No.

16 Agosto 2016

Artículo

La cascada del nitrógeno ocasionada

por actividades humanas

Silvia Pajares Moreno

De ciclo a cascada del nitrógeno

El nitrógeno (N) forma parte de los elementos imprescindibles

para la vida por estar presente en todas las proteínas y en los
ácidos nucleicos (adn y arn). A pesar de que es uno de los
elementos más abundantes en la atmósfera y la biosfera, es el
que menos pueden usar los seres vivos. La razón de esta con-
tradicción se debe a que 99% del N en la Tierra se encuen-
tra en forma de nitrógeno molecular (N2), y este gas es el más
abundante de nuestra atmósfera, formando el 78% del total. El
nitrógeno molecular tiene dos átomos de nitrógeno unidos por
un triple enlace (como se muestra en la Figura 1), y se necesita
una enorme energía para romperlo. Cuando el N2 se rompe, se
forman los tipos activos de nitrógeno que los seres vivos pueden
usar, como son las formas inorgánicas: amonio (NH4+), nitra-
to (NO3-), óxidos de nitrógeno, entre otros; y orgánicas: urea,
aminas, ácidos nucleicos y proteínas. Figura 2. Principales procesos del nitrógeno (N) a través de componentes bio-
lógicos y abióticos en el sistema terrestre. Adaptado de Wikipedia: https://
es.wikipedia.org/wiki/Ciclo_del_nitr%C3%B3geno.

La fijación del nitrógeno se produce fundamentalmente

Figura 1. Nitrógeno molecular. Fuente: http://elianamaytorena.blogspot.
mx/2009/03/gases-de-invernadero-y-su-incidencia-en.html.
Las moléculas del nitrógeno se mueven por procesos bio-
lógicos y no biológicos (o abióticos) de manera cíclica en la
Tierra, y a esto se le llama ciclo biogeoquímico del nitrógeno.
Este ciclo comprende cinco procesos principales: 1. fijación, 2.
asimilación, 3. amonificación, 4. nitrificación y 5. desnitrifica-
ción, como se ilustra en la Figura 2.
gracias a bacterias especializadas, como las del género Rhizo-
bium que forman nódulos en las raíces de plantas como el frijol
y otras leguminosas. Las bacterias Rhizobium son capaces de
transformar el N2 atmosférico en NH4+, que es la forma como
los organismos lo pueden incorporar a sus proteínas mediante
la asimilación. Por ejemplo, en este proceso las plantas absor-
ben el NO3- del suelo y lo reducen a NH4+, que es transferido
a las moléculas de carbono para producir aminoácidos y otras
moléculas orgánicas nitrogenadas que las plantas necesitan para
crecer. Las bacterias heterótrofas y los hongos son los responsa-
bles de la amonificación, proceso por el cual el nitrógeno de
los organismos muertos o de residuos orgánicos se transforma
también en NH4+, volviendo a estar disponible para las plan-
tas y microorganismos. En presencia de oxígeno, un pequeño
grupo de microorganismos autótrofos pueden convertir parte
de este NH4+ en NO3- mediante el proceso de nitrificación.

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El NO3-, tiene una carga negativa, por lo que no se adhiere
a las partículas del suelo que también tienen carga negativa, y
es por esta razón que se lava con facilidad (proceso conocido
como lixiviación). Cuando ocurre la lixiviación se pierde fertili-
dad en el suelo y además las aguas superficiales y subterráneas se
enriquecen con NO3-, provocando problemas de eutrofización
acuática y de salud en el hombre. En condiciones anaerobias, es
decir cuando no hay oxígeno en el ambiente, un grupo diverso
de microorganismos son capaces de respirar el NO3- y transfor-
marlo hasta N2 mediante una serie de etapas secuenciales, en las
cuales el nitrito (NO2-), el óxido nítrico (NO), que forma parte
del esmog, y el óxido nitroso (N2O), un potente gas de efecto
invernadero aparecen como productos intermedios. Todo este
proceso se conoce como desnitrificación y se resume en estos
pasos: NO3- NO2- NO N2O N2.
Glosario de compuestos químicos
Amonio (NH4+)
Dioxido de carbono (CO2)
Dioxido de nitrógeno (NO2)
Nitrato (NO3-)
Nitrito (NO2-)
Nitrógeno (N2)
Óxido Nítrico (NO)
Óxido nitroso (N2O)
Ozono (O3)
Antes de la revolución industrial, el nitrógeno reactivo se
originaba a partir del N2 por dos procesos: relámpagos y fijación
biológica del nitrógeno. El nitrógeno reactivo no se acumulaba
en el ambiente, porque existía un equilibrio entre el nitrógeno
que fijaban los organismos biológicamente y la desnitrificación.
Sin embargo, en las últimas décadas el nitrógeno reactivo se
está acumulando en la naturaleza como consecuencia de las ac-
tividades humanas: incremento de los cultivos de leguminosas
(los principales son el frijol y la soya), el uso de combustibles
fósiles y sobre todo, para producir fertilizantes inorgánicos me-
diante el proceso desarrollado por los investigadores Haber y
Bosch, como se ve en la Figura 3. Fritz Haber recibió el premio
Nobel de Química en 1918 por desarrollar la síntesis catalítica
del amoniaco a partir del dihidrógeno y el dinitrógeno atmos-
férico en condiciones de alta temperatura y presión. El método
Haber-Bosch, como se le conoce, solucionó los problemas de la
agricultura a escala mundial porque fue posible producir ferti-
lizantes de manera industrial, sin necesidad de depender de de-
sechos orgánicos como el estiércol. Al principio fue una historia
de enorme éxito, ya que gracias a los fertilizantes inorgánicos la
producción mundial de alimentos se disparó. Esta es una de las
razones por las que la población humana ha crecido tanto re-
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Figura 3. Tendencias históricas del nitrógeno reactivo formado por la actividad
humana. También se muestra el rango de fijación de nitrógeno (alrededor de
100 millones de toneladas por año) que se produce en los ecosistemas terrestres
naturales, principalmente por bacterias en asociaciones simbióticas con las plan-
tas. Adaptado de United Nations Environment Programme (2007).
cientemente, multiplicándose por seis en tan sólo 100 años. Sin
embargo, para mantener este ritmo acelerado de crecimiento,
también fue necesario aumentar la producción de fertilizantes
y el uso de combustibles fósiles, y es así como comenzaron los
problemas que aquejan hoy a nuestro planeta: sobrepoblación,
calentamiento global, pérdida de biodiversidad, contaminación
y cascada de nitrógeno, entre otros.
De hecho, de todos los fertilizantes que se aplican a un culti-
vo, las plantas sólo absorben cerca de la mitad. El resto de los fertili-
zantes se lava con el riego y termina en los mantos acuíferos, donde
ocasiona problemas en los ecosistemas, tiene efectos nocivos para la
salud, y se volatiliza a la atmósfera en forma de gases reactivos que
contribuyen con el calentamiento global y la contaminación del
aire. Conforme estos compuestos nitrogenados avanzan a través de
los ecosistemas, desencadenan lo que se conoce como cascada del
nitrógeno, que se muestra en la Figura 4.
Actualmente la aplicación de fertilizantes químicos ha
duplicado la cantidad de nitrógeno reactivo que circula por el
planeta, provocando que el ciclo del nitrógeno esté alterado en
más del 80%, mientras que el del carbono lo está en menos del
10%. Por ello, el nitrógeno antropogénico es probablemente
una amenaza medioambiental mayor que el carbono debido a
las actividades humanas y de la que se habla muy poco.
El ciclo alterado del nitrógeno, un serio problema ambiental
Las actividades agrícolas liberan, por una parte, amoniaco (NH3),
óxido nitroso y óxido nítrico (N2O y NO, respectivamente) que
se van a la atmósfera y, por otra, nitratos (NO3-) que llegan a los
acuíferos. De la combustión de carburantes fósiles se desprende
NO y dióxido de nitrógeno (NO2), compuestos que se conocen
genéricamente como NOx. La intensificación de las actividades
agrícolas y la combustión de carburantes fósiles aumentan la
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cantidad de formas reactivas de nitrógeno en el ambiente. Estos

compuestos, antes de depositarse en un sumidero final en forma
de N2 o quedar inmovilizados en suelos o sedimentos, tienen una
serie de efectos en cascada para la salud humana y los ecosistemas,
como se ilustran en las Figuras 4 y 5, entre los que destacan:
• El NO y el NO2 reaccionan con compuestos volátiles or-
gánicos, produciendo un aumento de la concentración del ozo-
no (O3) troposférico que repercute en la vegetación y la salud
humana e intensifica el efecto invernadero.
• El NH3 reacciona con ácidos presentes en la atmósfera,
entre ellos el ácido nítrico (HNO3) resultante de las emisiones
de NOx, lo que produce un aerosol fino que se desplaza largas
distancias, depositando nitrógeno reactivo a muchos kilómetros
de su fuente de origen. Estos aerosoles al ser respirados pueden
provocar enfermedades coronarias y respiratorias. Figura 5. Consecuencias de las formas inorgánicas del nitrógeno reactivo en el
ambiente. Elaboración propia.
• La deposición de nitrógeno oxidado (NOy) y nitrógeno
reducido (NHx) produce eutrofización de ecosistemas acuáticos.
La eutrofización provoca floraciones de algas y plantas acuáticas, lud humana porque el agua que se considera potable queda con-
lo cual reduce el oxígeno (hipoxia) disponible en el agua, ocasio- taminada. También provoca cambios en los sistemas acuáticos.
nando la muerte de peces y otros organismos, con la consiguiente • El óxido nitroso (N2O), también conocido como gas de
disminución de la biodiversidad del ecosistema. Estos compues- la risa, es uno de los gases causantes del efecto invernadero y
tos también pueden acidificar el suelo, produciendo cambios en contribuye en cerca del 12% del potencial de calentamiento
la composición de especies y la calidad del agua. global de origen antropogénico. Además, también interviene en
• La lixiviación del nitrógeno agrícola causa el aumento de la química atmosférica dando lugar a la destrucción de la capa
NO3- en aguas subterráneas y superficiales, con riesgos para la sa- de ozono (O3) estratosférica.

Figura 4. La cascada del nitrógeno en el ambiente. Muestra los efectos secuenciales que un sólo átomo de N puede tener en los compartimentos terrestres, atmosfé-
ricos y acuáticos después de transformarse de N2 no reactivo a una forma reactiva (flechas amarillas). Adaptado de United Nations Environment Programme (2007).

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Soluciones futuras a los efectos en cascada que provoca el
exceso de nitrógeno en el ambiente
Existe poca conciencia pública sobre la importancia del exceso
de nitrógeno reactivo y la amenaza que supone para el medio
ambiente y la salud humana. La complejidad de las interaccio-
nes entre diferentes contaminantes nitrogenados y sus múltiples
efectos es uno de los principales obstáculos cuando se intenta
sensibilizar a la sociedad. Sin embargo, a pesar de la falta de
concienciación a este gravísimo problema, existen diversos tipos
de propuestas para ponerle solución.
Además, como el ciclo del nitrógeno está acoplado al del
carbono, muchas de las soluciones a los efectos de la cascada del
nitrógeno ayudarán a mitigar también el acelerado crecimiento
del dióxido de carbono (CO2), principal causante del cambio
climático que estamos viviendo.
Desde la parte agrícola, se propone mejorar el rendimiento
de los cultivos e incrementar la eficiencia en el uso de nitrógeno
con algunas medidas, como son evitar la fertilización excesiva,
limitar los riegos tras la fertilización, usar fertilizantes de libera-
ción lenta, abonos verdes o estiércol e implementar la rotación
de cultivos. Adicionalmente, se ha propuesto tratar de cambiar la
política alimentaria a nivel mundial, fomentando el consumo de
menos carne y la producción local de alimentos para reducir la
necesidad de fertilizantes en grandes zonas agrícolas.
También se necesitan mejorar los sistemas de depuración
de aguas. Existen algunas propuestas ingeniosas y sencillas, como
la de colocar redes que atrapen el nitrógeno mediante una tela de
alambre cubierta por algas que se coloca en zonas acuáticas con
altas concentraciones de nitrógeno. Las algas capturan el nitróge-
no y lo usan para crecer, disminuyendo la cantidad de nitrógeno
en el agua. Posteriormente, parte de estas algas se pueden dar
como alimento al ganado, repitiéndose de nuevo el proceso.
Por supuesto, otra solución necesaria es la de reducir emi-
siones de combustibles fósiles. Esto se podría conseguir sustitu-
yéndolos por fuentes de energías renovables o limpias (como la
solar o la eólica), disminuyendo el consumo eléctrico, fomen-
tando el uso del transporte público, la bicicleta o de autos híbri-
dos e instalando catalizadores en los autos.
Además, para encontrar soluciones acertadas ante este grave
problema ambiental, económico y social se necesita de la colabo-
ración de la comunidad científica. Por ejemplo, en el Laboratorio
de Ecología Microbiana Molecular del Instituto de Ciencias del
Mar y Limnología de la unam, tratamos de comprender cómo la
disminución del oxígeno en el Pacífico mexicano y en lagos tro-
picales de México, debido al calentamiento global y la eutrofiza-
ción del agua, afecta a las comunidades microbianas acuáticas que
controlan el ciclo del nitrógeno y las consecuencias que tendrá en
el funcionamiento de estos ecosistemas acuáticos.
México, al igual que el resto del mundo, tiene un gran
reto en la lucha contra el cambio climático. Entre las estrategias
a implementar, una de las prioridades es reducir el nitrógeno
reactivo en el ambiente.
Actualmente nuestro país está instrumentando la Estra-
tegia Nacional de Cambio Climático, además acaba de aceptar
una serie de compromisos en la XXI Cumbre de Cambio Cli-
mático, celebrada recientemente a finales 2015 en París. Entre
las acciones, México se ha comprometido a reducir las emisio-
nes de gases de efecto invernadero en un 22 % para el 2030,
incentivando el uso de energías renovables y la conservación de
ecosistemas, como los bosques y humedales, que contribuyen a
la reducción de los gases de efecto invernadero. Estas son sólo
algunas de las medidas que se tienen que impulsar para luchar
contra el cambio climático.
Silvia Pajares. Es investigadora asociada C del Instituto de Ciencias
del Mar y Limnología de la unam. Su línea de investigación buscar la
relación entre las comunidades microbianas que controlan en ciclo
del nitrógeno en sistemas acuáticos y el cambio climático global.

Para saber más

•• Galloway, J.N., Aber, J.D., Erisman, J.W., Seitzinger, S.P., Howarth, R.W., Cowling, E.B.y B.J., Cosby. 2003. The nitrogen
cascade. BioScience, 53:341-356.
•• Galloway, J.N., Townsend, A.R., Erisman, J.W., Bekunda, M., Cai, Z., Freney, J.R., Martinelli, L.A., Seitzinger, S.P. y M.A.,
Sutton. 2008. Transformation of the nitrogen cycle: Recent trends, questions, and potential solutions. Science, 320:889-892.
•• Fowler, D., Pyle, J.A., Raven, J.A. y M.A., Sutton. 2013. Discussion Meeting Issue 'The global nitrogen cycle in the twenty-first
century'. Philosophical Transactions of the Royal Society, 368, issue 1621.
•• United Nations Environment Programme. 2007. Reactive nitrogen in the environment: Too much or too little of a good thing. The
Wood Hole Research Center, usa.

