Tradução

„ Tradução: refere-se a todo o processo pelo qual a sequência

de bases de um mRNA é usada como molde para unir
aminoácidos para a formação de uma proteína.

„ O DNA guarda as informações para a síntese protéica;

„ O RNA leva estas informações para o citoplasma, local onde
ocorre efetivamente a síntese das proteínas.
„ A ordem dos aminoácidos ao longo da cadeia protéica
determina a função desta nova proteína; portanto o
mecanismo que mantém esta ordem durante a síntese é crítico.

3 tipos de RNA estao envolvidos no processo da

traducao:
rRNAs

tRNAs

mRNA

Gene IX, 2008

„ Um aa e trazido ao ribossomo pelo aminoacyl-tRNA

„ O mesmo e adicionado a cadeia polipeptidica em
crescimento pela interacao com o tRNA que trouxe o aa
anterior
„ Cada um desses tRNA ocupam um sitio distinto no
ribossomo
‹ Sitio A: aminoacyl-tRNA (novo aa + novo codon)

‹ Sitio P: peptidyl-tRNA (tRNA carregando a cadeia

polipeptidica em crescimento)

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 Tradução:
A tradução é subdividida em 3 estágios:

Iniciação: compreende o conjunto de reações que precedem a

formação da primeira ligação peptídica da proteína.
-o acoplamento da subunidade menor do ribossomo ao mRNA,
-A união do primeiro tRNA ao códon de início da protéina (AUG),
-A junção das duas subunidades do ribossomo.
Elongação: inclui todas as reações que ocorrem desde a
formação da primeira ligação peptídica até a incorporação do
último aa à proteína.

Terminação: abrange os processos envolvidos na liberação

do polipeptídeo já pronto. O ribossomo separa-se do mRNA
e suas duas subunidades dissociam-se.

Iniciacao

Alongacao

Terminacao

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Iniciação em Procariotos

Sitio de ligacao do ribossomo – Shine Dalgarno:

35 bases no mRNA – complementar ao rRNA

Um tRNA “iniciador” especial inicia a cadeia

polipeptidica:

„ A sintese de proteina tem inicio com o aa

metionina (codon AUG)
„ tRNAs diferentes estao envolvidos na
iniciacao e na alongacao
„ O tRNA iniciador tem estrutura unica que o
distingue de todos os outros tRNAs
„ fMet-tRNA pode iniciar síntese protéica:
metionina formilada

fMet-tRNA: reconhece o codon AUG ou GUG

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„ A energia necessária
aos diferentes passos
da síntese protéica é
fornecida pela
hidrólise de GTP.
Neste caso, GTP é
necessário para o
posicionamento
correto do códon AUG
na subunidade
ribossômica.
„ IF-2 liga o iniciador
fMet-tRNA e permite
sua entrada no sitio P
da subunidade 30S

Um mRNA contem muitos codons AUG: Como o codon de

iniciacao eh reconhecido como o ponto de inicio da traducao?

„ Sitio de ligacao do ribossomo: como eh a sequencia do

mRNA bacteriano?
‹ AUG (menos frequente GUG ou UUG) sempre
presente
‹ 10 baes antes do AUG eh a sequencia:

 5’…AGGAGG…3’: poli-purinas = sequencia

Shine-Dalgarno
 Complementar a uma sequencia altamente
conservada com a extremidade 3’ do rRNA 16S.
„ Mutacoes na sequencia Shine-Dalgarno podem impedir um
mRNA de ser traduzido.

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 „ Quando um mRNA bacteriano eh
policistronico:
„ Cada regiao a ser traduzida apresenta um
sitio de ligacao do ribossomo

Cistron

Iniciação da sintese de proteinas em Eucariotos

„ Processo de iniciacao semelhante ao de bacteria

„ No que difere?
‹ Ordem dos eventos diferente e

‹ Numero de fatores de iniciacao maior

„ O mecanismo de reconhecimento do sinal de iniciação do

mRNA em eucariotos é diferente: o passo mais importante é o
reconhecimento da extremidade 5' do mRNA.
„ O terminal 5' dos mRNAs eucarióticos têm uma modificação
especial, um resíduo metilado de guanilato, ligado ao primeiro
nucleotídeo normal da cadeia por uma ligação 5' - 5', chamado
"cap".
„ a iniciação da tradução em eucariotos envolve o
reconhecimento do "cap", seguido da localização da seqüência
de consenso que envolve o códon AUG.

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„ Ao contrário dos três fatores de iniciação bem definidos que
iniciam a tradução em bactérias, em eucariontes existe uma
multiplicidade de fatores de iniciação (chamados"eIFs“ – fatores
de iniciacao eucariontes).
‹ Onde atuam?
 Formacao do complexo de iniciacao com a extremidade 5’
 Na formacao do complexo com o Met-tRNA
 No escaneamento do mRNA pelo ribossomo a partir da
extremidade 5’ ate o primeiro AUG
 Deteccao da ligacao do tRNA iniciador no sitio AUG
 Conexao da subunidade 60S
„ A subunidade pequena (40S) é a primeira a se complexar com o
mRNA e com o tRNA iniciador. O GTP, também em eucariotos,
é hidrolisado após o acoplamento da subunidade grande (60S) ao
complexo.
„ Entretanto, há vários aspectos em que a iniciação de eucariotos
difere de iniciação em procariotos:

„ Met-tRNA iniciador é diferente daquele utilizado na

fase de alongamento, mas a metionina não é
formilada no grupo N-terminal;
„ Em levedura: o Met-tRNA apresenta estrutura
terciaria diferente e uma fosforilacao na base 64
„ há um número muito maior de fatores de iniciação
em eucariotos (12 eIFs registrados em levedura) que
em procariotos,
„ A presença de um terminal 5' com "cap" no mRNA é
necessária para a iniciação.

