Article original
Ann Biol Clin 2013 ; 71 (6) : 679-91
Étude des performances analytiques d’un automate
d’hématologie (Advia® 2120 i Siemens)
et apport sur la pratique quotidienne
Evaluation of an haematological analyser (Siemens Advia® 2120i)
and improving quality of daily practice
Laura Melet
Christine Chaigneau
Magali Lefevre-Pettazzoni
Laboratoire de biologie médicale,
Groupe hospitalier public du Sud
de l’Oise, France
<magali.lefevre@ch-creil.fr>
Article reçu le 05 juillet 2013,
accepté le 18 juillet 2013
Faisant suite à la loi Hôpital patient santé et territoire
(HPST) du 22 juillet 2009, l’ordonnance n◦ 2010-49 rela-
tive à la biologie médicale est parue le 13 janvier 2010,
et la loi en découlant le 31 mai 2013. Elle comprend deux
mesures phares pour la biologie médicale : la médicalisation
de la biologie et l’accréditation des laboratoires d’analyse
médicale, les laboratoires devront avoir fourni leur preuve
doi:10.1684/abc.2013.0893
d’entrée effective dans la démarche d’accréditation pour le
31 mai 2013, et accrédité 50 % des examens par famille
Tirés à part : M. Lefevre-Pettazzoni
Pour citer cet article : Melet L, Chaigneau C, Lefevre-Pettazzoni M. Étude des performances analytiques d’un automate d’hématologie (Advia® 2120 i Siemens) et apport
sur la pratique quotidienne. Ann Biol Clin 2013 ; 71(6) : 679-91 doi:10.1684/abc.2013.0893
Résumé. Une analyse de risque, comprenant une vérification de méthode, ainsi
qu’une étude de la pertinence des alarmes morphologiques déclenchées par
l’automate, ont été réalisées pour l’automate d’hématologie Advia® 2120i (Sie-
mens). La répétabilité, la fidélité intermédiaire, la contamination, la linéarité,
la comparaison inter-automate, la justesse et l’approche de l’incertitude sont
conformes aux résultats attendus (selon Ricos). Grâce à l’étude rétrospective
des alarmes morphologiques déclenchées par l’automate et en s’inspirant des
recommandations de l’ISLH, une nouvelle attitude concernant la relecture des
frottis sanguins au microscope a été instaurée. Une sous-estimation du chiffre
de plaquettes prélevées sur sang total citraté a également été constatée malgré
le facteur de correction de 1,1, par rapport à l’EDTA, nécessitant probablement
de redéfinir des valeurs normales spécifiques pour cet anticoagulant.
Mots clés : hématologie, Advia 2120® , analyse de risque, accréditation
Abstract. A risk analysis, with method validation, and a study of the rele-
vance of morphological alarms triggered by the automat have been made to
the automat Advia® 2120i (Siemens). The analytical performance of the sys-
tems: repeatability, fidelity, contamination, linearity, correlation, the accuracy
and approach to uncertainty, are compliant with the expected results (Ricos).
Thanks to the retrospective study of morphological alarms triggered by the auto-
mat and based on the recommendations of the ISLH, a new attitude about blood
smear was introduced. For platelets in citrate, a slight underestimation of the
number compared to those collected in EDTA was observed probably need to
redefine normal platelet values citrate.
Key words: haematology, Advia 2120® , risk analysis, accreditation
en 2016, 100 % en 2020. L’accréditation a pour objec-
tif de garantir la fiabilité des examens et la qualité de la
prestation médicale offerte par le laboratoire. Pour cela
chaque laboratoire doit répondre aux exigences de la norme
NF EN ISO 15189 [1] celle-ci traitant des exigences du
système de management et des exigences techniques. Elle
impose notamment de vérifier que le matériel soit capable
d’atteindre les performances requises, et qu’il soit conforme
aux spécifications que le laboratoire s’est fixé se rapportant
aux analyses concernées (chapitre 5 : Pour chaque automate
ou technique utilisée une validation ou une vérification de
méthode doit être réalisée »).
679
Article original
Le Groupe hospitalier public du Sud de l’Oise (GHPSO
- fusion des centres hospitaliers de Creil et Senlis) pos-
sède sur son site de Creil 450 lits en médecine chirurgie et
obstétrique. Toutes les spécialités y sont représentées, avec
notamment un hôpital de semaine d’onco-hématologie et
un hôpital de jour. Le laboratoire du site de Creil réalise
environ 250 numérations formules sanguins (NFS) par jour,
dont 25 % ont été revues au microscope en 2012. Dans le
cadre de la mise en place de la démarche d’accréditation
pour la portée hématocytologie « Numérations formules
sanguines automatisées », une analyse de risque a été réa-
lisée, comprenant une validation de méthode de l’Advia®
2120i (Siemens) selon le SH GTA 04 [2] avant mise en rou-
tine. Une étude de la performance des alarmes qualitatives
de l’automate l’Advia® 2120i (Siemens) a été également
réalisée, alarmes desquelles découle la mise en relecture au
microscope des frottis sanguins. L’apport de ce travail de
validation sur la pratique quotidienne au laboratoire a été
évalué.
Matériels et méthodes
Description de l’instrument [3, 4]
Les appareils Advia® 2120 et 2120i sont des automates
commercialisés par Siemens Healthcare Diagnostics. Ces
automates permettent de réaliser les NFS et le dosage des
réticulocytes, à une cadence de 120 NFS par heure. Il est
couplé, au laboratoire site de Creil, à un autoslide réali-
sant les frottis sanguins colorés au May Grünwald Giemsa
(MGG). L’Advia® 2120i est un cymomètre de flux qui uti-
lise 5 canaux d’analyse : un canal pour l’hémoglobine (Hb),
un pour les érythrocytes (GR) et plaquettes, deux pour les
globules blancs (GB) : canal peroxydase et canal Baso, et
un pour les réticulocytes.
Les GB sont analysés selon deux modes : par la méthode
de la peroxydase et par la méthode de la densité nucléaire.
La méthode peroxydasique est une technique colorimé-
trique qui met en évidence l’activité peroxydasique dans
le cytoplasme de la cellule en fonction de la taille de la
cellule. Cette méthode permet de mesurer le nombre de
GB, le pourcentage de polynucléaires neutrophiles (PNN),
de polynucléaires éosinophiles (PNE), lymphocytes, mono-
cytes, des large unstained cells (LUC), qui sont des grandes
cellules dépourvues d’activité peroxydasique et les érythro-
blastes. Le canal Baso est la numération de référence pour
les GB. Le réactif Baso mis au contact de l’échantillon
sanguin dans une cuve chauffée à 33 ◦ C lyse les globules
rouges, les plaquettes et le cytoplasme des leucocytes, à
l’exception des polynucléaires basophiles (PNB) qui res-
tent intacts. Les noyaux sont acheminés vers la cuve optique
où ils vont être classés en fonction de leur forme, de leur
680
complexité et densité nucléaire. La diffraction de la lumière
laser va se faire selon un petit angle (2-3◦ ) qui permet de
mettre en évidence la taille de la cellule et selon un grand
angle (5-15◦ ) mettant en évidence la morphologie nucléaire.
Ce canal permet de calculer le nombre de GB, le pourcen-
tage de PNB, le pourcentage de blastes, le pourcentage de
cellules mononucléées (lymphocytes et monocytes) et celui
de cellules avec noyaux polylobés (PNN et PNE). Dans le
canal hémoglobine, il y a une réaction d’oxydoréduction
du fer héminique préalablement libéré des GR, qui ont
été lysés puis combinaison avec un ion hydrogène et une
molécule d’eau comme ligand axial, pour former le pro-
duit de réaction (hydroxyferriporphyrine monohydrate). Le
photomètre mesure l’absorbance de la solution à 546 nm
et fait correspondre la concentration en hémoglobine de
l’échantillon. Dans le canal érythrocytes et plaquettes, la
sphérisation isovolumétrique permet d’appliquer la loi de
Mie, qui étudie la diffraction de lumière pour les sphères
homogènes en petit angle et en grand angle. C’est une ana-
lyse en 2 dimensions qui permet d’analyser le volume et
l’indice de réfraction grâce à la mesure des 2 angles de
diffraction. Chaque angle correspondant respectivement au
volume et au contenu des sphères homogènes : obtention
du nombre de plaquettes (volume entre 1-60 fL et indice
de réfraction entre 1,35 et 1,40) et de GR (volume entre
1-180 fL et indice de réfraction 1,38 et 1,44).
Dans le canal réticulocytes, il y a une coloration des
acides ribonucléiques cytoplasmiques des réticulocytes,
puis mesure de la diffraction de la lumière et de l’absorption
provoquée par chaque cellule (les réticulocytes colorés
absorbent plus de lumière que les GR matures). Les signaux
recueillis permettent d’établir un cytogramme où est repré-
sentée en ordonnée la diffraction en fonction de la taille et
en abscisse l’absorption en fonction de la quantité d’ARN.
Ce canal permet de mesurer la répartition de la population
des réticulocytes en fonction de leur teneur en ARN, c’est-
à-dire l’intensité de la coloration (L Retic %, M Retic %,
H Retic %) ainsi que la teneur en hémoglobine des réticu-
locytes (CHr). Ce paramètre est un outil précieux dans le
suivi des traitements des insuffisants rénaux chroniques [5].
Les paramètres calculés à partir de ces canaux sont :
CCMH (g/dL) TGMH (pg) hématocrite (%) Chr (pg), les
paramètres mesurés sont : globules rouges (T/L) hémo-
globine (g/L) VGM (fL) CHCM (g/dL) plaquettes (G/L)
globules blancs (G/L) polynucléaires neutrophiles (%)
polynucléaires éosinophiles (%) polynucléaires basophiles
(%) lymphocytes (%) monocytes (%) réticulocytes (%).
Analyse de risque
Une analyse de risque a été réalisée basée sur le SH Form 43
[6] et sur la méthode des 5M. Elle comprend la validation
des méthodes. Pour effectuer la validation de méthodes :
Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013