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Artículo
Azufre: elemento incomprendido
de la biogeoquímica planetaria
Valerie de Anda y Valeria Souza
Recapitulando: la formación de los átomos en el universo, la
Tierra primitiva y los ciclos biogeoquímicos
Milisegundos después del Big Bang, el universo era una sopa
caliente de plasma de partículas elementales que dieron lugar a
toda la materia en el universo. Minutos después, ya se habían
formado todos los neutrones y protones los cuales comenzaron
a fusionarse entre sí, formando núcleos atómicos en un pro-
ceso conocido como nucleosíntesis del Big Bang. Trescientos
mil (300,000) años después, el universo ya se había enfriado
significativamente como para que los electrones se combinaran
con los protones y neutrones formando los primeros átomos
de helio e hidrógeno. Los gases de estos átomos, dieron lugar a
nubes gigantes que al colapsar formaron las primeras estrellas y
galaxias, generando en su interior los átomos esenciales para la
vida en la Tierra: carbono, oxígeno, nitrógeno, azufre y fósforo
(CHONP). Los primeros en formarse en el interior de las estre-
llas fueron el carbono y oxígeno, y los ciclos biogeoquímicos de
estos dos elementos se conocen con detalle (ver en esta edición a
Campo y a Souza y Viladomat-Jasso). Pero existen átomos más
complejos, como el azufre, que se formaron posteriormente en
las estrellas. La complejidad de los átomos se da al aumentar el
número de electrones, ya que éstos les confieren la posibilidad
de asociarse con otros elementos. Es decir, los electrones dispo-
nibles les confieren mayores posibilidades de asociarse con otros
elementos, porque estos electrones son los responsables de la
interacción entre los átomos: mientras más haya, aumentan los
tipos de enlaces posibles que pueden formarse. Debido a esto,
entender cómo se reciclan estos átomos “complejos” en nuestro
planeta no ha sido algo trivial, ya que tienen la capacidad de
interaccionar con una gran cantidad de átomos y elementos di-
ferentes (ver glosario).
Los átomos que constituyen la vida, y que se formaron
en las estrellas, se han reciclado en nuestro planeta y continúan
haciéndolo por medio de diferentes procesos como son: 1. el
movimiento del magma que proviene del centro de la Tierra
2. la tectónica de placas y 3. las reacciones que ocurren en la
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atmósfera debido al sol. Además, el reciclamiento de los átomos
en la Tierra no sólo se ha dado por procesos abióticos, si no que
fundamentalmente se ha llevado a cabo por los procesos meta-
bólicos derivados de los organismos más pequeños: las bacterias
y arqueas. Estos microorganismos procariontes, fueron las pri-
meras formas de vida que aparecieron en la Tierra hace 3,800
millones de años, y con el paso del tiempo, evolucionaron hasta
cambiar la química del planeta para siempre. Lo anterior dio
lugar a los ciclos biogeoquímicos que son la razón fundamental
de la existencia de la vida en el planeta Tierra, tal y como la
conocemos hoy en día.
Las primeras formas de vida en la Tierra se basaron en com-
puestos de azufre
El planeta Tierra se formó hace aproximadamente 4,600 mi-
llones de años y por términos prácticos, la historia de la vida
se divide en cuatro grandes eones: Hadeano, Archeano, Pro-
terozoico y Fanerozoico (ver Figura 1). En el Hadeano (nom-
brado así por el Dios griego del inframundo Hades), la Tierra
era excesivamente caliente, sin oxígeno, en donde una cantidad
inimaginable de meteoritos hubiera destruido cualquier intento
de vida, sin embargo, dichos impactos pudieron haber traído
los compuestos esenciales para el inicio de la vida en la Tierra
(moléculas orgánicas y posiblemente agua). La evidencia cien-
tífica indica que la vida empezó al principio del eón Arqueano
(3,800 millones de años), en un mar caliente sin oxígeno con
abundante hierro. Las teorías más recientes indican que posi-
blemente la vida se originó en ambientes parecidos a las ventilas
hidrotermales, las cuales son creadas a lo largo de las líneas de
separación de las placas tectónicas en el fondo marino.
Existen principalmente dos tipos de ventilas hidroterma-
les, clasificadas por color del efluente: negro o blanco. Las ven-
tilas o fumarolas negras, se encuentran cerca de los centros de
expansión donde el magma calienta el agua de mar que se filtra
a la corteza terrestre, emitiendo agua caliente (300-400°C), áci-
da (pH 2-3), rica en azufre reducido (H2S 3-110 mm/kg), dióxi-
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Glosario
Big Bang: Explosión cósmica de una muy pequeña cantidad
de materia a grandes temperaturas que ocurrió hace 20 mil
millones y que dio origen al universo.
Partículas elementales: Constituyentes más básicos de la
materia que transmiten las interacciones fundamentales.
Partículas subatómicas: Partículas que constituyen los
átomos, y que están formadas por algunas partículas
elementales.
Protón: Partícula subatómica que se encuentra en el núcleo
atómico y que tiene carga positiva. El número de protones
en un átomo determina el elemento.
Neutrón: Partícula subatómica que se encuentra en el
núcleo atómico; a diferencia del protón, no tiene carga
eléctrica neta. El número de neutrones en un núcleo
atómico determina el isótopo de ese elemento.
Electrón: partícula subatómica con carga negativa que se
encuentra fuera del núcleo atómico.
Nucleosíntesis: Proceso por el cual protones y neutrones
se fusionan para crear nuevos núcleos atómicos.
Dependiendo el momento y el lugar donde se lleve a cabo,
la nucleosíntesis se divide en 4: i) del Big Bang (primeros 3
minutos después de la formación del universo), ii) estelar
(dentro de las estrellas donde se formaron los elementos
esenciales para la vida, iii) explosiva (supernovas, donde
se producen los elementos más pesados que el He) y iv) a
espalación de rayos cósmicos (elementos ligeros).
Átomo: Partícula más pequeña en la que un elemento puede
ser dividido. El átomo es un constituyente de la materia que
está conformado por partículas subatómicas.
Elemento: Átomos que tienen el mismo número de
protones en su núcleo (conocido como número atómico z) y
que se encuentran en la tabla periódica.
Arqueas: Organismos unicelulares sin núcleo definido
(procariontes) que difieren de las bacterias y eucariontes y
que generalmente viven en ambientes extremos.
co) durante largo tiempo albergando las primeras formas de vida,
cuyos metabolismos, en ausencia de oxígeno y en un ambiente
hipercaliente, dependían del azufre para obtener energía.
En el árbol de la vida se encuentra evidencia de esta teoría,
en donde los linajes más ancestrales son arqueas hipertermófilas
que utilizan compuestos reducidos de azufre, así como hidróge-
no molecular. Estos primeros organismos que respiraron azufre,
fueron los predecesores de todos los metabolismos que surgie-
ron posteriormente en la Tierra primitiva, como lo son la foto-
síntesis anoxigénica llevada a cabo por bacterias púrpuras y por
las verdes del azufre, así como la fotosíntesis oxigénica que por
primera vez la llevaron a cabo las cianobacterias (Figura 1) que
se describen con detalle en el artículo de Souza y Viladomat-
Jasso de este número de Oikos=.
La sucesión de eventos en la historia de la vida en la Tierra y
los tapetes microbianos
El dilucidar la historia de la vida en la Tierra primitiva no ha
sido, ni es, tarea fácil. Para poder entender los eventos involu-
crados en la aparición de la vida en la Tierra y los consecuentes
metabolismos anaerobios que respiraron azufre, hasta la fotosín-
tesis oxigénica, ha sido necesaria una gran cantidad de pruebas
moleculares: fisicoquímicas, geoquímicas, fósiles, etcétera. Sin
embargo, una evidencia muy clara de esta sucesión de eventos
en la historia de la vida de la Tierra se encuentra en estructuras
microbianas actuales que existen en muy pocos lugares en el
mundo como Australia, Francia y México (Cuatro Ciénegas,
Guerrero Negro y Puebla). Estas estructuras se conocen como
microbialitos o tapetes microbianos (Figura 2).
El término microbialito se refiere a las estructuras órgano-
sedimentarias que forman láminas arregladas de manera vertical
que se desarrollan en interfases sólido/agua (Figura 2). Cuando

do de carbono (4-215 mm/kg), hidrógeno disuelto H2 (0.1-50

mm/kg) y metales de transición, en especial hierro (Fe2+). El
azufre y el hierro producido en estas ventilas hidrotermales, re-
acciona para formar sulfuro de hierro (FeS), el cual precipita en
contacto con el agua oxigenada del mar, generando el color ne-
gro característico de la ventila hidrotermal (ver en esta edición
Zapata-Peñasco). Dichas características de las ventilas hidroter-
males en donde se combina una alta presión y gran cantidad
de calor, favorece reacciones químicas que no son posibles bajo
otras condiciones. El calor de las ventilas favorece que los meta-
les de sulfuros se mantengan en solución, y el pH favorece que
se disocien, por tanto, aumentan las concentraciones de sulfuro
de hidrogeno (H2S). Este mismo escenario parece haber sido el de
Figura 1. Línea del tiempo de la evolución relacionada a la atmósfera oxigénica
la Tierra primitiva, en donde el H2S y los sulfuros de metales re- (O2, línea azul), y sulfuro de hidrógeno (H2S, línea verde). Modificado de K.R.
ducidos, permanecían en solución en un mar sin oxígeno (anóxi- Olson y K.D. Straub (2016).

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precipitan minerales como los silicatos o carbonatos de su en-
torno, se convierten en roca y son denominados estromatolitos.
Cuando no precipitan minerales de su entorno son denomina-
dos tapetes microbianos. Los microorganismos que habitan los
tapetes microbianos viven intercambiando entre sí nutrientes,
materia orgánica y compuestos de azufre, lo que contribuye a
que exista una fina formación de capas o estratificación vertical,
donde se llevan a cabo la mayoría de los ciclos biogeoquímicos,
de los cuales el ciclo del azufre es el eje rector de todos los de-
más. La organización de los microorganismos, de abajo hacia
arriba, recapitulan la historia de la vida en la Tierra en tan sólo
unos cuantos centímetros (Figura 2).
Durante más de dos décadas, la falta de métodos y herra-
mientas adecuadas dificultó entender la diversidad microbiana en
los tapetes. A principios de los años ochenta, el uso de microsen-
sores de alta resolución (Figura 3), ayudó para caracterizar el me-
dio ambiente físico y químico a pequeña escala espacial. El uso de
esta tecnología resaltó la importancia de los gradientes de azufre y
oxígeno, e identificó la reducción de sulfato y la fotosíntesis como
principales procesos geoquímicos de los tapetes microbianos.
En los noventas, el uso de técnicas moleculares y micro-
sensores de alta resolución (Figura 3) ayudó a estimar la estruc-
tura de la comunidad de muestras ambientales y reveló una in-
esperada gran diversidad microbiana, contrario a lo que se había
observado con técnicas que dependen de cultivos y microsco-
pía. A principios de siglo XXI, el uso de marcadores moleculares
abrió la posibilidad de estudiar el potencial metabólico de los
tapetes microbianos y resaltó la importancia de la reducción de
sulfato y la fijación de nitrógeno. De igual manera, la combi-
nación de medidas radiométricas, perfiles químicos y análisis
filogenéticos sirvió para estudiar lo que hacen algunos tipos de
bacterias en particular. Actualmente, técnicas como la metage-
nómica (descrita ampliamente en la revisión de S. Nikolaki y G.
Tsiamis de 2013), que consiste en conocer la secuencia del adn

Figura 2. Modelo de un tapete microbiano. a) Representación de la estratificación vertical de los microorganismos del tapete donde se ilustra la interacción fisio-
lógica, metabólica y geoquímica de acuerdo con el potencial redox. b) Esquema de la intersección de los ciclos biogeoquímicos en el tapete microbiano, donde el
ciclo del azufre es el eje rector de la intersección.

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Figura 3. Esquema de un microelectrodo de oxígeno. La punta de platino fun-
ciona como un cátodo, por lo que cuando se aplica un voltaje, el O2 es reducido
a H2O generando corriente. La corriente resulta de la reducción de O2 en la
superficie de oro del cátodo y es proporcional al O2 que contenga la muestra
ambiental. b) Microsensor biológico para la detección de nitrato NO3-. Las
bacterias inmovilizadas en la punta del sensor denitrifican NO3 a N2O, el cual
es detectado por la reducción de N2 en el cátodo. Modificado de Brock Biology
of Microorganisms, 13° ed.
de muestras obtenidas directamente del ambiente, han abierto
la posibilidad de responder preguntas sobre las comunidades de
microbios tales como ¿quién vive ahí? (potencial taxonómico)
y ¿qué función llevan a cabo? (potencial metabólico). Así pues,
los datos metagenómicos junto con información sobre genes
marcadores moleculares, han ayudado a confirmar que los mi-
crorganismos que viven en los tapetes microbianos asemejan la
historia de la vida en la Tierra, como se observa en la Figura 2a.
El gradiente de oxígeno en los tapetes microbianos nos ayuda
a entender lo que sucedió a lo largo de la historia de la vida
en nuestro planeta. Primero había una atmósfera reductora, sin
oxígeno, con condiciones extremas que permitieron el desarro-
llo de organismos que respiraban azufre, en forma de azufre
elemental y sulfato. Estos organismos, son las mencionadas ar-
queas hipertermófilas y las bacterias sulfato reductoras (srb por
sus siglas en inglés). Estas últimas se encuentran en la parte más
profunda de un tapete microbiano conviviendo con arqueas
metanógenas. En la capa siguiente se encuentran las bacterias
púrpuras y verdes del azufre (psb y gsb por sus siglas en inglés
respectivas) que necesitan el H2S, producido por las sulfato re-
ductoras. Estas bacterias púrpuras y verdes del azufre son ca-
paces de hacer fotosíntesis sin necesidad de oxígeno, y a su vez
producen sulfato que, como ya mencionamos, lo respiran las
vecinas de abajo: las sulfato reductoras (ver Figura 2). Arriba de
las psb y gsb se encuentran las bacterias que oxidan compuestos
de azufre, pero lo hacen en presencia de oxígeno y son conoci-
das como bacterias incoloras del azufre o clsb (por sus siglas en
inglés). Finalmente, la capa más superficial del tapete microbia-
no la dominan las cianobacterias, que son las responsables de
haber cambiado la atmósfera reductora a una oxidante (Véase
28
artículo de Souza y Viladomat-Jasso). Todos estos microrganis-
mos que son esenciales para llevar a cabo el ciclo del azufre a
escala global, se encuentran distribuidas en diferentes ambientes
del planeta Tierra (ríos, mares, lagos, sedimentos, etcétera).
En la Figura 2b se representa lo que hemos descubierto
sobre la interacción de los ciclos biogeoquímicos, cada rebana-
da en forma de triángulo esquematiza la relación del ciclo del
azufre con otros elementos, y los círculos simbolizan las capas
de los microorganismos en los tapetes microbianos, de la más
profunda hasta la superficial. Las cianobacterias fijan al CO2
por medio del ciclo de Calvin (y eso implica una interacción
con el ciclo del carbono), liberando oxígeno (O) y utilizando
agua como donador de electrones (H). Algunas cianobacterias
como Oscilatoria limnetica pueden fijar nitrógeno y utilizar
compuestos de azufre como fuente de energía. La relación del
ciclo del azufre con el fósforo (P), la observamos en la mem-
brana de algunas cianobacterias como Synechococcus y Sayne-
chocystis, ya que sintetizan compuestos de azufre (sulfolípidos),
en lugar de fosfolípidos, como respuesta a presiones selectivas
de su ambiente. Las bacterias incoloras del azufre (por ejem-
plo, Thiobacillus denitrificans o Thiobacillus ferooxidans) que se
encuentran en el segundo círculo (clsb), también utilizan el
ciclo del carbono ya que también fijan CO2 a través del ciclo
de Calvin, requiriendo un compuesto de azufre como fuente de
energía, y además necesitan oxígeno (O), y nitrato o nitrito (N).
En el tercer círculo están las bacterias púrpuras del azufre (psb).
Éstas necesitan compuestos reducidos de azufre (como H2S)
que producen las bacterias sulfato reductoras, y usan hidrógeno
molecular para biosintetizar material celular a partir del CO2.
Al igual que las cianobacterias, la síntesis de sulfolípidos tam-
bién está reportado en las psb como Rhodobacter sphaeroides.
En el cuarto círculo del modelo del tapete microbiano están
representadas las bacterias verdes del azufre que, a diferencia de
las psb, utilizan el ciclo de los ácidos tricarboxílicos reverso para
biosintetizar material celular usando CO2, pero el patrón del
ciclo del azufre con otros elementos es similar al de las psb. Fi-
nalmente, también en la Figura 2b, se representa a las bacterias
que reducen sulfato, proceso mediante el cual obtienen energía
reduciendo el compuesto de azufre, un proceso que está ligado
a la oxidación de compuestos orgánicos que contienen carbono
(C) o hidrógeno (H).
Tapetes microbianos para entender la importancia del azu-
fre en la Tierra
Bajo este esquema, nuestro trabajo de investigación propone
utilizar al tapete microbiano como un modelo que nos permita
entender la interacción biogeoquímica, molecular y ecológica de
los microrganismos y el ciclo del azufre, usando así una novedosa
perspectiva para analizar a los distintos ciclos biogeoquímicos.
Para generar un algoritmo computacional utilizamos el
Agosto 2016
orden y los microorganismos de cada una de las capas del tapete
microbiano, que está determinado por el gradiente de azufre
(Figura 2). Consideramos que éste es un modelo que representa
a los ciclos biogeoquímicos, y con base en esta información ge-
neramos el algoritmo que nos permite entender el ciclo del azu-
fre a escala global desde perspectivas diferentes: molecular, eco-
lógica y biogeoquímica. Como parte de nuestra investigación
realizamos un análisis bibliográfico para recopilar la informa-
ción de todos los genomas secuenciados hasta el momento de
arqueas y bacterias (incluyendo todos los organismos del azufre,
psb, gsb, clsb, srb) y todos los genomas de ambientes naturales
secuenciados hasta ahora (incluyendo los tapetes microbianos
y estromatolitos de Cuatro Ciénegas, Francia, Australia, Chi-
le, etcétera) que se encuentran en las bases de datos públicas
como el Centro Nacional para la Información Biotecnológica
(ncbi por sus siglas en inglés). Desarrollamos un algoritmo que
describe la importancia del ciclo del azufre, a escala global, por
medio de un valor numérico. De esta manera podemos cono-
cer qué tan importante es un ambiente determinado u orga-
nismo para el ciclaje del azufre, sin contar con ninguna prueba
anterior, más que conociendo su genoma o en el caso de un
ambiente, el conjunto de genomas o metagenoma. Nuestros
resultados comprueban la importancia de los microorganismos
que se encuentran en los tapetes microbianos y estromatolitos:
todos los genomas del azufre secuenciados hasta ahora, tienen
un valor muy alto en nuestro algoritmo. Además, los ambientes
en donde el ciclo del azufre es más importante, se encuentran en
los tapetes microbianos de Cuatro Ciénegas y en manglares de
Brasil, confirmando que estos ambientes son claves para el reci-
claje completo de las formas orgánicas e inorgánicas de azufre.
Con este algoritmo no sólo se puede estudiar el ciclo del
azufre, sino que está diseñado para que se entienda cualquier ci-
clo biogeoquímico de nuestro planeta, desde un punto de vista
ecológico, molecular y geoquímico. De esta forma se pueden ge-
nerar valores numéricos de ciclos biogeoquímicos con los que es
posible hacer análisis que integran la información de forma glo-
bal, y detectar así ambientes clave para el ciclaje de los elementos
esenciales para la vida en el planeta. Además, también se puede
analizar y dar seguimiento en la misma escala global a las vías
metabólicas de ciclos biogeoquímicos específicos. Por ejemplo,
en el caso particular del ciclo del carbono, estamos trabajando
con nuestro algoritmo para que sea capaz de detectar aquéllos
ambientes importantes en los que está ocurriendo la degrada-
ción de hidrocarburos o compuestos aromáticos tóxicos (como el
benceno nitrotolueno que contienen algunas gasolinas). De esta
forma es posible encontrar en qué ambientes del mundo existen
organismos potencialmente útiles para procesos como la biorre-
mediación, entre otras cosas.
Pero, ¿por qué estudiar el ciclo del azufre en una escala
global? y ¿por qué es necesario un algoritmo que detecte la im-
portancia del ciclo del azufre?
29
No. 16
Las propiedades fisicoquímicas del azufre complican su en-
tendimiento como ciclo biogeoquímico
El azufre es un elemento no metal que se encuentra en la sexta
familia de la tabla periódica, justo debajo del oxígeno. El azufre
tiene un número atómico de 16 (es decir, tienen 16 protones)
y una masa atómica de 32 (suma de protones y neutrones). En
cuanto a su configuración electrónica 1s22s22p63s23p4, tiene
seis electrones de valencia, los cuales son los responsables de la
interacción entre átomos, es decir, el número potencial de enlaces
con otros elementos químicos.
El azufre, a diferencia de los otros elementos que compo-
nen la vida en la tierra (CHONP), tiene ocho estados de oxida-
ción, lo cual indica que el azufre puede tomar diferentes “formas
químicas” que se pueden mover en la Tierra de manera abiótica y
biótica por diferentes grupos bacterianos que son muy divergen-
tes en términos evolutivos, ecológicos y metabólicos (las bacterias
que encontramos en los tapetes microbianos).
Dependiendo del enfoque con el que se estudie el ciclo
del azufre, se pueden estudiar sus transformaciones de manera
parcial o general. Por ejemplo, la Oceanografía y la Geología
sólo estudian los procesos meramente abióticos. Por otra parte,
desde la perspectiva de la Ecología Microbiana, estudiamos los
procesos y las relaciones entre los diferentes organismos que me-
tabolizan compuestos de azufre, y el ambiente donde se llevan
a cabo, involucrando tanto procesos bióticos como abióticos.
De esta forma, reuniendo la información de los enfoques de
Oceanografía, Geología y Ecología Microbiana, hoy sabemos
que el ciclo del azufre influye en la respiración de la materia
orgánica sedimentaria, el estado de oxidación de la atmósfera
y los océanos, y la composición del agua de mar. Lo anterior
está íntimamente relacionado con los otros ciclos biogeoquí-
micos (como por ejemplo el carbono). Sin embargo, debido a
que los diferentes compuestos de azufre son movilizados por
una gran cantidad de grupos bacterianos, el ciclo del azufre sólo
se estudia por partes. Es decir, existen grupos de investigación
que están enfocados en entender procesos, vías metabólicas y
grupos bacterianos específicos de cada parte del ciclo del azu-
fre. Por ejemplo, analizan la distribución de las bacterias sulfato
reductoras por medio de un solo gen. Por lo tanto, los intentos
por entender el ciclo del azufre, sólo han reconstruido peque-
ños fragmentos del rompecabezas. Debido a esto, existe poca
información acerca de los patrones de diversidad y distribución
de los microorganismos que llevan a cabo las reacciones redox
del ciclo del azufre, y por lo tanto se desconocen los factores
ambientales precisos que regulan su abundancia relativa. Au-
nado a esto, no hay evidencia directa del ciclaje activo a gran
escala de este elemento. Lo anterior resalta la importancia de
nuestro algoritmo que se apoya en la información de los ta-
petes microbianos, los cuales no sólo recapitulan la historia de
la vida en la Tierra, sino que también llevan a cabo todos sus
No. 16 Agosto 2016

