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Tecnología CRISPR-Cas9: una herramienta aplicable en la agricultura de


Costa Rica

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Andres Zuniga
Universidad Estatal a Distancia
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Artículos Científicos
Tecnología CRISPR-Cas9: una herramienta aplicable
en la agricultura de Costa Rica
Andrés Zúñiga Orozco1
Docente e Investigador de la carrera Ingeniería Agronómica, Escuela de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad
Estatal a Distancia. Apdo. 474-2050 San Pedro, San José, Costa Rica. Correo: azunigao@uned.ac.cr
Teléfono: (506) 22021813.

Recibido: 06 setiembre 2017 Aceptado: 02 octubre 2017

RESUMEN del aumento en rendimiento en algunos cultivos


como arroz, trigo y maíz, se incorporaron una
En la actualidad la técnica de biología molecular CRISPR-
serie de tecnologías que permitieron aprovechar
Cas9, es la más estudiada a nivel global para la edición
genómica. Por su facilidad, adaptabilidad, versatilidad, al máximo el rendimiento potencial de los culti-
precisión y costo relativamente bajo es una tecnología que vos, en las condiciones a que estaban sometidos
puede cambiar el panorama en la agricultura. El objetivo de los agricultores en los países en desarrollo. Los
este artículo es hacer una reseña y descripción acerca de la progresos científicos se vieron favorecidos por
tecnología CRISPR-Cas9, mencionar algunas aplicaciones un notable crecimiento de los sectores comercia-
que se han realizado en la agricultura y citar algunas posi-
bilidades que serían aplicables en Costa Rica.
les que suministraban insumos a la agricultura.
El desarrollo de nuevas variedades de cultivos,
Palabras clave: CRISPR-Cas9, agricultura, biotecnología, el conocimiento adquirido en algunos conceptos
genética como vigor híbrido (Beal 1880), desarrollo de
líneas puras (Shull 1908 y 1909, Jones 1918),
ABSTRACT
los bancos de germoplasma y el interés por au-
At present the technology of molecular biology CRISPR-
mentar la productividad potenciaron el uso del
Cas9, it is the most studied worldwide for the genomic edi- mejoramiento genético convencional como par-
tion. Because of its ease, adaptability, versatility, precision te de las tecnologías al servicio de los producto-
and relatively low cost is a technology that can change the res durante ese periodo.
landscape in agriculture. The aim of this article is to do La bonanza de la Revolución Verde comen-
a review and description about the CRISPR-Cas9 technol-
zó a declinar en la década de los años 80-90,
ogy, to mention some applications that have been realized
in agriculture and to mention some possibilities that would cuando se registraron estudios que describían y
be applicable in Costa Rica. evidenciaban la contaminación e impacto am-
biental de las tecnologías utilizadas hasta ese
Key words: CRISPR/Cas9, agriculture, biotechnology, momento, y de cómo habían generado efectos
genetics negativos en el ambiente, la vida silvestre e inclu-
so en la salud humana (Ceccon 2008; Eckholm
1978 y Freebairn 1995). Al margen de los efec-
tos positivos y negativos que tuvo la Revolución
Mejoramiento Genético con el Verde como lo relatan muchos organismos inter-
desarrollo de la Revolución Verde nacionales, gobiernos, activistas, agrupaciones
agropecurias, productores y la sociedad civil, es
La Organización de las Naciones Unidas para importante rescatar que fue el inicio del adveni-
la Agricultura y la Alimentación (FAO) (1996) y miento de una serie de tecnologías en mejora-
Echarri (1998) describen a la Revolución Verde miento genético que marcaron la pauta a seguir
como una serie de acontecimientos que, además durante los años siguientes.