la répétabilité, la fidélité intermédiaire, la contamination,
la justesse, l’incertitude, l’étude de linéarité basse, ont été
effectués selon le SH GTA 04 [2].
Répétabilité
Les contrôles bas, moyen et haut du fournisseur (normal,
abnormal 1, et abnormal 2, Siemens) ont été passés à 15
reprises successives, ce qui correspond à un tube de fla-
con de contrôle. La moyenne, l’écart type, le coefficient
de variation (CV) et la variance ont été calculés à partir
des résultats obtenus sur tous les paramètres mesurés par
l’Advia® et comparés aux CV Ricos [7].
Fidélité intermédiaire
Elle a été réalisée sur 1 mois et a consisté en un dosage
quotidien d’au moins deux niveaux de nos CQI : le CV et
l’écart type de la fidélité intermédiaire ont été ainsi obtenus
et comparés au CV Ricos [7].
Contamination
La contamination inter échantillon a été étudiée pour le
VGM, les GB, les GR, l’hémoglobine, les plaquettes. Pour
cela, le contrôle haut a été analysé 3 fois de suite en premier
suivi du contrôle bas qui lui aussi a été analysé 3 fois de
suite. Les résultats obtenus sont appelés H1, H2, H3 et B1,
B2, B3. La contamination se mesure en pourcentage et se
calcule à partir de la formule :
Contamination en % = (B1 − B3) ×100/ (mH − B3)
B1 correspond au premier passage bas, B3 au 3e passage
bas, mH correspond à la moyenne des valeurs hautes. La
contamination inter réactif n’a pas été faite car le système
de distribution n’est pas commun à tous les réactifs. Les
résultats attendus doivent être inférieurs à 1 %.
Justesse
La justesse a été évaluée à partir de la moyenne de plusieurs
dosages d’un même échantillon de CQI qui est comparée à
la moyenne obtenue par nos groupes de pairs via les contrô-
les internes externalisés (Comparaison inter laboratoire -
CIL). L’écart observé correspond au biais ; il est comparé
aux normes Ricos [7] :
Biais % = m − v×100/v
Étude de la linéarité basse
Le kit Eurocell® a été utilisé pour évaluer la linéarité basse
pour les plaquettes, les GB, les réticulocytes. Pour cela 6
niveaux ont été préparés à partir de dilutions précises de pro-
duit concentré de mammifère dans un liquide équivalent au
plasma. Chaque dilution est analysée 4 fois en commençant
par le niveau le plus bas jusqu’au niveau le plus haut.
Les données sont exploitées par le fournisseur pour obtenir
un biais, un écart type, ce qui nous a permis de connaître la
plus petite valeur linéaire.
Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013
Performances analytiques de l’automate Advia® 2120 i
Incertitude de mesure
Elle doit être connue pour pouvoir les fournir au clinicien en
cas de besoin. Seule l’incertitude de la phase analytique peut
être quantifiée. Une approche de l’incertitude a été effectuée
en suivant le SH GTA 14 [8] et la Méthode « CIQ/EEQ »
selon la formule :
√
2 
U (c) = u (CQI) + u2 (EEQ)
u2 (CQI) : représente la variance (carré de l’écart type)
de l’ensemble des résultats du contrôle interne de qualité
(CIQ), u2 (EEQ) : variance liée à la justesse (biais).
Comparaison de méthodes
Entre l’Advia® 2120 déjà en place et le 2120i : trente échan-
tillons patients ont été analysés sur les 2 Advia® . L’analyse
des droites de régression a porté sur tous les paramètres
mesurés mais aussi calculés par l’Advia® . Pour savoir si
les deux Advia® sont corrélés, il faut que les différences
obtenues à partir des 2 passages successifs ne dépassent
pas les limites de suivi. Ces dernières se calculent à par-
tir des écarts types obtenus lors de la fidélité intermédiaire
comme l’indique le SH GTA04 [2].
√
Limites de suivi = ± (3 ␴ FI technique testée)2
+(3 ␴ FI technique de comparaison)2
De plus, l’équation de la droite de régression (obtenue par
le graphe où en abscisse sont mis les résultats de la méthode
de référence et en ordonnée les différences obtenues à par-
tir des 2 passages différents), doit avoir une pente qui est
proche de 1 et une ordonnée à l’origine égale à zéro. Une
analyse des points discordants a été réalisée le cas échéant.
Analyse de la performance des alarmes
morphologiques déclenchées par l’automate
Trois cent dix-neuf patients ont été analysés de manière
prospective pour étudier l’efficacité des alarmes morpholo-
giques déclenchées par l’automate et adapter les relectures
de frottis au microscope : alarmes blaste Blast (présence
de blastes), Atypique Atyp (présence de LUC), immatures
granuleux IG (présence d’une myélémie) et érythroblastes
EB (présence d’érythroblastes). Tous les échantillons qui
présentaient une alarme morphologique déclenchée par
l’automate ont vu leurs frottis relus au microscope par 2
lecteurs différents sur 100 cellules chacun et en cas de dis-
cordance par une troisième. La spécificité (Sp), la sensibilité
(Se) et l’efficacité (Eff) des alarmes ont été calculées :
Se = VP/(VP+FN) x 100 = total des alarmes avec présence
de cellules avec alarmes/(total des alarmes avec présence
de cellules alarmes + échantillon sans alarme mais avec
présence de cellules anormales sur le frottis) x 100.
Sp = VN/ (VN+FP) x 100 = échantillon sans alarmes avec
absence de cellules anormales sur le frottis/(échantillon
681
Article original

