Influencia del disolvente.

En muchas ocasiones se observa que al aumentar la polaridad del disolvente

se produce un desplazamiento en el espectro de fluorescencia hacia mayores
longitudes de onda. Este hecho puede explicarse de la forma siguiente: Las
transiciones electrónicas entre diferentes niveles energéticos ocurren muy
rápidamente, de forma que cuando una molécula en estado fundamental
absorbe un fotón, pasa a un estado excitado meta-estable (estado excitado
FranckCondon), en el cual la geometría molecular y la configuración del
disolvente son todavía las características del estado fundamental (figura 4.3.).
La reorientación del disolvente tiene lugar aproximadamente 10–11—10–12
segundos después de la excitación, originando un estado excitado de
"equilibrio", en el cual la configuración del disolvente es óptima para la
geometría y configuración electrónica de la molécula. La emisión ocurre desde
ese estado excitado de "equilibrio", hasta un estado fundamental meta-estable,
teniendo lugar posteriormente la relajación del disolvente, para conducir hasta
el verdadero estado fundamental. En la mayoría de las moléculas polares el
estado excitado es más polar que el estado fundamental; por ello, al aumentar
la polaridad del disolvente se tiende hacia una estabilización del estado
excitado, en mayor grado que lo hace el estado fundamental (figura 4.3.A, B y
C). En consecuencia, al aumentar la polaridad del disolvente tiene lugar un
desplazamiento hacia mayores longitudes de onda (menor energía). Figura 4.3.
Influencia de la polaridad del disolvente sobre la emisión de fluorescencia.
Métodos luminiscentes 10 Respecto a la constitución del disolvente hay que
hacer notar lo siguiente: anteriormente se ha mencionado que la introducción
de átomos pesados como sustituyentes en moléculas aromáticas produce un
incremento en la fosforescencia a expensas de la fluorescencia. Este efecto se
observa frecuentemente incluso cuando el elemento en cuestión no forma parte
de la molécula luminiscente. Así, disolventes conteniendo átomos pesados,
normalmente dan lugar a una disminución de la fluorescencia. Este
comportamiento puede justificarse en algunos casos: concretamente cuando se
trata de disolventes halogenados, por formación de complejos 1:1 en los que
interviene el estado excitado del soluto fluorescente, pues la reactividad de los
estados excitados es normalmente diferente a la que presenta la molécula en
estado fundamental.

Influencia del oxígeno disuelto.

El efecto del oxígeno disuelto es uno de los problemas más molestos de la

fluorimetría, ya que a menudo reduce la intensidad de emisión de una
disolución fluorescente. Normalmente, el oxígeno presente en concentración
10–3 M reduce la emisión fluorescente del orden del 20%. Por ello, es
necesario desairear las disoluciones antes de llevar a cabo la medida. El papel
que juega el oxígeno en la atenuación de la fluorescencia se debe
fundamentalmente a sus propiedades oxidantes y a sus características
paramagnéticas. Así, frente a especies reductoras, el oxígeno puede llevar a
cabo la oxidación inducida foto-químicamente de las especies fluorescentes, si
bien, con mayor frecuencia, la atenuación de la fluorescencia se produce
debido a que el paramagnetismo del oxígeno molecular favorece el
cruzamiento entre sistemas, lo cual conduce hasta el estado triplete. Al
parecer, el cruce entre sistemas se produce mediante colisiones con especies
excitadas y por formación transitoria de complejos de transferencia de carga.
Por otra parte, el que la presencia de oxígeno favorezca el cruzamiento entre
sistemas en muchas moléculas fluorescentes no significa que aumente la
fosforescencia, pues el O2 es también un efectivo atenuador de estados
tripletes. Debido a que el estado triplete tiene una vida más larga que el
singulete, le hace mucho más susceptible para colisionar con impurezas, tales
como el propio oxígeno, u otras producidas por foto-descomposición del soluto.
En cualquier caso, la capacidad del oxígeno para inhibir la fotoluminiscencia
puede ser utilizada para su determinación en disolución. Otros gases
paramagnéticos, como el óxido nítrico, se comportan de forma similar, así
como iones paramagnéticos de los metales de transición.