En este proyecto de investigación se está caracterizando a los microrganismo olefilicos

de tierras contaminadas con petróleo, que tienen la capacidad de biorremediar suelos

contaminados con dicho hidrocarburo.

A nivel mundial, los problemas de contaminación tanto en suelos como en agua y aire
se deben principalmente a acciones antropogénicas; entre las que cabe destacar la
extracción de recursos naturales, en este caso en particular de hidrocarburos.1

Los derrames de petróleo afectan las propiedades físicas del suelo y especialmente las
poblaciones naturales de microorganismos. En particular causan disminución en
bacterias fijadoras de nitrógeno de vida libre, encargadas de asimilar y reciclar nutrientes
en los ciclos biogeoquímicos; al alterarse éstos, se afecta la fertilidad del suelo.2

Los hidrocarburos son combustibles fósiles ampliamente utilizados alrededor del mundo
como generadores fundamentales de diversas formas de energía, ellos están en la
naturaleza gracias a la acumulación de biomasa durante millones de años. Sin embargo,
es posible que en su extracción se genere contaminación en agua y suelos debido a
constantes derrames accidentales, los cuales son muy comunes en países
productores.3

El sector de hidrocarburos se ha expandido de manera importante en los últimos años,

convirtiéndose en pieza clave del crecimiento de la economía mundial, el consumo de
energía, la exploración, las reservas y la producción han aumentado de manera
considerable y este es actualmente considerado como motor del crecimiento económico
en varios países del mundo. Debido al crecimiento que han tenido los hidrocarburos la
contaminación por estos, ha sido de igual forma significativa. Los hidrocarburos impiden
el intercambio gaseoso con la atmosfera, iniciando una serie de procesos físico-
químicos simultáneos, como evaporación y penetración, que dependiendo del tipo de
hidrocarburo, temperatura, humedad, textura del suelo y cantidad vertida pueden ser
procesos más o menos lentos lo que ocasiona una mayor toxicidad; generando de esta
manera graves consecuencias ambientales tanto en la flora como en la fauna.

Durante las operaciones de explotación, extracción y transporte los materiales pueden

contaminar el medio ambiente circundante a través de filtraciones accidentales o
deliberadas. De esta manera, durante las últimas décadas los hidrocarburos han dado
lugar a una amplia liberación de contaminantes en el medio ambiente. Reportan que el
contenido de dióxido de carbono en la atmósfera se ha incrementado casi en un 30%
desde el inicio de la revolución industrial, estos además, pueden interferir en el
desarrollo de forrajes, cultivos y flora natural al afectar la fertilidad del suelo. Se reportan
la afectación que los hidrocarburos generan a la fertilidad a través de mecanismos como
la toxicidad directa en los organismos en el suelo, reducción en la retención de humedad
y/o nutrientes, compactación, cambios en pH y salinidad. La toxicidad de los
hidrocarburos de petróleo, tanto alifático como aromático, es variable pero, en general,
aquellos de menor peso molecular son más tóxicos.4

Los derivados de hidrocarburos (gasolina, queroseno, aceites, combustibles, parafinas,

y el asfalto entre muchos otros) no solo impactan la capa superficial del suelo, también
corren el riesgo de ser movilizados hasta aguas subterráneas generando así su
contaminación, o incluso pueden ser transportados por escorrentía incrementado aún
más el daño ambiental. Dicha contaminación afecta las condiciones fisicoquímicas de
agua al presentarse una disminución de oxígeno disuelto debido a la reducción de la
transferencia de oxígeno entre la fase atmósfera – agua, al igual que la entrada de luz
al medio, lo que inhibe el crecimiento de ciertas especies y disminuye la fijación de
nutrientes.5