Tableau 1. Correspondance entre les croix et le pourcentage de
cellules détectées.
Alarmes morphologiques + ++ +++
Blast 1,5 % 5% 10 %
Atyp 4,5 % 7,5 % 10 %
IG 5% 7,5 % 10 %
sans alarmes avec absence de cellules anormales sur le frot-
tis + total des alarmes avec absence de cellules anormales
sur le frottis)×100.
Eff = (VP+VN)/(VP+VN+FP+FN) x 100 = proportion de
cas bien identifiés.
Les alarmes Blast, Atyp et IG sont quantifiées par
l’automate : (+) (++) ou (+++). Chaque croix corres-
pond à un pourcentage de cellules détecté par l’automate
(tableau 1).
La table de Rümke (tableau 2) permet de révéler les varia-
tions des valeurs relatives pour un décompte d’évènements.
Une cellule présente dans l’échantillon (IG, Blast, Atyp)
correspond à un décompte possible de 0,1 à 3,6 % avec
double lecture sur 2 × 100 pour éviter les faux négatifs.
L’alarme Blast se déclenche quand le pourcentage de
blastes est compris entre 1,5 et 4,5 % et le pourcentage
de LUC supérieur ou égal à 4,5 % ou quand le pourcentage
de blastes est supérieur à 5 % des GB. L’alarme Blast a
également été étudiée sur la période d’un an de manière
rétrospective : une extraction des numérations avec des
blastes a été effectuée puis une vérification de la concor-
dance avec l’alarme Blast automate a été réalisée.
La présence de l’alarme Blast IG ou LUC est considérée
comme vrai positif si sont détectées au moins 1 % de cellules
anormales sur un compte de 200 et comme faux positif si
aucune cellule n’est détectée.
L’alarme érythroblaste EB se déclenche lorsque les GB sont
supérieurs à 3 G/L et un pourcentage d’érythroblastes supé-
rieur ou égal à 2 % soit 0,6 G/L ou dès que le nombre
d’érythroblastes est supérieur à 0,2 G/L. Sont considérés :
- vrai positif : une présence d’érythroblaste au microscope
supérieure ou égale à 2 % avec l’alarme érythroblaste ;
- faux positif : un décompte au microscope inférieur à 2 %
et la présence de l’alarme ;
- vrai négatif : un décompte au microscope inférieur à 2 %
et l’absence d’alarme déclenchée ;
- faux négatif : une présence d’érythroblastes supérieure ou
égale à 2 % sans alarme érythroblaste.
L’alarme agrégats plaquettaires est une alarme qualitative
qui se déclenche lorsque le total des amas dans la zone
dédiée du cytogramme Perox dépasse 300 évènements : la
sensibilité, la spécificité et l’efficacité de l’alarme agrégats
plaquettaires ont été étudiées sur 188 dossiers. Pour l’étude
de toutes ces alarmes, la corrélation interautomate a été
réalisée.
Comparaison entre les plaquettes sur tubes EDTA
K2 (Becton Dickinson réf. 368856) et citratés
0,105 M (Becton Dickinson ref.367714)
En cas de détection d’agrégats plaquettaires EDTA K2, la
numération plaquettaire peut être effectuée sur des tubes

Tableau 2. Table de Rümke. Variation des valeurs relatives d’une population leucocytaire selon le nombre de cellules comptées.

% 100 200 500 1 000 10 000

0 0-3,6 0-1,8 0-0,7 0-0,4 0-0,1
1 0,0-5,4 0,1-3,6 0,3-2,3 0,5-1,8 0,8-1,3
2 0,2-7,0 0,6-5,0 1,0-3,6 1,2-3,1 1,7-2,3
3 0,6-8,5 1,1-6,4 1,7-4,9 2,0-4,3 2,6-3,4
4 1,1-9,9 1,7-7,7 2,5-6,1 2,9-5,4 3,6-4,5
5 1,6-11,3 2,4-9,0 3,3-7,3 3,7-6,5 4,5-5,5
6 2,2-12,6 3,1-10,2 4,1-8,5 4,6-7,7 5,5-6,5
7 2,9-13,9 3,9-11,5 4,9-9,6 5,5-8,8 6,5-7,6
8 3,5-15,2 4,6-12,7 5,8-10,7 6,4-9,9 7,4-8,6
9 4,2-16,4 5,4-13,9 6,6-11,9 7,3-10,9 8,4-9,6
10 4,9-17,6 6,2-15,0 7,5-13,0 8,2-12,0 9,4-10,7
15 8,6-23,5 10,4-20,7 12,0-18,4 12,8-17,4 14,3-15,8
20 12,7-29,2 14,7-26,2 16,6-23,8 17,6-22,6 19,2-20,8
25 16,9-34,7 19,2-31,6 21,3-29,0 22,3-27,8 24,1-25,9
30 21,2-40,0 23,7-36,9 21,3-29,0 22,3-27,8 24,1-25,9
35 25,7-45,2 28,4-42 30,8-39,4 32,0-38,0 34,0-36,0
40 30,3-50,3 33,2-47,1 35,7-44,4 36,9-43,1 39,0-41,0
45 35,0-55,3 38,0-52,2 40,6-49,5 41,9-48,1 44,0-46,0
50 39,8-60,2 42,9-57,1 45,5-54,5 46,9-53,1 49,0-51,0