ciclos biogeoquímicos. El utilizarlos como modelos de estudio
es esencial para entender la vida en el pasado, y también para
comprender la biogeoquímica del planeta actual, con ayuda de
técnicas actuales.
Como ya lo hemos mencionado, el azufre ha sido y es un
elemento esencial para la vida en el planeta. Lo encontramos en
los aminoácidos esenciales como la cisteína y la metionina, y
también en coenzimas y cofactores que se encuentran en todos
los seres vivos (biotina, la tiamina, la coenzima A, y los clusters
de hierro y azufre). Las proteínas que necesitan estos cofactores
son esenciales en una gran variedad de procesos metabólicos y
celulares fundamentales, como la fijación de carbono, la asi-
milación de lípidos y carbohidratos, la síntesis de pentosas, la
duplicación celular, la replicación del adn (ácido desoxirribo-
nucleico), la fotosíntesis, la respiración y la regulación génica.
Sin el átomo de azufre no se podrían llevar a cabo proce-
sos celulares indispensables para la vida en la Tierra, por lo que
Lo anterior nos hace preguntarnos ¿la vida podido evolucio-
nar en el universo si los valores de las constantes fundamentales
o las condiciones iniciales del Big Bang hubieran sido diferentes?,
¿qué consecuencias hubiera tenido en la Tierra si el orden de apa-
rición de los elementos en las estrellas hubiera sido diferente?, o ¿si
las propiedades de los elementos que conforman la vida en la Tie-
rra hubieran tenido un cambio menor en su termodinámica?, ¿qué
hubiera pasado con el metabolismo y la evolución de la vida en la
Tierra?. Quizás nunca lo sabremos, pero nada nos cuesta imaginar.
Valerie de Anda. Es Bióloga por la Facultad de Ciencias de la unam.
Realizó su tesis de investigación en el Instituto de Biotecnología de la
unam sobre la evolución dirigida de proteínas recombinantes. Actual-
mente imparte clases de microbiología en la Facultad de Ciencias
unam, y estudia el doctorado en el Instituto de Ecología de la unam.

su importancia no sólo radica como un elemento fundamental
en la biogeoquímica del planeta, sino también como un ele-
mento clave para mantener funcionando la maquinaria celular
de eucariontes y procariontes.
Valeria Souza. Es investigadora del Laboratorio de Evolución Mole-
cular y Experimental del Departamento de Ecología Evolutiva. Estu-
dia la ecología evolutiva de los microorganismos. Su trabajo ha sido
reconocido con diversos premios nacionales.

Para saber más

•• De Anda Torres V., C. Poot-Hernandez, I. Contreras-Moreira, L. Eguiarte y V. Souza. Enviado a Environmental Microbiology.
A new multigenomic approach for the study of biogeochemical cycles at global scale: the complete molecular reconstruction of the
sulfur cycle.
•• Nikolaki S, Tsiamis G. 2013 Microbial diversity in the era of omic technologies. Biomed Res Int. 2013;2013:958719. doi:
10.1155/2013/958719. Epub 2013 Oct 24. Review. PubMed PMID: 24260747; PubMed Central PMCID: PMC3821902.
•• Olson, K.R. y K.D. Straub. 2016. The Role of Hydrogen Sulfide in Evolution and the Evolution of Hydrogen Sulfide in Me-
tabolism and Signaling. Physiology (Bethesda). 31: 60-72. doi: 10.1152/physiol.00024.2015. Review. PubMed PMID: 26674552.

30
La aplicación de enzimas microbianas en el tratamiento de aguas residuales industriales

La introducción y aplicación de normas estrictas para la descarga de residuos en el medio ambiente

ha hecho necesario para el desarrollo de los procesos de tratamiento de residuos alternativos. Un
gran número de enzimas de diversos microbios se han notificado a desempeñar un papel crucial en
aplicaciones de tratamiento de aguas residuales. Las enzimas pueden actuar específicamente en y
eliminar los contaminantes recalcitrantes por precipitación y transformación en otros productos y
también pueden cambiar las características de un residuo dado por lo que es más susceptible al
tratamiento o ayuda en la conversión de material de desecho a productos de valor añadido.
Inmovilización aumenta la estabilidad mecánica y térmica de las enzimas, mientras que la
disminución de la probabilidad de la lixiviación de la enzima en la solución. peroxidasa de rábano
picante inmovilizados covalentemente sobre perlas magnéticas retenidas una alta actividad y la
estabilidad y realizan conversiones de fenol más altas. contaminantes recalcitrantes en las aguas
residuales también pueden ser tratados mediante el uso de nanotubos que llevan enzimas oxidativas
como las lacasas y peroxidasas. Inmovilización de glucosa oxidasa y cloroperoxidasa en nanotubos
de carbono mantiene su funcionalidad y una mayor eficiencia de conversión de sustrato. Muchas
nuevas aplicaciones para sus actividades catalíticas se sugieren a través de una comprensión
adecuada de enzimas y su significado funcional. El uso de enzimas en lugar de reacciones químicas
nocivas es extremadamente importante para satisfacer las demandas de más limpia y tecnologías
más ecológicas para preservar el planeta. contaminantes recalcitrantes en las aguas residuales
también pueden ser tratados mediante el uso de nanotubos que llevan enzimas oxidativas como las
lacasas y peroxidasas. Inmovilización de glucosa oxidasa y cloroperoxidasa en nanotubos de
carbono mantiene su funcionalidad y una mayor eficiencia de conversión de sustrato. Muchas
nuevas aplicaciones para sus actividades catalíticas se sugieren a través de una comprensión
adecuada de enzimas y su significado funcional. El uso de enzimas en lugar de reacciones químicas
nocivas es extremadamente importante para satisfacer las demandas de más limpia y tecnologías
más ecológicas para preservar el planeta. contaminantes recalcitrantes en las aguas residuales
también pueden ser tratados mediante el uso de nanotubos que llevan enzimas oxidativas como las
lacasas y peroxidasas. Inmovilización de glucosa oxidasa y cloroperoxidasa en nanotubos de
carbono mantiene su funcionalidad y una mayor eficiencia de conversión de sustrato. Muchas
nuevas aplicaciones para sus actividades catalíticas se sugieren a través de una comprensión
adecuada de enzimas y su significado funcional. El uso de enzimas en lugar de reacciones químicas
nocivas es extremadamente importante para satisfacer las demandas de más limpia y tecnologías
más ecológicas para preservar el planeta. Muchas nuevas aplicaciones para sus actividades
catalíticas se sugieren a través de una comprensión adecuada de enzimas y su significado funcional.
El uso de enzimas en lugar de reacciones químicas nocivas es extremadamente importante para
satisfacer las demandas de más limpia y tecnologías más ecológicas para preservar el planeta.
Muchas nuevas aplicaciones para sus actividades catalíticas se sugieren a través de una
comprensión adecuada de enzimas y su significado funcional. El uso de enzimas en lugar de
reacciones químicas nocivas es extremadamente importante para satisfacer las demandas de más
limpia y tecnologías más ecológicas para preservar el planeta.

Introducción
Las enzimas son biocatalizadores producidos por las células vivas para causar reacciones
bioquímicas específicas formando generalmente los diversos procesos metabólicos de las células y
son indispensables para el mantenimiento y la actividad de la vida. Las enzimas son altamente
específicos en su acción sobre substratos y, a menudo se requieren muchas enzimas diferentes para
llevar a cabo la secuencia de reacciones metabólicas realizadas por las células vivas. Cada cepa de
un microorganismo produce un gran número de enzimas que pueden hidrolizar, oxidante o reductor
y metabólicos en la naturaleza. enzimas microbianas se sabe que juegan un papel crucial como

1
catalizadores metabólicos, lo que resulta en su uso en diversas aplicaciones industriales. El mercado
de uso final para las enzimas industriales está muy extendido de amplio con numerosas aplicaciones
comerciales industriales [1]. Los microbios han servido y seguirá sirviendo como una de las fuentes
más grandes y útiles de muchas enzimas [2]. Muchos procesos industriales tienen varias desventajas
como la baja eficiencia catalítica, la falta de especificidad enantiomérica para la síntesis quiral,
requisito de alta temperatura, bajo pH y alta presión. También, el uso de disolventes orgánicos
conduce a residuos orgánicos y los contaminantes. Las enzimas son más útiles para estas
aplicaciones, ya que trabajar en condiciones suaves de reacción (por ejemplo, temperatura, pH,
condiciones atmosféricas), no necesitan protección de los grupos funcionales del sustrato, tienen
una vida media larga, un alto estéreo-selectividad dando estereo- y región de los productos de
reacción química definida en una aceleración de 105 a 108 veces, y, además, que trabajan sobre
sustratos no naturales [3]. Además, enzimas se pueden seleccionar genéticamente y químicamente
modificados con el fin de mejorar sus propiedades clave: estabilidad, especificidad de sustrato y la
actividad específica. En el caso del océano y calidad de los ríos, la contaminación es causada
principalmente por la descarga de aguas residuales tratadas inadecuadamente industriales y
municipales.

En la descarga inicial, estas aguas residuales pueden contener altos niveles de contaminantes
inorgánicos que pueden ser biodegradados fácilmente, pero cuya carga de impacto sobre los
ecosistemas, ya sea en sólidos suspendidos totales (SST), Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO),
o Demanda Química de Oxígeno (COD) , puede estar en las decenas de miles mg / L [4]. Para
combatir esta carga cada vez mayor en nuestro medio ambiente acuático, la regulación cada vez
más estrictas en la descarga de la contaminación está siendo implementado por diversos organismos
gubernamentales, con el foco principalmente en la reducción de residuos. El cumplimiento de las
legislaciones ambientales no deben plomo necesaria para la creación de los costes adicionales, sino
que puede proporcionar una fuente secundaria de ingresos.

Las características de las aguas residuales pueden diferir considerablemente tanto dentro como entre
las industrias. En el tratamiento de aguas residuales, tratamiento biológico parece ser una tecnología
prometedora para alcanzar ingresos de Certificados de Reducción de Emisiones (RCE), más
comúnmente conocidos como créditos de carbono, que se genera gas metano a partir de la digestión
anaerobia y puede ser utilizada como energía renovable. Con el análisis apropiado y control
ambiental, casi todas las aguas residuales que contienen componentes biodegradables con una
relación BOD / COD de 0,5 o mayor pueden ser tratados fácilmente por medios biológicos [5].

En comparación con otros métodos de tratamiento de aguas residuales, sino que también tiene las
ventajas de reducir los costos de tratamiento con ninguna contaminación secundaria [6]. Ambos
procesos aeróbicos y anaeróbicos se pueden utilizar; el primero consiste en microorganismos
(aerobios) que utilizan oxígeno libre o disuelto y convierten los residuos orgánicos a la biomasa y
CO2 mientras que en los últimos residuos orgánicos complejos son degradados en metano, CO2 y
H2O a través de tres pasos básicos (hidrólisis, acidogénesis incluyendo acetogénesis y
metanogénesis) en la ausencia de oxígeno.

procesos biológicos aerobios se utilizan comúnmente en el tratamiento de las aguas residuales

orgánicas para lograr un alto grado de eficiencia del tratamiento, mientras que en el tratamiento
anaerobio, un considerable progreso se ha logrado en la biotecnología anaeróbica para el
tratamiento de residuos basado en el concepto de la recuperación y utilización de recursos sin dejar
de lograr el objetivo de control de la contaminación [7].

La mayoría de los procesos de tratamiento de residuos se pueden clasificar como cualquiera de los
procesos biológicos físico-química o. El tratamiento enzimático se encuentra entre estas dos

2
categorías convencionales ya que implica procesos químicos basados en la acción de catalizadores
biológicos.

Las ventajas potenciales de tratamiento enzimático en comparación con el tratamiento convencional

incluyen: aplicación a compuestos biorecalcitrantes; el funcionamiento a altas y bajas
concentraciones de contaminantes; funcionamiento en un amplio intervalo de pH, temperatura y
salinidad; ausencia de efectos de carga de choque; ausencia de retrasos asociados con la
aclimatación de la biomasa; reducción en el volumen de lodos y la facilidad y sencillez de controlar
el proceso [8].

