Genetica MD - Curs 5 1 Aprilie 2013

GENETICA
MEDICINA DENTARA
CURS 5
1 aprilie 2013
AUTOR:
PROF.DR. EMILIA SEVERIN
UMF “Carol Davila”
Bucuresti
CROMOZOMUL MITOTIC
LA EUCARIOTE (Ek)
CROMOZOMUL MITOTIC LA Ek
• Este un corpuscul colorat;

• Purtator de informatie genetic;
• Alcatuit din ADN si proteine;
• Numarul si morfologia crz. sunt:
ELEMENTE CARACTERISTICE FIECAREI SPECII
2
GENETICA MD CURS 5 - A nu se copia sau distribui fara copyright
CELULA GAMETICA: CELULA SOMATICA:
n=23 n=46
CELULA
HAPLOIDA CELULA
DIPLOIDA
CELULA
HAPLOIDA
3
ELEMENTE MORFOLOGICE SI FUNCTIONALE
COMUNE
TUTUROR CROMOZOMILOR UMANI
1. CROMATIDELE
2. CENTROMERUL
3. TELOMERELE
4
CROMATIDELE
Sunt subunitati longitudinale

identice , CROMATIDE-
CROMATIDE- Brat
SURORI; scurt
p
Sunt atasate una de cealalta la
nivelul centromerului prin
intermediul unui complex
multiproteic (coezine);
coezine);
Brat
Fiecare cromatida este lung
impartita de centromer in doua
brate,
brate, notate conventional p
(bratul scurt)
scurt) si q (bratul
(bratul lung).
q
1 cromatida = 1 molecula ADN

CROMATIDE SURORI 5
CROMATIDA versus CROMOZOM
SINTEZA ADN
(replicare)
CROMATIDA CROMOZOM
(cromozom monocromatidic/nereplicat) (cromozom bicromatidic/replicat)
ADN 1 MOLECULA ADN = 1 CROMATIDA ADN ADN
6
REPLICAREA CROMOZOMILOR LA EK.
In faza S de sinteza
a ciclului celular
moleculele de ADN
cromozomial sunt
replicate pe baza REPLICAREA
mecanismului CROMOZOMILOR a
semiconservativ, fost dovedita
replicare care la experimental.
nivel de cromozom
se manifesta prin
aparitia cromatidei
sora.
7
REPLICAREA CROMOZOMILOR
In 1957 J. Herbert TAYLOR,
TAYLOR,
folosind tehnica autoradiografiei a examinat cromozomii din celulele radacinilor de
VICIA FABA (2n=12)
A monitorizat procesul
replicarii prin marcarea ADN-
ADN-
ului din cz. cu timidina tritiata.
In acest experiment timidina

marcata se gaseste numai in
cz. care contin ADN-
ADN-nou
sintetizat.
Autoradiografia este un
procedeu citologic ce permite
localizarea izotopului
radioactiv in cadrul celulei.
Vicia faba
8
REPLICAREA CROMOZOMILOR:
Experiment
2.
1. Radacinile au fost trecute pe un
Rezultatele obtinute au
Radacinile de Vicia faba au fost mediu “rece” care nu contine fost compatibile cu
tinute 8h in mediul cu timidina timidina tritiata ci colchicina, modelul semiconservativ
tritiata, mediu numit “cald”. De care opreste celulele in de replicare al ADN-
ADN-ului,
ce 8 ore? Pt. ca 8 ore dureaza metafaza si ajuta la demonstrat de Meselson-
Meselson-
faza S. determinarea numarului de Stahl.
cicluri de diviziune.
A III-
III-a replicare
Dupa prima replicare
A II-
II-a replicare – fiecare – ½ din cz au o cromatida
ambele cromatide ale
cz. are o cromatida “calda” si una “rece”
cromozomilor sunt
“calda” si una “rece” – ½ au ambele cromatide
marcate (radioactive)
“reci”
Concluzia:
Replicarea cz. are la
baza mecanismul
semiconservativ
9
EXPERIMENTUL LUI TAYLOR
GENERATIA I GENERATIA II GENERATIA III