682 Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013


citratés avec une correction de résultat de + 10 % (pour tenir
compte de l’hémodilution liée au citrate). Pour vérifier que
les résultats concordent et que le décompte des plaquettes
n’est pas influencé par le type d’anticoagulant choisi : 42
patients ont été prélevés sur un tube EDTA et un tube citraté
dans le but de mesurer les plaquettes. La comparaison des
résultats est réalisée par les limites de suivi et par l’étude
de l’équation de la droite de régression.
Résultats
Les résultats pour l’analyse de risque qualitative sont pré-
sentés dans le tableau 3.
Validation de méthode
Répétabilité et fidélité intermédiaire
L’ensemble des paramètres de la numération hormis les
PNB apparaissent conformes aux CV limite Ricos [7]
(tableau 4). Pour la répétabilité, les CV ont été obtenus
d’après la formule décrite dans l’article de Anne Vassault
[12] : CV reproductibilité = 1,33* CV répétabilité.
Contamination
Pour les leucocytes : 0,2 %, l’hémoglobine (Hb) : 0,6 % ;
les GR, le VGM : 0 % : le pourcentage de contamination
pour les GB, l’Hb, les GR et le VGM est bien inférieur aux
recommandations fournisseurs. Le pourcentage de conta-
mination obtenu initialement sur les CQI pour les plaquettes
était supérieur à 1 %, la contamination a été testée à partir
d’échantillons de patients et était conforme inférieur à 1 %.
Justesse et approche de l’incertitude
Les résultats sont présentés dans le tableau 5. Sur la
période de mars 2012, la justesse est correcte excepté
pour l’hémoglobine, une calibration (Optipoint® Siemens)
a été réalisée et a amélioré les résultats. La justesse de
l’hémoglobine a été suivie au long court via les CIL.
Linéarité
Les valeurs à retenir comme seuil de linéarité basse : pour
les leucocytes : 0,08 G/L, pour les plaquettes : 3 G/L, pour
les réticulocytes : 0,79 % et 20 G/L. Ils ont été identiques
pour les 2 Advia® testés.
Corrélation Advia® 2120/2120 i
La comparaison pour chacun des paramètres a été faite
par l’analyse de corrélation avec calcul de la droite
de régression par la méthode des moindres carrés, sur
30 échantillons. Tous les points sont corrélés excepté un
point discordant qui était aberrant ; en le repassant, les
différences obtenues sur les 2 Advia® ont été correctes.
Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013
Performances analytiques de l’automate Advia® 2120 i
Analyse de la performance des alarmes
morphologiques déclenchées par l’automate
Étude de l’alarme blaste
Quarante-huit cas sur les 319 formules étudiées ont une
alarme blaste (+, ++ ou +++) pour 1 300 NFS soit
3,7 % des NFS et 15 % des causes de relecture de frot-
tis annuelles. Quarante-deux cas d’alarmes Blast + sont
associés à l’alarme Atyp ce qui est cohérent car Atyp (+)
correspond à 1,5 % de LUC, et lorsque l’alarme blaste est
entre 1,5 et 4,5 %, celle-ci ne se déclenche que si Atyp (+).
Les cas de vrais positifs sont au nombre de 4 : 1 cas chez un
patient de 77 ans avec des monoblastes (Atyp et Blast (+)),
1 cas chez un prématuré avec des plasmocytes circulants et
des myéloblastes (Atyp et Blast (+), IG (++), 1 cas chez un
bébé de 5 jours avec blastes circulants (LUC et Blast (+),IG
(++)), et 1 cas chez une patiente de 7 ans atteinte d’une LAL
pré B en aplasie (Atyp et Blast(+)). Les faux positifs sont
donc au nombre de 38 : 14 cas chez les enfants de 0-2 ans
(10 cas de lymphocytes hyper basophiles réactionnels asso-
ciés à des plasmocytes, et 4 cas sans anomalie), 14 cas chez
les 2 ans -70 ans (3 cas de syndrome mononucléosique et
11 cas sans anomalie), et 10 cas chez des patients âgés de
plus de 70 ans sans anomalie. Il y a 6 cas d’alarmes Blast
(++) : 2 vrais positifs (alarme Blast seule chez un bébé de
2 mois et un prématuré de 4 jours avec tous les 2 présence
de cellules immatures sur le frottis), 4 cas de faux positifs
: un cas de lymphome du manteau avec alarme Blast iso-
lée, un homme de 55 ans sans anomalie notable (alarme
Blast isolée), leucémie à plasmocytes (alarmes Blast (++)
et IG (++)), un homme de 74 ans en fin de vie en réani-
mation (alarmes Blast (++) Atyp (++) IG (++). Aucun cas
d’alarme Blast (+++) n’a été détecté durant cette période.
Pour cette alarme, la sensibilité est de 86 %, la spécificité de
87 % et l’efficacité de 87 %. Afin d’évaluer si l’intensité de
l’alarme Blast est corrélée au pourcentage microscope, une
autre étude a été réalisée sur un an et a consisté à extraire de
l’informatique toutes les formules rendues avec des blastes
(cellules immatures ou myéloblastes ou blastes de leucé-
mie) puis à analyser les alarmes déclenchées par l’automate
pour ces échantillons précis : 112 formules manuelles avec
des blastes ont été extraites dont 96 avaient une alarme Blast
et 16 en étaient dépourvues. Dans les 96 alarmes détectées,
31 alarmes Blast (+), 36 alarmes Blast (++) et 29 alarmes
Blast (+++). D’une manière générale, l’intensité de l’alarme
est bien corrélée au nombre de blastes comptés au micro-
scope : pour l’alarme Blast (+) qui correspond à 1,5 à 5 %
de blastes, en moyenne sont comptés 3 % de blastes (soit
0,015 à 3,68 G/L). Pour l’alarme Blast (++) qui correspond
à 5-10 % de blastes, en moyenne sont comptés au micro-
scope 8,5 % de blastes (soit 0,016 à 77,88 G/L), et pour
alarme Blast (+++) qui correspond à des blastes supérieurs
à 10 % sont comptés au microscope 33,8 % de blastes en
683
Article original
Tableau 3. Maîtrise des risques de la numération formule sanguine (NFS) automatisée et manuelle.
Maîtrise Éléments de la Risque identifié
des risques classification
Patient Différentes valeurs normales
en fonction de l’âge et du sexe
Contexte clinique Renseignements cliniques
nécessaires (à obtenir sur
premier prélèvement)
Prélèvement Ponctions veineuses franches
adultes et pédiatriques
Néo natalité : écoulement libre
dans le microtube favorise les
micro-caillots
Type de tubes Tube non adapté à l’analyse
Multitude de références
différentes
Matière
Transport Délai d’acheminement > 8 h
par rapport à l’analyse
Remplissage Remplissage insuffisant < 1 mL
EDTA
Interférence Hémolyse si contact avec la glace
Hémodilution par perfusion
Présence de caillot
Urgence Prise en charge tardive d’un tube
Urgent
Température de la pièce
Température ambiante Dysfonctionnement automate et
réactif si non respecté
Hygiène et sécurité
Milieu Gestion des déchets Mauvaise élimination des déchets
Sécurité Non-respect des consignes
de sécurité
Incident (réactifs sangs AES. . .)
684
Modalités de maîtrise
Paramétrages des valeurs normales dans
l’automate, sur le SIL et dans le compte rendu
papier en fonction de l’âge et du sexe
Recommandations du Manuel de prélèvement
Renseignements sur les bons de demande
d’examens ou appel aux services pour
informations cliniques et thérapeutiques
(chimiothérapie. . .)
Formations préanalytiques dans les services de
soins, rappels des bonnes pratiques (agitation :
manque d’agitation : prélèvements coagulés)
Manuel de prélèvement
Manuel de prélèvement
Respect des recommandations fournisseurs
Validation des différents tubes
(citrate EDTA K2. . .)
Formation transporteur, horodatage de l’heure
de dépôt et heure de prélèvement sur le bon
Non-conformité préanalytique
Formation IDE (remplissage > 90 %)
Manuel de prélèvement
Sachets séparés pour les gaz du sang
Formation IDE
Retournement du tube 8 à10 fois
par retournements lents
Sachets de couleur pour les urgences/pas
de prétraitement
Procédure de gestion de l’urgence : rond
sur bouchon du tube et fluo sur n◦ d’accès
pour NFS urgente
Métrologie : suivi des températures par logiciel,
limitation de l’ensoleillement
Procédure d’élimination des déchets
Gélification des effluents liquides
Filière Dasri
Travail sur tube fermé avec système de pique
pour les frottis
Procédure hygiène et sécurité
Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013
 Performances analytiques de l’automate Advia® 2120 i