Tipos de enzimas microbianas oxidorreductasas microbianos

La destoxificación de compuestos orgánicos tóxicos por varias bacterias y hongos [9] y plantas
superiores [10] a través de acoplamiento oxidativo está mediada con oxidorreductasas.

oxigenasas microbianas

Oxigenasas pertenecen al grupo oxidorreductasa de enzimas y participa en la oxidación de sustratos

reducidos mediante la transferencia de oxígeno del oxígeno molecular (O2) utilizando FAD /
NADH / NADPH como co-sustrato. Estas enzimas tienen un papel importante en el metabolismo de
compuestos orgánicos, ya que aumentan su reactividad o la solubilidad en agua o provocar la
escisión de los anillos aromáticos. Oxigenasas también median las reacciones de deshalogenación
de metanos halogenados, etanos y etilenos en asociación con enzimas multifuncionales [11].

monooxigenasas

Estas enzimas catalizan reacciones de oxidación de sustratos a partir de alcanos a las moléculas
complejas como los esteroides y los ácidos grasos y sólo requieren oxígeno molecular para su
actividad. Estas enzimas requieren oxígeno molecular única para sus actividades y utilizan el
sustrato como agente de [12] reductor. La desulfuración, deshalogenación, desnitrificación,
amonificación, hidroxilación, biotransformación, y la biodegradación de varios compuestos
aromáticos y alifáticos son catalizadas por monooxigenasas.

dioxigenasas microbianas

Estos dioxigenasas catalizan enantio específicamente la oxigenación de amplia gama de sustratos.

Los compuestos aromáticos se oxidan principalmente por dioxigenasas, lo que refleja las
aplicaciones de dioxigenasas en la remediación ambiental. Los dioxigenasas catecol se encuentran
en las bacterias del suelo y participan en la transformación de los precursores aromáticos en
productos alifáticos.

lacasas microbianas

Las lacasas (p-difenol: dioxígenooxidorreductasa) constituyen una familia de oxidasas multicobre

producidos por ciertas plantas, hongos, insectos y bacterias, que catalizan la oxidación de una
amplia gama de sustratos aromáticos con reducción concomitante de oxígeno molecular a agua [12]
reducida fenólica y. Muchos microorganismos producen intra y extracelulares lacasas capaces de
catalizar la oxidación de orto y paradiphenols, aminofenoles,polifenoles, poliaminas, ligninas, y
diaminas de arilo, así como algunos iones inorgánicos [13].

peroxidasas microbianas

3
Estas enzimas catalizan la oxidación de compuestos fenólicos de la lignina y otros a expensas de
peróxido de hidrógeno (H2O2) en presencia de un mediador. Debido a su alto potencial de degradar
sustancias tóxicas en la naturaleza, la peroxidasa de lignina (LIP) y peroxidasa de manganeso-
dependiente (MNP) se han estudiado más.

lipasas microbianas

Estas enzimas pueden catalizar diversas reacciones tales como hidrólisis, interesterificación,
esterificación, alcoholisis y aminolisis [14]. Además de su uso diagnóstico en la biorremediación,
lipasa tiene muchas aplicaciones potenciales en los alimentos, química, fabricación de detergente,
cosmético, y las industrias de fabricación de papel, pero su costo de producción ha restringido su
uso industrial [15].

celulasas microbianas

Durante la hidrólisis enzimática, la celulosa se degrada por las celulasas de azúcares reductores que
pueden ser fermentados por levaduras o bacterias a etanol [16]. Las celulasas causar la eliminación
de microfibrillas de celulosa, que se forman durante el lavado y el uso de los paños basados en
algodón. En industria del papel y pulpa, celulasas se utilizan para la eliminación de la tinta durante
el reciclado de papel.

Las proteasas microbianas

Las proteasas pertenecen al grupo de enzimas que hidrolizan enlaces peptídicos en el ambiente
acuoso y sintetizarlos en entorno no acuoso. Las proteasas tienen una amplia gama de aplicaciones
en alimentos, cuero, detergente, y la industria farmacéutica [17] (Tabla 2).

Industrias y contaminantes

Los compuestos aromáticos, incluidos fenoles y aminas aromáticas, comprenden una de las clases
principales de contaminantes y se regulan estrictamente en muchos países. Se encuentran en las
aguas residuales de una amplia variedad de industrias, incluyendo la conversión de carbón, refino
de petróleo, resinas y plásticos, conservación de la madera, recubrimiento de metales, colorantes y
otros productos químicos, textiles, minería y vestirse, y pulpa y papel [18]. El proceso Kraft que se
utiliza ampliamente en la fabricación de pasta de madera hojas de 5-8% (w / w) de lignina
modificada residual en la pulpa. Esta residual es responsable del color marrón característico de la
pulpa y se elimina comercialmente por el uso de agentes de blanqueo tales como el cloro y cloro
óxidos de [19].

operaciones de blanqueo producen efluentes de color marrón oscuro, que contienen productos
clorados tóxicos y mutagénicos que constituyen un peligro ambiental [20]. Ha habido un número de
estudios, incluyendo el uso de peroxidasas y lacasas para el tratamiento de efluentes de blanqueo.

Pesticidas, que incluyen herbicidas, insecticidas y fungicidas, son ampliamente utilizados en todo el
mundo hoy en día para la protección de cultivos y se espera que este uso seguirá creciendo [21].
Los efectos adversos potenciales que la industria de los plaguicidas puede tener en el medio
ambiente surgen de la eliminación de los desechos formados durante la producción y la formulación
de los plaguicidas, la desintoxicación de los envases de plaguicidas y los tanques de pulverización,
y la contaminación de las aguas superficiales y subterráneas por escurrimiento de plaguicidas [22].
Se estima que 3 millones de toneladas de cianuro se usan anualmente en todo el mundo en

4
diferentes procesos industriales, incluyendo la producción de productos químicos intermedios,
fibras sintéticas, goma y productos farmacéuticos, así como en la lixiviación de minerales,
procesamiento de carbón y de las planchas de metal.
Las enzimas podrían ser utilizados para disminuir los desechos de alimentos a través de
procesamiento enzimático para producir de mayor valor de los subproductos y para ayudar en la
limpieza de los flujos de residuos de alimentos [23]. Durante la última década, ha habido un interés
creciente en la hidrólisis enzimática de la celulosa [24]. Este interés se debe a las ventajas que tal
proceso podría ofrecer, a saber, la conversión de residuos lignocelulósicos y celulósicos a una
fuente de energía útil a través de la producción de azúcares, etanol, biogás o de otros productos
finales energético [25].
Los metales pesados tales como arsénico, cobre, cadmio, plomo y cromo entre otros, son
contaminantes peligrosos que se encuentran en un número de corrientes de desechos industriales y
de minería, así como en residuos sólidos, lodos de aguas residuales municipales y lixiviados de
vertedero [26] (Tabla 1). Tensioactivos o agentes de superficie activa son sustancias orgánicas que
tienen más bien grandes moléculas polares y son ingredientes básicos de detergentes [27]. Los
tensioactivos pueden causar problemas significativos de contaminación cuando las altas
concentraciones de las fábricas de formulación de champú, por ejemplo, entran en los sistemas de
alcantarillado municipales y generar condiciones no deseables tales como la formación de espuma
[28]. Las aguas residuales de las industrias lácteas [29] y los mataderos [30] son a menudo ricos en
moléculas orgánicas biodegradables y nutrientes y contienen altos niveles de grasas y proteínas que
tienen un coeficiente de biodegradabilidad baja. Algunos colorantes son polímeros altamente
estructurados y son muy difíciles de descomponer. Muchos de los colorantes son cancerígenos,
mutagénicos y perjudicial para el medio ambiente. industrias de procesamiento de cuero son
también una enorme fuente de residuos que incluyen residuos de cueros sin curtir / pieles (recortes,
desechos descarnado), residuos de cuero curtido (Afeitado residuos, polvo), residuos de teñido y
acabado de cuero (recortes de cuero) [31 ], tolueno y benceno.

Tabla 1 Los principales contaminantes en las aguas residuales

Contaminantes: Motivo de Importancia
Los sólidos en suspensión: puede llevar a la formación de depósitos de lodos y condiciones
anaerobias cuando las aguas residuales sin tratar se descarga al medio ambiente acuático.
orgánicos biodegradables: se elaboran principalmente de proteínas, carbohidratos y grasas. Se
miden comúnmente en términos de DBO y DQO. Si se descargan en los ríos interiores, arroyos o
lagos, su estabilización biológica puede agotar los recursos naturales de oxígeno y causar
condiciones sépticas que son perjudiciales para las especies acuáticas.
Los organismos patógenos: se encuentra en las aguas residuales pueden causar enfermedades
infecciosas.
contaminantes prioritarios: Incluyendo compuestos orgánicos e inorgánicos, pueden ser altamente
tóxicos, carcinógenos, mutágenos o teratogénico.
orgánicos refractarios: que tienden a resistir el tratamiento convencional de aguas residuales
incluyen tensioactivos, fenoles y pesticidas agrícolas
Metales pesados: Por lo general, agregado de las actividades comerciales e industriales deben ser
retirados para su reutilización de las aguas residuales
constituyentes inorgánicos disueltos: tales como calcio, sodio y sulfato se agregan a menudo
inicialmente a los suministros de agua domésticos, y pueden tener que ser eliminado debido a la
reutilización del agua residuales.

Tabla 2 enzimas microbianas y aplicaciones

Enzimas: APLICACIONES
Alkylsulfatase: degradación de tensioactivo [32]
Amilasa: a-amilasa, glucoamilasa: hidrólisis de almidón y producción de la glucosa [33]

5
Las enzimas celulolíticas: celulasa, celobiasa Cellobio-hidrolasa, Exo-1,4-BD-glucosidas: hidrólisis
de lodos celulósicas de pulpa y papel para producir azúcares y alcohol, la hidrólisis de la celulosa en
los residuos sólidos municipales para azúcares y otras fuentes de energía [34]
Quitinasa: bioconversión de mariscos residuos a N-acetil
glucosamina [35]
Cloro-peroxidasa: La oxidación de compuestos fenólicos [36]
Cyanidase: descomposición Cyanide [37]
El cianuro hidratasa: hidrólisis Cyanide [38]
L-Galactono-lactona oxidasa: Conversión de galactosa de la hidrólisis de suero de leche al ácido L-
ascórbico.
lacasa : Remoción de fenoles, decoloración de los efluentes de blanqueo Kraft, la unión
de fenoles y aminas aromáticas con humus [40]
Lactasas: Dairy estabaprocesamiento de te y la producción de productos de valor añadido [41]
lignina peroxidasa: La eliminación de fenoles y compuestos aromáticos, decoloración de los
efluentes de blanqueo Kraft [42]
Lipasa: Mejora de la deshidratación de lodos [43]
Lisozima: Mejora de la deshidratación de lodos [44]
Mn-peroxidasa: La oxidación de fenoles monoaromáticos y colorantes aromáticos [45]
Paratión hidrolasa: hidrolización de los plaguicidas organofosforados [46]
La pectina liasa: Pectina degradación [47]
Peroxidasa: La eliminación de fenoles y aminas aromáticas, decoloración de los efluentes de
blanqueo Kraft, deshidratación de lodos [48]
Fosfatasa: La eliminación de metales pesados [49]
Las proteasas: La solubilización de pez y carne La mejora de restos de lodos
deshidratación [50]
La tirosinasa: La eliminación de fenoles [51]

Las tecnologías utilizadas para el tratamiento enzimático de las aguas residuales

La conformación de las enzimas decide principalmente su funcionalidad. La conformación puede

cambiar bajo condiciones físicas y químicas severas de temperatura, pH y fuerza iónica alterando
así la función de las enzimas. Tales condiciones drásticas se encuentran a menudo en las corrientes
de efluentes. método de inmovilización reduce la pérdida de enzimas aumentando su reutilización y
también minimiza las posibilidades de pérdida de actividad enzimática en condiciones muy duras.
El uso de enzimas inmovilizadas en el tratamiento de efluentes, en comparación con los enzimas
libres, los resultados en múltiples ventajas como el aumento de la estabilidad, la reutilización, la
facilidad de manejo, la reducción de costes de funcionamiento. peroxidasa de rábano picante
inmovilizados covalentemente sobre perlas magnéticas retenidas una alta actividad y la estabilidad
y realizan conversiones de fenol más altas. lacasa fúngica inmovilizó usando pastillas de óxido-
aluminio gamma, se ha informado para decolorar soluciones de colorantes azoicos. Introducción de
células o tejidos que producen una enzima en el efluente es directamente uno de los método más
simple de administración de la enzima para apuntar efluente. se emplea este método cuando se
utilizan cepas acondicionada de microorganismos para cooperar a metabolizar los contaminantes
diana.

Los cultivos de la Staphylococcus arlettae se muestran para decolorar soluciones de cuatro

colorantes azoicos (CI Reactive Yellow 107, CI Reactive Red 198, CI Reactive Negro 5 y CI Direct
Blue 71) en un proceso secuencial microaerophilic / aireado y la decoloración media obtenida fue
del 97% [52]. En casos donde el efluente a tratar contiene contaminantes que no puede apoyar el
crecimiento, enzimas libres o aisladas de células se prefieren para el uso sobre microorganismo
intacto.

6
La nanotecnología es otra área que está ganando importancia en el tratamiento de aguas residuales.
El uso de nanopartículas en Reactive Remediation Technology es de gran interés para el tratamiento
de aguas residuales, ya que implica la degradación completa de los contaminantes a productos
inocuos tales como dióxido de carbono y agua [53]. La remediación de aguas residuales
contaminadas se puede lograr mediante el uso de una combinación de la tecnología de enzimas y la
nanotecnología conocido como el SEN, es decir, sola enzima de nanopartículas [54]. A SEN puede
ser descrita como una enzima cubierto por unos pocos nanómetros de protección jaula de espesor.
libre de células extractos crudos o formas purificadas de enzimas como peroxidasas, polifenol
oxidasas, deshalogenasas, hidrolasas se pueden utilizar para la síntesis de SEN. Una variedad de
compuestos recalcitrantes tales como fenoles, colorantes poliaromáticos, los pesticidas pueden ser
degradados por estas enzimas. Similar,
biorreactores de membrana constituyen una interesante posibilidad para ser aplicado en el
tratamiento de aguas residuales. La combinación de la tecnología de membrana con reactores
enzimáticos para tratamiento de aguas residuales ha llevado al desarrollo de tres sistemas genéricos:
reactor de membrana enzimática inmovilizada (IEMR), biorreactor de membrana extractivas (EMB)
y el reactor de membrana de contacto directo (DCMR). En ambos sistemas, IEMR y EMB, el uso
de biorreactores de fibra hueca o reactores de membrana capilar aumenta considerablemente la
relación de volumen de área de superficie y, por lo tanto, la capacidad de tratamiento del sistema
[55].

Ventajas de tratamiento enzimático sobre otras técnicas

La aplicación continua expansión de las enzimas es la creación de una demanda creciente de

biocatalizadores que exhiben mejorado o nuevas propiedades [56]. Al actuar específicamente en
ciertos contaminantes recalcitrantes, las enzimas pueden eliminarlos por precipitación o
transformación en otros productos. Biológicos procesos (enzimáticos) tienen una ventaja añadida
sobre los métodos tradicionales químicas / físicas ya que son considerados como limpio y verde
[57] .Los diversos tratamientos físico-químicos como la precipitación química, la coagulación,
floculación, flotación, la membrana de la oferta filtración ventajas como facilidad de operación y
control, flexibilidad de cambio de temperatura y son rápido pero sus beneficios, sin embargo, se ven
compensados por una serie de inconvenientes tales como sus altos costos de operación debido a los
productos químicos utilizados, alto consumo de energía y de manipulación de los costes para la
eliminación de lodos [58]. políticas gubernamentales estrictas con respecto a los niveles permitidos
de contaminantes, los altos costos de los tratamientos químicos especializados para la eliminación
de contaminantes y el hecho de que algunos de estos tratamientos generan residuos sólidos
adicional ha conducido al desarrollo de muchos métodos biológicos simples eficaces, todavía. Las
enzimas son altamente específicos y catalizadores extremadamente eficientes [59]. Ellos pueden
degradar selectivamente un contaminante objetivo sin afectar a los otros componentes en el
efluente. Más importante, pueden operar bajo condiciones de reacción suaves, especialmente
temperatura y pH. En este sentido, las enzimas superan a los catalizadores regulares (elementos de
transición como Cu, Ni, etc.). altos costos de los tratamientos químicos especializados para la
eliminación de contaminantes y el hecho de que algunos de estos tratamientos crear residuos sólidos
adicional ha conducido al desarrollo de muchos métodos biológicos simples eficaces, todavía. Las
enzimas son altamente específicos y catalizadores extremadamente eficientes [59]. Ellos pueden
degradar selectivamente un contaminante objetivo sin afectar a los otros componentes en el
efluente. Más importante, pueden operar bajo condiciones de reacción suaves, especialmente
temperatura y pH. En este sentido, las enzimas superan a los catalizadores regulares (elementos de
transición como Cu, Ni, etc.). altos costos de los tratamientos químicos especializados para la
eliminación de contaminantes y el hecho de que algunos de estos tratamientos crear residuos sólidos
adicional ha conducido al desarrollo de muchos métodos biológicos simples eficaces, todavía. Las

7
enzimas son altamente específicos y catalizadores extremadamente eficientes [59]. Ellos pueden
degradar selectivamente un contaminante objetivo sin afectar a los otros componentes en el
efluente. Más importante, pueden operar bajo condiciones de reacción suaves, especialmente
temperatura y pH. En este sentido, las enzimas superan a los catalizadores regulares (elementos de
transición como Cu, Ni, etc.). que pueden operar bajo condiciones de reacción suaves,
especialmente temperatura y pH. En este sentido, las enzimas superan a los catalizadores regulares
(elementos de transición como Cu, Ni, etc.). que pueden operar bajo condiciones de reacción
suaves, especialmente temperatura y pH. En este sentido, las enzimas superan a los catalizadores
regulares (elementos de transición como Cu, Ni, etc.).