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Tecnologías desarrolladas como se presenta el caso en que se incorporan algu-
herramientas en mejoramiento nos genes a un cultivo determinado siendo el
genético donador perteneciente a otro reino de organis-
mos distintos al vegetal. Esta técnica biotecno-
Algunas tecnologías emergentes desarrolla- lógica ha ocasionado diversas reacciones en la
das para mejoramiento genético han logrado ser comunidad científica, en organizaciones am-
muy exitosas, como es el caso de las mutacio- bientalistas, gobiernos y la sociedad civil, ha-
nes inducidas e inducción de poliploides en las biéndose encontrado grupos polarizados a favor
cuales se espera obtener variabilidad del mate- y en contra. A pesar de que los transgénicos son
rial genético. El cultivo de anteras es otra técni- una técnica que ha ocasionado reacciones tan
ca que se usa para el desarrollo de líneas puras, diversas según cada país, sector, legislación y
dando como resultado líneas conocidas como consumidor, es indiscutible que abrió una gran
haploides, lo cual vino a mostrar caracteres en discusión con una heterogeneidad de actores,
su condición homocigota más fácilmente y con los cuales enriquecieron mucho el discurso y fa-
esto contribuir en acortar el periodo de desarro- vorecieron las posiciones científicas que actual-
llo de variedades. mente se argumentan con respecto a este tema
Una técnica muy utilizada es el rescate o y con respecto al rumbo que deben tomar las
cultivo de embriones, el cual consiste en culti- nuevas tecnologías en el mejoramiento genéti-
var éstos mismos invitro en etapas tempranas co. Fruto de la discusión científica generada se
para superar barreras poscigóticas, las cuales en comenzó a investigar en la tecnología CRISPR-
ocasiones son impedimento y generan diferentes Cas9, Clustered Regularly Interspaced Short
grados de incompatibilidad en cruzamientos in- Palindromic Repeats, en español “Repeticiones
terespecíficos, estos cruces biparentales se han Palindrómicas Cortas Agrupadas y regularmente
utilizado normalmente junto a cruzamientos Interespaciadas”, pareciera difícil de entender,
“puente”, este último involucrando más de 2 es- pero realmente es más sencillo de lo que aparen-
pecies, pero con el mismo fin, trasladar genes de ta según veremos más adelante.
una especie a otra. El origen del trigo fue el re-
sultado del uso de ésta técnica, usando especies CRISPR-Cas9: sus orígenes
“puente”; posteriormente los investigadores hi-
cieron una modificación a esta técnica utilizan- A inicios de los años 80 se descubrió en la
do los embriones para facilitar la compatibilidad bacteria Escherichia coli (Bolivar et al. 1977), el
entre especies. mecanismo por el cual se defendían de algunos
Recientemente se ha implementado el uso virus. En 1987 se confirmó el mismo mecanismo
de marcadores moleculares, los cuales vinieron en la bacteria Streptococcus pyogenes (Dciencia
a favorecer el proceso de selección. Este método 2015) y en 2007 (Barrangou et al. 2007) con la
se ha utilizado para identificar genes de toleran- bacteria Streptococcus thermophilus se demos-
cia a ciertas enfermedades en muchos cultivos. tró que la bacteria podía adquirir resistencia con-
La producción de híbridos somáticos ha sido tra bacteriófagos integrando un fragmento del
otra de las técnicas utilizadas en laboratorio, la genoma de un virus dentro de su locus CRISPR.
cual consiste en fusionar dos células provenien- Posteriormente se identificaron 4 mecanismos
tes de diferentes especies, esta es una técnica de defensa siendo el II el más estudiado por
que han utilizado los desarrolladores de produc- su simplicidad y adaptabilidad para la edición
tos transgénicos. genómica (Reis A., Hornblowe B., Robb B.,
A partir de la década de los 90 se inició la Tzertzinis G. 2014). No fue hasta el 2011 cuando
revolución de los productos transgénicos por por primera vez se logró dilucidar como modi-
medio de diversas técnicas en las cuales, se in- ficar el genoma de E.coli con base en la secuen-
corporan algunos genes de una especie vegetal cia de resistencia identificada en S.thermophilus
relacionada a un cultivo determinado o también para adquirir inmunidad a la transformación