Toxicidad en el Suelo

La toxicidad de los hidrocarburos de petróleo, tanto alifático como aromático, es muy

variable pero, en general, aquellos de menor peso molecular son más tóxicos. Los
hidrocarburos de la fracción ligera, generalmente entre 5 y 10 carbonos, son muy tóxicos
pero muy volátiles y no perduran en un ambiente tropical. Un ejemplo fue un derrame
de gasolina nafta en el Arroyo “El Burro” en el sur del estado de Veracruz (México)
ocurrido en enero 2004. Según la caracterización realizada no se encontraron
hidrocarburos del petróleo en los sedimentos del arroyo después de dos meses. En el
medio tropical, los hidrocarburos que podrían perdurar después de un derrame o
descarga son de la fracción media (C11-C28) y la fracción pesada. De estos, son
principalmente los hidrocarburos de bajo peso molecular de la fracción media los que
son ligeramente tóxicos para diferentes tipos de plantas y la mesofauna del suelo, tales
como las lombrices. Sin embargo, debido a la rápida biodegradación de estos
compuestos, esta afectación es de muy corta duración.6

En el suelo, los hidrocarburos impiden el intercambio gaseoso con la atmósfera,

iniciando una serie de procesos fisicoquímicos simultáneos, como evaporación y
penetración, que dependiendo del tipo de hidrocarburo, temperatura, humedad, textura
del suelo y cantidad vertida pueden ser procesos más o menos lentos lo que ocasiona
una mayor toxicidad. Además de tener una moderada, alta o extrema salinidad, lo que
dificulta su tratamiento, debido a que altos gradientes de salinidad pueden destruir la
estructura terciaria de las proteínas, desnaturalizar enzimas y deshidratar células, lo
cual es letal para muchos microorganismos usados para el tratamiento de aguas y
suelos contaminados.

Principales fuentes de contaminación Una investigación realizada en 1981 por el

instituto americano de petróleo (API) identifico entre las principales fuentes de
contaminación:

Lodos de perforación de tipo inversa y recortes, estos lodos contienen un tipo de aceite
muy similar a diésel en concentraciones de aproximadamente 10% y son sumamente
arcillosos. Este material se deposita en presas, las cuales anteriormente eran
construidas con materiales permeables y filtraban los hidrocarburos al medio ambiente.

Suelo contaminado por derrames de tuberías corroídas, existen campos petroleros con
alrededor de cincuenta de 50 años de antigüedad, ubicados en zonas pantanosas,
manglares u otras selvas inúndales. Los ductos de estos se instalaron conectando los
pozos individuales a baterías de separación y desde ahí hasta las petroquímicas y
refinería, generándose corrosión anaerobia, debido principalmente a bacterias
reductoras de sulfato dando como resultado ductos corroídos y derramamientos. Los
tipos de suelos afectados son de zonas bajas con altos contenidos de materia orgánica
y arcilla y los menos afectados, son por lo general los más aptos para la agricultura por
poseer texturas menos finas y alta fertilidad. Los sitios que se encuentren en la planicie
costera, son los que más preocupan en caso de contaminación por el impacto que puede
tener sobre los acuíferos, debido a su alta permeabilidad.

Tiraderos de desechos aceitosos semisólidos, se utilizan pozos que nunca produjeron

petróleo o un pozo antiguo que no produce y está tapado, puesto que nunca fueron
diseñados para dicho fin y son construidos de materiales impermeables, muchas veces
se termina el espacio disponible y se sigue depositando el relleno sobre la plataforma lo
que resulta en escurrimientos e infiltraciones de hidrocarburos al medio ambiente
cercano.

Sitios contaminados por descargas petroquímicas y refinerías, estos tienen sistemas

antiguos de tratamiento de aguas residuales, las cuales generalmente contienen sales
de los yacimientos de petróleo, lo que puede afectar los pantanos y cuerpos de agua.7

Biorremediación

La Biorremediación es considerada como la más deseable aproximación a la

remediación de suelos contaminados en contraste a alternativas más costosa y de
menor aceptación pública como la incineración. Los tratamientos biológicos de
degradación en suelos pueden ser eficientes y económicos si las condiciones de
biodegradación son optimizadas. Se define como Biorremediación al proceso de
aceleración de la tasa de degradación natural de hidrocarburos por adición de
fertilizantes para provisión de nitrógeno y fósforo. El tratamiento biológico de suelos
contaminados involucra el uso de microorganismos y/o vegetales para la degradación
de los contaminantes orgánicos. La actividad biológica altera la estructura molecular del
contaminante y el grado de alteración determina si se ha producido biotransformación o
mineralización.