Desde la perspectiva del medio ambiente, las enzimas son más aceptable debido a su
biodegradabilidad [60]. En el caso de reacciones en las que el contaminante objetivo se oxida, la
enzima recibe uno o más electrones desde el sustrato y dona estos electrones a un aceptor de
electrones. Por lo tanto, al final de la reacción la enzima se regenera y está disponible para el
próximo ciclo catalítico. El origen biológico de las enzimas reduce su impacto adverso sobre el
medio ambiente haciendo así tratamiento de aguas residuales enzimática una técnica
ecológicamente sostenible.

escenario actual

participación de la India en el mercado mundial de enzimas industriales se estima en alrededor de

US $ 3.387,30 millones. El segmento es en gran parte orientada a la exportación, incluidas US
(participación global del 40%), Europa (global cuota de 25%), China (cuota mundial del 20%)
como los principales mercados de exportación. Los recientes desarrollos en las áreas de ingeniería
de proteínas y evolución dirigida han proporcionado herramientas para el desarrollo de nuevas
enzimas con propiedades mejoradas y aplicaciones técnicas.

El uso de enzimas como las amilasas y celulasas en lugar de tratamientos químicos en diversas
industrias ha dado lugar a la reducción de descarga de residuos químicos en el medio ambiente.
Nuevos procesos enzimáticos se están desarrollando tienen el potencial de reemplazar totalmente el
uso de productos químicos en diferentes industrias. El uso de enzimas como xilanasa ha mejorado la
eficacia de blanqueo reduciendo así el consumo de cloro. Inmovilización aumenta la estabilidad
mecánica y térmica de las enzimas que disminuye la probabilidad de la lixiviación de la enzima en
la solución. La investigación y desarrollo se centra actualmente en impartir propiedades deseables,
el desarrollo de sistemas microbianos y otras proteínas heterólogas a través de la clonación de
genes, más de expresión y de la ingeniería de enzimas. Algunos de los programas en curso sobre
enzimas incluyen la ingeniería de una fitasa termo-tolerantes [61],

Perspectivas de futuro

Las tendencias futuras pueden implicar el desarrollo de sistemas más eficaces que emplean menores
cantidades de productos químicos, menos agua y menos energía para alcanzar el máximo
rendimiento. El uso de técnicas de la biotecnología moderna dará lugar a sistemas de enzimas con
efectos mejorados en diversas condiciones fisiológicas de temperatura y pH que resulta en una
mayor eficacia con menor consumo de energía y costos más bajos.

la inmovilización de la enzima es un área de investigación activa donde los recientes avances en el

diseño de soporte de inmovilización han permitido un control más preciso de la inmovilización de
enzimas [64]. Muchas investigaciones futuras usarán combinaciones de enzimas diseñadas por
ingeniería y de novo, junto con la química para generar más (y más probables nuevos) productos
químicos y materiales de los recursos más baratos (y renovables), que por lo tanto contribuirán a

8
establecer una economía de base biológica y lograr una baja crecimiento verde de carbono [65].

Los microorganismos proporcionan una enorme cantidad de catalizadores con una amplia gama de
aplicaciones en diversas industrias, tales como alimentos, textiles, cuero, productos farmacéuticos y
muchos más. En el tratamiento de aguas residuales, las enzimas pueden ser utilizados para
desarrollar procesos de remediación que son ambientalmente menos peligrosos que las técnicas
convencionales. Su naturaleza versátil y la eficacia incluso en condiciones de reacción suaves les da
una ventaja sobre los métodos de tratamiento físico-químicas convencionales.

Las enzimas pueden actuar sobre los contaminantes recalcitrantes específicos para eliminarlos o
transformarlos a otros productos menos nocivos. Las características de un residuo dado también
pueden ser modificados por enzimas dejar los desechos más susceptible al tratamiento o ayuda en
bio conversión de material de desecho a productos de valor añadido.

9
CT 3 (2011) 173-186

Bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno

Sergio Calvo García1

Universidad de Salamanca
sergiocalvo@usal.es

SUMARIO
Algunas plantas establecen simbiosis con bacterias fijadoras de nitrógeno. Esta sim-
biosis proporciona beneficios durante la vida en común a ambos simbiontes. Las bacterias
pueden aprovechar directamente el nitrógeno del aire, originando compuestos absorbibles
y susceptibles de incorporarse a la composición del suelo o de los seres vivos. Dicha fija-
ción de nitrógeno se realiza en los nódulos radiculares, gracias a la catálisis del complejo
enzimático nitrogenasa.
Palabras clave: bacterias fijadoras de nitrógeno, simbiosis, nódulos radiculares, com-
plejo enzimático nitrogenasa.

SUMMARY
Some plants establish symbiosis with nitrogen-fixing bacteria. This symbiosis pro-
vides benefits throughout both symbionts’ life in common. Bacteria can take the nitrogen
directly from air, resulting absorbable compounds and capable of joining the soil or living
being composition. This nitrogen fixing takes place in root nodules, through the enzyme
complex nitrogenase catalysis.
Keywords: nitrogen-fixing bacteria, symbiosis, root nodules, enzyme complex nitro-
genase.

1 Sergio Calvo García es estudiante de segundo de Grado en Biología en la Universidad de

Salamanca.
174 Sergio Calvo García

1. INTRODUCCIÓN

Comencemos apuntando las características generales del nitrógeno: masa

atómica, 14,008; número atómico, 7; densidad, 1,2506; punto de ebullición, -195,8
ºC; punto de fusión,-209,86 ºC; símbolo N2.
El nitrógeno es un elemento químico no metálico, que en condiciones norma-
les aparece como un gas diatómico, incoloro e inodoro. El nitrógeno molecular está
ampliamente distribuido en la naturaleza en forma sólida, disuelta y gaseosa. Pero
es en la atmósfera donde se encuentra el mayor potencial biológico de reserva de
nitrógeno. El nitrógeno que respiran los organismos no es utilizable directamente
y sólo algunas plantas en simbiosis con bacterias fijadoras de nitrógeno pueden
originar compuestos susceptibles de incorporarse al suelo o a los seres vivos, es
decir, que pueden originar compuestos aprovechables. Es aquí donde se evidencia
el papel vital que tienen dichas plantas para la vida y los seres vivos.
Gran parte de las moléculas biológicas están compuestas por nitrógeno. La
importancia de este elemento queda clara en las grandes cantidades de nitrógeno
demandadas para formar parte de las moléculas biológicas. Aparece de forma muy
abundante en la naturaleza, tanto libre como formando combinaciones; libre cons-
tituye 4/5 partes del aire en volumen, y combinado se encuentra en ácidos nuclei-
cos, aminoglúcidos, urea, poliaminas, vitaminas, nitratos, nitritos, proteínas de
todo tipo (tanto animales como vegetales), en los responsables de la disponibilidad
de la energía (adenosina trifosfato y guanosina trifosfato) y del potencial reductor
(NAD(P) y FAD)
La mayoría de los organismos son incapaces de metabolizar el nitrógeno, de
modo que tiene que ser transformado en compuestos absorbibles y metabolizables
por las plantas. Por lo tanto, la conversión de nitrógeno a formas susceptibles como
el amoniaco es esencial para el desarrollo de todos los organismos.
El crecimiento de todas las plantas está determinado de forma directa o indi-
recta por la disponibilidad de nutrientes minerales, en especial del nitrógeno. Una
vez cubiertas las necesidades de agua, el factor limitante más importante es el
nitrógeno. Una planta con deficiencia de nitrógeno sufriría clorosis, manifestando
una coloración amarillenta de tallos y hojas, falta de desarrollo y debilidad. Por
el contrario, cuando la planta tiene suficiente nitrógeno, sus hojas y tallos crecen
rápidamente. En agricultura el nitrógeno es el principal nutriente para el creci-
miento de las plantas y, así, en suelos carentes de nitrógeno los rendimientos de los
cultivos son bajos.

2 Cf. M. Javierre González (ed.), Gran Enciclopedia Universal, Vol. IX y XII, Madrid 2004,
383.
 Bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno 175

Los átomos de nitrógeno están en continuo movimiento; se desplazan len-

tamente entre el aire, la tierra, el agua y los organismos, vivos o muertos. A este
ininterrumpido ciclo cerrado se le conoce como ciclo del nitrógeno3. La estabilidad
del nitrógeno le dificulta la combinación con otros elementos y, por tanto, es difícil
de asimilar por los organismos y necesita una gran cantidad de energía para combi-
narlo con otros elementos. Las bacterias que viven libres en el suelo o en simbiosis
con plantas son esenciales para fijar el nitrógeno, tanto nitratos como amonio.
Estas bacterias toman directamente el nitrógeno del aire, originando compuestos
susceptibles de incorporarse a la composición del suelo o de los seres vivos. De
esta forma el nitrógeno atmosférico empieza el ciclo, al ser incorporado a la planta.
Los animales herbívoros continúan el ciclo; sintetizan sus proteínas a partir de los
herbívoros, mientras que los carnívoros las obtienen a partir de los herbívoros.
Posteriormente, mediante los excrementos o al descomponerse los cadáveres, el
nitrógeno vuelve al suelo. Los animales forman iones amonio, que tienen una
toxicidad elevada y deben ser eliminados (amoniaco, urea o ácido úrico). El ciclo
finaliza con la intervención de ciertas bacterias denominadas bacterias desnitrifi-
cantes. Estas bacterias devuelven gran cantidad del nitrógeno inorgánico del suelo
a la atmósfera.

2. FIJACIÓN ABIÓTICA O BIOLÓGICA DEL NITRÓGENO

La fijación del nitrógeno se define como la oxidación o reducción del nitró-

geno para dar amonio u óxidos. Consiste en la conversión del nitrógeno atmos-
férico a formas metabolizables, que puedan ser incorporadas por los seres vivos.
Estas formas son el ion amonio (NH4+) o los iones nitrito (NO2–) o nitrato (NO3–).
Otras sustancias como el dióxido de nitrógeno (NO2) reaccionan fácilmente para
originar algunas de las anteriores.
Existen dos tipos de fijación del nitrógeno: abiótica o biológica.
La fijación abiótica engloba aquellos procesos químicos espontáneos, en los
cuales se forman óxidos como consecuencia de la combustión de compuestos orgá-
nicos. Una forma de fijación abiótica se produce mediante descargas eléctricas, o
mediante la oxidación producida por los rayos, que forman óxidos de nitrógeno. El
ser humano también ha conseguido fijar el nitrógeno atmosférico de forma abió-
tica mediante el método de Haber- Bosch. En 1909 el químico alemán Fritz Haber
descubrió un método para la síntesis del amoniaco. Este método supuso un gran
avance para los alemanes y revolucionó la economía, ya que permitió obtener fer-
tilizantes baratos y explosivos. Fritz Haber jugó un papel importante en la Primera

3 Cf. F. Castillo Rodríguez, Biotecnología ambiental, Madrid 2005, 155.

176 Sergio Calvo García

Guerra Mundial, y gracias a su método Alemania no se quedó sin munición ni

alimentos. Durante este conflicto bélico, Haber desarrolló gases de fosgeno, cloro
o iperita, todos ellos venenosos. Su método consiste en la formación de dos molé-
culas de amoniaco combinando una molécula de nitrógeno y tres de hidrógeno.
La reacción se produce a una temperatura de 500 ºC y una presión de unas 200
atmósferas. Como fuente de hidrógeno se utiliza normalmente el metano (CH4)
del gas natural. Para que esta reacción se lleve a cabo se necesita la presencia de un
catalizador, que generalmente es níquel.

N2 + 3 H2 → 2 NH3

El segundo paso del método de Haber-Bosch es oxidar el amoniaco hasta

ácido nítrico (HNO3), que al combinarse de nuevo con amoniaco rinde nitrato
amónico. El nitrato amónico es el producto final y se utiliza como explosivo o
fertilizante.
Otro proceso abiótico de fijación de nitrógeno es la producción de cianamida.
La cianamida es empleada normalmente para elaborar cianuro y en ocasiones
como fertilizante. Este proceso se realiza haciendo pasar nitrógeno atmosférico
sobre cianuro de calcio caliente. Al igual que el método de Bosch, la elaboración
de cianamida también necesita la presencia de un catalizador4.
Por su parte, la fijación biológica de nitrógeno la realizan algunos organismos
que pueden aprovechar directamente el nitrógeno del aire a través de bacterias,
formando nódulos5. Los nódulos son unas estructuras radiculares resultantes de
la simbiosis entre la planta y la bacteria. Estas bacterias forman parte de la deno-
minada rizosfera, que es una zona de interacción única y dinámica entre raíces de
plantas y microorganismos del suelo. La comunidad de la rizosfera consiste en una
microbiota (bacterias, hongos y algas) y una microfauna (protozoos, nematodos,
insectos y ácaros). Las bacterias en simbiosis con una planta hospedante fijan el
nitrógeno del aire, es decir, originan compuestos solubles por las plantas, como
amoniaco. Con posterioridad, el amoniaco entra en la cadena alimenticia mediante
su incorporación a los aminoácidos y proteínas. El enlace que une los dos átomos
de nitrógeno tiene un alto coste energético de rotura. Para romper este triple enlace
son necesarias grandes cantidades de energía. La enzima nitrogenasa es la encar-
gada de romper dicho enlace, para lo cual necesita 16 moléculas de ATP por N2
reducido.

Reacción :N2+ 8H++ 8e−+ 16 ATP → 2NH3+ H2+ 16ADP + 16 Pi

4 Cf. N. J. Fraume Restrepo, Abecedario Ecológico. La más completa guía de términos

ambientales, Bogotá 2006, 147.
5 Cf. L. Taiz-E. Zeiger, Filosofía vegetal, Vol. I, Castellón de la Plana 2006, 121.
 Bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno 177

Algunas plantas establecen una relación estrecha y persistente con bacterias

fijadoras de nitrógeno. Esta simbiosis, que proporciona beneficios durante la vida
en común a ambos simbiontes, se realiza en nódulos radiculares, en los cuales el
nitrógeno atmosférico se fija y se proporciona a la planta en forma de compuestos
orgánicos nitrogenados. De esta simbiosis la planta obtiene nitrógeno y la bacteria
ácido málico en su forma ionizada (malato) y refugio. El malato es un compuesto
orgánico implicado en las principales rutas del metabolismo, como son el ciclo de
Krebs y en las reacciones anapleróticas de éste.

Simbiosis de Rhizobium Nódulo visto a través

con una leguminosa. de un microscopio.

3. BACTERIAS FIJADORAS DE NITRÓGENO

Dentro de las bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno encontramos dos

grupos de organismos. Al primer grupo pertenecen bacterias móviles del suelo,
que son atraídas hacia la raíz por compuestos que ésta libera. Pertenecen al grupo
de quimioorganotrofos aerobios. Se denominan Rizobios. A este grupo pertenecen
Rhizobium (nodulan en raíces de leguminosas de climas templados y subtropica-
les), Azorhizobium (nódulos en tallos y raíces) y Bradyrhizobium (nodula raíces de
soja). Existen otros formadores de nódulos de fijación dudosa de nitrógeno como
son: Phyllobacterium (forma nódulos en tallos y hojas de mirsináceas y rubiáceas)
y Agrobacterium6. El segundo grupo está formado por Actinomicetos (bacterias
Gram positivas) que nodulan raíces de muchos árboles y arbustos. Son aquellas
bacterias filamentosas que viven en simbiosis con plantas actinoricicas (angiosper-
mas capaces de formar nódulos) y son pertenecientes al género Frankia. No forma
micelio aéreo y sus esporas son inmóviles. Nodula los géneros Alnus, Myrca,

6 www.unavarra.es (19/4/2011)
178 Sergio Calvo García

Casuarina, etc. Esta nodulación es de gran importancia para plantas leñosas peren-
nes, porque aporta nitrógeno al suelo en zonas pobres o repobladas.
Entre las plantas simbiontes destacaremos las leguminosas (Fabáceas) por
su importante papel en la evolución humana, proporcionando alimento (lentejas,
alubias y guisantes), forraje para la nutrición de animales (trébol, arveja, alfalfa...),
obtención de madera (Acacia, Leucaena) o para colonizar suelos pobres faltos de
nutrientes (retama, tojo, escoba…).