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de plasmidos (Sapranauskas et al. 2011), estu- componente (CRISPR) es un ARN que guía a
dio que luego se comprobó y ejecutó en 2012 las “tijeras” hacia una secuencia de nucleótidos
con los trabajos de Jinek et al. (2012). Este hito específica que ha sido enviada a cortar, a esta
científico se basó en los trabajos de Mojica FJ, secuencia se le conoce como objetivo o target.
Diez-Villasenor C, García-Martinez J y Soria E. Una vez encontrado el objetivo o target, la Cas9
(2005), Barrangou et al. (2007), Brouns et al. abre la cadena de ADN y deja la puerta abierta
(2008), Marraffini y Sontheimer (2008), Hale et para que se modifique la secuencia de nucleóti-
al. (2009), Haft DH, Selengut J,Mongodin EF y dos. Podemos observar en la figura 1 una repre-
Nelson KE (2005), Pul et al. (2010) y Garneau sentación básica del procedimiento:
et al. (2010) donde se habían estudiado y diluci- Este sistema de defensas utilizado por algu-
dado los mecanismos previos. nas bacterias, como se explicó anteriormente, in-
Una vez concretado este paso se abrió un cluso va más allá, las proteínas Cas son capaces
abanico de opciones y aplicaciones para la mo- de tomar una pequeña parte del ADN viral, mo-
dificación genómica de precisión en cualquier dificarlo e integrarlo dentro del conjunto de se-
organismo biológico con esta tecnología, la cual cuencias CRISPR. De esa forma, si esa bacteria
fue nombrada como: CRISPR-Cas9. (o su descendencia) se encuentra con ese mismo
virus ahora inactivará de forma mucho más efi-
¿En qué consiste la tecnología ciente el material genético viral. Es, por lo tanto,
CRISPR-Cas9? un verdadero sistema inmune de bacterias.
La tecnología CRISPR-Cas9 es una herra-
Después de dilucidar los 4 mecanismos de mienta molecular que viene a ser utilizada para
defensa principal que tienen las bacterias contra “editar” o “corregir” el genoma de cualquier cé-
los virus, el mecanismo II ha sido el más am- lula, gracias a ese mecanismo dilucidado en bac-
pliamente estudiado. El complejo CRISPR-Cas9 terias. Eso incluye, claro está, desde células de
tiene dos componentes, el primero es una enzima bacterias, virus, hongos, plantas, animales y las
(Cas9) que funciona como una tijera para cortar células humanas. Algunos autores lo mencionan
ADN (en la naturaleza las bacterias la usan para analógicamente como unas “tijeras” molecula-
desarmar el genoma de virus invasores), el otro res que son capaces de cortar cualquier molécula

Figura 1. Representación gráfica de la tecnología CRISPR/Cas9. Fuente: Bernal-Franco D. (2015).

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de ADN, haciéndolo además de una manera muy produjo un exceso de flores y frutos pequeños
precisa y totalmente controlada. Esa capacidad (Figura 2, derecha), los cuales muchas veces no
de cortar el ADN es lo que permite modificar su llegan a llenar y más bien contribuyen a drenar
secuencia, eliminando o insertando nuevo ADN los fotoasimilados. Los investigadores están
(Hobbs 2016, Dciencia 2015 y Specter 2016). modificando la arquitectura de la inflorescencia
Según Opazo (2016), entre las ventajas de para ajustar la cantidad de flores y frutos para
la tecnología podemos citar que es barata, incre- cada tipo de tomate, sea tipo bola (Figura 2, ima-
menta la rapidez para obtener resultados, preci- gen del medio) o tipo cherry (Figura 2, izquier-
sa, puede eliminar la transgénesis y el debate en da), lo anterior con el fin de evitar pérdidas y
torno a este tema, entendiendo su mecanismo aumentar rendimiento, lo cual inevitablemente
debería reducir los obstáculos regulatorios en mejorará la rentabilidad.
los países y la rápida evolución le ha permiti- Con la aplicación explicada anteriormente
do, incluso a PYMES (Pequeñas y Medianas vemos como con CRISPR-Cas9, se ha creado un
Empresas), desarrollar la aplicación. nuevo tipo de poder disponible para la especie
humana, por primera vez los científicos pueden
Aplicaciones rápida y precisamente alterar, borrar o reorga-
nizar todos los organismos vivos, incluyendo
En la figura 2 se observa una de las prime- al ser humano.
ras aplicaciones en cultivos, Soyk et al. (2017) Las aplicaciones dilucidadas con esta tecno-
encontraron que el mejoramiento convencional logía tienen la amplitud de la imaginación que

Figura 2. Tomate (Solanum lycopersicum) modificado en la arquitectura de la inflorescencia y frutos por medio de la técnica CRISPR-
Cas9. Fuente: Soyk et al. (2017).

alcance entre los científicos, gobiernos, sectores proyecto de trascendencia mundial para erra-
productivos, salud pública, conservación, medio dicar la Malaria modificando el ADN del mos-
ambiente y en general todos los sectores que tra- quito vector (Anopheles gambiae) para adquirir
bajen con organismos biológicos. La intención inmunidad a ser infectado por el agente patóge-
de esta revisión es mencionar algunas de las no. En otras investigaciones recientes se está ini-
aplicaciones en las que se está utilizando actual- ciando un equipo de especialistas que trabajen
mente, principalmente en el sector agrícola, pero con la manipulación del virus del VIH, modifi-
la posibilidad general es muy amplia. cando el ADN humano; también con el enfoque
En salud pública, el científico Anthony de salud pública, se está trabajando en eliminar
James de la universidad de California, inició un la susceptibilidad a virus en órganos de cerdos