Ambele O cromatida marcata – 50% din cz au o cromatida “calda”
cromatide radioactiv (galben) si o (marcata radioactiv – galben) si una “rece”
marcate cromatida nemarcata (nemarcata radioactiv – albastru);
radioactiv (albastru). – 50% din cz au ambele cromatide “reci”.
(galben).
Fara Fara Fara Fara Fara

Cu 3H 3H 3H 3H 3H
3H
REPLICARE I REPLICARE II REPLICARE III
10
GENETICA MD
CURS 5 - A nu se copia sau distribui fara copyright
Caracteristicile replicarii cromozomilor
umani
Cromozomul este o unitate

Unitatea de multirepliconica deoarece
replicare a cz. acesta contine intre 200 - 1500
Un replicon are intre 100-
100-200
de repliconi liniari, independenti,
uman este kb.
dispusi in molecula de ADN ce
REPLICON-ul; formeaza cromatida
cromozomului.
Replicarea asincrona poate fi:

- intracromozomiala: cz. 5q –
Cromozomii omologi se replica
Replicarea cz. este asincrona devreme; 5p – tardiva;
sincron (exceptie, cromozomul
datorita distributiei diferite a - intercromozomiala: cz. 15, 17,
X eucromatic, la femeie, care se
zonelor de eucromatina si de X eucromatic – precoce; cz. 14 –
replica precoce, iar cel
heterocromatic se replica tardiv. heterocromatina. intermediar; cz. 13, 16, 18, 21,
22, Y si X heterocromatic –
tardiv
Replicarea este programata -

fiecare cz. isi respecta modelul
specific de replicare.
11
Replicarea cromozomului MITOCONDRIAL
Este in acord cu particularitatile cz.

mitocondrial;
(circular, alcatuit din ADN necombinat cu

histone, densitatea diferita a celor 2 catene)
Are la baza mecanismul semiconservativ;
Este asincrona;
CROMOZOM
Relativ independenta fata de nucleu MITOCONDRIAL
(foloseste ADN polimeraza g sintetizata in

nucleu).
12
CENTROMERUL
Segmentul cromozomial de
la nivelul constrictiei - contine secvente de ADN
primare;
primare; satelit ce formeaza un bloc KINETOCORUL este o
de heterocromatina structura complexa, se
constitutiva la care se ataseaza ADN-
ADN-ului
fixeaza proteine specifice centromeric si capteaza
CENP (Centromer Proteins) microtubulii fusului de
si CLIP (Cytoplasmic Linker diviziune; protejeaza celula
Proteins) formand in mitoza de pierderea cromozomilor.
KINETOCORUL ;
- adeziunea cromatidelor
are rol in procesul de
--
FUNCTIILE segregare normala a surori (coezina se asociaza

heterocromatinei
CENTROMERULUI: cromatidelor / cromozomilor
centromerice dupa
in timpul diviziunii celulare;
replicarea cromozomilor).
13
CENTROMER si KINETOCOR
CENTROMER/ REGIUNEA
INTERNA A KINETOCORULUI
KINETOCOR REGIUNEA EXTERNA A

MICROTUBULI KINETOCORULUI
- Atasarea microtubulilor
- migrarea in anafaza
HETEROCROMATINA
CENTROMERICA
BRAT CROMOZOM
14
MARCAJUL C
evidentiaza heterocromatina constitutiva
CENTROMER
(heterocromatina
constitutiva)
15
TELOMERELE
sunt structuri specializate,

specializate, formate din
ADN repetitiv si proteine.
proteine.
- stabilirea
FUNCTIILE arhitecturii
TELOMERELOR: tridimensionale a
nucleului.
- mentin stabilitatea - asigura replicarea

si integritatea completa a
structurala a capetelor
cromozomului . cromozomilor.
16
SCURTAREA TELOMERELOR
SENESCENTA APOPTOZA
INSTABILITATE
GENOMICA * Activitatea telomerazei
inceteaza la scurt timp dupa
Alterari genetice multiple incheierea diferentierii
celulare
Activarea telomerazei
CANCER
Grup nou de
sindroame
17
TELOMERELE SI CICLUL CELULAR
SURSA: www.chrombios.com 18
ELEMENTE MORFOLOGICE SI FUNCTIONALE
COMUNE UNOR CROMOZOMILOR UMANI
1. SATELITII
2. CONSTRICTII SECUNDARE
3. SITUSURI FRAGILE
fra(Xq27.3)
fra(Xq27.3)
19
ELEMENTE MORFOLOGICE
COMUNE UNOR CROMOZOMI
Formatiuni de cromatina
atasate de bratele scurte ale
cz. acrocentrici. Atasarea se
A.SATELITII face prin filamente de ADN
ce contin genele de ARNr,
formand organizatorii
nucleolari.
B.CONSTRICTIILE Regiuni cz. caracterizate

