a la superficie de una célula
fagocítica especializada (PMN o macrófago), por algún mecanismo inespecífico,
de tipo “primitivo” (ameboide), esto es la emisión de pseudópodos y
englobamiento, para crear un fagosoma al que luego se unen los lisosomas y así
poder destruir o inactivar a la célula o partícula invasora. La destrucción del
agente invasor se propicia en pocos minutos. Se sabe que para que para que se
lleve a cabo la fagocitosis el fagocito debe ser capaz de unirse al microorganismo
(rodearlo y englobarlo con su membrana); para ello utiliza la activación del
complemento por la vía alternativa. La activación de la vía del complemento por
la ruta alternativa es característica de la inmunidad innata o natural. El
complemento es un conjunto de 20 proteínas del plasma, que interactúan entre
sí y con otros elementos de los sistemas inmunitarios innato y adquirido, para
mediar en una serie de importantes respuestas inmunológicas. La ruta
alternativa del complemento se basa en un sistema de activación enzimática en
cascada, en el que el producto de una reacción es a su vez una enzima para la
sgte. reacción, produciéndose una respuesta amplia y rápida del estímulo inicial.

II. OBJETIVOS
 Probar el poder bactericida del suero de un animal de experimentación (cobayo)
inoculado con una cepa bacteriana (E. coli).

III. MATERIALES
 Biológico: Cobayo macho adulto.
Cepa: Escherichia coli.
 Laboratorio:
- Láminas portaobjetos
- Tabla de disección
- Estuche de disección
- Pabilo
- Jeringas de 5 ml
- Agujas Nº 21
- Colorante de Wright o Giemsa
- Microscopio
- Solución salina fisiológica estéril
- Baño María
- Mechero Bunsen.

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IV. PROCEDIMIENTO
1. Primero preparamos nuestra cepa bacteriana a inocular.
2. Preparamos una suspensión bacteriana usando SSFE, igual a tubo Nº 3 del
nefelómetro de McFarlan (en este caso se usó como cepa E. coli).
3. Luego inactivamos la cepa: ponemos la suspensión recientemente preparada
en baño María a 70 ºC por 60 min.
4. Luego dejamos enfriar.
5. Pasado el tiempo, inoculamos vía peritoneal al cobayo de experimentación.
En este caso nuestra primera inoculación fue de 1ml.
6. Luego damos al cobayo un descanso de 4 días.
7. Pasado el tiempo volvemos a inocular vía peritoneal 1 ml de la suspensión
preparada y dejamos de nuevo 4 días de descanso al cobayo.
8. Luego realizamos la tercera inoculación, esta vez de 2 ml de la suspensión
preparada y dejamos descansar al cobayo por 8 días.
9. Pasado el tiempo, volvemos a preparar una suspensión bacteriana igual al
tubo número 3 del nefelómetro de McFarlan, pero esta vez no inactivamos la
cepa.
10. Luego inoculamos 1 ml de esta suspensión preparada vía peritoneal y
dejamos descansar al cobayo por aprox. 2 horas.
11. Pasado el tiempo, se disecciona al animal para extraer el líquido peritoneal.
12. Del líquido peritoneal obtenido se realizan frotis en las láminas portaobjetos.
13. Se realiza la tinción de Wright o Giemsa y luego se pasa a observar.
14. Buscamos células que hayan desarrollado la fagocitosis.

V. RESULTADOS
 El desarrollo de esta práctica fue con la intención de observar el desarrollo de
la fagocitosis “in vivo”, además de la estimulación de una respuesta
inmunitaria específica por parte del cobayo a las inoculaciones repetidas con
cepas inactivas de E. coli.
 Como ya se dijo, las inoculaciones repetidas de cepas inactivadas de E. coli
tuvieron la finalidad de estimular en el cobayo su sistema inmunológico
especializado (un afecto parecido al de las vacunas), osea, que además de la
respuesta inmunológica natural (mediada tanto por macrófagos y PMN), con
las inoculaciones repetitivas se trató de activar la respuesta inmunitaria
específica, esto es, la mediada tanto por LTCD4 activados (LT de memoria y
LT efectores),no así los LTCD8, que en este caso no serán “activados”
necesariamente; también la respuesta inmune específica que aquí veremos
estará mediada por LB (que se dividirán sobre todo en LB de memoria y LB
efectoras o células plasmáticas), para la secreción en este caso de
inmunoglobulinas (tipo G o tipo M), características dela infección activa.
 En un cobayo normal, la piel es su primera línea de defensa, nosotros al
inocular directamente en la cavidad peritoneal estamos salvando esa barrera
natural.
 La cavidad peritoneal es el espacio virtual comprendido entre el peritoneo y
las vísceras del animal, aunque los intestinos, que forman parte de este