La biotransformación es la descomposición de un compuesto orgánico en otro similar

no contaminante o menos tóxico, mientras que la mineralización es la descomposición
a dióxido de carbono, agua, y compuestos celulares. Los procesos biológicos se aplican
frecuentemente al tratamiento de suelos contaminados con hidrocarburos. Se pueden
aplicar técnicas in-situ (en el lugar donde se encuentra el suelo contaminado) o ex-situ
(cuando el suelo se traslada a una instalación para su tratamiento). 8 El tratamiento ex-
situ de suelos, sedimentos y otros sólidos contaminados con hidrocarburos se puede
realizar en un variado número de procesos en fase sólida y en fase lodo.

Las técnicas de Biorremediación generalmente son aplicadas en suelos con

concentraciones de hidrocarburos totales del orden del 5 a 8 %, extendiéndose estos
valores a rangos mayores para suelos fácilmente aireables; debe destacarse que la
determinación cuantitativa de hidrocarburos en suelo es compleja ya que la mayor parte
de las técnicas se basan en la extracción de las 10 diversas fracciones por solventes,
según sea el método utilizado para determinación de hidrocarburos se obtendrán
valores diferentes, que para determinados tipos de suelos e hidrocarburos pueden ser
muy marcados. De esto surge la importancia de especificar el método analítico a utilizar.

Las efectividades de esta metodología dependen de innumerables factores, entre ellos

se encuentran:

- Tipo y concentración de contaminante.

- Concentración de microorganismos.

- Concentración de nutrientes.

- Aireación.

- Condiciones macro ambientales.

- Presencia de inhibidores.

- Biodisponibilidad del contaminante.

- Características agronómicas.

- Topográficas y microbianas del suelo receptor.

Se puede resumir que en el tratamiento de suelos contaminados con hidrocarburos, la

Biorremediación es un de las mejores alternativas por sus diversas ventajas como son:

- Posibilidad de aplicarse in situ o ex – situ.

- Bajo costo de operación.

- Como subproducto se obtiene un suelo útil para la agricultura debido a la adición de

nutrientes. - No requiere de equipamiento especializado para su aplicación.

Sus desventajas fundamentales son:

- Tiempo de proceso largo.

- Aplicación efectiva a suelos con concentraciones de hidrocarburos < 30 %.

- Contaminantes no tóxicos para los microorganismos.

La biorremediación de suelos contaminados con petróleo también se realiza para limpiar

y disminuir el contenido de hidrocarburos de diferentes niveles de toxicidad presentes
en los suelos después de ocurrido un derrame; son 11 numerosas las metodologías
biológicas que se utilizan con este propósito, pero todas se basan en la capacidad de
los microorganismos de biotransformar compuestos orgánicos, por lo general hacia
productos menos tóxicos o de más fácil degradación. La biorremediación permite reducir
notablemente las concentraciones de petróleo residual. Este tratamiento se aplica
básicamente de 2 formas:

Por bioestimulación

Por bioaumantación.

La bioestimulación consiste en nutrir los suelos donde está el petróleo para posibilitar el
crecimiento microbiano.8

En Long Beach (California), aplicaron la biorremediacion in situ en suelos contaminado

con aceite diésel mediante el uso de microorganismos autóctonos complementada con
la adición de nutrientes y oxígeno en el suelo bioestimulacion, e inoculación de una
mezcla enriquecida de consorcios bacterianos previamente extraída del mismo suelo
bioaumentacion. Esto permitió encontrar consorcios bacterianos degradadores de
hidrocarburos identificados por secuenciación de genes 16S-RNA, demostrando la
presencia de Bacillus cereus, Bacillus sphaericus, Bacillus fusiformis, Bacillus pumilis,
Acinetobacter junii, y Pseudomonas sp.

Las bacterias del género Pseudomonas poseen la habilidad para utilizar diversos
substratos, incluyendo aquellos creados por el petróleo. Las Pseudomonas son
bacterias Gram negativas, ubicuas, que pertenecen a la subclase gamma de las Proteo
bacterias.