SECUNDARE printr-
printr-o relativa
decondensare a cromatinei,
vizibila in interfaza.
La acest nivel cz. se pot

rupe usor atat in vivo cat si
C.SITUSURILE FRAGILE Au aspect de lacune in vitro (zone cu cromatina
COMUNE (SFC) necolorate sau constrictii; compacta, hipoacetilarea
histonelor); Sunt markeri
normali.
20
MARCAJUL NOR (nucleolar organizing region)
evidentiaza satelitii cromozomilor
21
ELEMENTE SPECIFICE FIECARUI CROMOZOM
BENZILE CROMOZOMIALE
Prin tratamente
Benzile Pozitia,
cromozomiale diferite si colorantii
specifici rezulta o Fiecare cz. prezinta succesiunea,
reflecta structura marimea si
serie continua de un model
interna heterogena a intensitatea culorii
benzi transversale: caracteristic de
cz. si definesc benzilor permit
benzi intens distributie a benzilor.
regiuni cu structura identificarea precisa
colorate/benzi slab
si functii diferite. a fiecarui cz.
colorate
Benzile sunt Modelul de benzi

este identic pentru Marimea benzilor
markeri citologici toate celulele unui variaza intre 5-
5-10
ai structurii organism si pentru Mb.
heterogene a cz. toti indivizii speciei.
(gradul de SUNT CORELATE CU

compactare al ORGANIZAREA FUNCTIONALA A
fibrei de CROMOZOMULUI !
cromatina in cz).
22
ELEMENTE SPECIFICE FIECARUI CROMOZOM
BENZILE CROMOZOMIALE
BANDA
Acel segment cromozomial , clar diferentiat de
segmentele adiacente,
adiacente, avand o coloratie mai
inchisa sau mai deschisa.
deschisa.
REPERE SPECIFICE
-Centromerul
-Unele benzi
-Telomerele
7q26 REGIUNI
BENZI
.2 SUB-BENZI
23
CARIOGRAMA - CARIOTIP - IDIOGRAMA
CARIOTIP
(formula
cromozomiala)
cromozomiala)
descrierea alfa-
alfa-
numerica a
CARIOGRAMA : cromozomilor unei
cariograme.
cariograme IDIOGRAMA:
IDIOGRAMA:
aranjarea ordonata ,
dupa criterii bine stabilite,
stabilite, reprezentare schematica
a cromozomilor unei 46,XY,t(8;15)(p23;q14) a dispozitiilor benzilor
metafaze.
metafaze. cromozomiale
24
CARIOTIPUL (CARIOGRAMA) NORMAL
aranjarea ordonata a
cromozomilor unei Definiţie:
metafaze.
metafaze.
mărimea,
poziţia centromerului,
prezenţa sateliţilor, Criterii de
prezenţa constricţiilor aranjare:
secundare,
modelul de benzi.
Aranjaţi în şapte Autozomii sunt Gonozomii sunt

Numărul total grupe de numerotaţi de la 1
de cromozomi cromozomi notate la 22 în ordinea
aşezaţi separat,
convenţional de la descrescătoare a la sfârşitul
este 46
Caracteristici: A la G mărimii cariotipului.
25
CROMATIDA
Brat
Constrictie
scurt
secundara
(p)
Constrictie primara
CENTROMER
Brat
lung
(q)
Constrictie
secundara
CROMOZOM METAFAZIC CARIOTIP 46,XY
26
Identificarea cromozomilor metafazici: CRITERII
1.marimea; 2.modelul de benzi; 3.pozitia

centromerului.
marimea
modelul de
benzi
pozitia
centromerului
27
IDENTIFICAREA CROMOZOMILOR
prin folosirea unor tehnici de analiza cromozomiala conventionale
1. MARIMEA
2. POZITIA CENTROMERULUI
3. MODELUL DE BENZI
(unic pentru fiecare cromozom)
28
IDENTIFICAREA CROMOZOMILOR
LUNGIMEA CROMOZOMULUI
POZITIA MIJLOCII MICI

