UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONIA

FACULTAD DE INGENIERIA Y CIENCIAS AMBIENTALES

CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

PRÁCTICA DE LABORATORIO Nº 05

TEMA : DETERMINACIÓN DE BACTERIAS POR TINCIÓN

ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA AGROINDUSTRIAL

DOCENTE : Ing. DARWIN JOSUÉ ESTACIO ALBORNOZ

ESTUDIANTE : ZUÑIGA ZAPATA MAYLITH ESTHER

CICLO :V

PUCALLPA-PERU
2018

I.- INTRODUCCIÓN

En la práctica de laboratorio de microbiología hicimos la identificamos que bacterias

existía en nuestro cultivo mediante las practica de coloraciones; es decir agregando
distintos reactivos y observando en el microscopio si son Gram negativas o Gram
positivas.

Lo cual es de bastante importancia ya que depende de eso podemos saber si la

bacterias que existe en mi cultivo son patógenas o tal vez benéfica. Por ello después de
reconocer si son Gram positiva o negativa también observamos las formas que
presentaba dicha colonia.

II.- OBJETIVOS

2.1. Objetivo general

 Identificar las bacterias por método de tinción

2.2. Objetivo especifico

 Identificar si son Gram positivas o Gram negativas.

 Aprender cómo utilizar las coloraciones.
 Aprender a observar en el microscopio las bacterias.

III.- MARCO TEÓRICO

 3.1. TINCIÓN

Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El

uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y
poder realizar la observación en microscopio óptico. Dado que las bacterias son casi
incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y
no pueden observarse claramente sin algún tratamiento previo. (Ortega 2009)

a) Tinción simple: El colorante utilizado sirve solo para denotar la morfología

celular.
b) Tinción diferencial: El colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre
células bacterianas o entre partes de una misma célula. Estas técnicas utilizan
más de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tinción.

3.2. TICIÓN DE GRAM

En 1884 un médico Danés, Christian Gram, desarrolló un método de tinción de gran

utilidad en el laboratorio de bacteriología. Está tinción revela detalles referentes a la
forma y agrupación bacteriana y permite clasificar a las bacterias en dos grandes
grupos: Gram positivas y Gram negativas.

Durante el proceso de tinción, tanto las bacterias Gram positivas como las Gram
negativas retienen el colorante primario. Sin embargo al aplicar el agente decolorante,
la pared de las bacterias Gram positivas sufre una deshidratación que impide la salida
de colorante. En el caso de las bacterias Gram negativas, el agente decolorante
destruye la integridad de la membrana externa, incrementando así su permeabilidad, lo
cual permite la salida del colorante primario. (Victoria 2013).

3.3. COLORANTES

Los colorantes más utilizados: azul de metileno, cristal violeta, safranina, son catiónicos
y se combinan fuertemente con componentes celulares cargados negativamente, como
los ácidos nucleicos y los polisacaridos ácidos (las envueltas externas de los
microorganismos están por lo general cargadas negativamente). (Ortega 2009).

3.4. PRINCIPIOS

Los principios de la tinción de Gram están basados en las características de la pared

celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada
microorganismo.

3.3.1 Las bacterias Gram positivas.- poseen una pared celular gruesa
constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa. Las
bacterias G+ retienen el cristal-violeta después de la decoloración y aparecen de color
azul intenso (purpura).

3.3.2 La pared celular de las bacterias Gram negativas.- está constituida por
una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa, cuyo componente
estructural único son los lipopolisacáridos. Las bacterias G- no son capaces de retener
el cristal-violeta después de la decoloración y son teñidas de rojo con safranina.

3.3.3 Ojooooo

Agar Sangre: Cuando a un medio común se le adiciona entre 5 y 10% de sangre.

Permite el cultivo de bacterias patógenas.
 Agar Ogawa o Lowenstein – Jensen: Medio enriquecido que permite el cultivo
de Mycobacterium tuberculosis(Bacilo de Koch).
 Agar Chocolate: Se sintetiza al calentar el agar sangre a temperatura entre 60
– 80°C, tomando el color chocolate característico. Sirve para el crecimiento de
Neisseria meningitis (meningococo) y Neisseriagonorrhoeae (gonococo).
 Caldo Cerebro – Corazón (Brain, Heart Infusión. BHI): Sirve para
microrganismos exigentes.
 Caldo de Carne, Hemina y Vitamina K: Permite el crecimiento de
microrganismos anaerobios exigentes.

 Medios selectivos. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de

microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
 Agar Mac Conkey, para E.coli y otras enterobacterias.
 Agar Cetrimide, para Pseudomonas.
 Agar Manitol Salado, para estafilococos.
 Agar MitisSalivarius, para estreptococos orales.
 Agar Clindamicina, para Eikenellacorrodens.
 Agar GMC (Gelatina, Metronidazol y Cadmio), para el asilamiento de
Actynomicesviscosus, Actynomicesnaeslundi y Actynomicesodontolyticus.
 Agar TCBS, para Vibriumcholerae.
 Agar Sabouraud, para hongos.

Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de manifiesto

propiedades que un determinado tipo de microorganismos posee.
1.1. HISTORIA DE LAS BACTERIAS

Las primeras bacterias fueron observadas por Anton van Leeuwenhoek en 1683
usando un microscopio de lente simple diseñado por él mismo. Inicialmente las
denominó animalículos y publicó sus observaciones en una serie de cartas que envió
a la Royal Society. El nombre de bacteria fue introducido más tarde, en 1828, por
Ehrenberg. Deriva del griego y significa bastón pequeño.