Tableau 3. (Suite)

Maîtrise Éléments de la Risque identifié Modalités de maîtrise

des risques classification
Tube primaire
Date de péremption Tubes périmés
Disponibilité Rupture de stock
Automate
Exigences Perte de connexion : transmission
informatiques des résultats
Utilisation automate Mauvaise utilisation
Fonctionnement Panne
automate Maintenance non réalisée
Réactifs/colorants/contrôles/calibrants
Réception Coffrets endommagés
Gestion des lots Erreurs de réactifs
Matériel Lots périmés, rupture de stocks
Conservation réactifs Mauvaise température de
stockage
Solutions analyseurs Advia
Réactifs réticulocytes passage à
37◦ C dès réception
Utilisation colorants Mauvaise correspondance
Reconstitution du Mauvaise reconstitution
tampon autoslide
Conservation contrôles Mauvaise conservation (2-8◦ )
Délai de péremption dépassé
quand flacon ouvert > 14 jours
Formation habilitation
Formation initiale Formation insuffisante
Habilitation initiale Personne non habilité au poste
Suivi des compétences Oubli de la formation initiale
Main-
d’œuvre Validation technique et biologique
Commentaires Variation des commentaires
biologiques quantitatifs et
qualitatifs
Procédure gestion des stocks
Maîtrise du système informatique
Procédure dégradée établie
Formation/habilitation/suivi des compétences
Mode opératoire automates
Automate en miroir
Planning maintenance
Procédure gestion pannes service SAV
Contrat de maintenance
Vérification de la réception
Gestion des stocks sur logiciel de gestion
de stock
Conservation en pièces de réserves
jusqu’à date de péremption
Suivi métrologique des températures des
pièces de stockage et techniques et des
réfrigérateurs
Etiquette de suivi de passage à 37◦ C
Habilitation du personnel
Etiquetage des pailles pour éviter les erreurs
de positionnement des bouteilles
Vérification par papier pH lors de la fabrication
du tampon la bonne valeur du pH
Conservation en chambre froide à température
sécurisée par 2 compresseurs et contrôlée
par sondes raccordées
Date d’ouverture sur flacon
Formation- habilitation – suivi des compétences
Mise en place de commentaires codés
standardisés pour les anomalies quantitatives
et qualitatives sur les GR les plaquettes
et les GB.

Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013 685

Article original

Tableau 3. (Suite)

Maîtrise Éléments de la Risque identifié Modalités de maîtrise

des risques classification
Documentation
Documentation inexistante Procédure gestion documentaire : classeur
Documentation géné- ou insuffisante Advia, données statiques et traçabilité
rale au poste de travail Documentation non à jour Révision documentaire
Gestion documentaire externe maîtrisée
Validation initiale de l’automate
Vérification des Résultats non conformes Procédure de vérification de méthode
performances avant mise en route
Maîtrise technique Numérations
Présence de caillot dans le tube Vérification de l’absence de caillot
dans le tube tracée
Mauvaise homogénéisation des Mise en place d’une roue pour agitation et
microtubes vérification de l’absence de microcaillot pour
tous les échantillons pédiatriques avant analyse
Résultats non linéaires Mode opératoire pour la dilution des
Interférence sur (trop élevés ou trop bas) échantillons
l’analyse Formation habilitation sur la linéarité de
l’automate
Mauvaises connaissances des Gestion de la documentation externe :
interférences analytiques bibliographie à jour [9-11]
(cryoglobulines, hémolyse. . .) Formation habilitation
Méconnaissance alarmes Étude des alarmes déclenchées par l’automate
analytiques
Résultats
Validation technique et Résultats critiques non vérifiés et Liste des valeurs d’alertes, règle de validation
Méthodes biologique non téléphonés technique et biologique
Apparaissent en rouge à l’écran de validation
Advia
Validation technique non Logigramme de validation des patients et
homogène et technicien critères d’actions sur les tubes
dépendant Formation habilitation
Validation continue
Contrôles internes CQI Mauvaise gestion des CQI Gestion des CQI quotidiens selon les règles de
Westgard
Application d’actions si CQI non satisfaisants
(maintenance, nettoyages. . .)
Suivi des CQI au long cours
Formation habilitation
EEQ CIL Absence ou mauvaise gestion Procédure gestion EEQ et CIL mis en place
d’EEQ Suivi des résultats des CQE pour chaque
automate
Calcul des incertitudes par paramètre annuelle-
ment sur CQE avec groupe de pairs important
Comparaison inter Non conforme Passage de comparaison 1 fois par jour inter
automate automate et exploitation selon limite de suivi et
graphe de Levey-jennigs
Calibration Dérive de l’automate entre Suivi par externalisation des CIQ via le CIL
2 calibrations Siemens
Traçabilité
Lots utilisés Alerte ascendante et descendante Traçabilité informatisée sur logiciel gestock
Résultats automate Pertes de données Maitrise du système informatique du LBM
Résultats SIL Archivage informatique

686 Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013

 Performances analytiques de l’automate Advia® 2120 i

Tableau 4. Résultats répétabilité et fidélité intermédiaire.