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para hacerlos compatibles con el ser humano Para Costa Rica hay aplicaciones poten-
(Specter 2016). ciales para aplicar esta tecnología, se citan los
Recientemente también se ha iniciado pro- siguientes casos por el impacto que podrían ge-
tocolos para la modificación de células huma- nerar en el sector:
nas con los trabajos realizados por Mali et al.
(2013), lo cual, ha abierto el debate global acer- • En cítricos: crear la capacidad para desac-
ca de las implicaciones bioéticas, de hecho nun- tivar genes receptores del virus huanglong-
ca antes una tecnología emergente ha puesto en bing (HLB) en psílidos (Diaphorina citri)
discusión la posibilidad tan real de modificar el que atacan a este cultivo.
ADN humano, sin embargo, tendrá que superar • En tomate: crear la capacidad para desacti-
muchos foros científicos donde se discuta has- var genes receptores del virus de la cucha-
ta qué punto es bueno el alcance de la misma; ra en especies de mosca blanca (Bemisia
los resultados podrían poner freno a sus aplica- tabaci y Trialeurodes vaporariorum), las
ciones, debido a que, no necesariamente todos cuales atacan plantaciones de tomate. Así
los campos de la biología deberían ser autori- mismo la posibilidad se puede ampliar a
zados para la modificación genómica, especial- una variedad de virus fitopatógenos, ya que
mente en genética humana explora la brecha esta plaga tiene la capacidad de ser vector
de intervenir la “esencialidad” de la especie si en muchos cultivos y para una amplia va-
se usa indebidamente. riedad de virus. En tomate también hay un
En el sector agrícola se ha registrado en alto potencial para desarrollar variedades
Estados Unidos, la legalización y comercializa- con altos niveles de Lycopeno, el cual se
ción de hongos que no se oxidan (Opazo 2016). reporta como un poderoso anticancerígeno,
La empresa Cellectis Plant Sciences está desa- actualmente instituciones como el Instituto
rrollando una papa que tenga mayor vida posco- Nacional de Aprendizaje (INA) y el Instituto
secha y se pueda freír sin acumular acrilamida, Nacional de Innovación y Transferencia de
sustancia que se cree tener un efecto canceríge- Tecnología Agropecuaria (INTA) disponen
no. Esta papa se ha creado en tan solo 1 año, de materiales promisorios.
mientras que por métodos convencionales tar- • En arroz: modificar genes de resistencia a
daría entre 5-10 años y ha costado diez veces la sequía por medio de la identificación e
menos que producir maíz o soya transgénica implantación de la resistencia que le pue-
(Regalado 2015). de conferir la planta de la “resurrección”
Sorprendentemente, después de 6 años de (Selaginella lepidophylla). Esta planta ori-
ser anunciada esta tecnología, se comenzó a tra- ginaria de los desiertos de México com-
bajar en cómo aumentar la productividad modi- parte la ruta de resistencia a déficit hídrico
ficando la fotosíntesis, lo cual representa todo un en muchas especies vegetales por lo que se
reto al ser genética cuantitativa, este es el caso ha encontrado como una especie altamen-
de modificar la fotosíntesis C3 para convertirla te potencial para transferir su secuencia de
en C4 en cultivos como arroz (Bullis 2015). genes a diversos cultivos. Actualmente insti-
El siguiente paso será cambiar las letras del tuciones como el Centro de Investigaciones
ADN de los genes de las plantas, cambiando la en Biología Celular y Molecular (CIBCM)
versión de un gen en una planta por la de otra de la UCR está comenzando a trabajar
que se sabe que es resistente a una enfermedad, en esta línea.
comúnmente se le ha llamado terapia génica. • Frutas tropicales: la creación de colores
Este es el caso del trigo donde se viene reali- de cáscara nuevos y atractivos en cultivos
zando investigaciones para hacerlo resistente tropicales es clave para el país, ya que és-
al oidio o mildiú (Wang et al. 2015 y Acevedo- tos, tienen una alta demanda en los merca-
García et al. 2016). dos internacionales y son exclusivos de las

