Meios de cultivo

- MM (Minimal Medium) pH 6,5: 0,6% NaNO3, 0,052% KCl, 0,052% MgSO4.7H2O, 0,152% KH2PO4,
1% glicose e 0,2% elementos traços.

Indução da secreção de proteínas alvo em A. nidulans

Linhagens recombinante transformada com a enzima alvo (AbfA) serão crescidas por 2 dias a 37º
C em meio de cultivo MM suplementado com 1% de glicose

Os esporos serão inoculados em 10 mL de meio mínimo líquido, substituindo-se glicose por 2%

de maltose, e mantidos a 37 ºC por 36 horas. O micélio será separado por filtração a vácuo em
funil de Büchner, obtendo-se um filtrado livre de células. O mesmo será dialisado e utilizado para
purificação e determinação das atividades enzimáticas extracelulares.
ou
Após o crescimento, 106 conídios/mL serão inoculados por 48h a 37º C em meio de cultivo MM
suplementado com % maltose variando de 0,1% até 2% e 250mM de HEPES. Para a indução com
a linhagem A. nidulans A773 selvagem, os procedimentos serão os mesmos com suplementação
adicional de piridoxina (1 mg.L-1) e uracila e uridina (2,5 mg.L-1 de cada) ao meio de cultivo MM.