4. NÓDULOS RADICULARES

La fijación biológica del nitrógeno se realiza en los nódulos radiculares7. Los

nódulos son el resultado de una perfecta relación de simbiosis entre la planta y las
bacterias. Cuando ambos entran en contacto se produce un cambio de diferencia-
ción en la bacteria. Ésta se modifica dando lugar a un bacteroide. El bacteroide
con posterioridad expresa su actividad nitrogenasa y gracias al complejo enzima
nitrogenasa va a ser capaz de fijar el nitrógeno. Un proceso en principio invasivo
por parte de la bacteria, se transforma en un proceso beneficioso para ambos sim-
biontes.
La formación del nódulo radicular es un proceso coordinado mediante una
serie de etapas, que implican señalización por parte de la planta y por parte del
microsimbionte. Una planta que demanda nitrógeno para satisfacer sus necesi-
dades, va a pasar por una serie de fases o etapas. La primera etapa consiste en un
proceso de reconocimiento celular por parte de la bacteria. La planta lanza señales,
principalmente quimioatractantes, como son los flavonoides8. La bacteria actúa
como receptor de estas señales y busca puntos de invasión en la raíz de la planta
emisora. La segunda etapa consiste en la infección de la planta, es decir, la bacteria
penetra en la raíz de la planta y forma un tubo de infección; ésta avanza por el tubo
de infección hasta llegar a la corteza de la raíz. La tercera y última etapa consiste
en el establecimiento del simbiosoma (simbiosis diatrofa).
El primer paso en el establecimiento de la simbiosis es la liberación de pro-
ductos fotosintéticos por parte de las plantas. Liberan materia orgánica como
carbohidratos, ácidos organicos, vitaminas, aminoácidos o compuestos fenólicos.
Dentro de los compuestos fenólicos se encuentran los flavonoides participando
como quimioatractantes. Cada planta exuda un grupo característico de flavonoides
que son detectados específicamente por los productos de los genes nodD de la
bacteria. Los flavonoides (o bioflavonoides), también conocidos como Vitamina

7 Cf. J. R. Peña, Cuaderno de Histología vegetal, Salamanca 2010, 167.

8 Cf. L. Taiz-E. Zeiger, Fisiología Vegetal, Vol. I, Castellón de la Plana 2006, 551.
 Bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno 179

P y citrina, son una clase de metabolitos secundarios de las plantas. Son sinteti-
zados a partir de una molécula de fenilalanina y 3 de malonil-CoA. La estructura
base presenta un esqueleto C6-C3-C6 y se cicla gracias a una enzima isomerasa.
Los flavonoides constituyen una familia muy diversa de compuestos, debido a las
modificaciones y adicción de grupos funcionales a su estructura base. Un ejemplo
de bioflavonoides son el eriodictiol y la apigenina-7-O-glucósido; estos inducen
la nodulación de la agrobacteria Rhizobium leguminosarum. También los dos bio-
flavonoides: daidzeina y genisteina son inductores de los genes de la nodulación
de varias cepas de Bradyrhizobium japonicum. La daidzeina se encuentra en exu-
dados de soja. Además de flavonoides la planta también exuda compuestos tales
como aminoácidos y ácidos dicarboxílicos, que actúan como atrayentes nutritivos.

Daidzeina. Genisteina.

A continuación, se produce un proceso de adhesión por parte del microsim-

bionte, es decir, de la bacteria. La planta libera en la zona de infección glico-
proteínas específicas como la ricadesina y las lectinas, con la finalidad de atraer
al microsimbionte. Éste se acerca a la zona de infección de la raíz y libera un
compuesto lipopolisacarídico denominado factor NOD. El factor NOD induce una
serie de deformaciones en los pelos radiculares. Acto seguido, la planta dispara la
expresión de ciertas proteínas que facilitan en el microsimbionte la expresión de
genes de fijación, también denominados genes FIX. Estos genes provocan que el
microsimbionte sea capaz de reconocer las regiones de la planta donde se puede
incorporar. Es en este momento cuando la bacteria penetra en el pelo radicular.
Para que la bacteria colonice el pelo radicular, éste tiene que perder la pared celu-
lar y producirse una invaginación en la membrana celular del microsimbionte.

5. TUBO DE INFECCIÓN

Como respuesta a la infección del microsimbionte, la planta forma el llamado

hilo o tubo de infección9. El tubo de infección es un depósito de pared celular que

9 Cf. J. R. Peña, Cuaderno de Histología vegetal, Salamanca 2010, 167.

180 Sergio Calvo García

la planta deposita alrededor de la lesión producida por el microsimbionte al entrar

en el pelo radicular. El tubo de infección avanza por el pelo radicular hasta alcan-
zar la corteza de la raíz. En la corteza las bacterias se liberan colonizando el cito-
plasma de la célula vegetal. En dichas bacterias se producen una serie de cambios
en su morfología y se diferencian dando lugar a un bacteroide (usualmente son
cambios quimiotácticos), de forma que va a ser incorporado como bacteroide, es
decir, una bacteria modificada.
En su camino hasta el citoplasma de la célula vegetal, la bacteria queda
envuelta de una membrana peribacteroidea. El origen de ésta son restos de mem-
brana celular vegetal. Una vez dentro del citoplasma, las bacterias, mediante la
liberación de factores Nod, inducen la división celular y estimulan un desarrollo
anormal de las células corticales. Esto produce un crecimiento anormal que acaba
rompiendo la superficie de la raíz y da lugar a unas estructuras capaces de fijar
nitrógeno. La continua proliferación de las células corticales y de los bacteroides,
rizobios desarrollados, forma unas estructuras tumorales denominadas nódulos
radiculares.
Las bacterias que forman parte de estos nódulos radiculares se denominan
rizobios. Los rizobios de forma independiente no pueden fijar nitrógeno, sino que
requieren una planta hospedante. Ni la planta ni la bacteria pueden fijar nitrógeno
de manera independiente. Las bacterias gram-negativas del género Rhizobium
necesitan algo de oxigeno para fijar nitrógeno. Pero hay un inconveniente, la nitro-
genasa, enzima que cataliza la reacción principal de la fijación de nitrógeno, es
inactivada por el oxígeno. La acción de la leghemoglobina soluciona el problema
planteado anteriormente. La leghemoglobina es una proteína reguladora que con-
trola los niveles de concentración de oxígeno en el interior del nódulo radicular.
Dicha proteína contiene hierro y actúa como un tampón; aumenta y disminuye la
concentración de oxígeno en el interior del nódulo con la finalidad de mantenerlo
constante.
Cuando los rizobios son liberados del tubo de infección y penetran en el cito-
plasma de las células radicales, quedan rodeados por una membrana propia. De
esta forma evitan el contacto directo con el citoplasma de la célula, formando lo
que se denomina un simbiosoma. El simbiosoma pasa a ser el elemento funcional,
cuya única función es la de fijar nitrógeno. En el interior de los simbiosomas las
bacterias pueden multiplicarse de forma proliferativa hasta que se inicia la fija-
ción del nitrógeno. En este momento cesa la división celular, ya que son procesos
incompatibles; cuando se inicia la fijación, la división celular finaliza.
 Bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno 181

Tubo de infección; Nódulo.

Los nódulos presentan dos regiones. La primera es una región central con
células de gran tamaño invadidas por bacteroides10. En esta región, formada por
células vegetales, las bacterias modificadas que se encuentran en el interior de sus
citoplasmas se multiplican con rapidez. La segunda región es una zona meristemá-
tica externa. Aquí continuamente se agregan nuevas células permitiendo al nódulo
crecer. El crecimiento del nódulo alargará la vida útil del mismo, lo que permite al
nódulo fijar nitrógeno de forma indefinida. La zona meristemática presenta células
más pequeñas, ricas en peroxisomas y retículo endoplasmático. Las células meris-
temáticas no están invadidas por bacteroides. El nódulo a través del floema de la
raíz recibe fotosintatos originados en la planta a cambio del nitrógeno fijado. En
su periferia el nódulo está rodeado por una endodermis que está conectada direc-
tamente con la endodermis radicular. El diámetro de estas estructuras es de pocos
milímetros, varía de unas especies a otras entre 0,2 milímetros y 4 milímetros.
Existen dos tipos de nódulos. Por un lado, están los nódulos que presentan
un crecimiento limitado, denominados nódulos de crecimiento determinado, que
se caracterizan por presentar una estructura externa con apariencia esférica. Los
nódulos de crecimiento limitado no presentan células de transferencia. El otro tipo
son los denominados nódulos de crecimiento indeterminado o ilimitado. Estos
nódulos siempre poseerán células meristemáticas en división que permitirán al
nódulo crecer, sí presentan células de transferencia y las células presentan un ele-
vado número de vacuolas, principalmente las células periféricas.

10 Cf. E. Villalobos Rodríguez, Fijación simbiótica del Nitrógeno, San José (Costa Rica)
2006, 5.
182 Sergio Calvo García

6. COMPLEJO ENZIMÁTICO NITROGENASA

Las bacterias fijadoras de nitrógeno están equipadas con un complejo enzi-

mático denominado nitrogenasa. La nitrogenasa es un enzima proteico, formado
por dos metaloproteínas: la ferroproteína y la molibdoferroproteína. Este enzima
produce la catálisis de la reacción primordial de la fijación del nitrógeno, es decir,
la transformación en amoniaco del nitrógeno presente en la atmósfera. El complejo
enzimático nitrogenasa se inactiva irreversiblemente en presencia de oxígeno.
Por lo tanto, la presencia de grandes cantidades de oxígeno en el nódulo radicular
restringe la fijación de nitrógeno. Para su máxima eficiencia la nitrogenasa debe
trabajar a muy bajas tensiones de oxígeno. La leghemoglobina actúa como filtro
de oxígeno; además este pigmento regula la tensión de oxígeno en el nódulo radi-
cular. De esta forma permite que la nitrogenasa desarrolle su actividad eficiente-
mente, para lo cual requiere gasto de ATP y es inhibida por ADP.
El complejo enzimático nitrogenasa tiene dos unidades. La primera unidad
está formada por cuatro subunidades proteicas, que constituyen el cofactor cono-
cido como cofactor hierro molibdeno. Es aquí donde se reduce el nitrógeno y hay
que mencionar que esta unidad tiene actividad reductora. La segunda unidad está
formada por un homodímero, es decir, dos unidades idénticas. Posee átomos de
hierro acomplejados con azufre de determinadas proteínas11.
La conversión de nitrógeno a amoniaco por el complejo enzima nitrogenasa
ocurre mediante una sucesión de reacciones de transferencia hidronio-electrones.
Reacción global12: N2 + 8H+ + 8e− + 16 ATP → 2NH3 + H2 + 16 ADP + 16 Pi
Para transferir un par de electrones se requieren cuatro moléculas de ATP. Como
es necesario transferir cuatro pares de electrones por cada molécula de nitrógeno
reducido, el balance final de consumo es de dieciséis ATP. El elevado coste de ATP
necesario para romper las moléculas se debe a la fuerza de unión N≡N. La energía
necesaria para romper este triple enlace es muy elevada (225 kcal/mol).

Reducción de nitrógeno catalizada por la nitrogenasa.

11 www.rcbs.org (19/4/2011)
12 www.fisicanet.com (22/4/2011)
 Bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno 183

La fuente primaria de energía y de poder reductor es la sacarosa. La sacarosa

es un disacárido formado por una molécula de glucosa y otra de fructosa, originada
en el proceso fotosintético. El tejido vascular constituido por células que transpor-
tan savia elaborada en sentido descendente, denominado floema, es el encargado
de transportar a la raíz sacarosa. Los electrones para la reducción llegan al com-
plejo mediante unas proteínas hierro-azufre que intervienen en el transporte de
electrones.

7. ASIMILACIÓN DE NITRATOS Y AMONIO

No todas las especies vegetales son capaces de establecer simbiosis con una
bacteria. Esas especies que no establecen simbiosis absorben fuentes de nitrógeno
disponibles en el suelo, debido a que no realizan el mecanismo de fijación bioló-
gica. Normalmente absorben nitratos y en ocasiones amonio13. El nitrato puede ser
utilizado directamente, según entra en la célula, o acumularse en vacuolas, debido
a que en determinadas concentraciones es tóxico. Una vez en la planta, el nitrato
debe reducirse hasta amonio mediante una reacción en la cual no hay actividad
nitrogenasa. Hay una primera reacción en la cual el nitrato se reduce a nitrito. Esta
reacción está catalizada por el enzima nitrato reductasa. En la segunda reacción el
nitrito se convierte en amonio mediante la catálisis del enzima nitrito reductasa.
Finalmente, el amonio se transforma en los plastidios o en el citoplasma, en ami-
noácidos. El tejido vascular transportador de sabia bruta o xilema transporta poste-
riormente a los aminoácidos hasta los centros de consumo.
NO3– ----- R1 ----> NO2– ---- R2 ----> NH4+
R1: Nitrato reductasa. R2: Nitrito reductasa.
Para formar elementos más complejos se realiza una reacción entre un ami-
noácido y un alfa-cetoácido, es decir, una transaminación. El nitrógeno reducido
se asimila en una reacción catalizada por dos enzimas; la enzima glutamina sinte-
tasa y glutamato sintasa. En un primer paso, se forma glutamina y posteriormente
dos moléculas de glutamato. Una de las moléculas de glutamato se utiliza para
incorporar amonio y la otra es transferida directamente al xilema para su posterior
utilización como amida o ureidos. Entre las amidas destacan la asparragina y glu-
tamina, mientras que en los ureidos, la alantoina y ácido alantoico14.
Una cantidad excesiva de amonio o nitrato puede ser nociva para la planta. Por
esta razón la planta se ve sometida a un proceso de regulación génica y enzimática.

13 Cf. M. J. Bonete Pérez y R. M. Martínez-Espinosa (coords.), Avances en el metabolismo

del Nitrógeno, Alicante 2009, 51.
14 www.fisicanet.com (22/4/2011)
184 Sergio Calvo García

Un ejemplo de ello es la glutamina, que inhibe la absorción de amonio o nitrato. La

presencia o ausencia de luz y la disponibilidad de glucosa, actúan como regulado-
res génicos, de modo que la luz es un efector positivo.

8. BALANCE DE LA FIJACIÓN DEL NITRÓGENO ATMOSFÉRICO

El carbono asimilado por fotosíntesis nos proporciona una estimación de la

cantidad de nitrógeno fijado por las plantas, en el periodo de un año:

“La cantidad global de carbono fijado es alrededor 70.000 Tg (Terragra-

mos = 1 millón de toneladas métricas). Aunque no existe una relación única
de carbono/nitrógeno para las plantas, un valor medio de 50:1 es una cantidad
adecuada considerando la distribución de árboles, hierbas y cosechas. El valor
de nitrógeno consumido calculado por esta relación es del orden de 1400 Tg.
Por otro lado, las plantas utilizan solamente entre el 30% y el 60% del nitrógeno
mineral asequible en el suelo. Por lo tanto, calculando la capacidad de minerali-
zación global del suelo, el consumo de nitrógeno, para una eficacia del 40 %, es
aproximadamente de 3.500 Tg., es decir, un 3% del nitrógeno total contenido en
el suelo 105.000 Tg.”15
“La fijación simbiótica del nitrógeno, equivalente a 120Tg., es relativamente
mas baja que la cantidad de nitrógeno asimilado de los minerales del suelo, pero
representa el 8,5% del consumo total del nitrógeno de la planta debido a la alta
eficacia de la transferencia de este nitrógeno fijado a la misma. Los fertilizantes
aportan una cantidad de nitrógeno equivalente al 50 % del nitrógeno asimilado
por la fijación biológica, y además, debido a la baja eficacia de la transferencia
a la planta del nitrógeno contenido en los fertilizantes, el consumo total por la
planta equivale solo al 2 %.”16

Hay varios factores ambientales que limitan la fijación del nitrógeno. La

nodulación se ve afectada por el exceso o carencia en determinados elementos
minerales. Un defecto de Molibdeno influye negativamente en la fijación del
nitrógeno. Otro elemento mineral es el Hierro, que sin embargo cuando escasea
no tiene un efecto directo sobre la fijación del nitrógeno. El Hierro y el Molibdeno
son elementos constituyentes de la nitrogenasa17.