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regiones tropicales, tales cultivos son la pa- Actualmente, instituciones como el Centro
paya, mango, piña y banano. Agronómico Tropical de Investigación y
• Pitahaya: se puede modificar la región genó- Enseñanza (CATIE) trabajan por medio del
mica que confiera resistencia a Fusarium sp. mejoramiento genético convencional, sin
y Enterobacter ormaechei (bacteria identi- embargo esta investigación puede tardar de
ficada en Costa Rica por Retana K. 2015, 10-15 años en obtener una variedad con al-
datos sin publicar) los cuales atacan seve- gún grado de resistencia.
ramente al cultivo de pitahaya (Hylocereus • En banano: el mismo caso mencionado para
megalanthus). Inversamente se podría hacer el cultivo de cacao se puede aplicar para el
a las enfermedades menos agresivas modifi- cultivo de banano, para el control del hon-
cando su genoma y así con muchas enferme- go Sigatoka (Mycosphaerella fijiensis), el
dades que lo permitan, tanto en este cultivo impacto en el control de esta enfermedad,
como en otros. no solamente se enfocaría en la reducción
• Café: por la importancia que representa el de costos, tendría un mayor impacto a nivel
cultivo de café en el país y el alto costo en ambiental y social.
el manejo de enfermedades, se puede modi- • En piña: el control de la floración es un ca-
ficar la resistencia hacia fitopatógenos como rácter de difícil fijación por medio del me-
lo son el ojo de gallo (Mycena citricolor) y joramiento convencional, CRISPR-Cas9
la roya (Hemileia vastatrix). También hay podría modificar la secuencia que codifica
una gran posibilidad de sincronizar la flora- para la expresión de la floración y modificar-
ción a un evento ya que actualmente muchos la para expresarla en un periodo específico
productores tienen altos costos de produc- del cultivo y de esta forma lograr planificar
ción al tener 3 o hasta 4 eventos de floración mejor la producción, así como la reducción
en el año. de pérdidas y una mayor rentabilidad en el
• Cultivos ornamentales: actualmente Costa cultivo. También en piña las repercusiones
Rica exporta una gran cantidad de espe- ambientales de la mosca Stomoxys calci-
cies vegetales entre las cuales podría iden- trans sobre la salud humana y la producción
tificar los genes que expresan los colores, pecuaria podría ser un problema resuelto,
modificarlos y obtener colores nuevos para esto se lograría disminuyendo la fertilidad
el mercado. Tal es el caso de la Caña India de las hembras de esta mosca por modifica-
(Dracaena fragans var. massangeana), la ción de sus genes.
cual tiene un ciclo muy largo, una floración
difícil de inducir y por ende el mejoramien- Son múltiples las aplicaciones que puede lo-
to genético convencional se dificulta. Otras grarse con CRISPR-Cas9, sin embargo, deberán
especies de Dracaena spp. también podrían analizarse desde la importancia e impacto que
ser modificadas. Flores y esquejes que ac- puede causar en el sector agrícola.
tualmente se exportan se pueden ver bene-
ficiados al poder ofrecer nuevos colores y El futuro de CRISPR-Cas9
combinaciones de los mismos, identificando
los locus que codifican para la expresión de El rápido progreso en el desarrollo de nue-
color, y con esto ofrecer una mayor variabi- vas herramientas para la investigación en biolo-
lidad de productos al mercado. gía celular y molecular ha sido notorio, marcado
• En cacao: para todos es bien conocida la sus- por herramientas simples, versátiles y eficien-
ceptibilidad de este cultivo al hongo Monilia tes. De los sistemas diseñadores de nucleasas,
(Moniliophtora roreri), encontrando la se- CRISPR-Cas9 es por mucho el más amigable
cuencia de los genes que codifican para la para el usuario y consumidor final. Está claro
resistencia podrían modificarse para hacer ahora que la utilidad de ésta tecnología para la
al cultivo más tolerante o incluso resistente. modificación en locus específicos, está limitado

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Artículos Científicos
solo por la imaginación, además en años veni- Small. CRISPR RNAs guide antiviral defense in
deros es esperable el debate acerca del mejor prokaryotes. Science. 2008 (321): 960-964.
aprovechamiento de la agricultura orgánica, la
Bullis, K. (2015) (en línea). Supercharged photosynthesis:
convencional, la sostenible y la proveniente de
advanced genetics tools could help boost crop yields and
la biotecnología, las cuales podrían enlazarse. feed billions more people. MIT Technology Review.
Como hemos visto, la comunidad científica Consultado el día 14 de julio de 2017. Disponible
y la población en general se encuentran ante una en: https://www.technologyreview.com/s/535011/
tecnología que va a despertar odio y pasiones. supercharged-photosynthesis/#comments
Que ya ha desatado una guerra por los dere-
chos de uso de la patente. Pero, sobre todo, la Ceccon, E. (2008). La Revolución Verde: tragedia en dos
CRISPR/Cas9 ha cambiado la forma en la que actos. Ciencias (91): 20-29p.
vemos el futuro de la agricultura y la biotecno-
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