Répétabilité Fidélité intermédiaire

Paramètres Moyenne CV CV Ricos limite [7] Conclusion Moyenne CV CV Ricos limite [7] Conclusion
3,38 2,23 3,42 3,46
Leucocytes CV Ricos CV Ricos
7,12 1,72 Conforme 6,99 3,91 Conforme
(G/L) acceptable : 4,1 acceptable 5,5
16,49 2,22 16,55 4,61
2,33 1 2,35 1,49
GR CV Ricos CV Ricos
4,34 0,64 Conforme 4,29 1,32 Conforme
(T/L) acceptable : 1,2 minimal 2,4
5,24 0,75 5,25 1,68
57 0,9 58 0,95
Hb CV Ricos CV Ricos
115 1,26 Conforme 118 0,96 Conforme
(g/L) minimal : 1,6 acceptable 1,4
164 0,92 170 1,11
85 4,06 84 4,26
Plq CV Ricos CV Ricos
241 1,78 Conforme 247 4,44 Conforme
(G/L) minimal : 5,1 acceptable 4,6
489 0,92 503 3,50
74,2 0,22 71,6 0,58
VGM CV Ricos CV Ricos
80,3 0,20 Conforme 79,3 0,54 Conforme
(fL) minimal : 0,7 acceptable 0,7
89,5 0,14 89,3 0,4
30,9 0,13 31,2 0,99
CHCM CV Ricos CV Ricos
32 0,16 Conforme 32,5 0,65 Conforme
(x10 g/L) acceptable : 0,6 minimal 1,3
33,3 0 33,9 0,54
165 2,25 178 4,91
Réticulocytes Conforme Conforme sur 2
CV Ricos CV Ricos
(G/L) 140 3,1 sur 2 niveaux 162 4,98 niveaux
minimal : 6,2 minimal 8,3
(bas et moyen) (bas et moyen)
27 11,80 30 17,88
1,62 2,09 2 4,54
PNN CV Ricos CV Ricos
3,84 2,62 Conforme 3,75 5,01 Conforme
acceptable : 6 acceptable 8,1
11,38 2,13 11,38 2,13
1,21 2,35 1,15 4,38
Lymphocytes CV Ricos CV Ricos
2,17 2,45 Conforme 2,07 4,11 Conforme
minimal : 5,9 acceptable 5,2
2,85 4,02 2,74 3,8
0,26 7,9 0,27 11,07
Monocytes CV Ricos CV Ricos
0,57 5,21 Conforme 0,59 12,43 Conforme
minimal : 10 minimal 13,4
1,2 5,47 1,4 7,56
0,07 15,56 0,06 16,98
Conforme Conforme sur 2
PNE CV Ricos CV Ricos
0,13 9,91 sur 2 niveaux 0,13 11,74 niveaux
minimal : 11,8 minimal 15,8
(moyen et haut) (moyen et haut)
0,37 6,63 0,31 8,44

moyenne (soit 0,025 à 225,6 G/L). Les étiologies des
vrais positifs pour l’alarme Blast sont présentées dans le
tableau 6.
Faux négatifs de l’alarme blaste Blast
En ce qui concerne les blastes observés au microscope
mais sans alarme Blast déclenchée par l’Advia® : 16 échan-
tillons sanguins sont concernés avec en moyenne 2 % de
blastes : 7 dossiers ont moins de 3 G/L de GB : 1 patient 5
jours consécutifs, 2 patients 2 jours différents. Nous obte-
nons en moyenne : 0,11 G/L de blastes avec une anémie
réfractaire avec excès de blastes (Areb) acutisée, une leu-
cémie aiguë myéloide (LAM) en stade terminal et un patient
pancytopénique suivi pour une pneumopathie bilatérale et
une insuffisance rénale chronique. Les autres avaient au
moins 5 G/L de GB et étaient hospitalisés pour : syn-
drome infectieux sur hépatopopathie, cirrhose alcoolique et
décompensation œdomato ascitique, insuffisance cardiaque

Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013 687

Article original

et séjour en réanimation suivie d’une candidose dissémi-
née et surinfection bactérienne et d’un décès 15 jours plus
tard, d’un patient suivi pour thrombocytémie essentielle,
d’un suivi de cancer du sein adénocarcino mucineux et ils
avaient tous des cellules immatures circulantes. Pour tous
les cas de faux négatifs, les cellules immatures ont été détec-
tées au microscope car d’autres alarmes étaient déclenchées
nécessitant donc de faire un frottis sanguin et une formule
manuelle.
Pour l’alarme atypique Atyp
Il a été compté 80 cas d’alarmes avec 34 vrais positifs et
46 cas de faux positifs. Pour les cas de vrais positifs ont
été décomptés des plasmocytes, des lymphocytes hyper-
basophiles (LHB), et mis en évidence des cas de déficit
en myéloperoxydase (MPO - tous les polynucléaires neu-
trophiles se retrouvent au niveau de la zone des LUC), des
syndromes lymphoprolifératifs ont également été observés.
Pour les faux négatifs, la majorité des alarmes est avec une
intensité d’une croix (41 cas sur 46 faux positifs soit 89 %
des faux positifs), et dans 51 % des cas de déclenchement
d’alarme toute intensité confondue, et dans 2/3 des cas si
l’on considère l’intensité (+) (tableau 7). Si l’on considère
l’alarme Atyp (++) et (+++) elles ne présentent de faux
positifs que dans 23 % des cas (5 cas sur 21).
La sensibilité de cette alarme Atyp est de 83 %, la spécificité
de 83 % et l’efficacité de 83 %.
Pour l’alarme myélémie IG
Cent deux cas ont été comptabilisés dont 66 vrais positifs
avec des myélémies où l’on observait au moins 1 myélocyte.
Cette alarme est retrouvée dans des contextes de myélémie

Tableau 5. Résultats pour la justesse et approche de l’incertitude.

CQE Justesse Conclusion Validation Incertitudes Conclusion Validation

paramètre (%) (%)
GB bas -2,37 Carmen Ricos acceptable Validée 2% Carmen Ricos minimal Validée
< 5,6 < 21,9 %
GB haut -4,50 Carmen Ricos acceptable Validée - Carmen Ricos minimal
< 5,6 < 21,9 %
GR bas -0,43 Carmen Ricos acceptable Validée 4,85 % Carmen Ricos minimal Validée
< 1,7 < 6,5 %
GR haut 1,12 Carmen Ricos acceptable Validée 4,92 % Carmen Ricos minimal Validée
< 1,7 < 6,5 %
HB bas 3,45 Carmen Ricos minimal Non validée 2,54 % Carmen Ricos minimal Validée
< 2,7 < 6,2 %
HB haut 3,47 Carmen Ricos minimal Non validée 3,39 % Carmen Ricos minimal Validée
< 2,7 < 6,2
PQ bas -5,26 Carmen Ricos minimal Validée 17,51 % Carmen Ricos minimal Validée
< 8,9 < 20,2 %
PQ haut -0,66 Carmen Ricos minimal Validée 13,61 Carmen Ricos minimal Validée
< 8,9 < 20,2 %
VGM bas -0,87 Carmen Ricos minimal Validée 2,91 % Carmen Ricos minimal Validée
< 1,9 < 3,5 %
VGM haut 1,93 Carmen Ricos minimal Validée 2,2 % Carmen Ricos minimal Validée
< 1,9 < 3,5 %

Tableau 6. Etiologies vrais positifs alarme blaste.