15 M. Megías Guijo- A. J. Palomares Díaz- F. Ruiz Berraquero (eds.), Aportaciones a la Bio-

logía de la fijación del Nitrógeno atmosférico, Sevilla 1991, 12.
16 Ib., 12.
17 Cf. E. Villalobos Rodríguez, Fijación simbiótica del Nitrógeno, San José (Costa Rica)
2006, 9.
 Bacterias simbióticas fijadoras de nitrógeno 185

La temperatura también es un factor ambiental limitante que afecta de forma

indirecta. La presencia de altas temperaturas incrementa la respiración; esto hace
que el carbono disponible para la simbiosis sea menor. Con temperaturas inferiores
a los 7 ºC la nodulación es inexistente y en el caso extremo de altas temperaturas,
la probabilidad de nodulacón es menor, debido a la reducción de los pelos radicu-
lares.
El agua y la luz afectan también a la simbiosis. Cuando la disponibilidad de
agua es baja, la fijación del nitrógeno es menor; mientras que la luz influye indi-
rectamente a través de la fotosíntesis. La fotosíntesis produce los carbohidratos
necesarios para el desarrollo y funcionamiento del nódulo.
Otros factores limitantes que actúan en menor medida son las enfermedades
como hongos o virus y la diferente concentración de gases que hay en el terreno.
Algunos de los nutrientes esenciales necesarios para el desarrollo de la actividad
nodular como son el Fósforo, Hierro, Calcio, Molibdeno, Cobalto y Zinc, son esca-
sos. En lugares con elevadas precipitaciones los procesos de lixiviado producen su
escasez, por lo tanto, la disponibilidad de elementos nutritivos y la actividad de los
microorganismos fijadores son esenciales para la fijación biológica del nitrógeno.

9. BIBLIOGRAFÍA

E. Villalobos Rodríguez, Fijación simbiótica del Nitrógeno, San José (Costa Rica) 2006.
F. Castillo Rodríguez, Biotecnología ambiental, Madrid 2005.
J. R. Peña, Cuaderno de Histología vegetal, Salamanca 2010.
L. Taiz-E. Zeiger, Fisiología Vegetal, Vol. I, Castellón de la Plana 2006.
M. J. Bonete Pérez y R. M. Martínez-Espinosa (coords.), Avances en el metabolismo del
Nitrógeno, Alicante 2009.
M. Javierre González (ed.), Gran Enciclopedia Universal, Vol. IX y XII, Madrid 2004.
M. Megías Guijo- A. J. Palomares Díaz- F. Ruiz Berraquero (eds.), Aportaciones a la
Biología de la fijación del Nitrógeno atmosférico, Sevilla 1991.
N. J. Fraume Restrepo, Abecedario Ecológico. La más completa guía de términos
ambientales, Bogotá 2006, 147.
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www.unavarra.es (19/4/2011)
Capitulo 2

Las lacasas: una enzima azul por Greener tecnologías alternativas en la detección y tratamiento
de contaminantes emergentes

Resumen: La contaminación continua de los cuerpos de agua en todo el mundo, por la presencia
de contaminantes emergentes, ha levantado una gran importancia en las últimas décadas. Este
grupo de contaminantes comprende una gran variedad de productos químicos, comprendiendo
asimiento House- y productos de cuidado personal, medicamentos humanos y veterinarios, así
como compuestos industriales. Si bien, los datos científicos han puesto de manifiesto las
posibles amenazas de los contaminantes emergentes para la salud pública y el medio ambiente,
todavía hay poca información disponible sobre la ecotoxicidad, la concentración y distribución
de estos compuestos, lo que hace que su regulación ecológica, la detección y el tratamiento muy
difícil. Por lo tanto, la búsqueda de tecnologías verdes para detectar y tratar los posibles
contaminantes del medio ambiente es fundamental para la protección de la salud humana y
ecológica. En este contexto, lacasas han ganado interés científico debido a su amplia gama de
sustrato, incluidos los contaminantes ambientales recalcitrantes, y su capacidad para utilizar
solamente el oxígeno como co-sustrato. Este trabajo explora el potencial de enzima lacasa como
elemento de biodetección y biorremediación, e identifica los inconvenientes que tienen que ser
excesiva llegado el fin de demostrar su viabilidad e implementar un proceso a gran escala.

Introducción:
Hasta la fecha, hay un problema ambiental crítico de contaminación de los recursos hídricos con
persistente, bioactivo, y sustancias bioacumulables, que causan efectos ecológicos potenciales
para la salud y. Algunos de estos productos químicos son los artículos de la vida diaria, tales
como el hogar y productos de cuidado personal, humano y medicamentos veterinarios, que se
utilizan ampliamente y constantemente liberan en los sistemas acuáticos eco por las actividades
humanas y las descargas directas de las plantas de tratamiento de aguas residuales (EDAR).
Estos grupos de sustancias se conocen como contaminantes emergentes y su detección y
eliminación es crucial debido a su alta persistencia y la toxicidad, incluso a concentraciones tan
bajas como ng / L. Es bien conocido que la mayoría de los contaminantes emergentes que pasan
a través WWTPs convencionales no se eliminan por completo. Así, el desarrollo de biosensores
resultó como un esfuerzo en la búsqueda de herramientas analíticas capaces de detectar este tipo
de contaminantes en concentraciones bajas con una alta especificidad. Sin embargo, una vez que
se han identificado los contaminantes, un proceso de descontaminación se tiene que realizar. En
este contexto, la biorremediación de los recursos hídricos por el uso de biocatalizadores, tales
como enzimas, se ha sugerido en los últimos años. Las enzimas son biomoléculas que tienen la
capacidad para mediar reacciones; No se requieren condiciones severas para su acción y,
normalmente, los subproductos formados durante la catálisis son benignos, lo que implica una
gran oportunidad para el uso de enzimas en la biorremediación. Actualmente, varias enzimas se
han utilizado en diferentes aplicaciones biotecnológicas e industriales; sin embargo, lacasas
enzimas han recibido una atención especial debido a su capacidad de oxidar una amplia gama de
sustratos, que acompaña a la reducción de oxígeno al agua como un subproducto de la reacción.
Las lacasas son capaces de oxidar, polimerizar, o transformar diversas sustancias recalcitrantes
en moléculas menos tóxicas; Por lo tanto, estas enzimas podrían ser biocatalizadores adecuados
para la biorremediación de agua. Sin embargo, varios inconvenientes tienen que ser superado
con el fin de implementar el uso de lacasas para el alivio de la contaminación, principalmente,
debido a los gastos elevados que implica una producción de enzimas a gran escala. estas
enzimas podrían ser biocatalizadores adecuados para la biorremediación de agua. Sin embargo,
varios inconvenientes tienen que ser superado con el fin de implementar el uso de lacasas para
el alivio de la contaminación, principalmente, debido a los gastos elevados que implica una
producción de enzimas a gran escala. estas enzimas podrían ser biocatalizadores adecuados para
la biorremediación de agua. Sin embargo, varios inconvenientes tienen que ser superado con el
fin de implementar el uso de lacasas para el alivio de la contaminación, principalmente, debido
a los gastos elevados que implica una producción de enzimas a gran escala.

lacasa

Lacasa Fuente:
Como enzimas oxidorreductasa, lacasas poseen la capacidad de oxidar diversos compuestos
fenólicos con la reducción concomitante de oxígeno. Estos biocatalizadores han sido
ampliamente encontrado como enzimas extracelulares e intracelulares en varios organismos,
microorganismos que abarcan (Bacillus), plantas (género Rhus), hongos (tales como géneros
Trametes, Cerrena, Ganoderma, Pycnoporus, y Coriolopsis), y los insectos (M. sexta ). En
especies de insectos, lacasas son responsables del proceso de Esclerotización; mientras que en
especies de Bacillus, que desempeñan un papel relacionado con la pigmentación, la patogénesis,
y el conjunto de las esporas resistentes a los UV. En las plantas, las lacasas se encuentran en el
xilema y, junto con las peroxidasas, están involucrados en la lignificación; Por otra parte, las
lacasas fúngicas desempeñan un papel en los procesos de deslignificación y humificación.

Mecanismo biocatalıtica y Aplicaciones

En una enzima, el sitio activo es el lugar donde el reconocimiento, la unión, y la oxidación del
sustrato se llevan a cabo. El sitio activo de las lacasas comprende cuatro núcleos de cobre, cada
uno de ellos se agrupan en tres clases diferentes de átomos de acuerdo tanto a su distribución en
la enzima (sitios T1, T2, y T3) y su naturaleza espectroscópico. Los sitios de T1 y T2 solamente
poseen un átomo de cobre; los dos átomos restantes se encuentran en el sitio de T3. Cada tipo
de cobre tiene características únicas: tipo 1 es responsable del color azulado emblemáticos de la
enzima, es una cavidad hidrófoba en la que se oxida el sustrato durante el mecanismo catalítico
de la lacasa; tipo 2 es incoloro, ya que se observó ninguna absorción en la región visible;
Mientras tanto, el tipo 3 exhibe un pico débil a 330 nm (Ba et al. 2013).

El punto isoeléctrico de las lacasas es de alrededor de 4,0, mostrando su rendimiento óptimo en

condiciones ácidas, que se ha relacionado con las condiciones de crecimiento, donde los
microorganismos producen estas enzimas. Sin embargo, se ha informado recientemente de que
las lacasas mantienen alta estabilidad (por encima de 60% de su actividad) en condiciones
alcalinas (hasta pH 8). Por otro lado, la termoestabilidad, alto potencial redox, y la capacidad de
oxidar una amplia gama de sustrato (incluidos los contaminantes recalcitrantes) son algunas
otras propiedades que lo hacen lacasa de particular interés para los investigadores. Hoy en día,
el uso de esta enzima es común en algunas industrias (en su mayoría de papel, alimentos y
textiles Industries). Sin embargo, la tendencia actual es el uso de lacasa como biocatalizadores
en la biorremediación de aguas contaminadas por contaminantes emergentes; en la generación
de energía por bioelectrocatalysis en pilas de combustible enzimáticas; y en el desarrollo de
biosensores usando esta enzima como bioreceptor, para la comida

Fig. 2.1 Modelo de la lacasa sitio activo y ciclo catalítico, del

medio ambiente, y aplicaciones médicas.

La producción de lacasa en agro-industriales Residuos

A pesar del alto potencial de lacasa con fines biotecnológicos e industriales, es importante
destacar que se necesita una gran cantidad de enzima para un proceso a gran escala. Según
Osma, el medio de cultivo representa el costo más alto a los gastos totales de producción de
lacasa; Mientras tanto, los costos de infraestructura son los más bajos. Por lo tanto, con el fin de
superar este problema, varios estudios se han centrado en el desarrollo de modificaciones
genéticas estables de microorganismos con el fin de lograr la expresión de genes para lacasa; (2)
la optimización y reducción de los costos de los medios de cultivo utilizando desechos agrícolas
como sustratos de crecimiento baratas (que también ayuda a aliviar la contaminación del medio
ambiente); (3) buscar nuevas cepas de microorganismo capaz de producir lacasa. Ramírez
Cavazos probado una cepa de Pycnoporus sanguineus, nativa del norte de México, usando un
jugo de tomate como medio de cultivo, lo que resulta en el título de lacasa de 143.000 U / L.
Fenice (2003) obtuvo una producción de 4.600 U / L en el agua residual de oliva-molino.
Mientras tanto, Songulashvili (2007) informó de la producción de lacasa utilizando desechos de
alimentos, tales como cáscaras de mandarina, el salvado de trigo y el salvado de soja, kiwis,
plumas de pollo, y etanol, obteniendo una máxima actividad de la lacasa de 93,000-97,000 U /
L, luego de la fermentación sumergida de salvado de trigo y el salvado de soja por Ganoderma
spp. Varios agro-residuos tales como mandarina y cáscara de plátano son sustratos ricos en
hidratos de carbono de lignina y ácidos orgánicos, que podrían actuar como inductores para
estimular la producción de lacasa. En este contexto, diversos estudios han reportado el uso de
soportes sólidos tales como las semillas de uva, piel de plátano, y cacahuete como sustratos de
crecimiento para hongos. Sin embargo, el uso de estos sustratos complejos tiene como
desventaja la utilización posterior / purificación de la lacasa después de la fermentación; por lo
tanto se requiere el desarrollo de protocolos robustos que permiten el uso de enzimas en bruto
(sin proceso de purificación) en aplicaciones biotecnológicas.

Biosensor lacasa-base para la detección de contaminantes emergentes

Contaminantes emergentes en embalses

Durante las últimas dos décadas, la presencia constante de contaminantes emergentes en el
suministro de agua en todo el mundo ha adquirido gran relevancia. Este tipo de contaminantes
incluye una gran variedad de productos químicos utilizados en la vida diaria, tales como
compuestos de uso doméstico, productos de cuidado personal y medicamentos para usos
humanos y animales. Aunque los datos científicos han puesto de manifiesto las posibles
amenazas de los contaminantes emergentes para la salud pública y ecológica, todavía hay
información que no ha sido evaluado en relación con la toxicidad ambiental, concentración,
distribución y transformación de estos compuestos en los cuerpos de agua, lo que hace que sus
valores ecológicos regulación, detección y tratamiento muy difícil. Estos contaminantes son
liberados típicamente en el medio ambiente a través de actividades antropogénicas tales como
las prácticas agrícolas, industriales y vertidos humanos.

Los disruptores endocrinos son compuestos que mimetizan la acción de las hormonas en los
organismos, haciendo que la alteración del sistema endocrino, que se ha relacionado con
trastornos sexuales, cáncer, e incluso enfermedades crónicas. Hoy en día, la presencia de
productos químicos que exhiben alteraciones hormonales y están involucrados en la elaboración
de plásticos y productos para el hogar se ha informado ampliamente, por ejemplo, agentes
tensioactivos, agentes ignífugos, parabenos, y plastificantes. Mientras tanto, los productos
químicos presentes en productos de cuidado personal y considerados como contaminantes
emergentes abarcan desinfectantes (triclosan), agentes de conservación, fragancias (Celestolide,
tonalide, galaxolide), y pantallas de UV (octil-dimetil-PABA, octil-methoxycinnamte,
homosalato). Por otro lado, los compuestos farmacéuticos, como contaminantes emergentes,
abarcar medicamentos humanos y veterinarios que se han encontrado ampliamente en los
suministros de agua, tales como antibióticos, fármacos anti-inflamatorios no esteroides, y los
bloqueadores beta. Numerosos estudios han informado de la presencia de productos de cuidado
personal, compuestos farmacéuticos, y disruptores endocrinos en varios suministros de agua a
concentraciones alarmantes. Teijon (2010) informaron un estudio de monitoreo de compuestos
farmacéuticos en el agua muestreada de una PTAR y del acuífero que se recarga por la descarga
de esta PTAR, lo que resulta en la detección de estos productos químicos en concentraciones de
g / L. Un gran número de protocolos analíticos se han desarrollado para la detección de este tipo
de contaminantes, principalmente mediante técnicas de cromatografía y espectroscopía, ya que
estos métodos son extremadamente precisos y capaz de detectar concentraciones muy bajas; sin
embargo, que requieren complicados pretratamiento de la muestra, personal capacitado, los
altos costos de operación, y carecen de aplicabilidad en el lugar (Teijon et al., 2010). En este
contexto, la necesidad de instrumentos analíticos portátiles, capaces de vigilancia sobre el
terreno con alta selectividad, sensibilidad y tiempos de ensayo cortos, ha promovido el diseño
de nuevos dispositivos, tales como biosensores.

Un biosensor es un instrumento capaz de medir una molécula diana específica en una muestra,
tomando ventaja de su afinidad hacia una bio-elemento específico de reconocimiento
(bioreceptores, inmunorreactivos, enzimas). Hay tres elementos esenciales que comprenden un
biosensor (Fig. 2.2). El bioreceptor interactúa específicamente con el analito presente en la
muestra, produciendo una reacción bioquímica derivada de esta interacción, que es amplificada
y convertida en señales eléctricas cuantificables. El transductor está en contacto íntimo con la
bioreceptor y es responsable de la traducción de la prueba bioquímica en una señal eléctrica. El
uso de enzimas como bioreceptores se ha empleado ampliamente en biosensor debido a su
estabilidad y más fácil el control de sus propiedades de reconocimiento en comparación con
otras biomoléculas tales como anticuerpos o células. En este contexto, los enzimas oxidasa
(tirosinasa, peroxidasa, y lacasa) aparecen como buenos candidatos debido a su capacidad para
catalizar reacciones en las que se produce la transferencia de electrones, que puede ser utilizado
como el principio de la transducción. enzimas lacasa tienen algunas ventajas sobre las otras
oxidasas, que los hacen muy interesante para aplicaciones de biosensores; su termoestabilidad,
versatilidad para reaccionar con una amplia gama de sustratos, no se necesitan cofactores para
llevar a cabo la catálisis y la formación de agua como subproducto, son algunas de estas
ventajas. lo que las hace muy interesantes para aplicaciones de biosensores; su termoestabilidad,
versatilidad para reaccionar con una amplia gama de sustratos, no se necesitan cofactores para
llevar a cabo la catálisis y la formación de agua como subproducto, son algunas de estas
ventajas. lo que las hace muy interesantes para aplicaciones de biosensores; su termoestabilidad,
versatilidad para reaccionar con una amplia gama de sustratos, no se necesitan cofactores para
llevar a cabo la catálisis y la formación de agua como subproducto, son algunas de estas
ventajas.