MARI
CENTROMERULUI
metacentrici A 1-3 E 16 F 19-20
submetacentrici B 4-5 C 6-12, E 17-18

X
acrocentrici - D 13-15 G 21-22,

Y
29
DESCRIEREA SINTETICA A UNUI CARIOTIP
NORMAL SAU ANORMAL
FORMULA DE BAZA CUPRINDE 3

ITEMURI:
• Precizeaza numarul de cromozomi.

• Constitutia cromozomilor de sex (normala
/anormala).
• Anomaliile de numar sau de structura (daca este
cazul).
De exemplu,
exemplu,
46,XX sau 46, XY sau 46,XX/47,XXX sau 47,XY,+21
30
TEHNICI DE ANALIZA CROMOZOMIALA
Tehnici de generatia a I-a::

asigura colorarea uniforma a cromozomilor;
cromozomilor;
Tehnici de generatia a II-a::

asigura obtinerea unui marcaj cromozomial in metafaza (marcaj Q,G,R,C,T si NOR);
Tehnici de generatia a III-a:

asigura obtinerea unui marcaj cromozomial de inalta rezolutie pe cromozomi
prometafazici si metafazici;
metafazici;
Tehnici de generatia a IV-a:

de citogenetica moleculara (FISH, MLPA, QF-
QF-PCR);
Tehnici de generatia a V-a:

tehnici genomice bazate pe microretele (aCGH,
aCGH, SNP).
31
EXAMINAREA CROMOZOMILOR UMANI PRIN TEHNICI DE RUTINA:
TEHNICI DE GENERATIA I si II
1.Celula in INTERFAZA ciclului celular:

CROMATINA SEXUALA
2. Celula in METAFAZA mitozei ciclului G C

celular:
- Coloratia uniforma a crz.

- Marcajul Q
- Marcajul G R NOR
- Marcajul C Q
- Marcajul R/T
- Marcajul NOR
32
TEHNICI DE GENERATIA I
coloratia uniforma a cromozomilor
PLACA METAFAZICA 14 + 8 + 14 + 10 = 46
8
14
10
NUMARUL TOTAL DE
14 CROMOSOMI:
CELULA SOMATICA: 2n=46

33
CLASIFICAREA CROMOZOMILOR FOLOSIND:
INDICELE CENTROMERIC si MARIMEA
large mari
Metacentricii
metacentric
Metacentricii mici
Acrocentricii mari
Acrocentricii mici
Restul crz.
submetacentrici
Indice
centriomeric
Ic= p / p+q
PLACA METAFAZICA
34
TEHNICI DE GENERATIA III
Marcaj de inalta
rezolutie
Sunt utilizati
cromozomi slab
condensati
caracteristici
primelor faze ale
diviziunii;
diviziunii;
Fiecare banda din

crz.metafazic poate
fi subdivizata in
sub-
sub-benzi;
benzi;
Se identifica 550-
550-
850 benzi / genom
haploid.
*Fiecare banda are ~ 5 Mb = limita maxima de rezolutie in citogenetica conventionala.

conventionala.
35
TEHNICI DE GENERATIA III
A. B.
Perechea de OMOLOGI
GONOZOMI
A – placa metafazica cu marcaj cromozomial G;

B – cariotip uman normal 46,XY 36
CARIOTIP uman normal 46,XX – marcaj cromozomial G
A B
D E
F G
37
FISH (Fluorescence In Situ Hybridisation)
ADN tinta DENATURARE

SONDA SONDA
centromerica locusspecifica
SONDA wpc M-FISH
SONDA
eduard.kocarek@lfmotol.cuni.cz
HIBRIDIZARE
38
ARANJAREA CROMOZOMILOR in CARIOTIP
MARCAJ G M-FISH (Multiplex FISH)