Louis Pasteur demostró en 1859 que los procesos de fermentación eran causados
por el crecimiento de microorganismos, y que dicho crecimiento no era debido a la
generación espontánea, como se suponía hasta entonces. (Ni las levaduras, ni los
mohos, ni los hongos, organismos normalmente asociados a estos procesos de
fermentación, son bacterias). Pasteur, al igual que su contemporáneo y colega
Robert Koch, fue uno de los primeros defensores de la teoría germinal de las
enfermedades infecciosas.

Robert Koch fue pionero en la microbiología médica, trabajando con diferentes

enfermedades infecciosas, como el cólera, el ántrax y la tuberculosis. Koch logró
probar la teoría germinal de las enfermedades infecciosas tras sus investigaciones
en tuberculosis, siendo por ello galardonado con el premio Nobel en Medicina y
Fisiología, en el año 1905. Estableció lo que se ha denominado desde entonces los
postulados de Koch, mediante los cuales se estandarizaban una serie de criterios
experimentales para demostrar si un organismo era o no el causante de una
determinada enfermedad. Estos postulados se siguen utilizando hoy en día.
4 MATERIALES Y MEDODOLOGIA

4.3 Materiales, insumos e equipos:

 Lugol
 Ron de quemar
Método de siembra Descripción de la Medio de cultivo usado
siembra
Dispersión(10−1) Creció en sobre Agar nutritivo
población en parte de la
placa Petri con pocos
colonias.
Econométrico(10−2) Creció muy poca Agar nutritivo
colonia. Mayor sobre
población.
Estrías(10−3) Sobre población de Agar nutritivo
bacterias.
Característica de la Observación de colonia Medio de cultivo usado
colonia
Forma Puntiforme , irreguar Agar nutritivo
Elevación Covexa Agar nutritivo
Bordes Filamentoso, ondulado, Agar nutritivo
enetro.
 Mechero  Cristal de violeta
 Asa de siembra  Alcohol acetona
 Microscopio  Safranina
 Agua de caño  Lamina portaobjeto
 Lapicero indeleble
4.4 Metodología
a. Se esteriliza la porta objeto y se marca con una equis en un lado del porta objeto,
y al otro lado del porta objeto se trabaja.
b. Con la ayuda del asa de siembra se saca de la placa Petri un frotis (población) y
se pone en el porta objeto. Y dejar flamear en el mechero hasta que se seque.
 c. Luego se agrega un agrega 1 o 2 gotas de cristal violeta donde está el frotis
durante 1 minuto.
d. Lavar con agua de caño aproximadamente por un minuto.
e. se hace secar en una altura de 30cm.
f. Luego se le agrega lugol durante 1 minuto, nuevamente se lleva a lavar con agua
de caño por tiempo de 1minuto y se lo hace secar en el mechero a una altura de
30cm.
g. Terminado de secar se agrega para decolorar el alcohol acetona por 10
segundos.
h. Lavar con agua de caño esperar que seque y agregar safranina por 1 minuto.
i. Luego lavar con agua de caño y esperar que se seque.se observó con un
microscopio con el objetivo de 100X.

5 RESULTADOS Y DISCUCIONES

5.3 Resultados

Categoría Morfología Esquema de la observación bacteria

bacteriana bacteriana
Gran bacilos Se observó en el microscopio erwinia
negativos de color rosado y que
presentaba las formas de
cocos.

5.4 Discusiones

La bacteria, entre otras características, presentó flagelación perítrica, reacción de

Gram negativa, anaerobiosis en el medio Hugh y Leifson y en la prueba de
bactotioglicolato, producción de acidez en el medio bacto agar dextrosa rojo fenol y
oxidasa y en Tinción con Rojo Congo reacción bacilo negativa y cumple con las
características de la erwinia sp.Hernández y Trujillo (2000).

Cuando observe las formas de las bacterias poseían en las placas Petri algunas
eran ondulado. Pues coincide ya que la erwinia tiene fajelos y es bacilos.

Bacteria Gram negativa, forma de bastón, anaeróbica facultativa, de lento

crecimiento en Agar nutritivo y B de King, D de Kado positivo, producción de Indol
negativa, reducción de nitratos variable. Las colonias son blanco grisáceo se está
 hablando de la bacteria erwinia que no se puede distinguir su especie. Suarez
(2010).

Pues las colonias de bacterias que existe en mi cultivo son de color blanco y cuando
observamos en el microscopio se quedó de color rosado grosella y eren de forma
alargada por eso coincido con el autor.

6 CONCLUCION
 Logramos identificar la bacteria de acuerdo a los datos que obtuvimos en la
práctica se pudo determinar que es la erwinia.
 Aprendí a utilizar as coloración y a observar en el microscopio.

7 BIBLIOGRAFIA

 Identificación y caracterización de Pantoea agglomerans aislada en plantas

de gloxinia (Gloxinia alba)(articulo (2007)scielo.
 COMPORTAMIENTO DE MATERIALES DE LOS GÉNEROS (artículo 2010).
 Tinción y observación de microorganismos. (Santambrosio 2009).
 http://www.telmeds.org/wp-content/uploads/2016/11/Tincion-de-Gram.pdf

8 ANEXOS

Cuando ya echábamos el azul de Cuando echábamos la safranina

violeta

Observamos que son gram

Colocado el porta objeto en el negativos.