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conjunto, tienen una elevada y diversa flora microbiana, no así la cavidad

peritoneal, que por lo demás es estéril (libre de microorganismos), aunque sí
es custodiado por uno que otro macrófago errante.
 Cuando los E. coli ingresan en esta cavidad, son reconocidos como “extraños”
por los macrófagos errantes y empieza el proceso de fagocitosis. Aquí se inicia
el proceso de inflamación, típico de la inmunidad innata. El daño del tejido
(hecho por la aguja al inocular) propicia la liberación de factores vasoactivos
y quimiotácticos que tienen por resultado un incremento local del flujo
sanguíneo y permeabilidad capilar. Estos capilares permeables permiten la
salida de líquido y células, en este caso más macrófagos. Los macrófagos
presentes de manera temprana también empiezan a emitir sustancias
quimiotácticas, llamadas quimiocinas, que cumplen la función de atraer más
macrófagos al sitio de infección. Los macrófagos que circulan por los vasos
sanguíneos adyacentes, al recibir estas señales químicas, empiezan a
emigrar al sitio de infección (salen del vaso sanguíneo por diapédesis) y van
ayudar a los demás macrófagos presentes, ahí además liberación de TNF que
ayudará al proceso infeccioso por su acción pirógena.
 Aunque todos estos procesos deberían controlar la “invasión” de las cepas
inactivadas de E. coli, pueden ocurrir otros acontecimientos. Tanto en la
primera y más aún en la segunda inoculación, tanto los macrófagos como los
linfocitos B (LB) fagocitan a la bacteria “extraña” y cumplen con el
procesamiento de la misma, como ambas son presentadoras de antígeno,
procesan el péptido en su interior y lo presentan al LTCD4 a través del MHC
– II. Éste, al ser activado, se diferencia en su mayoría en LTH1, el cual
cumplirá tres funciones importantes:
- El LTH1 va a ayudar a la acción fagocítica de los macrófagos a través
de la secreción de INF-γ que mediará la activación de los macrófagos,
o sea, esto aumenta la fagocitosis y la destrucción de las bacterias en
el fagolisosoma (enzimas más potentes).
- El INF-γ también actúa sobre el LB estimulando la síntesis de
anticuerpos (IgG) que mediarán en la opsonización de estas bacterias
para su mejor fagocitosis (potencia la fagocitosis).
- La LTH1 también libera linfotoxinas y TNF que van a actuar sobre los
neutrófilos, activándolos (aumentando la destrucción microbiana) y
estimulando la inflamación.
 La LTH1 libera además una interleucina autocrina, la IL-2, que ayuda a la
proliferación de los mismos (factor de crecimiento “autocrino”).
 Todos estos acontecimientos, antes mencionados, son parte ya de la respuesta
inmunitaria adaptativa, y las inoculaciones intraperitoneales repetidas, son
realizadas para reforzar estos eventos (para mejorar la respuesta inmune).
 Entonces, en la cuarta inoculación, en la cual se inocula la suspensión
microbiana con células vivas (bacterias activas), si todo ha salido bien en el
desarrollo de la práctica, la respuesta del cobayo será rápida y efectiva, ya que
éste posee en su organismo macrófagos activadas inmunoglobulinas tipo G,

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características dela inmunidad específica y que neutralizarán rápidamente a la

bacteria.
 En las láminas del frotis de líquido peritoneal se observarán de forma clara la
fagocitosis y destrucción de las bacterias inoculadas.

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VI. CONCLUSIONES
 Se logró inducir en el cobayo la respuesta inmunológica específica,
caracterizada por la presencia de macrófagos activados e inmunoglobulinas
opsonizantes.
 Se logró observar la fagocitosis desarrollada por las células inmunes del cobayo
(macrófagos, linfocitos B, PMN) en respuesta a la cuarta inoculación de una
suspensión de bacterias vivas (1 ml) en la cavidad intraperitoneal.

VII. BIBLIOGRAFÍA
 ABBAS A. K. y cols. (2002) Inmunología Celular y Molecular. 3º Edic.Mc Graw
Hill. Madrid.
 GOLDSBY y colbs. (2005). Inmunología. Edit. Prentice Hall –Interamericana.
Madrid.
 IÁÑEZ PAREJA, Enrique (2003) Curso de Inmunología General: Introducción
al sistema inmunitario. Departamento de Microbiología. Universidad de
Granada. España.
 Microsoft ® Encarta ® 2007. © 1993--2006 Microsoft Corporation. Reservados
todos los derechos.
 ROJAS ESPINOSA, Oscar y Patricia, Arce paredes (2003) Fagocitosis:
Mecanismos y consecuencias. Asoc. Mexicana de Bioquímica Clínica. México
D.F.

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