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1.0 Introdução
Trizol Reagente é um reagente de fácil uso para o isolamento simultâneo
de DNA, RNA e proteínas de amostras de tecidos ou células de animais,
plantas, bactérias, vírus e leveduras.
Trizol é uma mistura de tiocianato de guanidina e fenol em uma solução
monofásica capaz de lisar e/ou homogeneizar amostras de tecidos,
dissolvendo todo o seu conteúdo: DNA, RNA e Proteínas. Com a adição de
clorofórmio e após uma centrifugação, três fases distintas são geradas na
mistura: Fase aquosa menos densa, contendo RNA; Fase Intermediária ou
interfase contendo DNA e Fase Orgânica mais densa contendo as
proteínas celulares. Cada
fase pode ser isolada, assim como o conteúdo de cada uma destas, com a
utilização de protocolos específicos.
Uma quantidade de 1 ml de Trizol é suficiente para isolar RNA, DNA e
proteínas de 100 mg de tecidos.
O método para o isolamento de RNA total é bastante simples e pode ser
realizado em menos de uma hora. Todo o procedimento é bastante
eficiente para o isolamento de moléculas de RNA total intactas, com baixa
ou nenhuma contaminação de DNA e proteínas. O RNA isolado por este
método pode ser utilizado em ensaios de Northern blots, isolamento de
mRNA, tradução in-vitro, Ensaios livre de RNase, clonagem e PCR.
O DNA isolado por este método pode ser utilizado em PCR, Southern
blotting e digeridos com enzimas de restrição.
2.0 Componentes
Trizol Reagente 100ml
Conteúdo: Tiocianato de Guanidina, Fenol e Reagentes não tóxicos
Células em Suspensão
Centrifugar as células (aproximadamente 5x106 células). Lisar as células
adicionando diretamente 1 ml de Trizol para células animais, cogumelos,
plantas ou de bactérias. Recomenda-se lavar as células de camada única
com PBS ou meio sem soro antes de adicionar o Trizol.