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 Elongação
„ Depois que a região de iniciação do mRNA foi corretamente
ligada ao ribossomo, ele sempre se move em uma direção fixa
durante a síntese protéica.
„ O ribossomo não tem a opção de mover-se para a direita ou para
a esquerda, refletindo o fato do mRNA ter uma direção, definida
pela orientação dos seus terminais 5' e 3'.
„ A entrada de um novo aminoacyl-tRNA no sitio A é mediada
pelo “Fator de elongacao” (EF-Tu em bacteria)
„ EF-Tu é uma proteina altamente conservada entre as bacterias e
eucariotos.
„ EF-Tu esta associada ao ribossomo somente durante o processo
de entrada do aminoacyl-tRNA (associacao ciclica)
„ Ha cerca de ~70.000 moleculas de EF-Tu por bacteria (~ 5% da
proteina total bacteriana)

Exemplo aplicado:

„ Kirromicina é um antibiotico que inibe a

função do EF-Tu.
„ Quando EF-Tu liga-se a kirromicina,
permanece capaz de ligar o aminoacyl-
tRNA ao sitio A, MAS
„ Não se solta do sitio A
„ Assim o ribossomo fica “parado” no mRNA
sem prosseguir com a síntese da proteina

„ Cada ribossomo tem dois sítios para ligação de tRNA. São os

sítios peptidil (P) e Aminoacil (A).
„ A especificídade para um determinado aminoacil-tRNA é dada
pelo códon específico do mRNA, isto é, embora a cavidade do
ribossomo possa aceitar qualquer aminoacil-tRNA, a superfície
contendo mRNA a torna específica para uma molécula específica.
„ Met-tRNA i met entra no sítio P.
„ Todos os aminoacil-tRNAs subsequentes entram no sítio A.
„ Depois que o segundo aminoacil-tRNA é colocado, corretamente,
no sítio A, uma ligação peptídica se forma entre a carboxila do
primeiro aminoácido e o grupo amina do segundo.
„ O dipeptídeo resultante fica, portanto, ligado, através da carboxila
do segundo aminoácido, ao segundo tRNA.

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„ Então, numa etapa chamada translocação, o peptidil-tRNA e o
códon do mRNA ao qual ele está acoplado, movem-se
coordenademente para o sítio P do ribossomo.
„ Este processo de adição de aminoácido se repete várias vezes,
até que a cadeia completa se forme.
„ Alguns pontos devem ser enfatizados:
‹ A formação da ligação peptídica move o ponto de ligação do
sítio P para sítio A (através da enzima peptidil transferase)
‹ O novo tRNA terminal move-se, então, do sítio A para o
sítio P. Ao mesmo tempo, o molde de mRNA ligado à
subunidade pequena do ribossomo move-se para colocar o
códon n+l na posição ocupada anteriormente pelo códon n;

„ Conjuntamente com a etapa (3), a molécula de tRNA que

liberou seu aminoácido para a formação da ligação peptídica, é
ejetado do sítio P,
„ O sítio A fica, então, livre para aceitar um novo aminoacil-
tRNA, cujo especificidade é determinada pelo pareamento
correto de bases entre o anticódon e o códon do mRNA.

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 Terminação
„ Duas condições são necessárias para a terminação da
síntese protéica:
‹ Uma é a presença de um códon que dá o sinal para o
processo de terminação.
‹ A outra é a presença de uma proteína, o "releasing
factor" (RF), que lê o sinal de terminação de cadeia.
„ Como a cadeia polipeptídica, após ter sido completada,
ainda está ligada a um peptidyl-tRNA, a etapa de
terminação envolve a quebra de ligação com este tRNA.
„ Quando isto acontece, a cadeia nascente se dissocia
rapidamente, uma vez que sua ligação com o ribossomo
ocorria através desta ligação.

„ Há três sinais que significam o final da tradução: UAG,

UAA e UGA.
„ estes códons são reconhecidos por proteínas, os "releasing
factors“ (RF).
„ Em E. coli, há dois RFs bem caracterizados:

‹ RF l, que reconhece os codons UAG e UAA, e

‹ RF2, que reconhece UGA e UAA.
„ Em eucariotos, há apenas um fator de terminação RF, que
reconhece os três codons de terminação.
„ Eles funcionam induzindo a peptidil transferase a transferir
a cadeia crescente para água, ao inves do aminoacil-tRNA.

„ Após a terminação da cadeia, a subunidade maior do ribossomo

(50S em procariotos e 60S em eucariotos), é liberada do mRNA
antes da subunidade menor (30S em procariotos, 40S em
eucariotos).
„ As subunidades ficam, então, disponíveis para iniciar a síntese
de outro polipeptídeo.