Las Pseudomonas son bacterias productoras de biosurfactantes como los ramnolipidos

involucrados en procesos de remoción de aceites y productos relacionados, Bushnell y
Hass fueron de los primeros en describir bacterias productoras de biosurfactantes, como
el Corynebacterium simplex y cepas de Pseudomonas.

Algunos microorganismos productores de biosurfactantes extracelulares que solubilizan

y facilitan la penetración de los hidrocarburos a través de la pared celular hidrofilica;
contienen además enzimas degradadoras de hidrocarburos en la membrana
citoplasmática. La Pseudomonas aeruginosa, es otro de los microorganismos más
usado y estudiado en biorremediacion y presenta una serie de actividades naturales
sobre xenobióticos. Lamentablemente, también es conocida por ser un patógeno
oportunista en humanos y causante de complicaciones graves en personas
inmunosuprimidas, con quemaduras severas o con fibrosis quística. Por estas razones
existe mucho interés en el estudio de las relaciones filogenéticas entre serotipos clínicos
y ambientales.

Estudios con relación al desempeño metabólico de la Pseudomonas aeruginosa ha

permitido identificarla como degradadora de gran cantidad de sustratos como el n-
hexadecano, mineralización de compuestos alifáticos en condiciones anaerobias, y
degradadora de hidrocarburos aromáticos y poli aromáticos, así como del pireno en
estudios in vitro.

La P. aeruginosa tiene la capacidad de sintetizar ramnolipidos cuando se encuentra en

la fase estacionaria de su crecimiento, por tal razón esto sólo se puede realizar en la
primera fase del proceso de biorremediacion y contribuyendo así con la movilización y
solubilizacion de los contaminantes durante la fase siguiente de mineralización. Al
mismo tiempo que pueden transformarse bajo microcosmos en el suelo con un
tratamiento físico o químico especifico, característica que comparte con el
Agrobacterium tumefasciens .

La Pseudomona putida es un saprofito del suelo , oportunista, cosmopolita,

metabólicamente versátil, por poseer una dioxigenasa inicial, una tolueno dioxigenasa,
aunque no presenta la dioxigenasa específica para los PAHs por lo cual es una buena
candidata para las aplicaciones biotecnológicas, tales como agricultura, biocatilisis,
biorremediacion, biocontrol en protección de las plantas y producción de bioplasticos .

La P. putida posee la capacidad de colonizar la rizosfera de plantas de cosecha y una

gran capacidad metabólica que facilita el desarrollo de biopesticidas y promotores de
crecimiento de la planta. La degradación de los alcanos por Pseudomona putida se ha
estudiado por secuenciación en el plásmido OCT que codifica una enzima dioxigenasa
que convierte alcanos a aldehídos a través del hidroperoxidasa del n-alkyl sin un
intermediario del alcohol, conocido como la vía de Finnerty; un proceso similar lo
presentan los géneros Acinetobacter sp y Nocardiodes sp. Aunque ellos no poseen este
plásmido. La Pseudomonas fluorescens es degradadora de naftaleno y fenantreno,
ventaja que tiene frente a las otras Pseudomonas, que solo metabolizan naftaleno y
asfaltenos .

Estudios realizados demuestran que Flavobacterium y Pseudomonas son los

microorganismos más aislados en la fase de degradación de los TPH (Hidrocarburos
Totales). La Pseudomonas stutzeri es una degradadora de PHAs .

BIBLIOGRAFIA

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Colombia.fitorremediacion como estrategia biotecnológica de
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la Salle. (Practica realizada para obtener el título de ingeniera ambiental y
sanitaria).2006.

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tropico.II: Afectación a la fertilidad y su recuperacion.Interciencia, 2008; 33(7):483-489

7,9 Benavides j, Quintero G, Guevara A, Jaimes D, Gutiérrez S, Miranda J,

Bioremediacion de suelos contaminados con hidrocarburos derivados del
petroleo.NOVA, 2006; 4(5):82-90.
8 Canasa a. Remediación de suelos contaminados en operaciones de perforación y
manejo de petróleo crudo en la selva peruana.UNI. (Tesis para optar el título profesional
de ingeniero de petróleo).2010.