Blast (+) Blast (++) Blast (+++)

N = 31 N = 36 N = 29
Leucémie aiguë myéloïde (LAM) 1 5 8
Leucémie aiguë lymphoïde (LAL) 1 (associée à Atyp (+++))
Leucémie aiguë non classée 11
Syndrome myélodysplasique (SMD)
Anémie réfractaire avec excès de blastes 5 3
En voie d’acutisation 10 6
Néoplasie 3 4
Myélémie avec myéloblastes circulants :
Sortie d’aplasie post chimiothérapie 4 3 4
Ou associée alarme IG 3+ 16 8
Faux positifs 1 3 0

688 Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013

 Performances analytiques de l’automate Advia® 2120 i

Tableau 7. Alarme atypique - alarme myélémie : faux positifs et vrais positifs.

Alarme atypique (+) (++) (+++)

Faux positifs 41 5 0
Vrais positifs 18 dont 7 dont 9 dont
- LHB, plasmocyte, syndrome mononucléosique 16 7 5
- déficit en MPO 1 4
- syndromes lymphoprolifératifs 1
Alarme IG + ++ +++
Faux positifs 18 9 9
Vrais positifs 24 dont 14 dont 28 dont
- myélémie post infectieuse 18 8 18
- myélémie de régénération 6 4 10
- autres 2

de régénération post chimio et aussi infectieuse (en réani- Discussion

mation). Pour les cas de faux positifs (36 cas sur 102, soit
35 %), un certain nombre de cas a été observé avec des poly-
nucléaires hyposegmentés. Lorsque l’alarme myélémie IG
(+++) est déclenchée, la myélémie est plus importante et va
du myéloblaste jusqu’au myélocyte alors que pour les deux
autres intensités, il y a des myélocytes, mais très rarement
des promyélocytes et des myéloblastes (tableau 7).
Pour cette alarme, la sensibilité est de 89 %, la spécificité
de 85 % et l’efficacité de 86 %.
Pour l’alarme Érythroblaste (n = 49)
Vingt-sept cas d’alarmes déclenchées ont des érythroblastes
sur frottis sur la lame et 22 sont sans érythroblaste. Les
27 cas de vrais positifs sont retrouvés en majorité chez
les personnes âgées (> 70 ans) souvent dans le cadre de
myélofibrose, chez les drépanocytaires et chez les nouveau-
nés. On retrouve dans plus de la moitié des cas (18 cas sur
27), cette alarme associée à l’alarme myélémie aussi bien
chez les nouveau-nés que chez les personnes âgées. Il a
été observé 22 cas de faux positifs sur 49, soit 45 % de
faux positifs. Par ailleurs, des érythroblastes ont été retrou-
vés chez 12 patients pour lesquels aucune alarme ne s’était
déclenchée, ce qui fait une sensibilité à 69 %, une spécificité
à 92 % et une efficacité à 89 %.
Les résultats des examens de biologie médicale concourent
au diagnostic médical dans plus de deux tiers des cas,
ils contribuent également à la prévention et au suivi
des pathologies chez les patients. Le plus important est
d’effectuer des examens appropriés, réalisés dans les
meilleures conditions et en garantissant le meilleur résul-
tat via l’accréditation selon la norme 15189 [1]. L’analyse
de risques et la vérification de méthodes permettent de
s’assurer de la qualité des résultats : justes, fidèles, compa-
rables inter automates et des risques maîtrisés.
L’analyse de risque a permis de mettre en évidence les
points critiques à maîtriser dont la validation de méthode
n’est qu’une partie. L’essentiel des risques est lié à la qualité
EDTA K2
400
350
300
250
y = 0,97x - 2,57
200

Pour l’alarme Agrégats plaquettaires 150

Trente-quatre dossiers sont concernés, 24 vrais positifs et
100
10 cas de faux négatifs (agrégats plaquettaires sur frottis
ont été retrouvés sans alarme). La sensibilité est de 74 %, 50
une spécificité de 96 % et une efficacité de 91 %.
0
0 100 200 300 400
Citrate 0,105 M avec résultats majorés de 10 %
Comparaison entre les plaquettes sur tubes EDTA
Courbe de tendance Linéaire (Y=X)
K2 (Becton Dickinson réf. 368856) et citratés obtenue pour les patients
0,105 M (Becton Dickinson ref.367714)
Les différences obtenues à partir des résultats des 2 tubes Figure 1. Comparaison du décompte plaquettaire sur EDTA k2
ne dépassent pas les limites de suivi (figure 1). versus Citrate 0,105 m.

Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013 689

Article original
du prélèvement (caillots, microcaillots) et à la formation du
personnel pour les techniques automatisées et manuelles
(formules), des commentaires standardisés ont été mis en
place pour les anomalies morphologiques et les anomalies
quantitatives. La validation de méthode, bien que longue,
doit se faire avant passage en routine. L’apport de cette
validation est clairement démontré dans notre travail. Lors
de l’installation de l’automate au laboratoire qui est un
automate reconditionné, les tests fournisseurs étaient tous
conformes selon les critères fournisseurs (répétabilité sur 5
passages. . .). Cependant la vérification de méthode a mis
en évidence un problème de répétabilité et de fidélité inter-
médiaire sur le paramètre réticulocyte et un problème de
justesse sur l’hémoglobine ayant nécessité un réglage du
laser. La méthode d’analyse des numérations et formules
sanguines par l’automate Advia® 2120 i est globalement
satisfaisante pour la vérification initiale pour les paramètres
mesurés selon le SH GTA 04 [2]. En effet, les objectifs de
répétabilité, de fidélité intermédiaire sont atteints hormis
pour les PNB, ce qui peut être expliqué car c’est un évè-
nement rare, de plus il est sans incidence clinique sur les
résultats patients. Pour les réticulocytes, la répétabilité, la
fidélité intermédiaire qui étaient validés sur 2 niveaux sur
3 ont été suivis par les CIL suite au réglage du laser et
étaient par la suite conformes. L’organisation du labora-
toire est telle que les NFS sont passées de manière aléatoire
l’un ou l’autre des Advia® . Cette organisation est vali-
dée par la comparaison inter automate qui est correcte. Un
contrôle de suivi de comparaison est réalisé de manière
journalière selon les normes de suivi déterminées lors de
la vérification initiale sur une NFS patient. Les données
sont exploitées sous la forme du graphe de Levey Jen-
nings. Ainsi la vérification initiale nous permet par la suite
d’exploiter les résultats de corrélations au long court selon
les critères d’acceptations basés sur les performances des
systèmes de notre laboratoire. Concernant la linéarité, les
spécifications fournisseurs ont nécessité d’être vérifiées :
les linéarités basses sont excellentes pour les leucocytes :
les leucocytes inférieurs à 0,08 G/L sont rendus < 0,08 G/L,
la linéarité basse est conforme aux valeurs cliniques atten-
dues notamment les sorties d’aplasie. Au laboratoire, les
formules sanguines dont les GB sont inférieurs à 0,5 G/L
ne sont pas rendues pour les patients sous chimiothérapie
du fait de la rareté des évènements comptabilisés, seuls les
PNN sont validés (du décompte sur automate). La linéarité
basse des plaquettes est très satisfaisante permettant non
seulement de valider les seuils transfusionnels (50 G/L avec
une incertitude de 17,5 % soit 50+/- 8,75 G/L, le seuil étant
donc de 41 à 59 G/L), mais aussi permettant le suivi des
purpuras thrombopéniques auto-immuns de manière fiable
dans les valeurs basses. La linéarité répond aux besoins
du laboratoire et a permis de valider les plaquettes jusqu’à
3 G/L et les résultats inférieurs à 3 G/L sont rendus < 3 G/L.
690
Cela permet donc de ne plus recompter les plaquettes en cel-
lule (sachant qu’en 2012, nous avions 60 dossiers avec des
plaquettes inférieures à 10 G/L ayant nécessité un comptage
en cellule). La linéarité basse des réticulocytes est relative-
ment haute de l’ordre de 20 G/L mais en % ceci correspond
à une valeur de 0,79 %. En deçà de ces valeurs, les réti-
culocytes seront comptés en manuel au bleu de crésyl. Le
pourcentage de patients concernés par an par ce décompte
manuel est de 11 %, soit 1 130 par an sur 9 914 demandes de
réticulocytes. La justesse initiale est correcte excepté pour
l’hémoglobine : calibration Setpoint Optipoint et réglage
du laser ont été effectués : le biais sur l’hémoglobine a pu
être rapidement corrigé. Les résultats de contrôles internes
externalisés CIL ont eux aussi été suivis au long cours
et ont montré les corrections attendues. La vérification de
l’absence de contamination inter-échantillon nous permet
de passer de manière aléatoire sur un même automate les
patients pancytopéniques et hyper leucocytaires, les bébés
avec une hémoglobine élevée et les patients anémiques,
les thrombocytoses, et les thrombopéniques sévères. Une
approche de l’incertitude de mesure a été réalisée, basée
sur les références internationales ; elle n’est pas exploitée
en routine sur les comptes rendus mais permet d’ajuster
l’attitude thérapeutique d’un médecin lorsque les résultats
sont à la limite de la valeur pathologique. Un suivi au long
cours de l’incertitude de manière annuelle est réalisé.
Concernant l’analyse des alarmes morphologiques, il nous
a paru important d’évaluer la performance des alarmes
morphologiques déclenchées par l’automate puisqu’elle
conditionne notre attitude de relecture au microscope : notre
taux de relecture étant élevé (25 % des NFS en 2012). Pour
l’alarme Blast, il a été montré que cette alarme est d’autant
plus performante lorsque le chiffre de GB est élevé, supé-
rieur à 5 G/L, et que ce sont des blastes myéloïdes. Elle a
une pauvre spécificité chez l’enfant de moins de 24 mois.
L’intensité de l’alarme est bien corrélée avec le pourcentage
microscope ((+) = 3 %, (++) = 8,5 % et (+++) = 33,8 %). La
littérature donne des résultats équivalents pour la sensibilité
et meilleure pour la spécificité (sensibilité : 94,8 % et spé-
cificité : 93,5 %) [13], de ce fait les patients avec l’alarme
Blast + isolée et déjà relus au microscope dans le mois
qui précède sans variation quantitative, ne sont plus relus.
Cependant les enfants de moins de 24 mois sont toujours
relus au microscope car l’alarme Blast est souvent associée
à d’autres alarmes (EB, Atyp, IG). Concernant l’alarme aty-
pique, notre travail a montré que cette alarme apparaît dans
plus de 50 % des cas comme un faux positif à l’intensité (+).
Elle est également retrouvée dans les syndromes lympho-
prolifératifs, les lymphomes leucémisés, les plasmocytoses
sanguines, les syndromes mononucléosiques. De ce fait
les patients connus dans le mois précédent sans variation
quantitative ne seront plus relus au microscope, ce qui est
recommandé dans l’ISH [14]. La littérature [13] donne des
Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013

résultats comparables pour la sensibilité et meilleure pour
la spécificité avec un autre automate (Se : 80,6 % et Sp :
92,2 %). Concernant l’alarme myélémie, la présence est
bien corrélée avec les décomptes de granuleux immatures
excepté dans les cas de PNN hypo segmentés. La littéra-
ture donne des résultats différents sur d’autres automates
(Se : 85 % et Sp : 90,7 %) [13]. Concernant l’alarme éry-
throblaste, la détection est mauvaise, les enfants de moins
de 24 mois sont relus systématiquement au microscope. La
littérature [15] donne un résultat pour la sensibilité équi-
valent (77,3 %) mais moins bon pour la spécificité (74,6 %).
Concernant l’alarme agrégats plaquettaires, la spécificité
est très bonne (Sp = 96 %), cependant un certain nombre
d’amas ne sont pas détectés par l’automate et ne le sont
qu’au microscope (Se = 74 %). Ainsi pour toute thrombo-
pénie sans antériorité de vérification de moins d’un mois, ou
grande variation du chiffre plaquettaire, il n’est pas possible
de se passer d’une vérification microscopique du frottis à
la recherche à l’objectif 10 puis 50, d’amas plaquettaires.
La conduite à tenir n’a donc pas été modifiée par rapport
à la pratique antérieure à notre étude. En 2012, le taux de
relecture de lame était de 25 %, ce qui est élevé, nous avons
donc mis en place ces nouvelles conduites de relecture de
lame pour abaisser ce pourcentage.
Pour ce qui concerne la numération des plaquettes sur
citrate, il a été montré que les résultats sont bien corrélés
en proportion avec un biais négatif par rapport à l’EDTA,
même en appliquant le facteur correctif de +10 % lié à la
dilution sur citrate, ce qui est retrouvé dans la littérature
[16]. Une des conditions requises pour cette numération est
que le tube soit correctement rempli, à plus de 80-90 % du
volume selon les mêmes critères que pour l’hémostase. Une
plus large étude semble nécessaire afin de déterminer des
valeurs normales sur citrate pour la numération plaquettaire.
Conclusion
L’apport de la validation de méthode est clairement démon-
tré dans notre travail pour la pratique quotidienne : elle
permet de réaliser ou réajuster les réglages avant passage
en routine, de déterminer les limites de suivi utiles pour
les comparaisons inter automates journalières, de détermi-
ner des seuils de linéarité au-deçà desquels les résultats ne
sont plus fiables, et enfin elle permet de réduire le travail
inutile (réduction du comptage des plaquettes en cellule
et des réticulocytes en manuel, réduction du nombre de
frottis) et d’avoir une approche de l’incertitude de mesure
autour des résultats seuils (seuil transfusionnel pour les pla-
quettes, l’hémoglobine). La validation au long cours est
réalisée avec les CIL mensuels comparée aux CV Ricos
et la détermination annuelle de l’incertitude de mesure via
les EEQ. L’étude des alarmes morphologiques nous a per-
Ann Biol Clin, vol. 71, n◦ 6, novembre-décembre 2013
Performances analytiques de l’automate Advia® 2120 i
mis d’ajuster les critères de relecture de lame en fonction
de notre recrutement afin d’optimiser le temps de relecture
au microscope. D’autres études restent à réaliser notam-
ment pour déterminer les valeurs normales des plaquettes
sur citrate et l’éventuel facteur de correction à apporter.
Liens d’intérêts : aucun.
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