39
INDICATII PENTRU ANALIZA
CROMOZOMILOR
Analiza cromozomilor este utilă în următoarele situaţii:
PRENATAL
Sarcină în cazul unei femei cu o vârstă care depăşeşte 40 de ani;
Sexul fătului în cazul unor boli genetice legate de cromozomul X.
NEONATAL
Moarte neonatală;
Malformaţii congenitale;
Organe genitale ambigue;
Suspiciune de sindrom cromozomial.
40
INDICATII PENTRU ANALIZA
CROMOZOMILOR
Analiza cromozomilor este utilă în următoarele situaţii:
ADOLESCENTA
Amenoree primară;
Retard al creşterii, statură mică.
ADULT
infertilitate, avorturi spontane repetate;
Handicap mintal;
Anumite tulburări maligne (leucemie);
Screening în cazul persoanelor care au rude cu tulburări cromozomiale

cunoscute.
41
CLASIFICAREA SI NOMENCLATURA
CROMOZOMILOR UMANI
IDENTIFICAREA • Se utilizeaza
CROMOZOMILOR SE FACE criterii precis
PE BAZA MORFOLOGIEI stabilite
CROMOZOMILOR (ISCN).
42
INTERNATIONAL SYSTEM of
HUMAN CYTOGENETIC NOMENCLATURE – ISCN, 2013
versus
43
Simboluri fo
folosite
losite pentru descrierea cariotipului
(ISCN, 2009)
SIMBOLUL SEMNIFICATIE
p Bratul scurt al cromozomului
q Bratul lung al cromozomului
cen centromer
ter terminal
A-G Grupe cromozomiale
1 - 22 Numerele perechilor de autozomi

umani
X, Y Cromozomii sexului (gonozomi sau

heterozomi)
44
HETEROMORFISMUL CROMOZOMIAL UMAN
Aceste variaţii
individuale nu au nici
un efect fenotipic
nefavorabil şi evident
pentru individ –
NU AU EXPRESIE
FENOTIPICA.
FENOTIPICA.
Defineste variatiile
morfologice ale unor regiuni
cromozomiale prezente la
Sunt rare în populaţie;
indivizi din populatia
(mai frecvente la generala;
generala;
cuplurile cu avorturi
spontane repetate sau
in grupul persoanelor
cu retard mental)
mental)
Se moştenesc
mendelian.
45
Regiunile In citogenetica umană

cromozomiale variaţiile morfologice
variabile morfologic
sunt zone de individuale sunt utilizate
heterocromatina ca markeri genetici
variabile ca marime si pentru identificarea
inactive genetic. anumitor cromozomi.
WYANDT & TONK , 2004

Kluwer Academic Publisher
46
Cromozomul marker este un cromozom diferit

morfologic de omologul său.
SURSA: Tchinda & Lee, Bio Technique 2006,

vol.14: 385-
385-392
47
La om, au fost
evidenţiate patru
tipuri de regiuni 2.Regiunile
2.Regiunile
variabile: pericentromerice ale
1.Marimea
1.Marimea variabila a tuturor cromozomilor
regiunii heterocromatice a
implicând mărirea
cromozomului Y;
Y; heterocromatinei
adiacente
adiacente centromerului.
3.Polimorfismul marimii si 4.Situs-

4.Situs-urile fragile induse
numarului satelitilor;
satelitilor; de antifolati.
antifolati.
48
De exemplu:
Constricţia secundară prezenta pe bratul q al cromozomilor 1,

9 si 16 poate fi alungită (are o lungime dublă faţă de omolog)
sau diminuată. Se notează astfel: 9qh+ sau 9qh-qh-;
Variaţii dimensionale ale braţului q al cromozomului Y

(10% din bărbaţii normali clinic). De exemplu, Yq+ (mai
mare decât q al cromozomului 19) sau Yq- Yq- (mai mic decât
q al cromozomului 22). Cromozomul Y foarte foarte mic
favorizează nondisjuncţiile în meioza paternă.
49
PATOLOGIA CROMOZOMIALA IN CLINICA SI
IN LABORATOR
CROMOZOMUL Philadelphia
CROMOZOMUL 21
CROMOZOMUL X
50
REFERINTE ELECTRONICE
Pentru ilusrarea experimentelor si a mecanismelor