Fig 2.2 componentes esenciales de un biosensor:

Bioreceptor, transductor electroquímico, camino
eléctrico en la producción de la respuesta biosensor y
respuesta eléctrica típica de los biosensores de electrodos
de base lacasa.

Los métodos de inmovilización

En general, un protocolo eficiente de inmovilización está desarrollado para facilitar la

recuperación molécula bio- y reutilización. Por lo tanto, la inmovilización del bioreceptor
prolongaría la vida del biosensor y asegurar su estabilidad laboral. El método de inmovilización
para aplicar deben proporcionar las mejores condiciones para asegurar la máxima estabilidad de
la bioreceptor y esto dependerá de las propiedades inherentes del elemento de reconocimiento;
los requisitos operativos de la medición, la molécula diana, y el principio de transducción
también son factores importantes a tener en cuenta en el diseño de un biosensor. Los métodos
de inmovilización más comúnmente empleadas para la fijación lacasa son acoplamiento
covalente, adsorción, reticulación, encapsulación, atrapamiento y (Fig. 2.3). El acoplamiento
covalente requiere la reacción química entre los grupos funcionales en el vehículo con la
biomolécula (principalmente, a través de los residuos de aminoácidos en su estructura) formar
enlaces covalentes; sin embargo, es importante evitar la unión de la enzima a través de los
aminoácidos dentro del sitio activo, ya que ello comprometer la actividad biocatalizador,
resultando en su inhibición. La inmovilización a través de la adsorción tiene lugar por
interacciones débiles entre las biomoléculas y el soporte sólido, interacciones de Van der Waals
o fuerzas iónicas; a pesar de la simplicidad y requisitos económicos del protocolo, este esquema
presenta el inconveniente de una fijación inestable de los bioreceptores bajo cambios de pH, la
modificación de la polaridad o las alteraciones de fuerza iónica, lo que resulta en la fuga de las
moléculas. La reticulación implica la generación de enlaces intramoleculares dentro de las
moléculas de la enzima. cristales de enzima reticulados presentes altas actividades catalíticas y
estabilidad operacional; sin embargo, se requieren altas cantidades de enzima altamente
purificada; Bajo este esquema, es importante mantener la concentración estable de pH y sal. La
encapsulación se refiere al confinamiento de la biomolécula dentro de las esferas
semipermeables de polímeros; Mientras tanto, el atrapamiento se basa en la retención de la
enzima dentro de una cuadrícula polimérico; este método asegura la integridad de la estructura
de la enzima, sin embargo, presenta problemas de difusión y la pérdida constante de las
biomoléculas debido a las diferencias sin embargo, se requieren altas cantidades de enzima
altamente purificada; Bajo este esquema, es importante mantener la concentración estable de pH
y sal. La encapsulación se refiere al confinamiento de la biomolécula dentro de las esferas
semipermeables de polímeros; Mientras tanto, el atrapamiento se basa en la retención de la
enzima dentro de una cuadrícula polimérico; este método asegura la integridad de la estructura
de la enzima, sin embargo, presenta problemas de difusión y la pérdida constante de las
biomoléculas debido a las diferencias sin embargo, se requieren altas cantidades de enzima
altamente purificada; Bajo este esquema, es importante mantener la concentración estable de pH
y sal. La encapsulación se refiere al confinamiento de la biomolécula dentro de las esferas
semipermeables de polímeros; Mientras tanto, el atrapamiento se basa en la retención de la
enzima dentro de una cuadrícula polimérico; este método asegura la integridad de la estructura
de la enzima, sin embargo, presenta problemas de difusión y la pérdida constante de las
biomoléculas debido a las diferenciasen el tamaño del poro en la cuadrícula.

Fig. 2.3 métodos de inmovilización empleados en biosensores. (A) El

acoplamiento covalente, (b) Adsorción,
(C) de reticulación, (d) la encapsulación, (e) Entrapment

Principios de transducción

Los transductores electroquímicos en aplicaciones

ambientales transductores electroquímicos se refieren al elemento en un biosensor que traduce
la transferencia de electrones que se producen durante la reacción de una enzima (inmovilizado
sobre un electrodo) con un sustrato. enzimas lacasa poseen propiedades mecánicas y
capacidades de transferencia de electrones que las hacen excelentes bioreceptores en
biosensores electroquímicos (Tabla 2.1). Los transductores electroquímicos en biosensores son
capaces de medir conductome tratar, principios potenciometría, y voltametría. métodos
conductometricos monitorear el desarrollo de una reacción redox a través de los cambios en la
conductividad de una solución electrolítica, como una respuesta de los productos cargados
formados por la interacción de la bioreceptor con el analito. biosensores potenciométricos medir
los cambios de potencial debido a una reacción bioquímica que se produce entre dos electrodos
(o bien, de referencia o indicador de electrodos. mediciones voltamétricas se basan en los
cambios de la corriente durante una reacción bioquímica en un electrodo de trabajo; Mientras
tanto, el voltaje aplicado es variada. Amperometry es una clasificación de voltametría; Bajo este
esquema, el potencial se mantiene constante durante la medición de reacción. Chen (2012)
informó la inmovilización de lacasa en un nanocompuesto de nanopartículas de oro por un
método de reticulación, el logro de una transferencia directa de electrones que resultó en un
biosensor altamente sensible. Mientras tanto, Das (2014) inmoviliza una lacasa Trametes
versicolor en una matriz de material nanocompuesto que comprende de tetróxido de osmio en
poli 4-vinilpiridina, los nanotubos de carbono de múltiples paredes; la obtención de una
respuesta de corriente frente a pirocatecol, un fenol genotóxico y mutagénico, en el intervalo de
concentración de 3,98 a 16. 71 nM y un límite de detección de 2,82 nM con una sensibilidad de
3,82 ± 0,31 nA / nM. Vianello (2004) inmoviliza una lacasa lignosus Rigidoporus sobre un
soporte de oro obtención de un límite de detección de 0,5 mg / L. Tang et al. (2006) informaron
de la inmovilización de un bioreceptor híbrido, que consta de enzimas peroxidasa de rábano
picante y lacasa para la detección de la densidad de E. coli a través de la reacción redox de los
polifenoles generados por el metabolismo de la E. coli. Por otro lado, el desarrollo de nuevos
nanomateriales ha mejorado el análisis electroquímico realizado por biosensores. que consiste
en enzimas peroxidasa de rábano picante y lacasa para la detección de la densidad de E. coli a
través de la reacción redox de los polifenoles generados por el metabolismo de la E. coli. Por
otro lado, el desarrollo de nuevos nanomateriales ha mejorado el análisis electroquímico
realizado por biosensores. que consiste en enzimas peroxidasa de rábano picante y lacasa para la
detección de la densidad de E. coli a través de la reacción redox de los polifenoles generados
por el metabolismo de la E. coli. Por otro lado, el desarrollo de nuevos nanomateriales ha
mejorado el análisis electroquímico realizado por biosensores.

En este contexto, Mei (2015) preparó una mezcla de paladio y cobre para cubrir un soporte de
óxido de grafeno con el fin de construir una plataforma para la inmovilización lacasa; la
obtención de un límite de detección de 2,0 mM para catecol. Según Rodríguez-Delgado (2015),
los métodos amperométricos son altamente empleados en biosensores basados lacasa; Mientras
tanto, los métodos potenciométricos conductometricos y no están muy a menudo se emplean
para este uso.

Los transductores ópticos en aplicaciones ambientales

mediciones de absorción y emisión de fluorescencia ópticos se han utilizado ampliamente para

caracterizar compuestos coloreados o cromóforos. Sobre la base de este concepto, las
propiedades espectroscópicas de los subproductos formados mediante catálisis de lacasa se
emplean para la detección de moléculas diana en biosensores ópticos. La lacasa tiene la
capacidad para producir un tinte rojizo cuando cataliza la oxidación de acoplamiento de fenoles
en presencia de 3-metil-2 benzothiazolinonehydrazone (MBTH). Con base en esta reacción,
Abdullah et al. (2007) informaron de la detección de catecol a concentraciones tan bajas como
0,33 mM. losla detección fue hecha por medidas espectrofotométricas del compuesto rojizo
formado a partir del acoplamiento de las películas de MBTH (apilados en silicato de Nafion) a
radicales de quinona y / o fenoxi producida por la oxidación enzimática de la lacasa (Abdullah
et al. 2007). Sanz (2012) estudió la reacción de fenol catalizada por Trametes versicolor lacasa,
utilizando un sensor de película de poliacrilamida inmovilizado con la enzima, la obtención de
un límite de detección de 0,109 mM. resonancia de plasmones fenómeno de superficie (SPR) es
también un principio óptico empleado para biosensores, desde hace casi dos décadas.
mediciones de SPR se llevan a cabo en un ángulo fijo de incidencia y el seguimiento se realiza
mediante la detección de cambios en la cantidad de la luz reflejada, que se correlaciona con
cambios en la masa en la superficie debido a los eventos de unión (entre el bioreceptor y el
analito). En este contexto,

Lacasa como biocatalizadores para la eliminación de contaminantes emergentes

Varios estudios han informado de la presencia de disruptores endocrinos, productos de cuidado

personal, y compuestos farmacéuticos en diversos cuerpos de agua en concentraciones
importantes. Así, la presencia de estos contaminantes en el suministro de agua se ha convertido
en un tema importante en términos de tecnologías de tratamiento para la limpieza de agua,
principalmente debido a la altamente resistencia de estos compuestos a las técnicas de
eliminación comunes. técnicas de oxidación avanzada sobre la base de la exposición UV /
ozono han obtenido rendimientos eficaz de eliminación / inactivación; sin embargo, estos
procesos son caros y, en algunos casos, los subproductos generados son más tóxicos que el
contaminante principal. Por lo tanto, las lacasas aparecen biocatalizadores tan fuerte para ser
empleadas en tratamientos de biorremediación, ya que puede reaccionar en condiciones suaves
con una amplia sustratos varían, abarcando contaminantes recalcitrantes, y generar no nocivo
por productos. Fukuda (2004) demostró la eliminación de la actividad endocrina de los
subproductos de bisfenol A; catalizada por lacasa de Trametes villosa.

Del mismo modo, Cabana (2007) informó de la actividad no estrogénica en los productos de
reacción mediante la catálisis de bisfenol A, triclosán, y nonilfenol empleando Coriolopsis
lacasa polyzona. La eliminación de los contaminantes que emerge de los suministros de agua
usando lacasa podría lograrse dentro de varios sistemas: (1) la enzima libre; (2) enzima
inmovilizada; y (3) células de los caldos de cultivo. Varios estudios han reportado el uso de
lacasas gratuitas para la eliminación de contaminantes emergentes. Yang et al. (2013)
informaron de 27% de la eliminación diclofenac. La eliminación total de estrona, 17β-estradiol,
estriol, y 17α-etinilestradiol, y oxibenzona se logró mediante Trametes versicolor lacasa. Casi la
eliminación completa de 2,4-diclorophenol fue observada por lacasa libre a pH ácido, las
temperaturas alrededor de 30 y 50 ° C, y el uso de concentraciones elevadas de enzima.

El uso de mediadores también es común durante degradaciones enzimáticas; estos com- puestos
son moléculas de pequeño tamaño que pueden ampliar la capacidad de una enzima para
reaccionar hacia sustratos no comunes; también son estables y reutilizable por varios ciclos.
ABTS, 1-hidroxi-benzotriazol (HBT), nitroso-2-naftol- ácido 2,6-disulfónico (NNDS),
siringaldehído, 4-acetilamino-TEMPO TEMPO 4-hidroxi-, ácido violuric (VIO), y p-cumárico
ácido son algunos de los mediadores más ampliamente empleadas para la catálisis lacasa.

Ji (2016) informó de la eliminación de carbamazepina utilizando como ácido mediadores p-

cumárico, Hyde syringalde, y acetosiringona, obteniendo el 60% de degradación después de 96
h. Mientras tanto, Margot et al. (2015) evaluaron el potencial de la lacasa para eliminar
sulfametoxazol y isoproturon con tres mediadores: ABTS, siringaldehído, y acetosiringona, que
muestra la transformación completa en unas pocas horas. biotransformación casi total de
diclofenac por lacasa también se obtuvo utilizando 1-hidroxibenzotriazol (Nguyen et al. 2013),
siringaldehído, y ácido violuric (VA).

En términos de inmovilización, Krastanov (2000) estudió la degradación de β-naftol,

observando una eliminación completa después de un tratamiento híbrido con lacasa de
Pyricularia oryzae y tirosinasa. Lante (2000) inmovilizado P. oryzae lacasa en una membrana de
polietersulfona, obteniendo el 18% de eliminación de β-naftol. Lee (2016) proporciona una
nueva técnica de inmovilización para lacasa en alginato de cobre para el tratamiento real de las
aguas residuales, que muestra 89,6% de eliminación de triclosan después del tratamiento 8 h.
Nguyen et al. (2014) informaron de un reactor de membrana enzimática de la degradación de
bisfenol A y diclofenaco, la obtención de> 85% y la eliminación> 60%, respectivamente, por la
lacasa a partir de Aspergillus oryzae.
Mientras tanto, Chen (2016) inmovilizado lacasas en la superficie de células de levadura para el
tratamiento de bisfenol A (eliminación de 46% después de 6 horas) y sulfametoxazol
(eliminación del 47% después de 30 horas de tratamiento). Sin embargo, hay sólo unos pocos
trabajos que abordan la degradación de contaminantes emergentes en una matriz real y en
condiciones de reacción reales (pH, temperatura, fuerza iónica); esto es importante tener en
cuenta, ya que algunos componentes de la matriz podría disminuir la actividad de la lacasa y por
lo tanto disminuir el rendimiento de degradación.

Rodríguez-Delgado (2016) probaron la biotransformación de los microcontaminantes:

diclofenac, 5,7-diyodo-8 hidroxiquinolina, β-naftol, y 2,4-diclorophenol usando lacasa de P.
CS43 sanguineus en muestras de agua subterránea, la observación de una bioconversión
reducida para ß-naftol y 2,4-diclorophenol en las muestras reales en comparación con la matriz
de tampón sintético. Biotransformación de bisfenol A, 4-nonilfenol, 17-α-etinilestradiol, y
triclosan se pusieron a prueba en el agua subterránea, así como.

La presencia de algunos iones en una matriz de reacción se ha informado de inducir

modificaciones estructurales en el sitio activo de la enzima. Por ejemplo, los aniones de haluro
se han relacionado con la interferencia en la transferencia de electrones dentro del sitio activo de
la enzima lacasa; Mientras tanto, cianuro de calcio y provocan la separación de los átomos de
cobre de la enzima. Kim y Nicell (2006) observaron que el bisfenol A biodegradación se vio
afectada negativamente por nitrito, tiosulfato y cianuro.

Perspectivas de Futuro y Conclusiones

El uso de lacasas como bioreceptores en biosensores promueve el desarrollo de nuevas

tecnologías para el monitoreo ambiental en términos de detección de contaminantes. Sin
embargo, la inmovilización del bioreceptor es un paso crucial en el diseño de biosensores, por
tanto, más investigación tiene que estar centrado en (1) la creación de nuevos materiales con
fines de apoyo que disminuyen la pérdida de las enzimas, una vez que se inmovilizan;
(2) la mejora de los métodos de inmovilización de corriente para asegurar una unión orientada
de la enzima con el fin de salvaguardar la integridad del sitio activo, lo que resulta en la
recuperación de la actividad enzimática una vez que se realizó la inmovilización; y (3) el uso de
modificaciones genéticas para extender la estabilidad lacasa en condiciones de catálisis difíciles,
asegurando el reciclaje de la bioreceptor y por lo tanto la vida útil del biosensor.
La explotación de las enzimas lacasa como elemento de biorremediación abre enormes
posibilidades en términos de futuras tecnologías de tratamiento de agua para la limpieza. Sin
embargo, a diferencia de las aplicaciones de biosensores, se requiere una cantidad elevada de
enzima para la biorremediación. Por lo tanto, una de las cuestiones cruciales que evitan el uso a
gran escala de la lacasa se relaciona con el alto costo de la producción de enzimas; por tanto, la
investigación adicional debe centrarse en disminuir el coste que representa los medios de
crecimiento para los microorganismos durante la producción de lacasa. Además, la
investigación futura necesita mirar (1) la prueba de la interacción de los tratamientos híbridos en
biorremediación, por ejemplo, fotocatalítica-enzimática, enzimática enzimática, toda célula-
enzimática, etc.