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Preparación de muestras:
20 μl de muestra.
20 μl de tampón de carga.
10 μl glicerol 80%.
Las muestras se hierven durante 5 min y se centrifugan 10 min a 13000 rpm. Finalmente,
las muestras se cargan en el gel, incluyendo un marcador de pesos moleculares, y se
procede a la electroforesis en tampón Tris-HCl 25 mM (pH 8.6), glicina 250 mM, SDS
10% con una fuente de corriente BioRad PowerPac 1000 a un amperaje constante de 10
mA/gel hasta que el frente penetre en el gel separador, y a partir de ahí 25 mA/gel hasta que
el frente alcance el final del gel.
Tris 20 mM, pH 8
EDTA 2 mM
SDS 5%
β-mercaptoetanol 10%
azul de bromofenol 0.05%,
Diluir el estándar 1:20 en tampón SDS Reducing Sample. Calentar 5 min a 95ºC. Enfriar y
cargar 7 μl.
β-mercaptoetanol 25 μl
Stock Sample Buffer 475 μl
1 2 3 4
Calle Muestra
1 Extracto crudo
2 Proteína pura
3 Proteína pura
4 Marcador Peso Molecular