moleculare prezentate s-au preluat imagini din
domeniul public.
SURSE:
http://images.google.com
www.google.com
http://www.juliantrubin.com/bigten/dnaexperiments.html
http://nucleus.cshl.org/CSHLlib/DNAinNY/Case5/Case_5.htm
http://www.allometric.com/tom/courses/bil255/bil255goods/09_dna.html
https://wikispaces.psu.edu/display/230/DNA+and+Chromosomes
https://deltawire.delta.ncsu.edu/around-
https://deltawire.delta.ncsu.edu/around-campus/making-
campus/making-metabolism-
metabolism-easier-
easier-to-
to-digest/
http://www.stolaf.edu/people/giannini/flashanimat/molgenetics/transcription.swf
http://bio3400.nicerweb.com/Locked/media/ch11/
Pentru clarificarea unor probleme legate de tematica

predata la curs se pot trimite intrebari la adresa:
geneticaintrebari@gmail.com
CURS 5 - A nu se copia sau distribui fara copyright ES 51

NE REVEDEM SAPTAMANA
VIITOARE !
Joi
4 Aprilie

Genetica MD - Curs 5 1 Aprilie 2013

Enviado por

Dados do documento

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Genetica MD - Curs 5 1 Aprilie 2013

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

GENETICA

• Este un corpuscul colorat;

Sunt subunitati longitudinale

1 cromatida = 1 molecula ADN

ADN 1 MOLECULA ADN = 1 CROMATIDA ADN ADN

In acest experiment timidina

GENERATIA I GENERATIA II GENERATIA III

Fara Fara Fara Fara Fara

REPLICARE I REPLICARE II REPLICARE III

Cromozomul este o unitate

Replicarea asincrona poate fi:

Replicarea este programata -

Este in acord cu particularitatile cz.

(circular, alcatuit din ADN necombinat cu

Are la baza mecanismul semiconservativ;

(foloseste ADN polimeraza g sintetizata in

FUNCTIILE segregare normala a surori (coezina se asociaza

KINETOCOR REGIUNEA EXTERNA A

sunt structuri specializate,

- mentin stabilitatea - asigura replicarea

COMUNE UNOR CROMOZOMILOR UMANI

B.CONSTRICTIILE Regiuni cz. caracterizate

La acest nivel cz. se pot

Benzile sunt Modelul de benzi

(gradul de SUNT CORELATE CU

Aranjaţi în şapte Autozomii sunt Gonozomii sunt

CROMOZOM METAFAZIC CARIOTIP 46,XY

1.marimea; 2.modelul de benzi; 3.pozitia

POZITIA MIJLOCII MICI

submetacentrici B 4-5 C 6-12, E 17-18

acrocentrici - D 13-15 G 21-22,

FORMULA DE BAZA CUPRINDE 3

• Precizeaza numarul de cromozomi.

46,XX sau 46, XY sau 46,XX/47,XXX sau 47,XY,+21

Tehnici de generatia a I-a::

Tehnici de generatia a II-a::

Tehnici de generatia a III-a:

Tehnici de generatia a IV-a:

Tehnici de generatia a V-a:

1.Celula in INTERFAZA ciclului celular:

2. Celula in METAFAZA mitozei ciclului G C

- Coloratia uniforma a crz.

CELULA SOMATICA: 2n=46

Fiecare banda din

*Fiecare banda are ~ 5 Mb = limita maxima de rezolutie in citogenetica conventionala.

A – placa metafazica cu marcaj cromozomial G;

ADN tinta DENATURARE

SONDA wpc M-FISH

MARCAJ G M-FISH (Multiplex FISH)

Sarcină în cazul unei femei cu o vârstă care depăşeşte 40 de ani;

Sexul fătului în cazul unor boli genetice legate de cromozomul X.

Organe genitale ambigue;

Suspiciune de sindrom cromozomial.

Retard al creşterii, statură mică.

infertilitate, avorturi spontane repetate;

Anumite tulburări maligne (leucemie);

Screening în cazul persoanelor care au rude cu tulburări cromozomiale

q Bratul lung al cromozomului

A-G Grupe cromozomiale

1 - 22 Numerele perechilor de autozomi

X, Y Cromozomii sexului (gonozomi sau

Regiunile In citogenetica umană

WYANDT & TONK , 2004

Cromozomul marker este un cromozom diferit